金鱼精子入卵过程的扫描电镜观察

金鱼的人工受精技术图解
当我们见到雄鱼剧烈追逐雌鱼，并见到少数卵粒排出时，可用面盆或小敞口缸盛1/3至1/2的新水，然后把雌和雄亲鱼带水捞入面盆或小敞口缸内，盆底铺上一层人工鱼巢或棕丝片，两手分别抓住雌鱼和雄鱼，使它们的是生殖孔相对，先用大拇指轻轻挤压雄鱼腹部，见有乳白色的精液泄出的同时，用相同的方法挤出雌鱼腹内的卵粒，两手在水中轻轻颤动，让卵粒均匀的随水落入到盆底的人工巢上，这时的卵子和精子在水中很快受精，卵粒由透明而转为米黄色的受精卵。

由于水内受精法不离水，对亲鱼的损伤略小于离水受精法，受精卵黏性强，能很快附着与人工鱼巢上，换水容易，操作方便，受精率也不亚于离水受精法。

人精子扫描电镜样品的制备与观察【关键词】精子；显微镜检查，电子，扫描；超微结构扫描电镜在临床医学、基础医学等领域具有广泛的应用价值，尤其在白血病、红细胞病变、细胞凋亡等游离细胞的临床诊断及基础研究方面得到了广泛的应用［1］。

随着计划生育和优生优育工作的开展，对人精子的超微结构研究受到了广泛重视。

由于人精子含水量大，表面导电性差，因此是扫描电镜样品制备和观察的难点。

为了使其适应扫描电镜观察的要求，并更好地显露其表面的形态结构，在制样过程中需要对其进行清洗、脱水。

由于水的表面张力为72.75 dyn/cm，样品极易受到脱水张力的损伤，发生收缩和变形［2］。

同时在扫描电镜下观察时，由于其二次电子的产率低，样品密度低，电子束容易穿透；而样品脆弱，又经不起电子束长时间的照射。

因此，要想取得质量较好的图像，正确调整扫描电镜工作时的参数也非常重要。

我们通过反复对不孕症患者精液样品的制备和观察，总结出一套较好的制样方法，并选择适合的加速电压，取得质量较好的图像。

1 材料和方法1.1 仪器漩涡混合器，普通离心机，普通冰箱，JEM JEE-5B真空冷冻干燥机，HITCH E-1010离子溅射仪，HITCHI S-3400N扫描电镜。

1.2 样品制备24 h内（4 ℃冷藏）送样（10 ml试管）的精液，漩涡混合器摇匀（1～2 min）。

采用离心清洗法：用吸管吸取样品1 ml，加5 ml PBS（或生理盐水）离心清洗（2 500～3 000 r/min，5 min） 3次，注意：去上清液时宜缓慢倒出，每次管底留液应不少于0.5 ml［3］。

加3%～4%戌二醛固定30 min，PBS离心清洗2次，清洗方法同前。

然后分别用50%、70%、90%、100%乙醇作梯度脱水，每次15 min，离心3 000 r/min，5 min。

在常温、常压下（也可在冷冻条件下）用100%的醋酸异戌酯置换乙醇，时间30 min，然后3 000 r/min，离心5 min，去除上清液（可见管底有白色絮状物），用吸管吸管底液2～3滴滴到载璃片上，自然干燥（也可采用JEE-5B真空冷冻干燥机干燥），用玻璃刀切下含有样品的部位，大小2 cm×2 cm。

