随机扩增多态性DNA反应体系优化的研究

佛手种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究佛手种质资源多样性和遗传关系。

方法采用随机扩增多态性随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析了佛手13份种质材料的亲缘关系。

结果从110条引物中筛选出16条多态性高的引物，共扩增出185条DNA带，其中多态性带有168条，多态率为90.8%。

通过聚类分析，在相似系数0.67的水平上将13份材料分为3类。

结论佛手种质间存在较丰富的遗传多样性，聚类结果与以产地为依据对佛手进行品种类群划分较为一致。

【关键词】佛手随机扩增多态度性DNA分析遗传多样性佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle(CMS)为芸香科柑桔属植物，其干燥果实入药，具有舒肝理气、和胃止痛的功效［1］。

佛手悠久的栽培历史，形成了一些各具特色的地方品种，药材现行规格按产地主要分为广佛手、川佛手和浙佛手［2］。

目前，有关佛手种质资源的研究很少，对其种质资源的多样性和遗传结构缺乏系统的研究。

随机性扩增多态性DNA（RAPD）技术是20世纪90年代发展起来的一种快速便捷的分子标记技术，已被证明是研究植物遗传多样性及种质鉴定的有效手段，广泛应用于药用植物种内、种间及近缘属间系统学研究［3～5］。

本文拟采用RAPD技术分析佛手不同产地、不同栽培品种的亲缘关系及遗传多样性，旨在探究其基因组上的差异，为佛手种质资源的评价和育种提供分子依据。

1 器材和方法1.1 材料佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis (Noot.) Swingle(CMS)的叶片，经广州中医药大学鉴定教研室张丹雁教授鉴定。

样品来源见表1。

1.2 仪器与试剂Beckman -15CSR冷冻高速离心机；PCR仪(Applied Biosystems 2720 Thermal cycler)；UVP GDS7600型凝胶成像仪；ECAN Spectra FLUOR plus多功能酶标仪。

玉米种质资源RAPD分子标记优化体系的建立摘要：玉米是我国重要的作物之一，在我国农业生产中占有重要的地位。

吉林省玉米生产条件优越，推广面积广，品种的多样性丰富，为实现品种的管理高效科学，本实验以用玉米为材料进行rapd 的研究。

建立并优化了高效、稳定的玉米rapd实验体系，为后续玉米品种的管理提供了理论基础和实验支持。

关键词：玉米；rapd；体系中图分类号：s513 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0050-1rapd（random amplified polymorphic dna，rapd）也称之为ap-pcr （arbitrary primer pcr），即随机扩增多态性dna技术，是由williams和welsh等发明的分子标记技术，是一项基于pcr技术的分子生物技术[1，2]。

是以基因组dna为模板，常以一个10mer随机的寡核苷酸序列作引物，通过pcr扩增，产生许多不连续的dna 产物，以检测dna序列的多态性。

它可以在物种遗传背景没有任何分子生物学研究的情况下，对其进行基因组指纹图谱进行研究，还可用于检测体细胞杂种和微生物分型[3]。

玉米是最为古老的栽培作物之一，目前为我国栽培作物的第二位。

吉林省是我国的玉米大省，玉米种植面积在全国位于前五，每年审定的新品种数目为全国第一。

由于目前玉米为品种检定手段还不完善，导致品种管理有一定的难度。

故本文进行了玉米rapd分子标记体系的相关研究。

1 材料与方法1.1 供试材料购买市售玉米主推品种种子。

1.2 试验试剂和仪器taqdna聚合酶、10×pcr buffer（含mg2+）、10碱基随机引物、dntps；琼脂糖、dna分子量标准（d2000maker）等购自上海生工。

1.3 rapd方法1.3.1 dna的提取以玉米种子产生的嫩芽为材料，使用植物基因组试剂盒提取。

dna回溶于灭菌水中，-20℃保存备用，1%琼脂糖凝胶电泳检测质量。

何首乌及其混伪品序列相关扩增多态性反应体系的优化（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的建立何首乌及其混伪品序列相关扩增多态性（SRAP）分子鉴定技术体系。

方法正交优化影响SRAP-PCR 的Mg2+、dNTPs、引物浓度与Taq聚合酶量。

结果20 μl反应体系的优化组合为：Mg2+ 2.5 mmol/L，dNTPs 0.4 mmol/L，引物0.35μmol/L，Taq酶1U。

结论Mg2+、dNTPs、引物浓度与Taq聚合酶量对不同物种SRAP-PCR结果有不同程度影响，利用SRAP分子鉴定前应对此4因素进行优化。

【关键词】何首乌混伪品序列相关扩增多态性优化Abstract：ObjectiveIn order to characterize Polygonum multiflorum Thunb. and its adulterants, the SRAP molecular marker system was established.MethodsOrthogonal design was used to optimize the concentrations of Mg2+, dNTPs, primers and Taq DNA olymerase. ResultsThe optimum system of 20 μl was as follows: Mg2+ 2.5 mmol/L, dNTPs 0.4 mmol/L, primer 0.35 μmol/L,Taq DNA polymerase 1 U. ConclusionThe concentrations of Mg2+, dNTPs, primers, Taq DNA olymerase have different effect in the result of SRAP-PCR in different species. It is necessary to optimize these four factors before using SRAP to identity different species.Key words：Polygonum multiflorum Thunb.; Adulterants; SRAP; Optimize何首乌Polygonum multilorum Thunb.是我国传统名贵中药，广东十大“道地药材”之一。