土壤蔗糖酶( S-SC)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC）试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号：BC0240产品简介：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3，5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

产品内容：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入40mL蒸馏水充分溶解备用；试剂四：液体45mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/ml。

操作步骤：试剂名称测定管对照管标准管风干土样（g）0.10.1-试剂一（μL）1515-振荡混匀，使土样全部湿润，37℃放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）750--蒸馏水（μL）-750-混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000g，4℃，离心5min，取上清液，同时准备标准品上清液或标准品（μL）200200200试剂四（μL）500500500充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。

标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。

以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。

土壤蔗糖酶的测定方法(一)土壤蔗糖酶的测定方法简介土壤蔗糖酶是一种重要的土壤酶活性指标，其测定方法可以帮助我们了解土壤中有机质分解和糖类循环的过程。

本文将详细介绍几种常用的土壤蔗糖酶测定方法。

方法一：邻苯二甲酸缓冲法1.准备土壤样品和邻苯二甲酸缓冲液。

2.将土壤样品加入邻苯二甲酸缓冲液中，使样品均匀悬浮。

3.在恒温水浴中将样品搅拌一定时间，通常为1小时。

4.用酚酞指示剂进行滴定，直到溶液从紫色转变为粉红色。

5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。

6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性。

方法二：多酚类抑制法1.准备土壤样品和多酚溶液。

2.将土壤样品与多酚溶液混合，使样品与抑制剂充分接触。

3.静置一段时间，通常为4小时。

4.加入邻苯二甲酸缓冲液和酚酞指示剂，进行滴定。

5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。

6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性，与未添加抑制剂的样品相比较，计算抑制率。

方法三：重组蔗糖酶法1.准备土壤样品和蔗糖酶底物。

2.将土壤样品与蔗糖酶底物混合，使底物与土壤酶反应。

3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。

4.加入试剂，使反应停止。

5.根据试剂的反应产物的浓度变化，利用分光光度法或其他适当方法测定蔗糖酶活性。

方法四：荧光素二葡萄糖测定法1.准备土壤样品和荧光素二葡萄糖底物。

2.将土壤样品与荧光素二葡萄糖底物混合，使底物与土壤酶反应。

3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。

4.根据底物反应产物的荧光强度变化，利用荧光分析仪或其他适当设备测定蔗糖酶活性。

5.根据荧光强度的变化计算蔗糖酶活性。

结论通过以上介绍的几种方法，可以选择适合实际需求的土壤蔗糖酶测定方法。

无论是邻苯二甲酸缓冲法、多酚类抑制法、重组蔗糖酶法还是荧光素二葡萄糖测定法，都可以有效地测定土壤中的蔗糖酶活性，为土壤质量评价和农作物种植提供参考依据。

不同方法的选择应根据实际情况权衡利弊，以提高分析结果的准确性和可靠性。

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0270规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用；试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体2mL×1支，0.2μmol/mL酪氨酸溶液，4℃保存。

产品说明：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。

土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛（或更小）。

样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

操作步驟：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）100100--试剂二（μL）200----混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6次，使土样与反应液充分接触。

试剂三（μL）200200--试剂二（μL）-200--混匀，10000rpm室温离心10min，取上清液--上清液（μL）220220--标准液（μL）--220-蒸馏水（μL）---220试剂四（μL）650650650650试剂五（μL）130130130130混匀，40℃水浴10min，10000rpm室温离心10min，取上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质，基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖，葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸，并在508nm波长下有最大吸光值。

2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中，加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5 磷酸缓冲液，再加3mL 8%蔗糖溶液，摇匀后加盖，放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出，摇匀，并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中，并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸，再立即将玻璃管沸水浴中加热5min，加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml，在508nm波长下比色，记录吸光值。

3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水，慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌，直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。

b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中，并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。

（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。

b.按下表加液编号： 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 葡萄糖母液（ml） 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 饱和苯甲酸（ml） 0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13 葡萄糖浓度（mg/ml） 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 吸光值（A508nm） 0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.006 1.176 c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液，并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后，立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后，用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。

222土壤亚硝酸还原酶（S-NiR ）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4010规格：50T/24S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1支2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四液体25mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体25mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入1mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存2周。

临用前根据用量用蒸馏水稀释100倍，现用现配；2、试剂二：临用前加15mL 蒸馏水备用，2-8℃保存2周；3、试剂三：临用前加15mL 蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。

用不完的试剂2-8℃保存2周；4、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠标准液。

产品说明：土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase ，S-NiR ）是反硝化作用中的关键酶之一，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原酶类，可将NO 2-还原为NO ，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

亚硝酸还原酶可将NO 2-还原为NO ，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO -减少，即540nm 处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

NO -S-NiRNO4-Aminobenezenesulfonic AcidN-(1-Naphthyl)-EthylenediamineNO-Diazonium SaltRed Azo Dyes(540nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、研钵、冰和蒸馏水。