黄颡鱼精子入卵的扫描电镜观察
王永玲;杨彩根;宋学宏;王建伟
【期刊名称】《淡水渔业》
【年(卷),期】2007(37)4
【摘要】应用扫描电镜观察了黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)成熟卵和精子的形态、卵子对精子的应答反应、受精孔的数量与形态、受精方式与过程.结果显示:黄颡鱼精子为鞭毛型,头部近圆球形,无顶体,单尾;卵为圆球形,卵膜表面多嵴,且有15～16条宽度不同的小沟;卵表面仅有1个受精孔,精孔管口内径约2.8 μm.黄颡鱼为单精受精,受精后30 s内完成精子入卵过程.
【总页数】4页(P41-44)
【作者】王永玲;杨彩根;宋学宏;王建伟
【作者单位】苏州大学生命科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学生命科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学生命科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学生命科学学院,江苏苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】S961.2;Q958.83
【相关文献】
1.黄鳝精子入卵过程扫描电镜观察 [J], 刘衍男;李小燕
2.中华乌塘鳢精子入卵过程的扫描电镜观察 [J], 何振邦;洪万树;陈仕玺;张其永;戈薇;陈筠筠
3.赤眼鳟精子入卵的扫描电镜观察 [J], 孙际佳;郭云贵;李桂峰;赵会宏
4.家养鱼类受精生物学的研究——Ⅱ．几种淡水鱼类成熟卵球的精孔器与精子入卵通路的光镜与扫描电镜观察 [J], 王瑞霞;张毓人;傅仓生;李振兰;吴宜章;张福顺;郝宏京
5.黄颡鱼受精早期精子入卵扫描电镜观察 [J], 尹洪滨;孙中武;姚道霞;孙德志;潘伟志;薛淑群
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动物学报　48(2):233～239,2002A cta Zoologica S i nica 异源四倍体鲫鲤的受精细胞学3李建中　张轩杰　刘少军　冯　浩　刘　筠33(湖南师范大学生命科学学院,长沙410081)摘　要　异源四倍体鲫鲤的成熟卵子处于第二次减数分裂中期,精子通过受精孔进入卵内。

精子入卵以后,受精孔立即被受精塞堵住。

受精后8min ,受精卵出现明显的精子星光,同时进入第二次减数分裂后期,即将排出第二极体;13min 时,精子头部开始膨胀,趋向核化;18min 时,雌雄原核均已形成,并向胚盘中央靠近;23min 时,雌、雄原核开始接触;33min 时,雌、雄原核完全融合成为一个合子核;38min 时,受精卵开始第一次卵裂,53min 后分裂形成两个子核。

该研究证明异源四倍体鲫鲤和大多数二倍体鱼一样,具有正常的受精细胞学程序,受精方式为单精受精。

关键词　异源四倍体鲫鲤　二倍体卵子　二倍体精子　单精受精　2000210208收稿,2001204228修回　3国家“863”计划项目(国科生字1996182)33通讯作者　E 2mail :liuyun @　第一作者简介　李建中,男,32岁,博士研究生,讲师。

研究方向:鱼类生殖生理。

人工诱导四倍体鱼的研究是鱼类育种领域中的重大课题。

国内外学者采用物理或化学的方法,在虹鳟(Chourrout ,1982;Refstie ,1981)、罗非鱼(Myers ,1986)、鳙鱼(洪云汉,1990)、水晶彩鲫(桂建芳等,1991)和白鲫(♀)×红鲫(♂)(陈敏容等,1997)等鱼类获得了同源四倍体或异源四倍体,但到目前为止,成功获得两性可育且能自然繁殖的人工诱导四倍体鱼的研究甚是少见。

湖南师范大学生命科学学院与湘阴县东湖渔场合作,利用生物学的方法,在红鲫(Carassi us aurat us red variety ,♀)与湘江野鲤(Cypri nus carpio ,♂)的杂交三代(F 3)中发现了异源四倍体鱼(刘筠,1993),该四倍体鱼雌雄可育并且能自然繁殖,已形成了一个新的稳定的四倍体鱼种群(刘少军等,1999;Liu et al .,2001;李建中等,2001)。

太平洋牡蛎配子和精子入卵的扫描电镜观察及胚胎发育的初步研究田传远;梁英;王如才;任素莲;于瑞海;赵厚均【期刊名称】《黄渤海海洋》【年(卷),期】2000(18)2【摘要】通过扫描电镜观察 ,太平洋牡蛎精子由头部、中段和尾段组成。

