抗骨桥蛋白_OPN_和整合素_3抗体中和OPN_整合素_3对小鼠胚泡种植的影响
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小鼠胚胎与子宫内膜中整合素α5的表达李英;陈军;吕丹瑜【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2003(026)001【摘要】目的:观察整合素α5在小鼠早期胚胎和子宫内膜中的表达分布状况,探讨整合素在胚胎着床中的可能作用.方法:用免疫组织化学ABC法染色,对发育不同时期的小鼠胚卵和妊娠2 d~6 d、8 d、13 d以及非妊娠期的子宫内膜中整合素α5的表达分布进行形态学观察与半定量分析.结果:整合素α5的阳性反应物质在小鼠早期胚卵胞浆内;非妊娠期子宫内膜和妊娠期的脱膜上皮与基质细胞内均有整合素α5表达,植入前表达相对较弱,植入后随妊娠的进展逐渐增强.结论:提示整合素α5在小鼠胚卵着床中起重要作用:推测它不参与胚卵对母体子宫内膜的识别和粘附,而是参与了粘附后的侵入及胚胎发育过程.【总页数】6页(P1-6)【作者】李英;陈军;吕丹瑜【作者单位】北京大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,北京,100083;北京大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,北京,100083;北京大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,北京,100083【正文语种】中文【中图分类】Q954.5【相关文献】1.小鼠早期完整胚胎诱导子宫内膜白血病抑制因子和整合素β3表达并提高子宫容受性 [J], 李婷婷;方丛;贾磊;岳超敏2.整合素β3在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 刘能辉;周昌菊3.过表达CD82对植入期小鼠子宫内膜整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin 表达的影响 [J], 尉晓蔚;谭冬梅;张倩;何通川;谭毅4.围植入期小鼠子宫内膜中整合素β3亚基的表达 [J], 卢桂兰;武玉玲;邴鲁军;宋卫华;朱传菊5.整合素β_3在小鼠植入期子宫内膜中的表达 [J], 白照岱;武玉玲;邴鲁军;张宝华因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
围植入期小鼠子宫内膜中整合素β3亚基的表达卢桂兰;武玉玲;邴鲁军;宋卫华;朱传菊【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2004(013)002【摘要】目的研究整合素β3亚基与胚泡植入的相关关系.方法取未孕动情期、真孕及假孕3-6天小鼠子宫作切片,用免疫组织化学和图像分析法检测整合素β3亚基围植入期子宫内膜的表达状况和变化规律.结果整合素β3亚基仅分布于子宫内膜腺上皮的细胞膜.在真孕组小鼠,受精后第4天,整合素β3亚基含量明显上升,第5天达到高峰,第6天又突然回落;假孕组小鼠,只有第5天时呈弱阳性表达,其余各天的表达均降至检测水平之下.结论①整合素β3亚基在真孕小鼠子宫内膜的表达与植入窗的开放相吻合,是子宫内膜接受性的客观标志.②启动整合素β3亚基表达变化的信号不仅受母体因素调控,还与胚泡刺激有关.【总页数】4页(P164-167)【作者】卢桂兰;武玉玲;邴鲁军;宋卫华;朱传菊【作者单位】北京市疾病预防控制中心传染病与地方病控制所,北京,100013;山东大学医学院组织胚胎不教研室,济南,250012;山东大学医学院组织胚胎不教研室,济南,250012;山东大学医学院组织胚胎不教研室,济南,250012;山东大学医学院组织胚胎不教研室,济南,250012【正文语种】中文【中图分类】R321【相关文献】1.血管内皮生长因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 高晓妹;陈晓蓉;张荣宜2.巨噬细胞移动抑制因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 张荣宜;陈晓蓉;朱坤3.整合素β3在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 刘能辉;周昌菊4.骨桥蛋白(OPN)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 刘能辉;周昌菊5.整合素β_3在小鼠植入期子宫内膜中的表达 [J], 白照岱;武玉玲;邴鲁军;张宝华因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
·基础研究·骨桥蛋白对鼠皮肤表皮干细胞的生物学影响李琴,王佐林(同济大学附属口腔医院口腔种植科,上海200072)[摘要]目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。
方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态,采用β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色鉴定,并进行细胞生长曲线测定,流式细胞仪分析及细胞克隆形成率测定,以角质形成细胞作为对照。
实验对不同浓度rrOPN处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞生长率,ELISA法测定IL-6、IL-1炎性因子分泌的变化。
结果:倒置显微镜观察所得鼠表皮干细胞呈上皮样生长,电镜观察细胞胞核大,较多处于分裂象。
