随机扩增多态性DNA

分子生物学题库（含参考答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色：A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A2、点突变引起的血友病 A 的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案：E3、巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E4、有下列哪项指征者应进行产前诊断A、夫妇之一有致畸因素接触史的B、习惯性流产的孕妇C、夫妇之一有染色体畸变的D、35 岁以上高龄的E、以上都是正确答案：E5、描述随机扩增多态性 DNA 技术不正确的是 ( )A、引物序列随机B、有多条引物C、电泳分离产物D、需要限制性内切酶酶切E、反应基因组多态性正确答案：D6、绝大多数β-地中海贫血系由位于第 11 号染色体上的β-珠蛋白基因中的基因突变所致，下列方法中不能用于分子生物学检验的技术是A、PCR-ASOB、PCR-RDBC、基因芯片D、多重 PCRE、MOEA-PCR正确答案：D7、关于测序策略的叙述正确的是A、应该具有最大重叠、最小数量的测序反应B、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用引物步移法C、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用随机克隆法D、大片段未知序列DNA 测序，可以直接测序E、大规模基因组计划，可以使用多个测序策略正确答案：E8、在人类基因组中，编码序列占的比例为A、5%B、1.5%C、21%D、3%E、23%正确答案：B9、PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B10、Tm 值主要取决于核酸分子的A、A-T 含量B、G-C 含量C、A-C 含量D、T-G 含量E、C-T 含量正确答案：B11、结构基因突变不包括A、基因扩增B、基因点突变C、基因表达异常D、基因缺失E、基因重排正确答案：C12、由于突变使编码密码子形成终止密码，此突变为：A、无义突变B、移码突变C、终止密码突变D、同义突变E、错义突变正确答案：A13、关于肺炎支原体的实验室检测，正确的是A、体外培养生长缓慢但阳性率很高B、免疫学方法检测的假阳性率较低C、体外培养在支原体感染的早期诊断上具有重要意义D、利用分子生物学方法可以进行流行病学调查和耐药基因分析E、PCR 技术可检测到极微量的 DNA，但特异性不高正确答案：D14、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B15、关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案：E16、关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D17、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D18、目前已知感染人类最小的 DNA 病毒 ( )A、HIVB、HPVC、HBVD、HAVE、HCV正确答案：C19、核酸分子杂交的基础是A、碱基互补配对B、甲基化C、磷酸化D、抗原抗体结合E、配体受体结合正确答案：A20、基因芯片技术在移植配型中有着越来越广泛的应用，也具有其他技术不能比拟的优点，以下不属于基因芯片技术特点的是A、观察判断直观B、自动化程度高C、微缩化D、操作繁琐E、高通量正确答案：D21、关于 NC 膜下列描述不正确的是A、能吸附单链 DNAB、能吸附单链 RNAC、依赖于高盐浓度结合靶分子D、对小分子 DNA 片段 (<200bp) 结合力强E、易脆正确答案：D22、线粒体糖尿病属于A、新发现的第 5 种糖尿病B、特殊类型糖尿病C、妊娠期糖尿病D、1 型糖尿病E、2 型糖尿病正确答案：B23、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、15~25℃B、40~50℃C、5~10℃D、10~15℃E、30~40℃正确答案：A24、K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、插入突变C、点突变D、缺失突变E、基因扩增正确答案：C25、检测目标是 RNA 的技术是：A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：C26、以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B27、关于 HPV 各亚型遗传物质的描述正确的是A、有的是脱氧核糖核酸，有的是核糖核酸B、都是核糖核酸C、同时存在脱氧核糖核酸和核糖核酸D、都是脱氧核糖核酸E、脱氧核糖核酸与核糖核酸可交替互换正确答案：D28、PCR 技术扩增 DNA，不需要的条件是 ( )A、目的基因B、引物C、四种脱氧核苷酸D、DNA 聚合酶E、mRNA正确答案：E29、延伸的温度通常为A、55℃B、95℃C、25℃D、37℃E、72℃正确答案：E30、下列密码子中，终止密码子是 ( )A、UUAB、UGAC、UGUD、UAUE、UGG正确答案：B31、影响DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜，低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C32、丙型肝炎病毒基因组高变区位于A、E1 区B、C 区C、NS3 区D、NS4 区E、NS1/E2 区正确答案：E33、为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1 ×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A34、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、沙眼衣原体B、鼠衣原体C、豚鼠衣原体D、鹦鹉热衣原体E、肺炎衣原体正确答案：A35、DNA 自动化测序技术中，不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B36、决定 PCR 反应特异性和PCR 长度的物质是( )A、引物B、模板C、dNTPD、Mg2+E、DMSO正确答案：A37、下列不是影响DNA 复性因素的是A、DNA 浓度B、DNA 的分子量C、温度D、碱基组成E、DNA 的来源正确答案：E38、下列不是目前用于 O157：H7 型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规 PCRB、多重 PCRC、荧光定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA 测序正确答案：E39、下列叙述哪项是错误的( )A、原核生物基因组具有操纵子结构B、原核生物结构基因是断裂基因C、原核生物基因组中含有插入序列D、原核生物基因组中含有重复序列E、原核生物结构基因的转录产物为多顺反子型mRNA 正确答案：B40、指导合成蛋白质的结构基因大多数为：A、中度重复序列B、散在核原件C、单拷贝序列D、高度重复序列E、回文序列正确答案：C41、双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关 ( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E42、第三代测序技术测定人全基因组的目标：A、30 分钟的测序时间及 5 万美元的测序价格B、3 小时的测序时间及 5 千美元的测序价格C、3 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格D、3 小时的测序时间及 5 万美元的测序价格E、30 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格正确答案：C43、阳性质控品失控的原因不包括A、提取的核酸残留有抑制物B、扩增仪孔间温度不一致C、Taq 酶失活D、扩增产物污染E、核酸提取试剂失效正确答案：D44、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因功能正确答案：E45、下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中，不正确的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A46、Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：A47、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E48、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，可使比值升高的是：A、蛋白质B、酚C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：C49、人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是 ( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案：D50、关于 DNA 变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案：B51、判断 HBV 复制及传染性的直接指标是检测A、HBV DNA 多聚酶活力B、HBsAgC、HBV DNAD、HBeAgE、HBcAg正确答案：C52、病毒的遗传物质是A、DNAB、RNA 和蛋白质C、DNA 或 RNAD、RNA 和 DNAE、DNA 和蛋白质正确答案：C53、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、携带者诊断B、产前诊断C、症状前诊断D、耐药基因检测E、携带者筛查正确答案：B54、mtDNA 突变不会导致A、综合征型耳聋B、非综合征型耳聋C、神经性耳聋D、药物性耳聋E、氨基糖苷类抗生素耳毒性正确答案：C55、关于真菌，以下描述正确的是A、真菌种类繁多，其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性，对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B56、利用DNA 芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A57、下列叙述不正确的是A、F 质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R 质粒又称抗药性质粒C、Col质粒可产生大肠杆菌素D、F 质粒是一种游离基因E、F 和ColE1 质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A58、有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域，通常不被转录D、形式为 (CA) n/ (TG) n、 (AG) n、 (CAG) n 等E、又称为可变数目串联重复序列 (VNTR)正确答案：D59、以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D60、下列不属于血友病 B 间接诊断方法的是A、PCR-RFLPB、PCR-SSCPC、双脱氧指纹图谱D、毛细管电泳E、变性高效液相色谱正确答案：D61、关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D62、关于 PCR 反应引物的描述，不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列，防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的Tm 值应该尽量相近正确答案：D63、关于逆转录 PCR 的描述，不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用DNA 聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d (T) 理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E64、以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基正确答案：A65、逆转录 PCR 扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d (T) 决定C、PCR 扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案：C66、有关 SNP 位点的描述，不正确的是A、生物芯片技术可提高 SNP 位点的检测准确性B、单个 SNP 位点信息量大，具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有 300 万个 SNP 位点D、被称为第三代 DNA 遗传标志E、SNP 位点是单个核苷酸的变异正确答案：A67、下列不属于单基因遗传病产前诊断常用方法的是A、巢式 PCRB、全基因组扩增C、多重 PCRD、Western blotE、PCR-SSCP正确答案：D68、Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、α-35S-dNTPB、dNTPC、ddNTPD、α-32P-dNTPE、NTP正确答案：C69、标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、杂交B、复性C、变性D、复杂性E、探针正确答案：E70、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式，与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制，不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E71、Northern 印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、检测靶分子是 RNAD、用于基因定位分析E、用于阳性菌落的筛选正确答案：C72、线粒体基因组与核基因组之间，下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录，之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍，影响细胞呼吸、氧化功能，进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制，但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立，但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ，相互影响，相互协调正确答案：A73、基因芯片技术的优点不包括A、高通量B、操作简单C、芯片检测稳定性高D、观察结果直观E、微缩化正确答案：C74、基因多态性连锁分析中，第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C75、PCR 反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案：E76、SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于A、50bpB、100bpC、200bpD、300bpE、400bp正确答案：D77、任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案：A78、下列说法错误的是A、用于 RNA 检测的样本短期可保存在-20℃B、用于 PCR 检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入 1mol/L NaOH 初步处理正确答案：B79、以下哪种酶可用于 PCR 反应 ( )A、KlenowB、HindⅢC、Taq DNA 聚合酶D、RNaseE、Dnase正确答案：C80、相对于第一代测序技术，新一代测序技术不具有的优点：A、模板不需要克隆B、高通量C、并行D、较长的测序读长E、一次运行可产生海量的高质量数据正确答案：D81、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例，哪一种的Tm 值最高 ( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案：A82、某基因位点正常时表达为精氨酸，突变后为组氨酸，这种突变方式为：A、同义突变B、移码突变C、错义突变D、无义突变E、动态突变正确答案：C83、聚合酶链式反应是一种A、体外特异转录 RNA 的过程B、体外翻译蛋白质的过程C、体外特异转录 DNA 的过程D、体外特异复制 DNA 的过程E、体内特异复制 DNA 的过程正确答案：C84、最能直接反映生命现象的是：A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A85、下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A86、丙型肝炎病毒的核酸类型 ( )A、双链 RNAB、单链正链 RNAC、双链环状 DNAD、单链 DNAE、单链负链 RNA正确答案：B87、关于 p53 基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53 蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体 17q13 上正确答案：E88、不能作为 PCR 模板的是A、DNAB、RNAC、质粒 DNAD、蛋白质E、cDNA正确答案：D89、关于 FISH 在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH 只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH 的灵敏度高于 PCRE、FISH 是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案：A90、检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D91、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A92、构成完整的病毒颗粒的成分是A、糖蛋白B、蛋白质与核酸C、核酸D、结构蛋白E、蛋白质正确答案：B93、TaqMan 探针技术要求扩增片段应在A、250~300bpB、50~150bpC、150~200bpD、200~250bpE、300~350bp正确答案：B94、产前诊断临床应用尚不广泛，原因不包括A、单个细胞的遗传诊断困难B、诊断的准确性受到多种制约C、需要生殖医学与遗传学技术的结合D、已明确母亲为携带者的婴儿E、诊断技术不成熟正确答案：E95、关于 TaqMan 探针技术的描述，不正确的是A、R 基团与Q 基团相距较远，淬灭不彻底，本底较高B、易受到Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析，减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案：C96、下面关于线粒体的描述不正确的是A、是真核细胞重要的细胞器B、线粒体的主要功能是氧化产能C、是细胞的能量工厂D、半寿期是 10 天左右，其数量和体积保存不变E、线粒体中存在基因，线粒体基因突变会导致疾病的发生正确答案：D97、关于特定突变位点探针的设计说法正确的是A、长度为 N 个碱基的突变区需要 2N 个探针B、检测变化点应该位于探针的中心C、检测变化点应该位于探针的两端D、探针设计时不需要知道待测样品中靶基因的精确细节E、采用等长移位设计法正确答案：B98、在人类基因组 DNA 序列中，DNA 甲基化主要发生在A、腺嘌呤的 N-6 位B、胞嘧啶的 N-4 位C、鸟嘌呤的 N-7 位D、胞嘧啶的 C-5 位E、鸟嘌呤的 C-5 位正确答案：D99、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D100、HIV 最易发生变异的部位是A、核衣壳蛋白B、刺突蛋白C、逆转录酶D、包膜蛋白E、内膜蛋白正确答案：B。