精子全长约2 1 .6μm ,尾段长约1 8.2 μm ,末端观察到“针眼”样结构 ;头部最大处的直径约2 .6μm ;中段直径约1 .1 μm ;未成熟精子尾段中部出现膨大 ,该处直径约0 .3μm。

卵呈梨形 ;卵的直径约为 41 .9μm。

卵表面有微绒毛组成的皱折结构 ,可见卵黄膜孔。

卵质收回时 ,在卵表面卵柄处可见明显的树枝状结构。

受精后 ,受精卵表面的卵黄膜剥离处可见较多数量的皮质小泡。

在水温2 1 .2～2 3.5℃ ,精卵混合 34min时 ,释时出第 1极体 ;1h2 2min时 ,放出第 2极体 ;2 1h55min时 ,胚胎发育至初期D形幼虫。

【总页数】5页(P51-55)【关键词】太平洋;牡蛎;精子入卵;胚胎发育;扫描电镜【作者】田传远;梁英;王如才;任素莲;于瑞海;赵厚均【作者单位】青岛海洋大学水产学院;山东省渔业技术推广站【正文语种】中文【中图分类】Q959.215.3【相关文献】1.三倍体萍乡肉红鲫的精子入卵及胚胎发育观察 [J], 洪一江;王静;王军花;桂建芳2.诱导栉孔扇贝雌核发育时精子入卵的扫描电镜观察 [J], 赵峰;杨爱国;刘志鸿;周丽青;王清印3.诱导鲤雌核发育时精子入卵的扫描电镜观察 [J], 潘光碧;邹世平;邹桂伟4.太平洋牡蛎配子和精子人卵的扫描电镜观察及胚胎发育的初步研究 [J], 田传远;梁英;王如才;任素莲;于瑞海;赵厚均5.家养鱼类受精生物学的研究——Ⅱ．几种淡水鱼类成熟卵球的精孔器与精子入卵通路的光镜与扫描电镜观察 [J], 王瑞霞;张毓人;傅仓生;李振兰;吴宜章;张福顺;郝宏京因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

尼罗罗非鱼成熟卵结构及精子入卵早期的电镜观察
黄永松
【期刊名称】《动物学报》
【年(卷),期】1990(036)003
【摘要】用扫描电镜观察尼罗罗非鱼(Tilopia nilotica)成熟卵卵膜孔结构和精子入卵的早期情况,用透射电镜观察成熟卵皮质,可见卵膜孔包括前庭和精孔管两部分,前庭壁及壳膜外表面上有许多小孔洞,精孔管壁呈阶梯状。