免疫组织化学检测表皮干细胞β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色均呈阳性。
细胞周期分析表皮干细胞中48.9%的细胞处于DNA合成期,细胞克隆形成率为34.7%。
5~50ng/mL 的rrOPN促进角质形成细胞生长,浓度为15ng/mL的rrOPN促进细胞生长作用最显著(P<0.05)。
rrOPN引起IL-6明显升高(P<0.05),IL-1β未见明显上调。
结论:成功建立大鼠表皮干细胞分离、培养方法,rrOPN促进表皮干细胞增殖,并促其炎性因子分泌,影响创口愈合。
[关键词]表皮干细胞;骨桥蛋白(OPN);细胞培养;创口愈合;鼠[中图分类号]R329.28[文献标志码]A[文章编号]1005-4979(2012)01-0008-07doi:10.3969/j.issn.1005-4979.2012.01.002The Biological Effects of OPN on Skin Epidermal Stem Cells of RatLI Qin,WANG Zuo-lin(Department of Oral Implantology,Hospital of Stomatology,Tongji University,Shanghai200072,China)[Abstract]Objective:The present study was designed to investigate the effects of recombinant rat osteopontin(rrOPN) on the proliferative effects of epidermal stem cells in vitro and the secretion of IL-6and IL-1βby the cells.Methods:The epidermal stem cells were isolated from SD rats and cultured in vitro.The cell growth was observed by an inverted microscope and electron microscope.Immunocytochemistry was used to observed the expression ofβ1-integrin,keratin15 (CK15),keratin19(CK19),keratin5(CK5)and keratin10(CK10).The characteristics of the growth curve were explored, and the cell cycle was determined with flow cytometry(FCM)analysis and the colony forming efficiency(CFE)was studied.Keratinocytes were served as controls.The epidermal stem cells were treated with rrOPN at different concentrations.The influences of rrOPN on the proliferation of epidermal stem cells were checked by MTT assay.The secretion levels of IL-6 and IL-1βin culture supernatant were determined with ELISA.Results:Epidermal stem cells showed an epithelial-like appearance under inverted microscopy.Many mitotic figures were observed by electron microscopy.Positive expression of β1-integrin,CK15,CK19,CK5and CK10of cultured cells were detected by immunocytochemistry.The cell cycle profile analysis showed that48.9%cells were in the S stage.The CFE of the epidermal stem cell was34.7%.Concentration of rrOPN ranging from5ng/mL to50ng/mL could stimulate the proliferation of epidermal stem cells,while most remarkable at the concentration of15ng/mL.The IL-1βlevels were significantly increased after induced with rrOPN(P<0.05),but the IL-6levels had no statistically changed(P>0.05).Conclusion:Skin Epidermal stem cells of rats can be successfully isolated and cultured in vitro;and rrOPN stimulated the proliferation of epidermal stem cells,and the secretion of IL-1βin epidermal stem cells could be induced with rrOPN.[Key words]epidermal stem cell;osteopontin(OPN);cell culture;would healing;rat收稿日期:2011-11-02基金项目:国家自然科学基金资助项目(30872904)作者简介:李琴(1986—),女,上海人,硕士研究生.E-mail:liqintj1986@通信作者:王佐林,教授.E-mail:zuolin@表皮干细胞在皮肤组织的自我更替及维护机体内环境稳态中发挥着重要作用,应用干细胞的无限增殖和多向分化潜能进行表皮重建将有重大实用价值。