河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、分析题（5分，每题5分）1. 写出从组织中抽取RNA的关键步骤，并解释如何判断RNA质量。

答案：（1）从组织中提取RNA的步骤如下：①将组织在液氮中所磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol 裂解液溶解样品，充分吹打混匀。

②每1ml TRIzol加入2.0ml氯仿，剧烈震荡15s，室温放置5min。

③4℃，10000g离心15min，此时RNA主要集中在水相中。

④将水相转移至新的离心管中，加入等体积丙酮，室温放置10min。

⑤4℃，10000g离心10min，此时可在离心管仔细分析底部观察到白色沉淀，即为RNA。

⑥用75冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，7500g以下，离心5min，弃上清。

⑦超净台中吹干，加入无RNase的水溶解。

（2）检测RNA质量的方法如下：①凝胶成像：取适量RNA溶液加入电泳缓冲液后，跑琼脂糖凝胶电泳，如果28S和18S条带明亮、清晰，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则认为RNA的质量是好的。

②吸光度检测：使用紫外波谱光度计检测RNA样品在260nm、280nm处的吸光度，若两者的比值在1.8～2.0时，可认为RNA纯度良好，蛋白质等其他物质的污染可以接受。

解析：2、判断题（55分，每题5分）1. 衰减子在真核基因调控中起负调节作用。

（）答案：错误解析：真核基因无衰减子。

2. 一个基因的内含子能够作为另一个基因的外显子。

（）答案：正确解析：内含子是指断裂基因的非编码序列，可被转录，但在mRNA加工过程中被剪切压碎，故成熟mRNA上用无内含子编码序列。

外显子是真核抗原生物基因的一部分。

它在片断后会被保存下来，并可在蛋白质生物合成关键步骤中被表达为蛋白质。

某理工大学生物工程学院《现代分子生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、分析题（5分，每题5分）1. 写出从组织中抽取RNA的关键步骤，并解释如何判断RNA质量。

答案：（1）从组织中提取RNA的步骤如下：①将组织在液氮中所磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol 裂解液溶解样品，充分吹打混匀。

②每1ml TRIzol加入2.0ml氯仿，剧烈震荡15s，室温放置5min。

③4℃，10000g离心15min，此时RNA主要就集中在水相中。

④将水相转移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，室温放置10min。

⑤4℃，10000g离心10min，其时可在离心管底部观察到白色沉淀，即为RNA。

⑥用75冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，7500g以下，离心5min，弃上清。

⑦超净台中吹干，加入无RNase的水溶解。

（2）检测RNA质量的方法如下：①凝胶成像：取适量RNA溶液加入电泳缓冲液后，跑琼脂糖凝胶电泳，如果28S和18S条带明亮、清晰，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则认为RNA的质量是好的。

②吸光度检测：使用紫外分光光度计检测RNA样品在260nm、280nm处的吸光度，若两者的比值在1.8～2.0时，可认为RNA纯度良好，蛋白质等其他物质自然界的污染可以接受。

解析：2、判断题（55分，每题5分）1. 增强子和沉默子是具有位置和方向效应的DNA元件。

（）答案：错误解析：增强子和沉默子是不具有位置和方向效应的DNA元件。

2. 细胞的分化是多细胞生物体发育的基础，也是单细胞生物体生活的周期变化的基础。

（）答案：正确解析：3. 叶绿体的rRNA核糖体是由16S、5S、23S、5.8S组成的。

（）答案：错误解析：叶绿体蛋白合成所有的核糖体的沉降系数为70S，由大小不等的两个亚基（50S和30S）组成，和原核生物的核糖体十分相似。

分子标记1.分子标记技术及其定义1974年,Grozdicker等人在鉴定温度敏感表型的腺病毒DNA突变体时, 利用限制性内切酶酶解后得到的DNA片段的差异, 首创了DNA分子标记。