卵膜孔下的卵皮质是一凹陷区,这一区域存在着皮质小泡。

本实验见到5种形态的皮质小泡,其中大的皮质小泡靠近质膜。

【总页数】4页(P227-230)
【作者】黄永松
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.405
【相关文献】
1.文蛤(Meretrix meretrix)精子的超微结构及精子入卵过程的电镜观察 [J], 董迎辉;林志华;柴雪良;吴松燕
2.大菱鲆成熟精子、卵子及精子入卵早期过程的电镜观察 [J], 吴莹莹;柳学周;王清印;邱兆星
3.家养鱼类受精生物学的研究——Ⅱ．几种淡水鱼类成熟卵球的精孔器与精子入卵通路的光镜与扫描电镜观察 [J], 王瑞霞;张毓人;傅仓生;李振兰;吴宜章;张福顺;郝宏
京
4.黑鲷(Sparus macrocephalus)成熟精、卵和精子入卵早期过程的初步观察 [J], 张筱兰;丛娇日;姚斐;范瑞青;高澜;郭恩棉;姚善成
5.暗纹东方鲀精、卵超微结构及精子入卵早期电镜观察 [J], 卢敏德;葛志亮;倪建国;高伟建;诸葛兰剑;叶金明
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!月"研究简讯"人工四倍体鲤鲫成熟卵受精过程的扫描电子显微镜观察"叶玉珍!王忠卫!吴清江!袁秀萍!周建峰中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术重点实验室!武汉&*%%O "!"%%()%!)"&收稿!"%%()%$)%’收修改稿!"国家自然科学基金$批准号#*%&O !*&"%和国家+十五,攻关$"%%!G ;(%(G %(%’%资助项目!+),-./#^^a 6!.6H #-8#82摘要!!以人工四倍体鲤鲫卵子和普通红鲤精子为材料进行人工受精#在受精后的不同时间以扫描电子显微镜观察卵子对精子的应答反应%受精孔形态%数量与大小以及受精过程等超微结构特征#结果表明#四倍体卵子动物极的卵壳上仅有一个受精孔#但受精孔区域有($$个似小山丘状的嵴状结构#而鲤却完全没有这种结构#研究证实(四倍体鲤鲫成熟卵属单受精孔%单精受精类型#其特异的嵴状形态结构可作为区分普通鲤的标记表型#关键词!!人工四倍体鲤鲫!受精过程!单精受精!电子显微镜观察!!硬骨鱼类的受精过程主要依靠于成熟卵子动物极的卵壳上敞开的特殊结构***受精孔来完成!但不同的鱼类其受精孔和受精孔区域的结构却不同#关于这方面的研究!国内外学者已在多种鱼类中对鱼卵受精过程和受精后卵壳结构变化进行了观察!并有详细的报道#日本学者[7<5&!’曾以鲤$!I /.,’@(*&./,+%为材料就受精孔的形态(精子入卵及其引起卵子表面的变化等作了研究!发现其卵壳漏斗状的前庭较光滑并有一个受精孔#N -?@等&"’发现斑马鱼$?.&*0I 9&’,+.#.,+%卵的前庭有突褶并呈螺线排列#张天荫等&*’发现金鱼$!&.&((,@(&@.&:@(%的前庭呈明显的沟嵴#吴坤明等&&’对泥鳅$5,(%@.’@(&’%@,$$,*&@9&:@(%成熟卵受精孔进行了观察并确认其为涡旋状结构#姚纪花&(’等对大鳞副泥鳅$2&.&H ,(%@.’@(9&=.I&’@(%"G ?7,),>@@&$’等对底!$E @’9@$@(0#:#.+*$,:@(%正常受精后早期过程进行了观察#迄今为止!在人工诱导多倍体方面虽有一些学者进行了大量探索&O *!"’!但在受精生物学方面尚未见到研究报道#人工四倍体鲤鲫是本实验室采用人工染色体基因组操作技术构建的一种以雌核发育为特殊生殖模式的多倍体鲫克隆鱼&’’!它具有两套鲤和两套鲫的染色体组!生长快(体形好(抗病力强(易捕捞!