血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。

2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。

醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。

将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。

该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。

醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。

它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。

该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。

目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。

三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。

若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。

实验中应选用质地均匀的薄膜。

因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。

例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。

将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。

2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。

取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。

然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。

按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。

二、点样在薄膜无光泽的一面点样。

点样区距负极端1.5㎝处。

点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳__ENT 5血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和方法。

实验目的支持介质醋酸纤维素是把纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,将其涂布得到的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。

这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象；膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，分离速度快，电泳时间短；样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。

因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。

实验原理蛋白质名称白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白等电点(pI) 4.8 5.06 5.06 5.12 6.85-7.3 相对分子质量__ 2022年00 __ __-__ __-__本实验是以醋酸纤维素薄膜为支持物的区带电泳。

在PH8.6的缓冲液中，各蛋白均带负电荷，在电场中向正极泳动。

由于血清中不同蛋白质所带的电荷数量及分子量不同，因此泳动速度不同，从而彼此分离。

电泳薄膜经染色和漂洗，可清晰呈现五条区带！经洗脱比色或者薄膜经透明处理后扫描可以测定各蛋白组分的相应百分含量。

操作点样将醋酸纤维素薄膜小条浸泡于PH8.6的巴比妥缓冲液中，使之完全浸泡透。

将浸泡的薄膜取出，用滤纸吸去多余的水分，让薄膜的无光泽面向上，用有机玻片末端蘸取少量血清在距一末端 1.5cm处点样。

电泳将点样的薄膜无光泽面向下，置于电泳槽支架上，点样端置于负极。

槽架上用4层滤纸做桥垫，膜条与滤纸必须贴紧，平衡5min后通电，电压110v电泳1h。

染色电泳结束后，用镊子将膜取出，直接浸于氨基黑10B中染1min,后置于漂洗液中反复漂洗至背景干净为止。

用滤纸吸干薄膜。

结果观察一般在染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。

从正极端起，依次为清蛋白、α1球蛋白、α2 球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。

实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【原理】由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异，电泳时可将其分离。

醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快，区带清晰，操作简便等优点。

血清含多种蛋白质，用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，经固定染色后不仅可看到清晰的色带，而且可定量测定，计算出各种蛋白质的百分含量，其正常值如下：A(白蛋白) 57～72%α1球蛋白 2～5%α2球蛋白 4～9%β球蛋白 6.5～12%γ球蛋白 10～20%某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。

【仪器】电泳仪 721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子(或竹夹子)【试剂】1．巴比妥缓冲液(pH8.6，离子强度0.06)：巴比妥纳12.7g，巴比妥1.66g，先加水少量，小心加热溶解，最后用蒸馏水定容为1 000ml，4℃保存。

2．氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50ml，冰醋酸1.0ml，蒸馏水40ml，混匀。

3．漂洗液：95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，按比例混匀。

4．0.4N NaOH溶液。

【操作】1. 点样：将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状，浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取出置于滤纸上，轻轻吸去多余的缓冲液，再于薄膜的无光泽面的一端2.5cm处，用小玻片蘸取少许血清，垂直印于膜上，待样品浸入膜后，将薄膜有样品的一面向下(以防蒸发干)贴在电泳槽架上，两端用数层浸湿的滤纸（或纱布）作盐桥贴紧。

（其他样品同样处理，若需标记，只能用铅笔书写于有光泽面的两端。

）2．通电：一般电压用90～120V，电流约0.4～0.6mA／cm，通电45至60分钟，待电泳区带展开约25～35mm后关闭电源。

3．染色：通电完毕，将薄膜直接浸于染色液中，3～5分钟后取出放入另一盘中，用漂洗液浸洗数次,每次3分钟，至脱色使背景无色为止。

染色完毕，将染色液倒回原瓶，漂洗液注入回收瓶。

4．定量：将漂洗完毕的薄膜吸干，剪下每种蛋白质色带，另于空白处剪一窄条薄膜，分别放入有4m1 0.4N NaOH的中试管内，振摇数次，使染料色泽浸出，30分钟后，分别于650nm处读吸光度(空白薄膜条浸出液作空白对照)。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果1. 实验背景说起血清蛋白，大家可能觉得这听起来像是医生的专业术语，其实它和我们的日常生活有着密切的关系。