所谓分子标记是根据基因组DNA存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记,它是继形态学标记、细胞学标记、生化标记之后最为可靠的遗传标记技术。

广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质分子。

通常所说的分子标记是指以DNA多态性为基础的遗传标记。

分子标记技术本质上都是以检测生物个体在基因或基因型上所产生的变异来反映基因组之间差异。

2.分子标记技术的类型分子标记从它诞生之日起, 就引起了生物科学家极大的兴趣,在经历了短短几十年的迅猛发展后, 分子标记技术日趋成熟, 现已出现的分子标记技术有几十种, 部分分子标记技术所属类型如下。

2.1 建立在Southern杂交基础上的分子标记技术(1) RFLP ( Rest rict ion Fragment Length Polymorphism)限制性内切酶片段长度多态性标记；(2) CISH ( Chromosome In Situ Hybridization) 染色体原位杂交。

2.2 以重复序列为基础的分子标记技术(1) ( Satellite DNA ) 卫星DNA；(2) ( Minisatellite DNA ) 小卫星DNA;(3) SSR( Simple Sequence Repeat ) 简单序列重复, 即微卫星DNA。

2.3 以PCR为基础的分子标记技术(1) RAPD ( Randomly Amplif ied Polymorphic DNA ) 随机扩增多态性DNA；(2) AFLP( Amplif ied Fragment Length Polymorphism) 扩增片段长度多态性；(3) SSCP( Single Strand Conformation Polymorphism) 单链构象多态性；(4) cDNA-AFLP( cDNA- AmplifiedFragment Length Polymorphism) cDNA -扩增片段长度多态性；(5) TRAP( Target Region Amplified Polymorphism) 靶位区域扩增多态性；(6) SCAR ( Sequence Char acterized Amplified Region) 序列特征化扩增区域；(7) SRAP ( Sequencerelated Amplified Polymorphism) 相关序列扩增多态性。

