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健康域公卫引言男性不育是高发于男性群体的生殖系统疾病，是指夫妻生活正常，且无避孕措施，因男性因素造成不育症状。
其致病因素与性病史、吸烟饮酒和环境污染有关,多需要通过精液质量检测诊断该病，而后开展针对性治疗[1]。
DFI （DNA 碎片指数）是精液质量的常用诊断指标，可以评估疾病程度。
顶体酶活性可以判断精子活性，其指数降低则精子具有较差的穿越力，进而降低精子质量。
现阶段，以上两项指标是男性不育的常规诊断指标，便于疾病的早期治疗。
为此，本研究选取1727例男性筛查者，分析以上两项指标的诊断效果。
1资料与方法1.1一般资料选择2016年6月~2021年12月入院诊断的1727例男性筛查者，其中男性不育患者481例。
根据DFI 分组，一组306例，不育时长为9个月~3年，平均（1.24±0.48）年。
二组113例，不育时长为10个月~3年，平均（1.30±0.44）年。
三组35例，不育时长为11个月~4年，平均（1.30±0.34）年。
四组27例，不育时长为8个月~4年，平均（1.51±0.33）年。
根据顶体酶活性分组，≤48.2U/106为27例，不育时长为8个月~3年，平均（1.17±0.66）年；＞48.2U/106为416例，不育时长为10个月~4年，平均（1.21±0.69）年。
经假设检验并无差异，＞0.05。
1.2方法根据精液检查与处理实验室手册对精液进行常规检测，用改良的牛鲍氏计数板测量精液密度，采取手工法计数。
用快速染色法（Diff-Quik ）测定精子形态学特点，正常形态4%为参考值的具体下限。
所有操作人员经过系统化培训以后上岗，具备熟练的操作能力。
顶体酶活性检测采取顶体酶试剂盒，根据改良后的Kennedy 法实施检测，将精液标本混匀以后进行计数操作，使每个反应管内部的精子个数大概是7.5×106个，对各个标本设置对照以及反应管，然后添加反应液以及抑制剂。
不同染色方法对精子形态学评估的影响张红斌;毛熙光;陈绍威;梁冠男;黄桂英;王芳【期刊名称】《泸州医学院学报》【年(卷),期】2012(35)2【摘要】目的:探讨Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法对精子形态学评估的异同性及相关性.方法:对80例标本分别涂片两张,利用Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法分别进行染色,并记录同一标本不同染色方法其正常精子百分率、头部缺陷精子百分率、颈部和中段缺陷精子百分率、尾部缺陷精子百分率、畸形精子形态指数(TZI)、精子畸形指数(SDI)等.结果:Diff-Quik 染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中,正常形态率、各种类型的缺陷率(头部、颈部与中段、尾部)、畸形精子指数、精子畸形指数等均无统计学意义(P＞0.05).结论:Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中具有较为一致的结果；改良巴氏染色法虽经典,但过于繁琐；在病人多且急需出具精子形态学检验报告的情况下,可以考虑使用Diff-Quik染色法作为精子形态评估染色方法.【总页数】3页(P148-150)【作者】张红斌;毛熙光;陈绍威;梁冠男;黄桂英;王芳【作者单位】泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院医学实验中心,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000;泸州医学院附属医院人类辅助生殖医学技术部,四川泸州646000【正文语种】中文【中图分类】R698.2【相关文献】1.2种染色方法用于精子细胞形态学分析的效果比较 [J], 邓云;吕健忠2.精子形态学分析中染色方法的对比分析 [J], 李林;吴励梅;罗一平;李彩英;徐妙容3.精子形态学分析中染色方法的比较 [J], 高久春;王瑞雪;许宗革;郑海筝;刘媛;刘睿智4.四种酶处理液化异常精液对精子形态学影响的评估 [J], 王世君; 彭晓枫; 张梅5.应用严格精子形态学测定法评估精子形态对体外受精率的影响 [J], 崔险峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
