两种不同检测法对猪瘟抗体阴性猪筛检的比较

多 、
典 病 例 表现 为最 急性 、哑急 性 或慢 性 病 程 ，死 率 高 最
急 型较 少 ，病猪 体 温升 高 ．常 无其他 症状 ，ｌ～２ｄ内死 亡 急
图１猪瘟病毒抗体ＥＩ ＩＳＡ试验结 果
性 型 常 ，体 温 Ｉ１『上 升 ￣ｌＪ４１ ｃ【：以上 ．食 欲减 退或 消 失 ，可 发 生
免 疫 猪 场 ，真 空 采 【ｎｌ管 （普 通 生 化 管 ），猪 瘟 病 毒 抗 体 ２．３ 猪 瘟 病 毒抗 体 ＥＬＩＳＡ和 快 速 检 测 卡 对 比
Ｅｌ ＩＳＡ试剂 ．猪瘟 病毒 机 体快速 检测 卡 １．２ 使 用 普 通 乍 化 管 采 取 免疫 猪 的 前 腔 静 脉 血
［关 键词 ］快 速检 测 卡 ＥＬＩＳＡ 检测 效 果对 比
瘟 俗称 “ 肠癌 ” ，是 Ｉ｛１黄病 毒 科猪 瘟 病 毒属 的 猪瘟 痫
Ｉｊｌ起 的一 种 急性 、发热 、接触 性 传 染传 染病 ，是 一种 具 有 高度 传
染 性疫 瘸 ．址威 胁 养猜 业 的 主要 传染 病 之 一 ，其 特 是 ：急 性 ，
多数 化 广 ．、ＩＥ急性 ， 常 于本痫 流干亍地 区 ．痫 程 可延 至２～３胤 ；
仃 的 转 为 慢 性 ．常 拖 延 １～２个 月 ．．表现 黏膜 苍 ｈ ， 眼 险 有 … ｌｎ【
点 皮 肤 …现 紫 斑 ，病 猪 极度 消瘦 死 亡 以仔 猪 为多 ，成 年 猾 彳ｆ
的 Ｉｌ『以州过 、怍 痫 猜 Ｉ 诊 症状 不 明 ，呈 慢性 ，常 见 于 “架
［摘 要］ 目的 ： 比对 快速 检 测 卡和 ＥＬＩ ｓＡ两种检 测 方 法 的灵 敏度 和 准 确性 ，确 定 两种 方 法 的检 测对 象。方 法 ： 采用 真 空采 血 管 （抗 凝 管 ）从 免疫 过 猪瘟 疫 苗 的猪体 内采血 并 分 离血 清 ，采 用快 速检 测 卡和 ＥＬＩ ｓＡ方 法对 分 离的血 清 进行 检 测 。结 果： ＥＬＩ ｓＡ方 法 更加 灵敏 准 确 ，快 速检 测 卡 简便 快捷 。 结论 ：在 临床诊 断 和 紧急 情 况下 ，可 以使 用快速 检 测卡 进 行快 速诊 断和 治疗 ；在 正 常监 测过 程 中 ， 还 应 该 使 用 ＥＬＩ ｓＡ方 法 进 行 检 测 ， 更 加 准 确 可 信 。

猪免疫抗体不同检测方法的对比试验摘要应用某国产胶体金诊断试剂盒和进口酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂盒，分别检测猪血清中口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体合格率，比较两种血清学诊断方法的准确性。

结果表明，胶体金诊断试剂盒结果和ELISA结果差异显著，两者的符合率较低。

因此，应加强国内部分胶体金诊断试剂的监控。

关键词：抗体检测；胶体金；ELISA随着养殖业的持续发展及动物防疫工作的进一步深化，对动物进行免疫接种已成为预防和控制动物疫病的重要手段。

口蹄疫、猪瘟和蓝耳病是国家要求强制免疫的重大动物疫病，其抗体监测关系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是评估疫苗质量、对重大动物疫情预警能力的的可靠依据。

县级以上兽医实验室目前开展抗体监测主要使用ELISA试剂盒，其昂贵、费时和要求专业仪器和专业人员的特点，使之不适合基层推广使用。

近年来，随着一系列胶体金检测产品在动物疫病检测领域的推广运用，以其操作简单、价格低廉、现场即时检测等特点，迅速获得了基层兽医站和养殖户的认可。

为了解这项新技术的检测准确性和可靠性，我们用胶体金和ELISA两种试剂盒检测猪血清中的抗体水平，其结果对比如下。

1 材料与方法1.1 被检血清从全市5个规模养猪场采集并分离猪血清共27份,-20℃保存备用。

1.2 诊断试剂口蹄疫合成肽ELISA试剂盒为上海优耐特生物医药有限公司生产，批号：201012004；猪瘟抗体ELISA试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号：43220-X681；猪蓝耳病抗体ELISA试剂为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号： 40959-X061。