1、同源染色体：指形态、结构、功能相似的一对染色体，一条来自父方，一条来自母方2、性染色体：与性别决定有关的染色体常染色体：性染色体之外的其他染色体统称为常染色体3、细胞周期：一次细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束，构成一个细胞周期4、二价体：减数分裂偶线期，每对联会的同源染色体5、交换（互换）：联会复合体形成后，非姐妹染色单体之间相应的部位发生断裂、重接的现象6、交叉端化：双线期，同源染色体分开，交换部位形成交叉，且向两极移动的现象7、基因组：细胞或生物体的遗传物质的总量8、配子发生：产生成熟配子或孢子的整个过程9、孢子体世代（无性世代）：在植物界，一个合子（2n）发育成一个二倍体个体的过程配子体世代（有性世代）：孢子体进一步进行生殖形成一个配子体，并产生配子的过程10、世代交替：植物生活史中，产生孢子的时代（2n）与产生配子的世代（n）相互交替的现象11、性状：生物体所表现出来的形态特征和生理特性12、性对性状：不同品种之间表现出相对差异的一对性状13、杂交：不同遗传型的个体进行有性交配14、显性性状与隐性性状：具有一对相对性状的两亲本杂交，F1所表现出的其中一个亲本的性状为显性性状；未表现出来的另一亲本的性状为隐形性状15、等位基因：控制相对性状的同一基因的两种不同形式的基因16、基因型：生物体的遗传组成，是肉眼看不到的，通过杂交试验测定表现型：生物所表现的性状，肉眼可见，可以用物理、化学方法测定17、纯合体：体细胞所含控制某一性状的两个基因（等位基因）是相同的个体杂合体：体细胞所含控制某一性状的两个基因（等位基因）是不同的个体18、纯系：具有相同基因型的一群个体19、完全显性：两个纯合亲本杂交，F1表现出其亲本之一的性状不完全显性：两个纯合亲本杂交，F1表现的性状介于两亲本之间的表型20、测交：被测验的个体与基因型为隐性纯合的个体进行杂交回交：F1个体与亲本之一进行杂交21、携带者：携带有害性基因，但其表现被正常显性等位基因掩盖的杂合体22、多因一效：指某性状在代谢上由很多基因决定一因多效：指一个基因可影响若干性状的现象23、表现度：基因表达的变异方式之一，是指个体间基因表达的变化程度外显率：基因表达的另一变异方式之一，是指某一基因型个体显示预期表型的比例24、致死基因：生物体中具有致死作用的基因25、隐性致死：基因的致死作用只在纯合体时表现显性致死：基因的致死作用在杂合体时就能表现26、配子致死：发生在配子期的致死作用，称为配子致死合子致死：发生在胚胎期或成体阶段的致死作用，称为合子致死条件致死：有些基因在某一环境中致死，在另一环境中具有正常的生活力的现象27、复等位基因：一个基因座位存在两个以上的等位形式的现象28、完全显性：指控制某一性状的等位基因在杂合体（Aa）的表型和显性纯合体（AA）的表型相同不完全显性：指控制某一性状的等位基因间缺少显隐性关系，杂合体的表型介于两亲本之间并显性：指控制某一性状的等位基因间缺少显隐性关系，杂合体的表型与两纯合亲本都不同，但每一等位基因效应在杂合状态下都可以观察到镶嵌显性：两纯合亲本杂交，杂合体的表型与亲本都不同，而在各自的不同部位分别表现出显性29、互作作用：两对非等位基因相互作用决定一个性状抑制作用：一对基因本身不表现性状，但当其处于显性纯合或杂合状态时，能够使另一对显性基因不发挥作用的现象叠加作用：两队非等位基因的作用相同，本身为完全显性，非等位基因间互为完全显性互加作用：两队非等位基因的显性状态具有同等效应，且同时存在时又具有叠加效应上位作用：某对等位基因的表现，因受另一对非等位基因的影响而改变的现象30、同配性别：性母细胞通过减数分裂只产生一种类型的配子的性别异配性别：性母细胞通过减数分裂产生两种不同类型的配子的性别31、性指数：性别取决于性染色体（X）与常染色体组数（A）的比值，即为性指数32、伴性遗传：性染色体上基因所控制的性状在遗传方式上通常与性别相联系的遗传方式33、从性遗传：其所涉及的性状由位于常染色体上的基因控制，由于内分泌等因素的影响，基因在不同性别中表达不同，在一性别中为显性，而另一性别中为隐性的遗传现象34、限性遗传（限制遗传）：指只在某一性别中表现性状的遗传，即该基因在另一个性别中外显率为035、剂量补偿效应：使具有两份活两份以上的基因量的个体与只具有一份基因量的个体的基因表现趋于一致的遗传效应36、嵌合体：非整倍体出现是由于配子形成时染色体不分开造成，若出现在卵裂期或以后，就有可能形成由不同基因型细胞所组成的个体，即为嵌合体37、巴氏小体：又称性染色质体，是一种在间期细胞核内贴近核膜边缘着色较深的染色小体，是由一条失活的X染色体形成的38、连锁基因：当两个或两个以上基因位于同一染色体上时，其形成配子的过程中较少分离39、相引相：两个连锁的基因，若两个显性等位基因在一条染色体上，而相应两隐性等位基因在其同源染色体上（AB/ab）的连锁关系相斥相：当一位点等位基因和另一位点的隐性基因在同一染色体上时（Ab/aB）的连锁关系40、图距：指两个基因在染色体图上距离的数量单位，常用两相关基因间的交换率表示41、完全连锁：连锁的基因间不发生交换，即交换值=0不完全连锁：连锁的基因间能发生交换，0<交换值<50%42、两点测交：利用两个连锁基因进行的测交分析三点实验：利用三个连锁基因进行测交的分析43、干涉：某同源染色体形成一个交叉，结果减少其邻近区域第二个交叉形成的概率的现象正干涉：以及交换抑制了另一次交换的发生负干涉：一次交换促进了另一次交换的发生44、连锁群：位于同一染色体的所有基因构成一个连锁群45、四分子：真菌类减数分裂的4个产物停留在一起，构成四分子46、有序四分子分析：对具特定排列顺序的四分子的遗传分析无序四分子分析：对无特定排列顺序的四分子的遗传分析47、细菌染色体：位于细菌细胞内拟核区域中的一个裸露的环状DNA分子，其不进行减数分裂48、质粒：一些细菌细胞除其细菌染色体外，还具有小的可自主复制的环状DNA分子49、附加体：指除染色体外的遗传因子，其能够以自主复制的环状DNA分子的形式存在，又能成为整合到宿主染色体上的DNA序列50、转化：一个细菌品系的裸露DNA分子或其片段，进入另一细菌品系的细胞内，而使该细菌产生新的（重组）表现型的方式51、接合：供体菌（雄性）通过性菌毛与受体菌（雌性）直接接触，把F质粒或其携带的不同