diffquik染色原理Diff-Quik染色原理引言Diff-Quik染色技术，又称为Wright染色法，是一种常用的细胞核和细胞质染色方法，广泛应用于临床实验室和病理学领域。
本文将介绍Diff-Quik染色的原理、步骤和应用。
一、Diff-Quik染色的原理Diff-Quik染色法主要通过染色剂的作用，使细胞核和细胞质的结构显现出不同的颜色，从而达到对细胞形态和组织结构的观察和分析的目的。
Diff-Quik染色原理主要包括三个方面的作用：核染色、胞质染色和胶原纤维染色。
1. 核染色：Diff-Quik染色使用的核染色剂是由甲苯胺、甲苯胺盐酸盐和蓝色染料组成的溶液。
这种染料有亲核性，能与细胞核内的DNA结合，使细胞核呈现出蓝色。
2. 胞质染色：Diff-Quik染色使用的胞质染色剂是由碱性染料组成的溶液。
这种染料能与胞质内的蛋白质结合，使胞质呈现出粉红色。
3. 胶原纤维染色：Diff-Quik染色还能染色胶原纤维，使其呈现出红色。
这是因为Diff-Quik染色剂中的胶原纤维染色剂能与胶原纤维结合，使其呈现出红色。
二、Diff-Quik染色的步骤Diff-Quik染色的步骤相对简单，一般包括以下几个步骤：固定、染色、洗涤、脱水、透明化和覆盖。
1. 固定：将待染色的细胞固定在载玻片上，常用的固定剂有甲醛和乙醇等。
固定的目的是保持细胞形态和结构的完整性，使细胞不发生变形。
2. 染色：将Diff-Quik染色剂均匀地滴于待染色细胞上，让染色剂充分渗透到细胞内。
染色剂的作用是使细胞核染色为蓝色，胞质染色为粉红色，胶原纤维染色为红色。
3. 洗涤：用蒸馏水或生理盐水轻轻地冲洗载玻片，以去除多余的染色剂。
4. 脱水：将载玻片放入不同浓度的乙醇溶液中，逐渐提高乙醇浓度，以使细胞内的水分逐渐被乙醇取代。
5. 透明化：将载玻片浸入透明剂（如苯胺、苯酚醛等）中，使细胞透明，以便观察。
6. 覆盖：用显微镜盖玻片将载玻片覆盖，以保护样本并方便观察。
精子形态学染色液（shorr法）使用说明书货号：G2570规格：3×20ml/3×100ml保存：室温，避光，12个月。
试剂盒组成：名称3×20ml3×100ml Storage试剂A：猩红橙黄染色液20ml100ml RT，避光试剂B：媒染液20ml100ml RT，避光试剂C：固绿染色液20ml100ml RT，避光产品简介：WHO推荐的精子形态的评估方法有巴氏染色法、Shorr染色法和Diff-Quik染色法。
精子形态学染色液（shorr法）染色原理与巴氏染色法相似，因精子及细胞内不同等电点的蛋白质在相同的酸度下带不同的电荷，能选择性地结合相应的染料而着色。
胞核由酸性物质组成，它与碱性染料的亲和力较强；而胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力较大。
特别适用于精子的染色，亦可用于胸水、腹水、痰液等细胞样本的染色。
操作步骤（仅供参考）：1.细胞涂片用95%乙醇-冰乙酸（3:1）固定液固定10-15min。
2.80%、70%、50%的乙醇分别浸泡1min。
3.蒸馏水或自来水浸泡或冲洗1min。
4.苏木素染色液染色3-5min。
自来水冲洗2min。
5.（可选）0.5%的盐酸乙醇分化液分化4-5s。
自来水冲洗2min。
6.蓝化液中蓝化4min。
7.自来水冲洗2min。
8.用猩红橙黄染色液染色1-2min。
9.蒸馏水速洗，然后入媒染液处理1-2min。
10.入固绿染色液染色4min。
11.直接用1%冰醋酸分化30s。
12.水洗，然后经50%、70%、80%、95%、无水乙醇脱水。
13.二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：精子头部的顶体区淡蓝色顶体后区深蓝色中段略呈红色尾部蓝色或淡红色通常位于头部下部或围绕中段的过量残留胞浆染成橘红色。
注意事项：1.所有染液均需过滤，需经常更换染液。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
精子形态学分析正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。
目前，用于精子形态学分析的染色方法有：改良巴氏染色法、苏木精-伊红（HE）染色法、瑞氏染色法、瑞-吉氏染色法、Diff-Quik染色法和Shorr染色法。
1 涂片的制备一般用新鲜的液化精液或生理盐水洗涤过的精子悬液进行涂片，通常每份标本涂双份片子，以备染色或操作出问题。