胶体金快速诊断试剂盒为苏州艾瑞德生物医药有限公司生产，猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒批号：CFC005A；猪瘟抗体快速检测试剂盒批号：CFC002A；猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒批号：CFC001A。

1.3 检测方法1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）严格按照说明书进行操作，以测得样品OD值大于临界值为阳性，否则为阴性。

两种猪瘟疫苗抗原检测方法对比分析一、实时荧光定量PCR将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

可以实时定量检测目标的基因拷贝数。

优势方便，快捷，灵敏，非常微量的样品，在几个小时内就可以出结果。

劣势1、无法区别活的病毒和死亡的病毒，检测的结果只是病毒的基因拷贝数，跟活病毒数量无关。

针对这个问题，可以进行一个小实验。

疫苗企业、猪场、检测单位如果有兴趣均可以试试。

方法很简单，选择同一批次的三瓶疫苗，选择其中一瓶疫苗，加入适量甲醛灭活，然后与不灭活的剩余两瓶疫苗同时使用荧光定量PCR方法检测，看其检测结果。

2、无法鉴别出BVDV和猪瘟病毒的基因容易出现假阳性。

3、受操作影响较大，定量数据有一定偏差。

4、检测出的基因拷贝数跟在猪体上的免疫效果没有直接相关性。

5、没有标准可以参考，各自为战。

用处使用实时荧光定量PCR方法只能大致定量疫苗中的病毒基因数量，无法确定猪瘟疫苗中的活病毒的抗原含量，只可以在同等条件下大致评估疫苗中的基因含量高低，检测出的基因拷贝数量跟疫苗中的活病毒数量和免疫效果完全没有相关性。

目前，实时荧光定量PCR均是各个检测机构的自建方法，检测流程、引物与耗材等均按照自己的标准进行，没有国家标准可以参考，而且进行操作的实验室环境控制参差不齐。

因此，同一个样品，可能各个试验室检测的结果会有明显偏差。

二、兔体感染量(RID)检测按照疫苗瓶签注明的头份，使用生理盐水按照内控标准进行稀释，然后接种家兔，上下午各测体温一次，48小时后每隔6小时测定体温一次，当兔子出现典型的定型热反应时，疫苗判断合格。

胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较
徐维成;范秀铭;岳正河
【期刊名称】《畜牧兽医杂志》
【年(卷),期】2014(33)6
【摘要】为比较胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体的符合率,以了解胶体金法的特异性与敏感度,用胶体金法和ELISA法平行检测受检猪血清标本猪瘟抗体滴度.结果表明,胶体金法和ELISA法检测猪瘟抗体的结果符合率为86.6％,胶体金法较ELISA 法敏感度、特异度低,用胶体金法检测猪瘟抗体滴度存在一定程度的漏检率及误诊率,只能初步筛查猪瘟抗体.具有一定技术力量的县级兽医实验室使用ELISA法检测猪血样的猪瘟抗体滴度更为合适,对于胶体金法筛查阴性的猪血样,建议用ELISA法复检以防漏检.
【总页数】2页(P20-21)
【作者】徐维成;范秀铭;岳正河
【作者单位】惠州市大亚湾区动物卫生监督所,广东惠州516000;广东省肇庆市农业学校;镇安县动物疫病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4+3
【相关文献】
1.利用胶体金免疫层析法检测猪瘟强、弱毒抗体方法的建立 [J], 郑鸣;金彦法;闫国庆
2.胶体金免疫层析法检测猪瘟(强弱毒区分)抗体研究 [J], 李华玮;郑鸣
3.胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体结果对比分析 [J], 向林远;杜国芹
4.一步法胶体金快速诊断法与ELISA检测猪瘟抗体的比较 [J], 顾健;张燕;陆义超
5.对比胶体金法与酶联免疫吸附测定法对丙型肝炎病毒抗体的检测价值 [J], 成君俐
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猪瘟抗体检测两ELISA方法比较一、原理是什么？间接法：①该方法是检测猪瘟抗体的经典ELISA方法，其原理是在酶标板中包被猪瘟病毒或猪瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待检血清同包被的抗原孵育后，加入酶标二抗和底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则形成包被抗原-待检抗体-酶标二抗三种物质的结合物，OD值越高、显色越深、待检抗体含量越高，反之，则待检抗体含量越少。