长度的宿主DNA片段传递给后者，使后者获得新遗传性状的现象52、转导：以缺陷型噬菌体为媒介，把供体细胞的小片段DNA携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象53、转导子：由转导作用而获得部分新性状的重组细胞54、高频重组子（Hfr）：染色体上整合有F质粒的细胞，具有高效转移其他遗传物质的潜在能力55、外基因子与内基因子：在细菌接合中，进入受体的染色体片段称为外基因子；受体染色体为内基因子56、部分二倍体：由于外基因子伟染色体片段，其与受体染色体形成的二倍体57、性导：Hfr通过交换，可形成带有部分细菌染色体的F'因子，通过F'因子进行的细菌重组称为性导58、重组作图：根据基因间的重组率进行基因定位并确定基因间的相对距离的方法扩增片段长度多态性（AFLP）：通过多聚酶链式反应（PCR)扩增基因组DNA产生的多态性DNA片段随机扩增多态DNA（RAPD）：其用于PCR扩增的引物是随机的，是利用一些列碱基顺序随机排列的寡聚核苷酸单链引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，扩增产物DNA片段的多态性反映出基因组相应区域的DNA多态性59、缺失：染色体丢失了某一区段顶端缺失：指缺失的区段为某臂的外端中间缺失：指缺失的区段为某臂的内段60、缺失杂合体：某个体的体细胞内有正常染色体及其缺失染色体缺失纯合体：某个体的缺失染色体是成对的61、重复：指细胞的染色体组中，存在两段或两段以上相同的染色体片段，即染色体多了自己的某一区段62、顺接重复：某区段按照自己在染色体上正常直线顺序重复反接重复：某区段在重复时颠倒了自己在染色体上正常直线顺序63、剂量效应：指细胞内某基因出现的次数越多，表型效应就越显著64、位置效应：重复基因所在染色体上的位置不同，其表现型效应也不同65、倒位：指染色体某一区段的正常直线顺序颠倒66、臂内倒位：即一侧倒位，倒位区段在染色体的某一个臂的范围内臂间倒位：即两侧倒位，倒位区段内有着丝粒，亦即倒位区段涉及染色体的两个臂67、易位：指非同源染色体间发生节段转移的现象，即某染色体的一个区段移接在非同源的另一条染色体上68、相互易位：两条非同源染色体都折断，而且这两条折断的染色体及其片段交换重接，较为常见简单易位（转移）：某染色体的一个臂内区段，嵌入非同源染色体的一个臂内，较为少见69、四重体：相互易位杂合体的两对同源染色体由于发生节段互换不能正常联会成两个二价体，而是4条染色体联会成一个配对的构型70、罗伯逊易位：一种涉及两条近端着丝粒或端着丝粒染色体染色体的易位类型71、平衡易位：凡发生罗伯逊易位后，主要遗传物质没有丢失，个体表现仍是正常的类型不平衡易位：易位后，个体遗传物质的缺失影响个体的发育的易位类型72、C1B测定：利用C1B//X雌蝇测定X染色体上基因的隐性突变频率73、染色体组：二倍体生物中配子所具有的全部染色体74、整倍体：染色体数在正常染色体数2n的基础上，以染色体组的染色体基数为单位成倍性增加或减少，形成的变异个体的染色体数目是基数的整数倍非整倍体：染色体数在正常个体染色体数2n的基础上增加或减少一条至数条的个体75、单倍体：含有性细胞的染色体数的个体76、同源多倍体：指所有染色体由同一个物种的染色体组加倍而成的多倍体异源多倍体：指体细胞中染色体组来自不同物种，一般由不同种、属的杂交种染色体加倍形成77、同源异源多倍体：指体细胞中有不同的染色体组，且至少有一类染色体组的数目在3个或3个以上的变异类型节段异源多倍体：指异源多倍体中不同染色体组间具有同源性的变异类型78、基因突变：是染色体上一个座位内的遗传物质的变化，使一个基因突变为它的等位基因79、形态突变型：突变主要影响生物外型的突变型，外观可见，故又称为可见突变生化突变型：突变主要影响生物的代谢过程，导致一个特定的生化功能的改变或丧失致死突变型：突变主要影响生活力，造成个体死亡或生活力明显下降⑴显性致死：杂合态即有致死效应⑵隐性致死：纯合态时才有致死效应80、条件致死突变型：某些条件下能成活，另一些条件下是致死的突变81、碱基替换（碱基置换）：因碱基被替换所引起的突变，一个碱基对被另一个碱基对代替，分颠换和转换82、移码突变：增加或减少一个或几个碱基造成的突变，造成编码框的移动83、同义突变：碱基发生变化后，编码的氨基酸未发生变化错义突变：碱基发生变化后，编码的氨基酸发生了变化无义突变：碱基发生变化后，导致了蛋白质合成的终止（终止密码子的出现）抑制突变：由于tRNA基因突变引起了反密码子的改变，当它参与进行转译某些无义突变或错义突变的改变了的信息时，有时却“以错就错”地转译出某种氨基酸，表现出抑制突变的效应84、启动子上升突变：基因突变位点存在于负责基因调控的DNA序列中时，如启动子区域中，能够增强启动子对于转录的发动作用的突变类型启动子下降突变：启动子区域中，能够降低启动子对于转录的效能的突变类型85、组成性突变：若突变位点在操纵基因，其位点不能被阻遏蛋白所识别，或由于调节基因发生突变，不能产生阻遏蛋白，使结构基因失去了负向控制，产生不依赖于需要而在细胞中产生固定数量的蛋白质的基因突变86、突变的重演性：同种生物种同一基因突变可在不同个体间重复出现的性质87、突变的平行性：亲缘关系相近的物种因遗传基础比较近似，往往发生相似基因突变88、自发突变：生物体在无人工干预下自然发生的低频率突变诱发突变：指通过人为的方法，利用物理、化学或生物因素显著提高基因自发突变频率的手段89、照射强度（剂量率）：指被照射物质在单位时间内接受射线能量的多少90、增变基因：某些基因的唯一效应是增加其他基因的突变频率，具有这种效应的基因称增变基因91、母性影响：个体的表型受其母亲的核基因组中基因控制的现象92、核外遗传（细胞质遗传）：染色体外的遗传因子所决定的遗传现象93、三套遗传系统：即细胞核、叶绿体和线粒体遗传系统94、核不育型：由核内染色体上基因所决定的雄性不育类型95、核-质互作不育：由细胞质和细胞核基因共同控制的不育类型96、细胞质雄性不育（CMS）：受到质基因控制的雄性不育97、异胞质体：菌丝体接合导致两个有区别的胞质系统混合98、异核体：细胞含有来自两亲本的细胞核99、二倍体菌株：少数细胞单倍体细胞核融合成为二倍体细胞核，含有这样细胞核的菌株100、分离子：是重组体和非整倍体或单倍