doi:10.3969/j.issn.2095-3887.2020.02.012骨桥蛋白(OPN&在绵羊胎盘形成和发育中的作用余乾杨永林张得林2,杨华1(1.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所,石河子832000;2.新疆生产建设兵团技术市场办公室,乌鲁木齐830002)摘要:骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种促进子宫与孕体相互识别的主要候选因子,在胚胎着床和胎盘形成发育过程中发挥着重要作用。
大量的研究表明,子宫内膜腺上皮分泌OPN经过磷酸化酶修饰后分布到子宫腔,并与子宫腔上皮和滋养外胚层上的整合素受体或CD44受体连接,启动一系列信号通道促进胚胎的粘附着床。
胚胎着床后,母胎界面的OPN刺激胎盘血管的生成以及调节母胎之间Ca2+流量等,以促进胎盘形成和发育。
近年来,OPN对胎盘发育的作用越来越受到关注。
基于此,文章对OPN的结构和功能,及其在促进子宫与孕体相互识别、胚胎着床、胎盘发育和形成中的作用进行了综述,以供同行参考。
关键词:骨桥蛋白;绵羊胎盘;整合素;CD44中图分类号:S826文献标志码:A文章编号:2095-3887(2020)02-0053-04Roles and Molecular Regulation of Osteopontin in Sheep Placenta Formation and DevelopmentYu Qian1,Yang Yonglin1,Zhang Delin2,Yang Hua1(1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Shihezi832000,China;2.0伍Re of Technologies Market of Xinjiang Production and Construction Corps,Ulumuqi830002,China)Abstract:The placenta is of utmost importance for intrauterine fetal development and growth.Placental formation and development is an extremely complex process in the uterus.Osteopontin(OPN),also known as secreted phosphoprotein1 (SPP1),is a member of the small integrin-binding ligand N-linked glycoprotein(SIBLING)family of extracellular matrix proteins/cytokines.OPN bridges trophectoderm of embryos and uterine endometrium in the period of implantaion and placentation.In recent years,more and more attention has been paid to the role of OPN in placental development.This paper reviewed the role of OPN in promoting mutual recognition between uterus and oosperm,in the mechanism of embryo implantation process and in the formation of the placenta,with a view to providing reference for peers.Keywords:osteopontin;placenta;integrin;CD44骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种糖基化磷酸蛋白,属于细胞外基质,与其整合素受体和CD44受体产生联接,发挥大量的生物学功能。
小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定刘祥;陈春琳;王杨科;俱雄;吴三桥;张涛【摘要】为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Westernblotting检测抗血清特异性.OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1∶1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性.结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)005【总页数】7页(P1069-1075)【关键词】OPN蛋白;RT-PCR;多克隆抗体;ELISA;Western blotting【作者】刘祥;陈春琳;王杨科;俱雄;吴三桥;张涛【作者单位】陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001;陕西理工学院生物科学与工程学院,汉中723001【正文语种】中文【中图分类】Q786骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型的非胶原骨基质糖蛋白[1],具有8 个α-螺旋和6 个β-折叠结构;存在与整合素受体结合的高度保守序列(Arg-Gly-Asp,RGD)[2],介导细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附作用[3],调节胞内Ca2+浓度、NO 水平[4]。
抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响刘能辉;周昌菊【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2012(22)18【摘要】目的研究骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体对小鼠胚泡着床的影响.方法取20只孕4d小鼠,分别在两侧子宫角内注射骨桥蛋白抗体、整合素β3抗体,对照组注射生理盐水,正常妊娠空白对照组未行任何处理,于孕8d处死小鼠,统计胚泡着床数及妊娠率,取子宫观察内膜的组织学变化.结果结果显示骨桥蛋白抗体组小鼠妊娠率为60%,平均胚胎着床数为1.6±1.19,整合素β3抗体组妊娠率为70%,平均胚胎着床数为1.7±1.28,明显低于生理盐水组及空白对照组(90%,10.0±1.63及100%,10.5±1.58),提示骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡着床.结论骨桥蛋白和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡的着床并导致子宫内膜的形态学变化,这提示骨桥蛋白和整合素β3与子宫内膜容受性获得有关.骨桥蛋白和整合素β3参与了小鼠胚泡的着床.【总页数】5页(P18-22)【作者】刘能辉;周昌菊【作者单位】中南大学湘雅医院妇产科生殖医学中心,湖南长沙410008;中南大学湘雅三医院妇产科,湖南长沙410013【正文语种】中文【中图分类】R711-6【相关文献】1.整合素α5及其配体纤粘连蛋白抗体对胚泡着床的影响 [J], 梁虹;陈军;郑英2.小鼠骨桥蛋白(OPN)基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体内抑制效果鉴定 [J], 郭满;林晶;陈进宏;蔡端3.骨桥蛋白(OPN)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达 [J], 刘能辉;周昌菊4.抗骨桥蛋白(OPN)抗体对沙鼠肝多房棘球蚴组织IL-2和IL-5表达的影响 [J], 高亮亮;张示杰;吴向未;张永国;张龙;彭心宇;曹玉文;孙红5.体外研究整合素αv、α4、β1、β3在小鼠胚泡着床中的作用 [J], 宋芳;李英因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
子宫内膜容受性的评估及改善方法胚胎质量与子宫内膜容受性是影响辅助生殖技术成功率的两个最重要因素。
当子宫内膜容受性存在缺陷会影响受精卵的着床从而导致不孕症和降低辅助生殖技术的成功率。
因此,对子宫内膜容受性进行正确的评估与合理的干预是生殖医学界研究的热点。
标签:子宫内膜容受性;评估;干预;改善胚胎着床是一个复杂的涉及众多生物机制的程序化过程,其中胚胎质量与子宫内膜容受性是两个最重要的因素。
所谓的子宫内膜容受性即子宫内膜对胚胎的接受能力,是指子宫内膜处于一种允许囊胚定位、粘附、侵入并使内膜腺体间质发生改变从而导致胚胎着床的状态。
当子宫内膜容受性存在缺陷,会影响受精卵的着床,导致不孕症和影响辅助生殖技术的成功率。
因此,对子宫内膜容受性进行正确的评估与合理的干预、改善是生殖医学界研究的热点。
1子宫内膜容受性的调节及评估1.1形态学评估1.1.1子宫内膜胞饮突大量研究证实,胞饮突是子宫内膜容受性建立和植入窗开放的重要形态学指标,成熟期胞饮突的出现标志着子宫内膜处于最佳状态。
扫描电镜对子宫内膜连续监测显示:自然周期中胞饮突于月经第18〜19 d开始出现,成熟时间于月经第20〜21 d,持续时间S48 h,与子宫内膜最大接受性出现时间一致。
有研究结果表明,动物胚泡的着床位置均出现在胞饮突区域,粘附在胞饮突顶端。
胞饮突表达量与胚泡着床率呈正相关,因此胞饮突被认为是子宫内膜容受性的形态学标志[1]。
1.1.2超声学指标1.1.2.1内膜厚度超声检查时,子宫内膜厚度主要是指子宫前后壁的内膜厚度与宫腔间隙的总和。
有研究显示,在IVF助孕周期中,妊娠组和非妊娠组的妇女子宫内膜厚度有显著差异,内膜厚度2 mL时受孕率显著提高[5]。
1.1.2.4子宫动脉血流状况对子宫动脉血流情况进行诊断时,彩超检查可以确定其相关参数。
目前,阻力指数(RI)和博动指数(PI)是最为常见的检测指标,RI和PI低,说明血管阻力低,卵巢及子宫灌注良好,反之,血管阻力高,子宫动脉血流少,子宫的整体血流灌注较差。
整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用
宋芳;李英;王光明;吕丹瑜
【期刊名称】《解剖学杂志》
【年(卷),期】2003(026)004
【摘要】目的:探讨整合素αv、α4在小鼠胚泡植入中的作用.方法:在体外培养的人蜕膜细胞中分别加入整合素αv、α4抗体,与小鼠胚泡共培养,观察整合素αv、α4抗体对小鼠胚泡在体外培养的人蜕膜细胞上的粘附和铺展的影响.结果:整合素αv 抗体组,胚泡的粘附受到暂时抑制,48 h时大部分胚泡才粘附并开始铺展;整合素α4抗体组,胚泡的粘附率不受影响,但铺展率及滋养层细胞的扩展面积以剂量依赖的方式受到抑制.结论:整合素αv、α4能够调节胚泡在人蜕膜细胞上的植入,其中整合素αv可能与胚泡的粘附有关,而整合素α4可能与胚泡侵入和滋养层细胞的进一步生长相关.
