人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)试剂盒使用方法

单核-巨噬细胞移动抑制因子(MIF)
单核-巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是1966年发现的一种淋巴因子，可由活化的T淋巴细胞或B淋巴细胞产生。

人的MIF是糖蛋白,包括有23000和55000两种分子量的分子。

在体外试验中,MIF可以抑制在毛细玻璃管中的单核细胞或巨噬细胞向管口外的四周运动,故名。

将MIF 注射于人或动物皮内，局部可发生迟发型超敏反应样的变化，皮肤出现红肿硬结，病理检查表现为以单核细胞浸润为主的炎症。

这说明MIF在迟发型超敏反应过程中具有重要的作用。

MIF产生试验是一种细胞免疫的检测方法,如果待检者的淋巴细胞在某种特异的抗原刺激下，能在细胞培养液中产生MIF,则说明待检者可以对这种抗原发生迟发型超敏反应，或者说此人对该抗原存在特异的细胞免疫力。

医学免疫学实验指导实验三巨噬细胞（白细胞）移动抑制试验由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。

BioRike博瑞克系统的介绍了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。

BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。

BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验目的】1.熟悉巨噬细胞或白细胞的移动抑制试验的原理方法及意义。

2.通过本实验了解细胞免疫的特异性。

【实验原理】根据白细胞可以游走的特点，将事先用布氏杆菌致敏的小鼠腹腔渗出细胞置毛细玻璃管中37℃培养，24小时候白细胞可从管口向外移动扩散成扇状。

若再次遇到相应的抗原时，由于致敏淋巴细胞能释放出巨噬细胞移动抑制因子（MIF）或中性粒细胞移动抑制因子（NIF），抑制巨噬细胞、中性粒细胞的移动，故白细胞游出毛细管口面积减少。

根据此情况计算的移动指数（MI），可反映机体的细胞免疫水平。

因此本实验是检测细胞免疫功能的方法。

【实验用品】1.材料药品：布氏杆菌致敏的小鼠、布氏杆菌抗原、Hanks液、RPMI1640培养液、凡士林、8%淀粉肉汤。

2.器具：水平离心机、解剖显微镜（或低倍显微透射仪）、恒温箱、毛细玻璃管（内径1mm，两端粗细一致，长7~8cm）、平底凹孔玻璃板（凹孔直径2cm）、盖玻片、注射器、砂轮、带盖瓷盘。

【内容和方法】一、动物细胞制备布氏杆菌致敏的小鼠腹腔注射8%淀粉肉汤0.5ml，3～4天后将动物处死，向腹腔内注射2ml Hanks液，无菌取出腹腔渗出细胞。

配成10%的细胞悬液（或用Hanks液洗涤2次后，配成8×107个/ml的白细胞悬液）。

人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）ELISA分析检测试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（MIP-2）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）水平。

用纯化的转化生长因子（MIP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（MIP-2），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的转化生长因子（MIP-2）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）浓度。

试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：100ng/ml 1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗OT抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存自备材料：1. 蒸馏水。

巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)
巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)介绍：
已致敏的淋巴细胞在体外培养中受到特异性抗原的刺激，会释放多种淋巴因子，其中包括移动抑制因子。

巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)正常值：
移动指数小于0.8，表示淋巴细胞已为所加抗原致敏，所以在同一抗原的作用
下会有MIF的释放。

巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)临床意义：
异常结果：移动指数小于0.8，表示淋巴细胞已为所加抗原致敏，所以在同一
抗原的作用下会有巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的释放。

需要检查的人群：存在细胞免疫功能紊乱的患者。

巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)注意事项：
检查前：不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。

检查时：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。

不适合人群：血小板极度减低的时候，还有有凝血障碍性疾病，如血友病。

巨噬细胞或白细胞移动抑制试验(MMIT)检查过程：
抽血后，立即用消毒过的干棉块(消毒湿棉块容易刺激穿刺点引起疼痛，且不
易止血)压紧穿刺部位，需在针孔及向上两厘米进针处的范围进行局部按压3-5分钟，进行止血。