比普通二倍体鲫和三倍体鲫经济性状更优良!因此将具有广阔的生产应用前景#像这种具有两套鲤染色体和两套鲫染色体的多倍体卵子的受精孔到底属于何种类型/是多受精孔还是单受精孔/是多精受精还是单精受精/以及在精子入卵过程中其各个时期的形态特征有何变化等都是值得研究的问题#本文针对以上问题进行了详细观察并取得重要研究结果!现报道如下#$!材料与方法四倍体鲤鲫和红鲤$!I /.,’@(*&./,+%均取自中国科学院水生生物研究所关桥实验基地#在生殖季节取四倍体鲤鲫成熟卵子和红鲤精子进行人工受精!然后迅速将卵均匀洒在浸在水里的%**!尼龙筛绢上并取经人工受精后(!!%!"%!*%!$%! A%和!"%4的受精卵和未受精卵进行双固定!同时取红鲤的正常受精卵子作为对照#将样品置于"#(B戊二醛中在&n条件下固定"&6!后用!B锇酸固定!再用梯度酒精脱水!最后以乙酸异戊醇置换!F]"临界点干燥!真空喷镀!用美国;,?-^公司生产的扫描电子显微镜$P+R%观察!加速电压为"%M X!摄影成像#(!结果(&$!卵子与精子的形态四倍体鲤鲫产出的成熟卵一般为圆形或椭圆形!半透明#在P+R下观察!卵壳呈致密状!并具有大量致密球形蜂窝状结构!排列较为整齐!直径在%#**%#&*,!卵内充满细胞质#通过P+R观察可以发现红鲤的精子的结构十分简单!主要由头部和尾部构成!头部呈椭圆形!尾部细长#实验表明!精子进入四倍体卵子的过程非常迅速!而且受精后的卵子表面结构也随之发生变化!最明显的特征是卵壳电子密度变低!呈疏松状态!球形蜂窝状结构排列不够整齐!直径在%#$*%#’*,#(&(!受精孔结构在受精前观察受精孔区域构型发现!四倍体卵子外壳有一定的严密结构!并处于封闭状态!只留有一个非常小的受精孔$图!$-%%#受精孔主要是由前庭区域和精孔管两部分组成#与红鲤比较发现!它们虽然在靠动物极卵壳上都有一个环状(敞开的受精孔!但两者在形态结构上有却有着很显著的差别#四倍体鲤鲫受精孔区的前庭是由(*$个形状相同和大小基本相似的小山丘状突起嵴状物组成!显得十分特别$图!$H%%#但与大多数硬骨鱼类一样!卵壳中央也只有一凹陷(呈圆形环状结构!精孔管外开口就位于嵴状结构凹陷底部中央!这就是受精孔#受精孔的直径为*#(*&#%*,!口部具有一个明显的环状结构!在环状结构周围还可以观察到一些微绒毛!它可能含有精子入卵的识别位点!以至于每次受精时也就只容许有一个精子入卵受精#从图!$8%可以很清楚地看出红鲤卵子动物极的受精孔前庭区域呈漏斗形!且四周边缘区域非常平坦而光滑!口部只有一个清晰的环状结构!而没有发现像人工四倍体鲤鲫那样的嵴状结构或其他形状的结构!底部就是精孔管的外开口!直径为*#’* &#**,#图$!扫描电子显微观察图像$-%四倍体鲤鲫卵子的受精孔"$H%四倍体鲤鲫受精孔区域的脊状结构"$8%红鲤的受精孔#,>!受精孔"?!脊状物"8!环状物(&)!单精入卵与受精过程在观察的所有成熟卵子中!没有发现一个有多受精孔!也没有观察到多精受精的现象!据结果推测!精子入卵的必经之路只能是从那一个受精孔道穿入!因此受精时通常也只能允许一个精子受精#一般情况下受精(*!%4后!在P+R下就能看到在卵子朝向动物极方向有大量的精子聚集于受精孔前庭区域附近$图"$-%%#受精后"%**%4!尽管有大量的精子聚集于此!但每个卵子的靠动物极方向的卵壳上的受精孔中也只有!个精子进入受精孔受精!而其余的精子都被挡在受精孔外边!未发现有多精入卵的情况#图"$H%是!个精子正进入受精孔!**!!第受精的情况#图"$8%是精卵结合!%4后!个精子拖着一条长长的尾巴进入受精孔管道!而另外一些精子被阻挡在外面的典型受精情景#一般情况下!受精&%4后!