显色深浅与待检抗体量呈正比。

阻断法：①该方法是基于基因工程和单克隆抗体发展起来的ELISA方法，其原理是在酶标板中包被通过基因工程得到的猪瘟病毒保护性抗原蛋白，然后加入待检血清与包被的抗原孵育，洗板后加入针对包被蛋白的酶标单抗再次孵育，后加入底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则会阻断酶标单抗的反应，导致酶标单抗不会或少量地同抗原蛋白结合；若待检血清中没有特异性抗体，酶标单抗会更好地同抗原蛋白结合。

OD值越高，显色越深、待检抗体含量越少，反之，则待检抗体含量越多。

显色深浅与待检抗体量呈反比。

二、哪种方法更好？在农业部颁布的国家动物疫病监测方案中，规定可以采用阻断ELISA或间接ELISA等方法进行猪瘟抗体水平检测。

目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA法和荧光抗体中和试验（FVNT）, 其中FVNT可作为猪瘟抗体检测的“金标准”。

而中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。

因此，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的血清检测方法。

在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性。

阻断ELISA采用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。

有研究表明，用OIE推荐的FVNT与上述两种ELISA方法进行符合验证实验，结果表明间接法与FVNT的符合率高于阻断法，间接法能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断法对阳性样本有漏检情况。

猪瘟抗体检测
• 1、猪瘟抗体：阻断率（Blocking）≥40%， 判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判 为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结 果。
• 2.离散度：Coefficient of Variation(CV) 离散度计算的是平均个体的变化，以平均滴 度背离的百分数来表示。 离散度是指所测的样品值与所有样品的平均 值的距离，距离越大，离散度越大。一般离散度 可以用标准差来衡量(STDEV)
猪 病 抗 体 检 测
付• 阴性：没有抗体
• 上图所示的阻断法检测猪瘟疫苗抗体的原 理，可以简单的概括为：第3步中加入的酶 标记物（抗猪瘟病毒的单克隆抗体），与 被检血清中的抗猪瘟病毒抗体，两者竞争 与包被抗原结合。而第2步加入的被检血清 中如果大量含有抗猪瘟病毒抗体，就会阻 断酶标物抗体与包被抗原的结合。最后加 入底物显色。被检血清中猪瘟病毒抗体越 多，阻断率越高，颜色越浅.
• 蓝耳：IRPC是免疫反应阳性细胞。抗体 irpc就是说抗体参与特异性免疫反应产生阳 性细胞。通常是求数量。
• S/N:样品比阴性值
• 公式如下： 离散度 CV = 标准偏差（STDEV）/平均阻断 率×100%CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡 的、相似反应。（表示猪群内不同个体之间抗体 水平稳定，免疫效果良好）CV≥60%,显示了群内 猪只滴度反应变化高于正常估计值。（表示猪群 内不同个体之间抗体水平差异较大；生产管理水 平，疫苗质量、免疫程序制定有提升与商榷的余 地）。作为衡量猪群抗体稳定性与均匀度的指标， CV值对评判免疫结果具有重要意义。