【总页数】5页(P322-326)
【作者】宋芳;李英;王光明;吕丹瑜
【作者单位】北京大学医学部组织学与胚胎学教研室,北京,100083;北京大学医学部组织学与胚胎学教研室,北京,100083;北京大学医学部组织学与胚胎学教研室,北京,100083;北京大学医学部组织学与胚胎学教研室,北京,100083
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
1.抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响 [J], 刘能辉;周昌菊
2.健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床作用的研究 [J], 刘艳娟;黄光英;陆付耳;龚萍;张明敏
3.体外研究整合素αv、α4、β1、β3在小鼠胚泡着床中的作用 [J], 宋芳;李英
4.整合素及其在胚泡植入中的作用 [J], 蔡理全;段恩奎
5.整合素在胚泡植入中的作用 [J], 楼湘莹;王自能;朱伟杰
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子宫内膜容受性的评估及改善方法作者:王蕾段金良来源:《医学信息》2014年第08期摘要:胚胎质量与子宫内膜容受性是影响辅助生殖技术成功率的两个最重要因素。
当子宫内膜容受性存在缺陷会影响受精卵的着床从而导致不孕症和降低辅助生殖技术的成功率。
因此,对子宫内膜容受性进行正确的评估与合理的干预是生殖医学界研究的热点。
关键词:子宫内膜容受性;评估;干预;改善胚胎着床是一个复杂的涉及众多生物机制的程序化过程,其中胚胎质量与子宫内膜容受性是两个最重要的因素。
所谓的子宫内膜容受性即子宫内膜对胚胎的接受能力,是指子宫内膜处于一种允许囊胚定位、粘附、侵入并使内膜腺体间质发生改变从而导致胚胎着床的状态。
当子宫内膜容受性存在缺陷,会影响受精卵的着床,导致不孕症和影响辅助生殖技术的成功率。
因此,对子宫内膜容受性进行正确的评估与合理的干预、改善是生殖医学界研究的热点。
1子宫内膜容受性的调节及评估1.1形态学评估1.1.1子宫内膜胞饮突大量研究证实,胞饮突是子宫内膜容受性建立和植入窗开放的重要形态学指标,成熟期胞饮突的出现标志着子宫内膜处于最佳状态。
扫描电镜对子宫内膜连续监测显示:自然周期中胞饮突于月经第18~19 d开始出现,成熟时间于月经第20~21 d,持续时间≤48 h,与子宫内膜最大接受性出现时间一致。
有研究结果表明,动物胚泡的着床位置均出现在胞饮突区域,粘附在胞饮突顶端。
胞饮突表达量与胚泡着床率呈正相关,因此胞饮突被认为是子宫内膜容受性的形态学标志[1]。
1.1.2超声学指标1.1.2.1内膜厚度超声检查时,子宫内膜厚度主要是指子宫前后壁的内膜厚度与宫腔间隙的总和。
有研究显示,在IVF助孕周期中,妊娠组和非妊娠组的妇女子宫内膜厚度有显著差异,内膜厚度1.1.2.2内膜类型子宫内膜类型是指子宫内膜与肌层相对回声状态的分型,最常用的方法为三分法,即A型为多层或三线型子宫内膜,其中部以及外层的回声较强,宫腔中线的回声较为明显。
骨桥连接素(OPN)在肺癌中的表达及其临床病理学意义
杨艳娟;张锦
【期刊名称】《宁夏医学杂志》
【年(卷),期】2004(26)12
【摘要】目的探讨骨桥连接素(OPN)在肺癌中的表达及其临床病理学意义.方法应用免疫组织化学方法对78例肺癌组织标本进行OPN检测.结果65例非小细胞肺癌(NSCLC)阳性率为58.46%,13例小细胞肺癌(SCLC)的OPN表达均为阴性.OPN 表达率与患者TNM分期及淋巴结转移有密切关系(P<0.01),与细胞分化程度无明显关系(P>0.05).结论OPN的表达同肺癌病理类型、发生、发展、淋巴结转移有密切关系,可作为临床评估NSCLC进展及预测肿瘤转移潜能的指标.