血清蛋白就像是我们身体里的“搬运工”，负责运输各种营养物质、激素和废物。

想象一下，它们就像是一个个小快递员，在血液这条大街上忙忙碌碌，辛勤工作，保持我们的身体正常运转。

哎，真是个不容易的职业！为了更好地了解血清蛋白，我们常常用到醋酸纤维薄膜电泳这项技术。

虽然听起来复杂，但其实就是把血清蛋白“分门别类”，让它们各自展现自己的风采。

2. 实验过程2.1 准备工作实验开始前，咱们得先准备好材料。

这可不是随便拉拉家里的东西就能搞定的。

我们需要高质量的血清样本，还有醋酸纤维膜、缓冲液等等，听起来就像是在准备一场盛大的宴会。

每一个小细节都不能马虎，毕竟“千里之行，始于足下”。

做好准备，咱们就可以开始了。

2.2 实验步骤先把血清样本滴在醋酸纤维膜上，嘿，就像给它们来个小小的“泡泡浴”。

然后，我们把膜放进电泳槽，电流一打开，哇！就像给这场聚会打上了光速，血清蛋白们开始“分开舞动”，每种蛋白根据大小和电荷的不同，表现出不同的迁移速度，简直是一场精彩的“舞蹈比赛”。

最后，咱们用染料将它们染色，瞬间，整个膜上就像开满了五彩缤纷的花朵，各种颜色交织在一起，真是美丽得让人心醉！3. 实验结果3.1 观察到的现象看着膜上那些不同颜色的条带，心里不禁感慨万千。

这些条带就像是一幅复杂的画卷，每一条都代表着一种不同的血清蛋白，真是让人忍不住想一探究竟。

我们能够清楚地看到每种蛋白的相对浓度，甚至还可以发现一些隐藏的“明星蛋白”。

这些小家伙可是咱们健康的重要守护者，它们的数量和状态直接影响着我们的身体。

3.2 数据分析接下来就是分析数据了。

通过定量分析，我们可以得出不同蛋白的浓度比。

这就像是在选拔赛中，评委们仔细打分，谁是冠军，谁又是陪跑的，都一目了然。

根据不同的情况，比如炎症、营养不良等，咱们也能从这些数据中找到线索。

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理哎呀，这可是个大课题啊！不过别着急，咱们一步一步来，先来聊聊醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的原理。