仍然可以观察到在受精孔区域附近还有许多精子"而受精(%4后!受精孔口开始出现一些降解精子和絮状物质将受精孔紧紧堵住$图"$<%%#与此同时!我们还观察到当四倍体鲤鲫成熟卵受精(%4时!许多精子虽已死亡!但有些精子的形态仍然较正常!有些精子则开始发生变化!一般受精$%4后!精子绝大部分解体!受精区大面积被白色的解体精子絮状物覆盖$图"$>%%"也可见到少量未解体的死亡精子在受精孔区的嵴状结构之间$图"$1%%!此时成熟卵的嵴状物也开始慢慢合拢!并形成受精孔关闭状态!受精A%4后!嵴状结构明显融合并呈模糊的一条细缝$图"$3%%!至受精!"%4后!前庭的特异嵴状结构完全把受精孔关闭!从受精卵卵表面观察已完全没有受精孔和嵴状物的任何痕迹$图"$6%%!至此卵子完成整个受精过程!随后受精卵开始早期的胚胎发育#图(!四倍体鲤鲫受精过程!详见正文"4I!精子"4@!精尾"<>4!降解精子"<4!死亡精子)!讨论关于一般硬骨鱼类的受精生物学机制许多学者已研究得相当深入!并提出鱼类本身具有阻止多个精子入卵的能力!因此受精方式都是单精入卵!单精受精!从而维系胚胎基因组的正常大小和一系列胚胎发育#[7<5等&!’曾经观察了鲤鱼等多种硬骨鱼类的受精过程!他认为大多数鱼类属单精受精#防止多精入卵的机制有*种类型#$!%精孔管狭窄!其孔径只允许单个精子通过"$"%精子进入精孔管后即产生受精锥!它能阻止其他精子再进入精孔管"$*%由于精子进入精孔管后!卵子即产生皮质反应!释放出的皮质激素能把受精孔周围的多余精子胶联成团#我们也曾对人工复合三倍体鲤卵子的受精生物学做过较详细的观察&!!’!虽发现部分卵子有多精进入!但雄核与雌核不融合!胚胎发育完全由雌核单独调控#\-2-3.,-86&!*’曾在鲱鱼$!$@/#&/&$$&(,%的受精孔发现一种特殊的蛋白质!它们能激活并促使精子进入卵内受精#本研究观察的结果揭示!人工四倍体鲤鲫卵子的受精生物学特点仍然与大多数鱼类相同!控制精子入卵的部位很可能就位于卵壳上的受精孔区域#很明显!未受精卵因为卵外壳具有一定的严密结构!处于封闭状态#卵子受精过程主要是受机械(物理或化学反应等多种机制调控!如本实验中在每一个卵表面都只观察到有一个受精孔!而且受精孔孔径大小和精子头部大小相似#从实验中我们还观察到在受精后的精孔管由于皮质反应而凝集成团的未进入卵子的大量多余精子!从而防止了多精入卵的现象发生!同时卵子可能在受精的瞬间就能产生某种物质以凝集其他精子"**!!第于卵的表面!而不允许任何精子进入受精孔发生受精#据此结果推测!当第一个精子进入受精孔后!其他的超数精子很可能就停止运动!进而退化(解体或被吸收#此外!从人工四倍体成熟卵与红鲤精子受精激活后的发育情况看!胚胎和幼苗的成活率都极高!与正常的两性生殖的鲤(鲫无差别!同时在发育过程中也没有发现由于多精受精引起的多精综合症症状#综合这些事实说明人工四倍体鲤鲫虽属天然雌核发育类型!但仍属于单受精孔(单精入卵!单精受精类型的鱼类#研究表明!四倍体鲤鲫的成熟卵对红鲤精子受精后的应答是在受精后瞬间发生的一系列受精生理变化过程!当卵子排出体外而未+受精,时!位于动物极的受精孔是完全敞开并且是静止的!未受精前!一切都是稳定平静的!一旦精子入卵受精!卵子对精子迅速发生应答并发生急剧的生理变化!卵子间隙周围的囊胞大量向外排除!动物极和植物极明显分出!随后开始进行一系列胚胎发育过程#在以前报道的鱼类受精生物学研究资料中!没有见到如此明显而详细的卵壳上的受精孔由开放直到慢慢封闭的全过程!本研究观察到的这一详细的过程对于受精生物学的研究将具有十分重要的意义#依据人工四倍体鲤鲫受精时间来看!受精后&%4!受精卵表面就有絮状物分泌!