【总页数】2页(P759-760)
【作者】杨艳娟;张锦
【作者单位】宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R734.2
【相关文献】
1.整合素连接激酶mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达和意义 [J], 邬麟;陈琼;杨一新;胡成平;杨红忠
2.非小细胞肺癌中OPN和MMP-2的表达及意义 [J], 吴健;张昶;朱亚宁
3.乳腺浸润性导管癌中Galectin-3、OPN的表达及其临床病理学意义 [J], 余慧萍;樊祥山;孟凡青;张东生;周强;吴鸿雁;孟奎
4.整合素连接激酶在非小细胞肺癌中的表达及意义 [J], 余辉;张道荣;房晓;石蕊;邱雪杉;王恩华
5.天鹅记忆接骨器对实验性骨折愈合时骨桥素和骨连接素mRNA表达的影响 [J], 任可;张春才;康庆林;许硕贵;高堂成
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第22卷第18期中国现代医学杂志Vol.22No.182012年6月China Journal of Modern Medicine Jun.2012文章编号:1005-8982(2012)18-0018-05·论著·抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响刘能辉1,周昌菊2(1.中南大学湘雅医院妇产科生殖医学中心,湖南长沙410008;2.中南大学湘雅三医院妇产科,湖南长沙410013)摘要:目的研究骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体对小鼠胚泡着床的影响。
方法取20只孕4d小鼠,分别在两侧子宫角内注射骨桥蛋白抗体、整合素β3抗体,对照组注射生理盐水,正常妊娠空白对照组未行任何处理,于孕8d处死小鼠,统计胚泡着床数及妊娠率,取子宫观察内膜的组织学变化。
结果结果显示骨桥蛋白抗体组小鼠妊娠率为60%,平均胚胎着床数为1.6±1.19,整合素β3抗体组妊娠率为70%,平均胚胎着床数为1.7±1.28,明显低于生理盐水组及空白对照组(90%,10.0±1.63及100%,10.5±1.58),提示骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡着床。
结论骨桥蛋白和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡的着床并导致子宫内膜的形态学变化,这提示骨桥蛋白和整合素β3与子宫内膜容受性获得有关。
骨桥蛋白和整合素β3参与了小鼠胚泡的着床。
关键词:骨桥蛋白;整合素β3;胚泡;着床;抗体中图分类号:R711-6文献标识码:AThe effect s of osteopontin and integrinβ3antibodies onmice blastocyst implantationLIU Neng-hui1,ZHOU Chang-ju2(1.Reproductive Medical Center,2.Department of Obstetrics and Gynaecology,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,Hunan410008,P.R.China)Abstract:【Objective】Inhibitory effect on mice blastocyst implantation was observed after intra-uterus injection of antibodies against osteopontin and integrinβ3.【Methods】20mice(at Day4of pregnancy)were respectively in-jected with antibodies against osteopontin or integrinβ3.The control group was injected saline solution.No treat-ment served as the blank control group.Mice were sacrificed at Day8of pregnancy,and anatomized.The implanta-tion numbers of mice blastocysts were counted.The endometrium morphology was observed under microscopy.【Re-sults】The results showed that the pregnancy rate was60%in osteopontin antiserum group,implantation number ofmice blastocyst was1.6±1.19.The pregnancy rate was70%in integrinβ3-antiserum group,implantation number ofmice blastocyst was1.7±1.28.All of pregnancy rate and implantation number of mice blastocyst were significantlylow in the osteopontin-antiserum and integrinβ3-antiserum group compared with N.S group(90%,10.0±1.63)andthe blank control group(100%,10.5±1.58).These suggest that osteopontin-antibody and integrinβ3-antibody blockmice blastocyst attachment and implantation.