其实，这个实验就是让蛋白质在醋酸纤维薄膜上“跑”起来，然后根据它们的运动速度和方向来区分不同的蛋白质。

听起来好像很高深的样子，但其实很简单，就像我们在学校里做的那些实验一样。

咱们要准备一些东西。

除了醋酸纤维薄膜、电泳仪、缓冲液等基本材料外，还需要一些血清蛋白样品。

血清蛋白是血液中的一类重要成分，它们可以帮助我们了解身体的健康状况。

这些蛋白质可不是随便取的，得是新鲜的、高质量的才行。

接下来，咱们就要开始实验了。

要把血清蛋白样品加入到缓冲液中，这样可以给它们提供一个合适的环境。

然后，把缓冲液倒入电泳仪中，让它开始工作。

这时候，醋酸纤维薄膜就会变得非常有活力，因为它上面有很多小的孔隙，可以让小分子穿过。

当电场作用在醋酸纤维薄膜上时，这些小分子就会被推着在薄膜上移动。

而血清蛋白呢？它们就像一群顽皮的孩子，总是喜欢在一起玩耍。

当电场作用在它们身上时，它们就会跟着一起跑起来。

那么问题来了，怎么才能知道这些蛋白质跑得快还是慢呢？这就需要用到电泳迁移率了。

所谓迁移率，就是指蛋白质在电场作用下移动的速度。

不同的蛋白质，它们的迁移率是不一样的。

比如说，血红蛋白的迁移率就比较低，而胰岛素的迁移率就比较高。

所以，通过观察蛋白质在醋酸纤维薄膜上的迁移情况，我们就可以判断出它们的身份了。

这个实验还有很多细节需要注意。

比如说，样品的质量、浓度、pH值等因素都会影响到实验结果。

而且，有时候还会遇到一些干扰因素，比如气泡、杂质等。

但是只要我们认真操作，仔细观察，就一定能得出准确的结果。

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验是一种非常有趣且实用的方法。

它可以帮助我们了解身体内部的各种蛋白质成分，从而更好地维护我们的健康。

所以啊，大家一定要认真学习这个实验哦！。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清中的蛋白质进行分离和定性，同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析，加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。

二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。

其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同，大小不同的蛋白质在电场的作用下，向正极或负极移动的速度也不同，从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。

三、实验步骤1.准备试剂和仪器：醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。

2.配制试剂：按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。

3.加样：将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上，控制加样量为5μL。

4.浸泡：将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟，使其完全湿润。

5.电泳：将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上，再覆盖上另一块玻璃板，然后将电泳槽装配好，接通电源进行电泳。

电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。

6.染色：电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，放入染色液中染色10分钟，以便更好地观察蛋白质条带。

7.脱色：将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色，直到背景清晰，蛋白质条带颜色较浅为止。

8.扫描定量：利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描，获取各蛋白质条带的OD值（吸光度），计算各蛋白质的相对含量。

四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳，我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。

从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值，通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。

以下是本实验的部分实验数据：OD值（吸光度）数据分析表：通过本次实验，我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。

同时通过扫描定量，我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)一、实验目的本实验旨在掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作的技能，通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析，了解蛋白质电泳分析中常用的方法和技术，并且能够初步理解血清蛋白质电泳图谱的含义和影响因素。

二、实验原理1. 蛋白质分离原理蛋白质分离是利用蛋白质之间在电场中的运动迁移率的不同分离的。

蛋白质在电场中的运动迁移率取决于蛋白质分子的大小、形状、电荷性质等的不同。

2. 醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素膜为电泳区间的蛋白质电泳方法。

其原理为，蛋白质在正常向电场中发生运动，随着蛋白质运动迁移，逐渐进入膜孔中，受到膜孔的限制，蛋白质停止迁移。

大分子的蛋白质分子无法进入膜孔，小分子的蛋白质可以进入膜孔，分子大小的差异导致了蛋白质的分离。

醋酸纤维素膜孔的大小通常小于3纳米，蛋白质要进入膜孔需要满足一定的条件，如形状、电荷、大小等，因此通过醋酸纤维素膜孔的筛选效果，可以将蛋白质分离出不同性质和大小的蛋白质组分。

三、实验步骤1. 操作前准备：① 气泡清除：取适量蒸馏水，通入空气，将水搅动形成气泡，并将其排出，重复多次，以去除气泡。

② 涂膜：取新的醋酸纤维素膜，利用毛刷刷上适量真空脱泡机中的真空润湿液，边刷边使薄膜平铺，直至全部涂膜结束。

2. 样品制备① 取0.5 mL 的实验样品，放入1.5 mL 的离心管中，室温下放置5 min，使蛋白质沉淀和分散。

② 在超净工作台或洁净室内操作，将样品香磨匀，取样板，向上转移液体吸头轻轻吸取一下，将液体加入样品槽中。

3. 电泳操作① 将准备好的醋酸纤维素膜，贴在电泳仪的隔板上，并将隔板安装在电泳槽内。

② 将电泳槽中的电泳缓冲液（TGE）加热并耗尽气泡之后，轻轻将样品槽放入电泳槽中，注意不能与电泳膜接触，最后慢慢加入样品针头的样品。

③ 大致运行5-10min 后，可观察到样品在膜上积累。

④ 电泳完成后，将电泳槽内的醋酸纤维素膜取出，将其在甲醇以及蒸馏水中洗涤3次，最后在蒸馏水中洗涤一次。