载玻片应洁净，可用70%酒精洗涤并干燥后使用；涂片的厚薄应根据精子密度而定，精子密度高者涂片应薄些，而精子密度低者涂片应尽可能厚些。
涂片的方法有多种，WHO推荐的方法有拉薄技术和滴管法，拉薄技术即用另一张载玻片的边缘拖拉载玻片上的一滴精液；滴管法即水平持滴管使一滴精液沿载玻片的表面展开。
由于精液有一定粘稠度，这两种方法都很难涂成均匀的涂片。
可建议用以下方法涂片：用滴管将一滴精液置于载玻片上，然后从液滴中央向周围循环吸净多余的精液，注意滴管的头要平整，滴管与载玻片垂直，缓慢吸去多余的液体。
低密度、粘稠的、或充满碎屑的标本，建议先离心去除精浆，沉淀的精子团重新悬浮在适当体积中，以获得尽可能高的密度，但不应超过80×106/ml。
正常精子密度且液化良好的精液标本亦可以洗涤后用精子悬液进行涂片，但离心操作对精子形态分析有无影响，尚需要进一步验证。
精子涂片可进行空气干燥并固定。
固定程序取决于染色方法。
2 改良巴氏染色法这是WHO手册推荐的方法。
它可以使精子和其他细胞很好地染色，可使精子头部的顶体和顶体后区、胞浆小滴、中段和尾部着色。
染液中的俾士麦棕为盐基性染料，伊红、亮绿、橙黄等为酸性染料，能与细胞中具有相反电荷的蛋白质结合，而染成各种不同的颜色，从而能清楚地区分各种细胞成分。
以往用巴氏染色法进行染色时，操作步骤繁琐，目前已有改良的单一的巴氏染色液出售，操作非常简单，只需在自然干燥的精子涂片上滴加1~2滴巴氏染液，染15分钟即可。
流水冲洗后自然晾干，显微镜油镜下观察精子形态。
Diff-Quik法是一种用于细胞涂片染色的快速染色技术。
它起源于20世纪70年代，由希腊的科学家吉奥尔格斯·帕帕尼科拉乌设计，并于1973年首次发表。
该技术在临床诊断中广泛应用，尤其是在细胞学和病理学领域。
Diff-Quik法的原理是利用两种染料，分别叫做Wright-Giemsa和Diff-Quik，对细胞核和胞质进行染色。
Wright-Giemsa染料可以将细胞核染成蓝紫色，而Diff-Quik染料则可以将细胞胞质染成粉红色。
通过双重染色，可以清晰地观察细胞的形态和结构，有助于医生快速准确地进行疾病诊断。
Diff-Quik法的操作步骤如下：1. 准备细胞涂片：首先需要从患者身上采集样本，例如血液、尿液、骨髓等，然后将样本制备成细胞涂片，使细胞均匀分布在载玻片上。
2. 固定和干燥：将细胞涂片进行固定和干燥处理，以保持细胞形态的完整性和稳定性。
3. 染色处理：将涂片依次在Wright-Giemsa染料和Diff-Quik染料中浸泡，使细胞核和胞质均匀染色。
4. 清洗和干燥：将染色后的涂片进行清洗除去多余染料，然后进行干燥处理，使涂片干燥。
5. 观察和分析：最后将干燥好的细胞涂片放置在显微镜下观察，医生可以通过放大镜头观察细胞的形态、结构和染色情况，并做出相应的诊断。
Diff-Quik法的优点在于操作简便、快速方便，对细胞形态的保留和染色效果都非常理想。
它可以在短时间内完成细胞观察和分析，特别适用于临床医生需要迅速做出诊断的情况，有助于提高疾病的早期诊断率和治疗效果。
Diff-Quik法在临床诊断中得到了广泛的应用和推广。
然而，虽然Diff-Quik法具有诸多优点，但也存在一些局限性。
由于Wright-Giemsa和Diff-Quik染料的特殊性，某些特定的物质或结构可能会对染色结果产生影响，因此在某些情况下可能需要结合其他检测方法进行综合分析。
由于细胞染色过程中需要严格控制时间和染料浓度等因素，操作者需要具备一定的技术经验和专业知识，否则可能会影响染色效果和诊断结果的准确性。
diff-quick染色原理
Diff-Quick染色法是一种常用的细胞染色方法，主要用于快速染色分析和观察细胞形态结构。
它的染色原理是基于细胞成分的亲合、亲水性差异以及细胞结构的亲水性差异。
Diff-Quick染色的主要步骤包括：1. 细胞固定：将要研究的细胞固定在载玻片上，一般使用酒精或甲醛进行固定。
2. 快速染色：将固定的细胞放入染色液中，Diff-Quick染色液由甲醇、染液1和染液2组成。
在这个过程中，染液1主要起到了碱性染色剂的作用，尤其是双碱性染色剂，它们可以染色细胞核和DNA；染液2含有酸性染色剂，可以染色细胞浆和细胞质。
3. 脱水：经过染色后，将载玻片中的细胞样品通过一系列的酒精浓度逐渐脱水。
4. 封片：将脱水后的载玻片用明胶封装并加盖玻片，使细胞样品得以保存。
Diff-Quick 染色法能够清晰显示细胞核、细胞浆和细胞质等细胞组成成分的形态结构。
通过观察不同染色深浅和颜色的变化，可以识别和分析细胞的变化、异常以及病理性的改变，从而帮助进行细胞学诊断和研究。