ｃｉｃｄｎ ｅｒｔ ｗ ｓ１０ （ ５ ５ ） Ｔ ｅ ｒｓｌ ｓｏ ｅ ｈ ｔＥ ＩＡ ｗ ｓｍ ｒ ｇｎｉｖ ｈ ｎ Ｒ Ｔ ｎ ａ ｏ ｉｅ ｃ ａ ａ ０ ％ ５ ／ ５ ． ｈ ｅｕｔ ｈｗ ｄ ｔａ ＬＳ ａ ｏｅ ｅ ｓｉｅｔａ Ｎ ，ａ ｄ ｃ ｎ 国兽 药杂志
２ １ ， （ ）２ ２ ／ ０ １４ １ ：０～ １ 高金源 ， ５ 等
猪瘟抗体 阴性 猪筛选方法 的 比较
高金源 ， 陈晓春 ， 华伟 ， 永 ， 吴 邓 郎洪武
（ 中国兽医药品监察所 ， 北京 １０ ８ ） ００ １ ［ 收稿 日 ］０ ０— ４ ０ ［ 期 ２ １ ０ — ７ 文献标识码 ］ ［ Ａ 文章编号 ］０ ２ １８ （０ １ ０ — ０ ０－ ２ ［ １０ — ２ ０ ２ １ ） １ ０ ２ ０ 中图分类号］ ８ ２ ５ ￥ ５ ．３
来飞速发展 的一种 免疫检 测方 法 ， 种类 繁 多 ， 应用 广 泛， 尤其在 抗体 检 测 方 面。本 文 采用 两 种 商 品化 的
检测 ， 中华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 规 程》 《 二ｏｏｏ年版（ 以下简称规程） 《 、 中华人民共和国兽 药典》 二ｏ０五年版（ 以下简称药典） 规定 ， 采用兔体
Ａｎｔｂｏ ｉ ｄｙ —ｎ ｇ ｔｖ ｇ — ｅ ａ ｉｅ Ｐｉｓ
Ｇ ｉ ＡＯ Ｊｎ—ｙ ａ Ｃ Ｎ Ｘｉｏ—ｃ ｕ Ｗ Ｕ ａ—ｗ ｉＤＥ ｎ ， ＡＮ Ｈｏ ｇ—Ｗ ｕ ｎ， ＨＥ ａ ｈ ｎ， Ｈｕ ｅ ， ＮＧ Ｙｏ ｇ Ｌ Ｇ ｎ Ｕ
（ ｈｎ ｎｔｕｅｆＶｔ ｉ ｒ ｒｇ Ｃｎｒｌ Ｂ ｉｇ １０ ８ ；ｈｎ ） Ｃ ｉ Ｉｓｔｔ ｏ ｅ ｒ ａｙＤｕ ｏｔ ， ４ｉ ０ ０ １ Ｃ ｉａ ａ ｉ ｅｎ ｏ ｎ

4种猪瘟病毒抗体检测方法的比较马超英【摘要】为比较4种猪瘟病毒抗体检测方法的优缺点,应用正向间接血凝试验(IHA),间接ELISA、Dot-ELISA、胶体金免疫层析试纸条(GICA)4种方法分别对142份猪血清样品进行检测.结果表明,间接ELISA方法检出阳性样品119份,IHA检出阳性样品117份,Dot-ELISA检出阳性样品115份,GICA检出阳性样品109份.结果提示,在对猪瘟病毒抗体进行检测时,间接ELISA由于其灵敏性高,可作为首选检测方法,但操作时需要避免假阳性的出现；正向间接血凝试验虽然灵敏度稍低,对血清质量要求高,但结果准确,是猪瘟抗体检测必不可少的检测方法,适合个体检测；胶体金试纸条和dot-ELISA检测时间较短、操作简单、无需特殊仪器设配,由于受其敏感性较低所限,适合对畜群进行检测.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)010【总页数】4页(P128-131)【关键词】猪瘟抗体;检测方法;优缺点【作者】马超英【作者单位】青海省海西州乌兰县铜普兽医站,青海乌兰817000【正文语种】中文【中图分类】S852.651猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病，临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征［1］。

猪瘟具有高度传染性，主要通过呼吸道和消化道传染，传播速度快，发病率和病死率高，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国也将其列为一类动物疫病，是严重危害我国养猪业的最重要的疫病之一［2－6］。

近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚病毒感染，在临床表现上也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高病死率的急性症状，又有持续感染的温和性症状趋于复杂化，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，在病理剖检上也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来了很大困难［7］。

