土壤β-1,4-葡聚糖酶 纤维二糖苷酶(S-C1)活性检测试剂盒说明书 微量法

土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4046规格:50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6mL×1瓶常温保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四液体20mL×1瓶2-8℃保存标准品液体59.3μL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：临用前加入1.97mL甲苯，即100μmol/mL油酸。

用前注意解冻溶解。

用不完的试剂可以2-8℃保存一个月。

2、工作液的配制：将试剂三临用前加入20mL蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。

冷却至常温后加入5mL试剂二混合，高速震荡2次，每次3min，间隔5min。

可根据该比例现用现配。

产品说明：脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。

该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

Triglyceride+LPS Fatty Acid+GlycerolFatty Acid+Cu2+Copperoleate(Soap)（蓝色络合物）710nm 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2、标准溶液的稀释：取50µL100µmol/mL油酸标准溶液，加入950µL甲苯，充分混匀，配制成5µmol/mL标准溶液待测，现用现配。

土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4025规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入3mL丙酮溶解。

产品说明：S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。

S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

自备实验用品及仪器：天平、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、丙酮、30目筛（或更小）。

操作步骤：一、样本处理土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，蒸馏水调零。

2、加样表：测定管对照管土样（g）0.030.03甲苯（μL）1515震荡混匀，室温静置15min。

试剂一（μL）255255试剂二（μL）30-30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。

流水冷却至室温。

试剂二（μL）-3014000g常温离心10min，取200μL上清于405nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照顾管。

三、酶活计算公式（1）按微量比色皿计算：酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。

S-LAP活性（U/g）=△A÷(ε×d)×109×V反总÷W÷T=0.507×△A÷W。

ε：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，300μL=3×10-4L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

土壤β-葡萄糖苷酶微板法土壤β-葡萄糖苷酶（soil β-glucosidase）是一种重要的土壤酶类，它在土壤有机碳循环和营养元素循环中扮演着重要角色。

本文将介绍土壤β-葡萄糖苷酶的微板法测定方法及其在土壤生态学研究中的应用。

β-葡萄糖苷酶是一类能水解葡萄糖苷键的酶，可将β-D-葡萄糖苷水解成葡萄糖和对应的配基。

它在生物体内广泛存在，包括植物、动物和微生物。

在土壤中，β-葡萄糖苷酶主要由微生物产生，参与碳、氮和磷等元素的循环过程。

微板法是目前常用的测定土壤β-葡萄糖苷酶活性的方法之一。

它通过利用培养基中的显色剂，如对氨基苯酚和氯化铵，与酶反应产生颜色变化，从而测定酶的活性。

这种方法具有操作简便、灵敏度高、准确度好等优点，被广泛应用于土壤生态学研究中。

微板法的步骤如下：1. 样品制备：收集土壤样品后，将其通过筛网过滤，去除大颗粒杂质。

然后将土壤样品加入适量的缓冲液中，使土壤与缓冲液充分混合。

2. 培养基制备：制备含有显色剂的培养基。

常用的培养基配方为：对氨基苯酚、氯化铵和磷酸盐缓冲液。

3. 混合反应：将土壤样品和培养基混合，使其充分接触。

然后将混合物均匀地分配到微孔板的孔中。

4. 孵育：将装有混合物的微孔板放入恒温培养箱中，以适当温度孵育一定时间。

常用的孵育温度为30摄氏度，孵育时间为24小时。

5. 颜色测定：孵育结束后，使用光谱分光光度计测定微孔板中孔的吸光度。

根据吸光度的变化，可以推算出土壤样品中β-葡萄糖苷酶的活性。

土壤β-葡萄糖苷酶的活性可以反映土壤中有机质的分解能力和微生物的活跃程度。

在土壤生态学研究中，通过测定土壤β-葡萄糖苷酶活性，可以评估土壤的健康状况、有机质分解速率和养分循环能力。

此外，β-葡萄糖苷酶活性还与土壤的物理化学性质、植被类型和管理方式等因素密切相关，因此可以用于土壤质量评价、土壤肥力改良和生态系统管理等方面。

土壤β-葡萄糖苷酶微板法是一种常用的测定土壤酶活性的方法，其操作简便、准确度高，在土壤生态学研究中具有重要应用价值。

β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC2620规格：50T/24S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加2mL蒸馏水。