土壤漆酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1960规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前每瓶加15mL试剂一溶解。

试剂三：液体3mL×1瓶，常温保存。

若有白色物质析出，放于37℃中溶解即可。

产品说明：土壤漆酶（SL）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、震荡仪、30目筛（或更小）。

操作步骤：一、样本处理新鲜土样风干，过30目筛。

二、测定操作1.分光光度计预热30min，调节波长到420nm，蒸馏水调零。

2.加样表：试剂名称测定管对照管土样（g）0.10.1试剂一（μL）450450试剂二（μL）500-37℃水浴反应10min。

试剂三（μL）5050试剂二（μL）-5004℃12000g离心15min，取上清于420nm测定其吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照管。

三、土壤漆酶（SL）活性计算公式酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol ABTS自由基所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

SL活性（U/g）=ΔA÷(ε×d)×109×V反总÷W÷T=2.78×△A÷W。

ε：ABTS自由基摩尔消光系数：36000L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.001L；W，样本质量，g；T：反应时间，10min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

一、实验目的1. 了解土壤蔗糖酶活性的测定原理和方法。

2. 掌握土壤蔗糖酶活性的测定步骤和操作技巧。

3. 分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。

二、实验原理土壤蔗糖酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质，在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖和果糖，再与3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在508nm波长下，通过测定吸光度，可以计算出土壤蔗糖酶活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：风干土壤、蔗糖、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、硫酸、蒸馏水等。

2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、比色计、试管、烧杯、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1. 土壤样品处理：称取风干土壤0.15g，加入5ml蒸馏水，充分振荡后过滤，得到土壤悬液。

2. 标准曲线绘制：配制一系列葡萄糖标准溶液，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，在508nm波长下测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 土壤蔗糖酶活性测定：取3ml土壤悬液，加入1ml蔗糖溶液和2ml氢氧化钠溶液，混匀后置于50℃恒温水浴锅中反应30分钟。

取出后，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀，在50℃恒温水浴锅中反应10分钟。

取出后，加入硫酸终止反应，冷却至室温。

在508nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性。

4. 数据处理：计算土壤蔗糖酶活性，分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y=0.0628x-0.0026，相关系数R²=0.9989。

2. 土壤蔗糖酶活性测定：根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性为1.23U/g土壤。

3. 分析：土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子呈正相关。

一、目的了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。

二、原理本实验以Nelson 方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu 2+ 还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm 波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25~200μg。

三、主要仪器及试剂四、操作步骤1．标准曲线制作（1）取9 个具塞试管，按表1 加样：（2）向每管中加1mL Nelson 试剂，盖上塞子，置沸水浴中20 min。

冷至室温，向每管中加1 mL 砷钼酸试剂。

（3）5 min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，混匀。

（4）在510 nm 下测定光密度，以还原糖葡萄糖为横坐标，以OD510nm 值为纵坐标，制作标准曲线。

2．酶活力测定取2g 小麦苗，加入2mL 乙酸缓冲液，在冰浴中用研钵研磨成糊状，12 000r/min 离心10min，留取上清液用于酶活测定。

取2 支具塞刻度试管，向每个试管中加入乙酸缓冲液0.8ml，0.5 mmol/L 蔗糖溶液0.2mL，适当稀释的酶液1mL，以同样处理但不加酶液者为空白对照，室温下放置10min。

然后向每管中加1mL Nelson 试剂，置沸水浴中20min。

冷却至室温，向每管中加1mL 砷钼酸试剂，5min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，510 nm 下比色，测定光密度OD510nm。

五、实验结果活力计算：在室温、pH4.5 条件下，每分钟水解产生1μmol 葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1 个活力单位（U）酶活力的影响教师：XXX实验类型：基础学时：10(参考)内容：一、实验目的初步掌握用正交表设计实验方案并用数理统计方法处理实验数据的步骤和注意事项。

二、实验原理酶的催化作用受多种因素的影响。

欲求某因素对酶活力的影响，通常是固定其它因素，测定该因素不同水平下的酶活力。

土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质, 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖, 葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸, 并在508nm波长下有最大吸光值。

2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中, 加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5磷酸缓冲液, 再加3mL 8%蔗糖溶液, 摇匀后加盖, 放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出, 摇匀, 并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中, 并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸, 再立即将玻璃管沸水浴中加热5min, 加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml, 在508nm波长下比色, 记录吸光值。

3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水, 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌, 直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。

b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中, 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。

（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。

b.按下表加液编号: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10葡萄糖母液（ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07饱和苯甲酸（ml）0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13葡萄糖浓度（mg/ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.060.07吸光值（A508nm）0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.0061.176c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液, 并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后, 立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后, 用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4310规格:50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。

临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。

临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。

4℃保存一周。

产品简介：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。

3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本2020--标准溶液--20-蒸馏水---20试剂一808080试剂二-80--混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。