猪瘟抗体检测方法猪瘟，即猪繁殖与呼吸综合征，是由猪瘟病毒引起的一种严重的传染病，对猪群健康和养殖业产生了重大影响。

为了及时控制疫情和保护养殖业的发展，猪瘟抗体检测方法非常重要。

猪瘟抗体检测方法主要包括传统血清学法和分子生物学法。

传统血清学法主要是利用抗原-抗体反应原理进行检测，分子生物学法则是通过检测猪瘟病毒核酸进行诊断。

下面我将详细介绍这两种方法。

传统血清学法中最常用的方法是血清病毒中和试验。

该方法通过将待检血清与猪瘟病毒进行反应，观察病毒和抗体的相互作用。

这种方法的优点是简单、经济、可靠，适用于大规模的抗体检测。

但是存在一些局限性，如需要对待测血清和病毒进行配对，病毒株的选择和制备需要一定的经验和技术，且过程较为繁琐。

另一种传统血清学方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）。

该方法利用特异性的酶标记抗体来检测待测血清中的猪瘟病毒抗体。

ELISA具有操作简单、灵敏度高、多重样品同时检测等优势。

此外，还可以通过改变试剂盒中抗原的性质，进一步检测不同类型的抗体，如IgM和IgG。

但是，该方法需要进行酶标仪等专门设备的检测，成本较高。

分子生物学法主要是通过检测猪瘟病毒核酸来进行诊断。

常用的方法包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）。

PCR是一种高度敏感且特异的检测方法，通过扩增待检样品中的病毒核酸，可以快速检测出病毒的存在。

RT-qPCR则能实时监测PCR反应的过程，具有更高的精确性和灵敏度。

此外，PCR还可以进行基因测序，用于病毒株的分型和溯源研究。

然而，分子生物学法虽然灵敏度高，但仍存在一些局限性。

首先，该方法对设备和技术要求较高，需要专业的实验室和操作人员。

其次，由于病毒基因组的变异性较大，需要选择合适的引物和探针，以确保检测的准确性。

此外，病毒核酸在环境中的稳定性较差，易受到污染和降解的影响，可能导致假阴性结果。

综上所述，猪瘟抗体检测方法在疫情监测、疫苗评估和动物检疫等方面具有重要作用。

抗 体检测 。采 用 Ｉ Ｈ Ａ方 法 ，以抗 体效 价 ≥２ 为合格标 准 时 ，其抗 体合 格率为 ９ ５ ． ３ ％ ；采用 竞争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法 ，以 阻断率 ≤５ ０ Ｚ 为 阳性标准时 ，其抗体 阳性率为 ９ ３ ． ６ ％ ，两种检 测方法总体一致符合 率 ９ ３． Ｏ ％ ，经 Ｘ 检验 ，两者差异不显著 ，说明
１ 材 料 与 方法
１ ． １ 免 疫 疫 苗种 类
猪 瘟 传 代 细 胞 苗 ，哈 药 集 团 生 物 疫 苗 有 限 公 司 生
产 ，批 号 ：２ ０ １ ４ ０ ２～２ ０ １ ４ ０ ５ 。
Ｔ Ｅ ＣＡＮ公 司 酶标 仪 ，型号 为 Ｉ ｎ ｆ ｉ ｎ ｉ ｔ ｅ Ｍ２ ０ ０ Ｐ Ｒ Ｏ。
１ ． ２ 被检血清
样 品来 源 于 福 建 省 漳 州 市 各 县 （ 市 、区 ）抽 检 的
收稿 日期 ：２ ０ １ ５ — ０ ５ — ２ ２
（ 第 ４孔 ） ，呈现 “ ＋ ＋ ”凝 集 为 免疫 合格 ；按 （ （ ２ ０ １ ４年
福建省动物疫病监 测与流行病学调查计划》 的通知文件
两种 检测 方 法 之 间存 在 的 关 系 ，减 少 因检 测 方法 不 同 而
１ ． ３ 诊 断试 剂
猪 瘟 间接 血 凝抗 体 检 测试 剂 盒 （ 配 套 有抗 原 、阳 性 血 清 、 阴性 血清 及 稀释 液 ）购 自 中国农 业 农科 院 兰 州 兽
医 研 究 所 诊 断 中 心 ，批 号 ：２ ０ １ ４ １ １ ２ １ ０ ５ ；猪 瘟 抗 体 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检 测诊 断试 剂盒 购 自法 国 Ｉ Ｄ ． Ｖ Ｅ Ｔ公 司 ，Ｌ Ｏ Ｔ ：
６ ２６

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗的比较沈绍新;戴爱玲;李晓华;杨小燕【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2009(030)009【摘要】应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清.结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为 75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(＞0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考.【总页数】4页(P20-23)【作者】沈绍新;戴爱玲;李晓华;杨小燕【作者单位】龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364000;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364000;福建省高等学校预防兽医学与生物技术重点重点实验室,福建龙岩,364000;福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩,364000;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364000;福建省高等学校预防兽医学与生物技术重点重点实验室,福建龙岩,364000;福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩,364000;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364000;福建省高等学校预防兽医学与生物技术重点重点实验室,福建龙岩,364000;福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩,364000【正文语种】中文【中图分类】S852.651【相关文献】1.应用正向间接血凝(IHA)与阻断ELISA方法检测猪瘟抗体的比较试验 [J], 胡杰;磨龙春;黄夏;刘棋;梁媛;莫胜兰;屈素洁;陈义祥;陆文俊;郑敏;李军;施开创2.液相阻断ELISA法与正向间接血凝(IHA)法检测猪瘟抗体结果比较 [J], 刘胜宇;汪峰;胡元元3.两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验 [J], 张东东;宁宜宝;刘灿;龚文芝;徐璐;张玉杰;范学政4.IHA AGP及Dot—ELISA检测猪瘟抗体的比较试验 [J], 杜玉磐;乐正中5.应用IHA检测猕猴B病毒相关抗体及其与ELISA、NT的比较 [J], 王建飞;王晓明;符明泰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