试剂二：液体35mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体35mL×1瓶，4℃保存。

标准液：液体1mL×1支，4℃保存，5μmol/mL对硝基苯酚溶液。

产品说明：β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。

另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取1.植物样本：称取约0.1g样品，加1.0mL提取液充分冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃，离心20min，弃沉淀，取20μL上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。

2.细菌、真菌样本：收集约500万个细胞，加入1.0mL提取液，超声波破碎（冰浴，功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，弃沉淀，取20μL上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。

3.标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL。

二、测定操作表1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2、操作表对照管测定管空白管标准管酶液（μL）200200标准品（μL）200试剂一（μL）50试剂二（μL）400350600400混匀，45℃水浴20min试剂三（μL）400400400400混匀，静置5min，1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定A 405吸光值，分别记为A 对照、A 测定、A 空白、A标准。

纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4117100T/96S试剂名称规格保存条件提取液一液体400mL×1瓶（自备）2-8℃保存提取液二液体100mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、提取液一：80%乙醇400mL，即将320mL无水乙醇和80mL蒸馏水混合，自备。

提供一个125mL空瓶。

2、标准品：10mg葡萄糖。

临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。

3、工作液的配制：取一瓶试剂一中加入2.5mL试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌；用不完的试剂可以2-8℃保存一周。

纤维素是由β-D-葡萄糖单元以β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。

以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。

纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。

在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。

\Cellulose H2SO4β-D-Glucose H2SO45-Hydroxymethylfurfura5-Hydroxymethylfurfura+Anthrone Furfural Derivatives（620nm）最低检出限：0.0037mg/mL线性范围：0.00391-0.3mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞壁物质（CWM）的提取：（1）称取约0.3g（记为W1）样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴20min，冷却至室温，6000g，25℃离心10min，弃上清。

纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4285规格:100T/96S产品简介：纤维素是由β-D-葡萄糖单元以β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。

以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。

纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。

在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。

产品内容：提取液一：80%乙醇400mL，即将320mL无水乙醇和80mL蒸馏水混合，自备。

提取液二：液体100mL×1瓶，4℃避光保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存；试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存；标准品：粉剂×1支，10mg无水葡萄糖。

临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成10mg/mL葡萄糖溶液备用。

工作液的配制：在试剂一中加入5mL试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌；用不完的试剂，4℃可保存一周。

操作步骤：一、纤维素的提取：1、细胞壁物质（CWM）的提取：称取约0.3g（记为W1）样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴20min，冷却至室温，6000g，25℃离心10min，弃上清。

沉淀先后用1.5mL提取液一和丙酮各洗两遍（涡旋振荡2min左右，6000g，25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡15小时，6000g，25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，得到细胞壁物质（CWM），称重记为W2。

2、纤维素的提取：称取烘干的CWM约5mg（记为W3），加入0.5mL蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至EP管中，用蒸馏水定容至0.5mL，置于冰水混合物中，缓慢加入0.75mL浓硫酸，缓慢混匀，冰水浴中静置30min。

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4032规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶-20℃保存试剂三液体60mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入4mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周；2、标准品：5mmol/L的对硝基苯酚溶液。

产品说明：土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶体中的一种酸性水解酶。

其活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-NAG分解对硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。

S-NAGP-Nitrobenzene-β-N-Acetylglucosamine P-Nitrophenol(400nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min，波长调至400nm，蒸馏水调零。

2、标准溶液的稀释：临用前取20μL5mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂一，充分混匀，配制成100μmol/L标准液使用，现用现配。

（实验中每管需要500μL，为减小实验误差，故配制大体积。

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4000规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入7.5mL蒸馏水溶解，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体60mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体1mL×1支，5mmol/L的对硝基苯酚溶液，4℃保存。