那么其受精过程在*%4之内就完成了!与鲤&!’(金鱼&*’等受精时间很相似!但远远短于大鳞副泥鳅&(’#因此当四倍体鲤鲫在进行体外人工受精时必须严格控制时间!以保证获得较高的雌核发育激活率#参!考!文!献!![7<5P#P I>?,I>2>@?-@.52-2<@6>15?,-@.5251-1>?@./.a-@.52852>.2@6>85,,528-?I>33#=>Z>/5I E?5J@6-2<=.11>?!!A’%!""$*%#&%**&!&"!N-?@:N!=525Z-2R#P@?78@7?>51@6>865?.52-2<4.@>51 4I>?,>2@?^.2@6>>3351G?-86.<-2.5#‘+K I V55/!!A’*!""O $"%#"O O*"A$*!张天荫!封树芒!潘忠宗#金鱼精子入卵过程的扫描电镜观察#动物学研究!!A A*!!&$"%#!$$*!O%&!吴坤明!沈其璋!刘根洪#泥鳅成熟卵受精孔涡旋状结构的研究#科学通报!!A A!!*$$!(%#!!O(*!!O’(!姚纪花!周平凡#大鳞副泥鳅卵子壳膜结构与受精过程的扫描电镜观察#上海水产大学学报!!A A’!O$!%#$(*$’$!G?7,,>@@;9!=7,52@‘:#L2.@.-/4@-3>514I>?,I>2>@?-@.52 .2@5@6>>3351E@’9@$@(0#:#.+*$,:@(#‘57?2-/51+K I>?.,>2@-/ V55/53^!!A O A!"!%#&!O*&**O!=523Y N!\>\V!S7b‘#F5,I-?-@.Z>4@7<.>452@6>,.8?5) I^/-?-I I-?-@74.2157?1?>46J-@>?1.46>4J.@648-22.23>/>8@?52 ,.8?5485I>#;227-/9>I5?@51P@-@>[>^T-H5?-@5?^15?W?>46) J-@>?+85/53^-2<G.5@>8625/53^51F6.2-!!A A&!!%**!%O’!S7b‘!\>\V!=523Y N#U J572.4>K7-/-?@.1.8.-/I5/^I/5.< 8/52>48524@?78@><H^3>25,>-<<.@.525185,,528-?I$!I/.,<’@(*&./!%%-2<8?78.-28-?I$!&.&((,@(&@.&:@(%#P8.>28>.2F6.) 2-!F!"%%*!&$$$%#!*’A!=523Y N!\>\V!S7b‘#F^@5/53.8-/H-4.451I5/^4I>?,.81>?@./.a-@.52.2-2-?@.1.8.-/,7/@.I/>@?.I/5.<#F6.2=>Z>/5I9>I?5<G.5/!!A A’!!O$!%#&!c&O!%!\>\V!S7b‘#Q5/^4I>?,^J.@6,-@7?>>33451-?@.1.8.-/,7/) @.I/>@?.I/5.<8-?I#;_7-87/@7?>!!A A*!!!!#*!A!!!叶玉珍!吴清江#人工复合三倍体鲤卵的受精生物学研究#水生生物学报!!A A&!!’$!%#!O*"!!"!\>\V!V657‘W!S-23Y N!>@-/#9>I?5<78@.52,5<>51-2 -?@.1.8.-/-//5@>@?-I/5.<8-?I$Q.48>4"F^I?.2.<->%#N>?><.@-4!"%%"!!*O#!&%*!&&!*!\-2-3.,-86.9#P@7<.>4511>?@./.a-@.52.2!$@/#&/&$$&(,#X L# W>?@./.a-@.5251>33<>I?.Z><51@6>,>,H?-2>#‘I2‘L86@65/!!A(O!$#&!*&O***!!第。