体的总称101、单倍体化：产生非整倍体或单倍体的过程102、体细胞交换：有丝分裂过程中，同源染色体间发生染色体交换产生重组体的过程103、培养细胞突变型的建立：利用体外培养单个哺乳动物细胞的技术，在体外培养和克隆特定的突变型细胞，保证细胞在遗传背景上的均一性，为进一步在体外对这些动物细胞进行体细胞杂交、基因定位等遗传学研究奠定基础104、正向选择：利用HGPRT与嘌呤类似物之间的特殊关系，通过嘌呤类似物来筛选HGPRT-细胞的选择方法105、染色体定位：将某个基因定位于某一条染色体上106、区域定位：将某个基因定位于某一染色体的具体位置上107、同线分析：连锁分析的原理用于体细胞杂种染色体分析的方法108、最小重叠区（SRO）：将有关基因区域定位的资料汇集起来，得出一个定位一致的区域109、动物克隆技术（核移植技术）：将动物早起胚胎或体细胞的细胞核移植到去核的受精卵中，重新构建新的胚胎，使重构胚发育为与供核细胞基因型相同的后代的技术过程110、连续细胞核移植：早期胚胎细胞为核供体，经核移植获得的早期胚胎再作为供核体进行多代克隆111、胚胎分割：通过对胚胎的显微操作，人工制造同卵双胞胎或多胞胎的技术112、细胞克隆：指由单个细胞通过有丝分裂增殖（无性繁殖）形成的一个细胞群体113、克隆化：分离单一细胞并使其繁殖成为细胞群体的方法114、单克隆抗体技术：是通过克隆单个分泌抗体的B淋巴细胞，使之分泌大量的均一抗体115、单克隆抗体：是单一的B淋巴细胞的产物，是由一群同样的抗体分子组成的，每个抗体分子带116、“级联”反应：指一些基因的产物可激活另一些基因的活性，这些被激活的基因的产物，又调控另外一些基因的表达的反应117、基因的差异表达：在生物个体发育的不同阶段，或是在不同的组织或细胞中发生的不同基因按时间、空间进行有序的表达方式118、细胞全能性：指个体的体细胞中都含有该个体的全部遗传信息，即具有一套完整的基因组119、巴氏小体：根据Lyon假说，在女人的体细胞中，成对的X染色体中有一个是失活的，此失活的X染色体因固缩而可被染深，在非分裂细胞核内缘被辨认出来的结构120、质量性状：在相对性状间具有界限分明的差异，呈非连续变异状态，能进行分类的性状121、数量性状：许多性状的表现为连续的变异，界限不分明的性状122、微效基因：控制数量性状作用微小的基因123、有效基因（A）：控制同一数量性状的非等位基因之间的效应相等，而等位基因之间的效应不同，故把作用大的称为有效基因124、无效基因（a）：相对，把作用小的基因或无作用的称为无效基因125、方差：变数与平均数的偏差的平均平方和，其意义在于反映某一群体的离散程度，值越大，离散程度越大126、标准差：方差的平方根127、标准误：平均数方差的平方根，表示平均数可能的变异范围128、变异系数（CV）：标准差除以平均数所得到的与测量单位无关的数值129、遗传率（遗传力）：遗传方差在总的表型方差中所占的比例，是遗传方差与总方差（表型方差）的比值130、显性方差（V D）：由等位基因之间的显隐性造成的方差（不完全显性或有部分显性）131、加性方差（V A）：群体里不同个体所含有有效基因多少不同而造成的方差132、互作方差（V I）：非等位基因之间的相互作用不同造成的不同个体表现不同所造成的方差133、近交（近亲繁殖）：有亲缘关系的个体之间相互交配、繁殖后代，其结果会增加纯合体的比例134、近交系数（F）：指一个个体从某一祖先得到一对纯合的、而且遗传上等同的基因的概率135、同合子：在一近交个体中某位点有两个相同的等位基因，其可能在血缘上是相同的，即它们是由一祖先的单个等位基因复制出来的，这时的近交个体为同合子136、异合子：两个等位基因也能能在血缘上是不相同的，即它们不是一个等位基因的复制品，这时的近交个体为异合子137、回交：指后代与某一亲本交配138、轮回亲本：用于回交的亲本称为轮回亲本，另一亲本则称非轮回亲本139、基因代换：通过连续回交，其后代细胞核内基因将逐渐被轮回亲本的核内基因所取代，后代性状的表现将趋于轮回亲本140、定向纯合：在回交中，后代基因的纯合是定向的，逐渐趋于轮回亲本的基因型141、杂种优势：广义的杂种优势定义为杂交产生的后代在抗逆性、繁殖力、生长势等方面优于纯种亲本的现象，同时也指近交系间杂交时，因近交导致的适合度和生活力的丧失可因杂交而得到恢复的现象142、正杂种优势：杂种优势超过亲本均值143、负杂种优势：杂种优势低于亲本均值144、“显性学说”：杂种优势是由于双亲的显性基因集中在杂种中所引起的互补作用145、“超显性学说”：杂合性本身是产生杂种优势的原因146、尽余值：不含有有效基因个体的表现值147、累进值：一个有效基因的效应值148、群体：指彼此有交配可能的有性繁殖个体群，特称为孟德尔式群体149、基因库：指在一定时间内，群体中能进行有性繁殖个体内全部基因的总和150、等位基因频率：指给定群体内某种等位基因占该位点全部等位基因数量的比例151、基因型频率：指群体中某基因型个体数占全部个体数的比例152、随机交配：指在一有性繁殖群体中，某一性别个体同异性任何个体有相等的交配的机会153、遗传平衡定律：用于描述随机交配群体中，等位基因频率和基因型频率之间的定量关系154、Hardy-Weinberg遗传平衡法则：以亲代基因库的配子（等位基因）频率表达子代的基因型频率期望值155、适合度（适应度）：某种基因型的相对成活率，用ω表示156、选择系数（s）：某基因型的相对淘汰率，是淘汰强度的量度157、遗传漂变：由于抽样误差引起等位基因频率随机波动的现象158、迁移（基因流动）：一个物种若不是一个大的随机交配群体，一般可分为几个隔离的群体，隔离不完全时，一个物种的个体从一群体进入另一个群体导致等位基因频率的改变的现象159、迁移率（m）：从乙群体迁移到甲群体的个体占新构成的甲群体的比例160、作图：人类基因组计划（HGP）把基因组分成易于操作的小的结构区域的过程161、cSNP：当SNP（单个碱基多态性）位于基因的编码序列中，即称为cSNP162、基因工程：把来自不同生物的外源DNA插入到载体分子上，形成“杂种”分子，然后将之引入宿主细胞，实现目的基因的表达163、限制性内切核酸酶（限制酶）：一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列并由此切割DNA双。