【Conclusion】Osteopontin-antibody and integrinβ3-antibody couldblock mice blastocyst attachment and implantation,and induced the morphological changes of uterine endometrial.This indicates that osteopontin and integrinβ3are associated with uterine endometrial receptivity at embryo im-plantation.Osteopontin and integrinβ3may participate in mice blastocyst anchor into uterine.Key words:osteopontin;integrinβ3;embryo;implantation;mouse收稿日期:2012-04-26*基金项目:湖南省科技厅基金课题(No:2009SK3183)[通信作者]周昌菊,E-mail:zhouchanju8816@yahoo.cn.com第18期刘能辉,等:抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响OPN可由子宫内膜产生,并且在整个生殖周期中的表达具有波动性。
目前研究表明[1],孕4 ̄7d时兔子宫OPN表达明显增多,与循环中孕激素(P)的升高和胚泡开始着床的时间一致。
OPN在孕6 ̄7.5d的子宫内膜腺上皮显著表达,但滋养细胞无表达。
而非孕子宫的内膜无OPNmRNA或蛋白表达。
进一步研究表明[2],OPNmRNA及其蛋白在人子宫内膜增殖期表达低,在分泌中期至晚期的内膜上皮细胞、内膜白细胞和子宫分泌物中表达明显升高。
OPN受体整合素β3mRNA和蛋白在整个月经周期的基质细胞都有表达,在分泌中期至晚期的内膜上皮细胞显著表达,从而认为OPN在月经期的内膜上皮细胞和分离的基质细胞上的高表达可能是免疫源性的[3]。
OPN是子宫-胎盘微环境的重要组成部分,可能的作用如下:①整个妊娠期子宫-胎盘表面黏附和信号转导的必需组成之一;②由子宫基质产生促成子宫基质产生促成子宫内膜发生与孕体侵袭有关的蜕膜样转变;③子宫和胎盘免疫细胞的产物,可调节它们的活动和细胞因子的生成[4,11]。
新近发现,胚胎上的整合素αvβ3通过RGD位点与子宫内膜上已被MMPs水解的骨桥蛋白结合,两者相互协调,相互作用,共同介导胚胎的植入[5]。
另外,骨桥蛋白与整合素β2同时表达于滋养细胞上,在胚胎着床时,它们与内膜上的整合素β3和骨桥蛋白起到相互补充的作用[6]。
为进一步探讨骨桥蛋白(OPN)和整合素(αvβ3)在胚泡着床的机制,我们在已建立的小鼠受孕模型基础上,采用抗体中和技术,将抗骨桥蛋白(OPN)抗体、抗整合素(αvβ3)抗体注射至妊娠小鼠子宫,中和骨桥蛋白(OPN)和整合素(αvβ3),探讨其对小鼠胚泡着床的影响。
1材料和方法1.1实验动物成年昆明小鼠20只,4 ̄6周年,体重30g,雌、雄各半,由中南大学实验动物中心提供。
颗粒饲料喂养,随意饮水,室温22℃。
1.2实验方法1.2.1小鼠PMSG和HCG处理和抗体注射取成年昆明雌鼠10只,体重约30g,腹腔注射PMSG10u,48h后注射10uHCG,随后雌:雄小鼠1∶1合笼,次日检查阴栓。
发现阴栓计为1d。
将妊娠小鼠随机分成4个组:OPN抗体组、整合素β3组、生理盐水组,正常妊娠对照组。
于妊娠4d,在全身麻醉下实行子宫双侧手术,分离小鼠子宫和输卵管,从小鼠输卵管与子宫交界处方向分别注射抗骨桥蛋白(OPN)单克隆抗体、抗整合素(β3)单克隆抗体或生理盐水,每只5μg。
空白对照组未做任何处理。
于手术后的8d,将用颈椎脱臼法处死,迅速解剖,检查子宫,记录所有孕鼠数及每只孕鼠的胚泡数。
1.2.2观察子宫内膜的形态结构取3只小鼠,在着床胚泡间取一段子宫标本。
一部分用4%的福尔马林固定,石蜡包埋切片,HE染色,制组组织片,光镜观察子宫内膜膜上皮细胞、间质的变化。
1.2.3观察卵巢的形态结构取3只小鼠,将卵巢标准本4%福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,制作组织切片,光镜观察卵巢黄体的变化。
1.2.4反向免疫组化检测Ab-OPN、Ab-β3与子宫内膜OPN、β3结合已脱蜡用于免疫组化检测的组织切片,加数滴过氧化酶阻断剂,完全覆盖组织点,室温下孵育10min,PBS液冲洗3次,每次3min,加数滴非免疫性动物血清,室温下孵育10min,甩干,依次加抗兔抗体(1∶500),完全覆盖组织点,PBS液代替一抗作为阴性对照,PBS液冲洗3次,每次3min,依次加数滴生物素标记的驴抗兔二抗(1∶1000)及数滴链亲和素一过氧化物酶,完全覆盖组织点,室温下孵育10min,PBS液冲洗3次,每次3min,加数滴新鲜配制的DAB液,完全覆盖组织点,镜下观察染色,终止反应,自来水冲洗,苏木素浅染,冲洗返蓝,脱水透明封片。
1.3统计学处理全部统计学分析均采用SPSS11.5统计软件进行分析。
计量资料全部用均数±标准差(x±s)表示。
计量资料的比较采用t检验。
临床病理资料等计数资料分析采用χ2检验或Fisher精确概率法。
免疫组化结果与临床病理资料的相关性分析采用Spear-man’scorrelationcoefficient分析。
用Kaplan-Meier法进行生存分析并绘制生存曲线。
生存时间采用均数±标准差(x±s)表示。
采用Log-rank检验比较生存率的差别。