不要揉，以免造成皮下血肿。

此后，应在24小时内尽量保持抽血手臂的清洁卫生，不要淋浴或桑拿。

抽血后要休息15分钟，最好这15分钟内不要动，静坐或躺着休息，若出现晕针症状如：头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水，待症状缓解后再进行体检。

SEA090Hu96T巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第12版（2016年05月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、尿液、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中MCSF含量。

[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板（预包被）196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。

请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。

2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。

注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。

产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

[标本的采集与保存]1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。

人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）ELISA分析检测试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（MIP-2）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）水平。

用纯化的转化生长因子（MIP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（MIP-2），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的转化生长因子（MIP-2）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）浓度。

试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：100ng/ml 1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗OT抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存自备材料：1. 蒸馏水。

人巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）试剂盒使用方法检测范围：96T50pg/ml-1600pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）水平。

用纯化的人巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1），再与HRP标记的巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎症蛋白1（MIP-1）浓度。

试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（3200pg/ml）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1600pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液800pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液400pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液200pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液100pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

2024年沪教版选择性必修3生物下册阶段测试试卷含答案考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______ 姓名：______ 班级：______ 考号：______总分栏题号一二三四五总分得分评卷人得分一、选择题(共7题，共14分)1、蓝细菌拟核DNA上有控制叶绿素合成的chlL基因。

某科学家通过构建该种生物缺失chlL基因的变异株细胞；以研究chlL基因对叶绿素合成的控制，技术路线如下图所示，下列相关叙述不正确的是（）A. ①②过程应使用不同的限制性内切核酸酶B. ①②过程都要使用DNA连接酶C. 终止密码子是基因表达载体的重要组成部分D. 若操作成功，可用含红霉素的培养基筛选出该变异株2、动物细胞培养是动物细胞工程的基础。

下列产品不能通过动物体细胞培养直接获得的是（）A. 克隆动物B. 皮肤组织C. 组织细胞D. 疫苗3、与啤酒、葡萄酒并称世界三大古酒的黄酒是中国特产，即墨老酒是黄酒中的珍品，按照“黍米必齐、曲蘗必时，水泉必香、陶器必良、湛炽必洁、火剂必得”的古代造酒六法（古遗六法）酿制而成。

下列关于我国传统黄酒发酵的叙述，错误的是（）A. “黍米”中所含物质只能为微生物提供碳源和氮源B. “曲蘗”指酿造老酒的酵母菌，在酿造黄酒过程中进行有氧呼吸和无氧呼吸C. “湛炽必洁”为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要措施D. “火剂必得”的目的是控制适宜的温度保证酵母菌发酵所需4、控制哺乳动物的性别对于畜牧生产有着十分重要的意义；目前分离精子技术是有效的控制方法，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管动物。

试管牛的培育如下图所示。

下列有关叙述正确的的是（）A. 试管牛的培育属于有性生殖B. 过程①指的是体外受精技术和胚胎移植技术C. 采集来的精子和卵母细胞可以直接用于受精D. 经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致5、科学家用植物体细胞杂交方法，成功地培育出了“番茄—马铃薯”杂种植株（如图所示），其中①～⑤表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。

小鼠巨噬细胞移动抑制因子（MIF）ELISA检测试剂盒组成及配置说明小鼠巨噬细胞移动抑制因子（MIF）ELISA检测试剂盒组成及配置1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。

每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 ng/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，样品稀释液直接作为空白孔0 ng/ml。

如配制5 ng/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）10 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

6、检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100 /孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

7、检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液B 1:100稀释。

稀释方法同检测溶液A。

8、底物溶液：1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H2SO4）。

11、覆膜：5张12、使用说明书：1份小鼠巨噬细胞移动抑制因子（MIF）ELISA检测试剂盒说明1、由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。