分子生物学在微生物检验中的应用南京军区福州总医院全军临床检验研究所兰小鹏21 世纪是以分子生物学为代表的生命科学的时代，近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步，分子生物学技术在医学、遗传学、法医学、生物学等各个领域广泛应用, 新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测，为传染病的流行病学调查、基因的多样性、微生物的生物学特性、微生物的致病性和药物的耐受性、微生物的生物降解能力等各个方面提供了重要的信息。

一．核酸杂交法最初应用于微生物检测的分子生物学技术是基因探针方法,它是用带有同位素标记或非同位素标记的DNA 或RNA 片段来检测样本中某一特定微生物核苷酸的方法。

核酸杂交有原位杂交、打点杂交、斑点杂交、Sorthern杂交、Northern杂交等,核酸分子探针又可根据它们的来源和性质分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡聚核苷酸探针等。

其原理是通过标记根据病原体核酸片段制备的探针与病原体核酸片段杂交,观察是否产生特异的杂交信号。

核酸探针技术具有特异性好、敏感性高、诊断速度快、操作较为简便等特点。

目前,已建立了多种病原体的核酸杂交检测方法,尤其是近年来发展起来的荧光原位杂交技术(FISH) 更为常用。

二．质粒DNA图谱分型技术细菌质粒分析是较早被使用的对病原微生物流行病学进行调查的分子分型技术。

这种技术包括萃取质粒DNA ,通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA。

由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同,通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也将不同,因此,与流行病相关的分离株能够被分类分型。

质粒图谱分析的再现性和分辨力可通过限制性内切酶消化质粒而提高。

虽然2个不相关质粒有相同的分子量, 但性内切酶位点的位置和频率是不同的。

但质粒是可移动的非染色体遗传物质,细菌能自发的失去或很容易的获得,结果流行病相关的菌株可以展示不同质粒指纹图谱。

第12章遗传标记：genetic marker可以稳定遗传的、易于识别的特殊的明确反映遗传多态性的生物特征。

：morphological marker那些能够明确显示遗传多态性的外观性状，如株高、穗形、粒色或芒毛形态标记形态标记：等的相对差异。

细胞学标记：cytological marke r是指能明确显示遗传多态性的细胞学特征。

染色体的结构特征和数量特征是常见的细胞学标记，它们分别反映了染色体结构上和数量上的遗传多态性。

分子标记：molecular marker分子标记是DNA水平上遗传多态性的直接反映。

主效基因：major gene对于性状的作用比较明显，容易从杂种分离世代鉴别开来。

微效基因：minor gene基因数量多，每个基因对表型的影响较微，所以不能把它们个别的作用区别开来，称这类基因为微效基因。

：restriction fragment length polymorphism,RFLP限制性片段长度多态性。

这种多态限制性长度多态性限制性长度多态性：性是由于限制性内切酶酶切位点或位点间DNA区段发生突变引起的。

聚合酶链式反应：polymerase chain reaction,PCR是一种利用酶促反应对特定DNA片段进行体外扩增的技术，该技术只需非常少量（通常在纳克级范围内）的DNA样品，在短时间内以样品DNA为模板合成上亿个拷贝。

随机扩增多态性DNA：random amplified polymorphic DNA,RAPD一种随机引物的PCR标记RAPD标记所用的引物长度通常为9～10个碱基，大约只有常规的PCR引物长度的一半。

扩增片段长度多态性：amplified fragment length polymorphism,AFLP由Zabeau等（1993）发明的一项DNA指纹技术。

其基本原理是，通过对基因组DNA酶切片段的选择性扩增来检测DNA酶切片段长度的多态性。

简单序列重复：simple sequence repeat,SSR是由1~9个bp为重复单位组成的高度重复序列.在染色体上呈随机分布,由于重复次数和重复程度的不同,造成了每个基因位点的多态性。