临用前用试剂一将标准品稀释50倍得100μmol/L的标准溶液。

产品说明：土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶体中的一种酸性水解酶。

其活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-NAG分解对硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30目筛（或更小）、和蒸馏水。

测定操作：一、样本处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、操作步骤：（1）分光光度计预热30min，波长调至400nm，蒸馏水调零。

（2）加样表：试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）475475--试剂二（μL）125---混匀，37℃水浴1h后，立即沸水浴5min（盖紧，防止--水分散失），流水/冰浴冷却。

试剂二（μL）-125--12000g25℃离心10min，取上清液--上清液（μL）500500--标准品（μL）--500-蒸馏水（μL）--500试剂三（μL）1000100010001000室温静置2min后，10000g常温离心5min，取上清测定400nm处的吸光值A。

分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。

货号：QS2935 规格：50管/24样土壤β-葡萄糖苷酶（Solid-β-Glucosidase，S-β-GC）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

测定原理：S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有特征光吸收。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：甲苯5mL×1 瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体25mL×1 瓶，4℃保存；试剂四：液体50mL×1 瓶，4℃保存；样品处理：新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

混匀，37℃振荡反应 1h 后，立即90℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处蒸馏水调零，测定吸光值 A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。

每个测定管设一个对照管。

第1页，共2页S-β-GC 活力计算：标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-β-GC 活力（μmol/d /g 土样）＝(ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：9.25×10-4 L；W：样本质量，0.05g第2页，共2页。

一、概述土壤中的β-1,4-葡萄糖苷酶是一种重要的酶类，在土壤中具有分解植物残渣和有机碳分解的作用。

测定土壤中β-1,4-葡萄糖苷酶的活性，对于了解土壤有机碳的分解情况以及生物量的活动情况具有重要意义。

本文将对土壤β-1,4-葡萄糖苷酶的测定方法进行详细介绍。

二、土壤β-1,4-葡萄糖苷酶的作用1. 分解植物残渣β-1,4-葡萄糖苷酶能够分解土壤中的植物残渣，将其转化为有机质和营养物质，为土壤中微生物的生长提供能量和养料。

2. 有机碳分解β-1,4-葡萄糖苷酶还能够分解土壤中的有机碳物质，促进土壤中碳的循环和代谢过程，对维持土壤的健康和生态平衡具有重要作用。

三、土壤β-1,4-葡萄糖苷酶的测定方法测定土壤β-1,4-葡萄糖苷酶的活性与其在土壤中的生物地球化学循环密切相关，因此需选择合适的测定方法来准确反映其活性水平。

1. 酶活性测定利用酶活性测定可以直接测定土壤中β-1,4-葡萄糖苷酶的活性，常用的方法包括对取样土壤进行酶促反应后测定其产生的产物的浓度，或者直接测定土壤中的酶活性水平。

2. 活性指标测定β-1,4-葡萄糖苷酶的活性指标包括土壤中的酶活性水平和底物降解速率，可以通过测定土壤中的糖苷酶活性以及在一定时间内底物的降解速率来间接反映酶的活性水平。

3. 分子生物学方法利用分子生物学方法可以从土壤中提取土壤微生物的DNA，通过PCR 扩增和测序技术检测β-1,4-葡萄糖苷酶基因的存在和水平，从而推断土壤微生物对β-1,4-葡萄糖苷酶的影响。

四、测定方法的选择与应用在实际应用中，应根据研究目的和具体的土壤环境特点选择合适的测定方法。

如在研究土壤中有机碳的分解情况时，可选择酶活性测定方法，以直接测定土壤中β-1,4-葡萄糖苷酶的活性水平。

而在研究土壤微生物对酶的影响时，则可选择分子生物学方法，从而了解土壤微生物对β-1,4-葡萄糖苷酶的分解情况。

五、结论土壤中的β-1,4-葡萄糖苷酶是一种重要的土壤酶，在土壤中具有重要的生物地球化学作用。