非洲猪瘟的实验室检测与诊断技术非洲猪瘟是一种高度传染性的猪传染病，对全球猪肉产业造成了严重的威胁。

为了及时发现并控制非洲猪瘟的传播，实验室检测与诊断技术起着重要的作用。

本文将介绍非洲猪瘟的实验室检测方法和诊断技术，并对其应用和发展进行探讨。

一、非洲猪瘟的实验室检测方法非洲猪瘟的实验室检测通常包括两种方法：病毒检测和抗体检测。

病毒检测主要通过PCR技术进行，PCR技术是一种基于核酸的检测方法，可以快速、准确地检测出非洲猪瘟病毒的存在。

通过提取猪体组织或血液样本中的核酸，再通过PCR扩增和检测，可以得到非洲猪瘟病毒的阳性结果。

PCR技术具有灵敏度高、特异性好、快速等优点，是目前非洲猪瘟的首选实验室检测方法之一。

另一种实验室检测方法是抗体检测，主要通过ELISA或ND抗体试验进行。

ELISA是一种基于酶标记的免疫学检测方法，通过检测猪体内的非洲猪瘟抗体来确定是否感染病毒。

ND抗体试验是一种血清学检测方法，通过检测血清样本中的中和抗体来判断是否感染非洲猪瘟。

这些抗体检测方法具有操作简便、经济实惠等优点，广泛应用于实际生产实验室。

二、非洲猪瘟的诊断技术在实验室检测的基础上，非洲猪瘟的诊断技术主要包括病理学检查、临床症状观察和病原学鉴定。

病理学检查是通过对病死猪体进行解剖和组织学检查，来确定非洲猪瘟的病变特征。

病理学检查可以提供病变部位和类型的信息，对于非洲猪瘟的早期诊断和病情判断起到重要的作用。

临床症状观察是通过观察感染猪的表现和症状来判断是否患有非洲猪瘟。

非洲猪瘟的临床症状包括发热、食欲减退、呼吸困难等，对于非洲猪瘟的诊断和控制具有重要意义。

病原学鉴定是通过实验室检测方法来鉴定病原体是否为非洲猪瘟病毒。

除了前面提到的病毒和抗体检测方法外，还可以通过核酸测序、电镜观察等方式来进一步确认非洲猪瘟的病原体。

病原学鉴定可以提供非洲猪瘟的病毒学信息，为病情评估和控制措施的制定提供依据。

三、实验室检测与诊断技术的应用与发展实验室检测与诊断技术在非洲猪瘟的防控和管理中起着重要的作用。

两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验张东东;宁宜宝;刘灿;龚文芝;徐璐;张玉杰;范学政【摘要】为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证.结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100％检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性.由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显离子IDEXX公司的试剂盒.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)007【总页数】4页(P28-29,32,中插2)【关键词】猪瘟;ELISA抗体检测;临床应用;比较【作者】张东东;宁宜宝;刘灿;龚文芝;徐璐;张玉杰;范学政【作者单位】中国兽医药品监察所,北京海淀100081;中国兽医药品监察所,北京海淀100081;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;中国兽医药品监察所,北京海淀100081;中国兽医药品监察所,北京海淀100081;中国兽医药品监察所,北京海淀100081;中国兽医药品监察所,北京海淀100081【正文语种】中文【中图分类】S852.65+1猪瘟是我国重大动物疫病之一，在《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》中，将猪瘟作为我国优先防治和重点防范的16种动物疫病之一。

科学的免疫和防控是控制猪瘟的重要手段之一，但是如何进行检测和免疫评估是我们目前面临的主要难题，特别是检测试剂盒的选择和相应检测结果的分析是免疫检测和评估的头等难题。

（ Ｆ Ａ Ｓ Ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ） 等 方法 。其 中 目前国际贸易 中主要采用酶联免
疫 吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 包括阻断法 和间接法 。 目前 在我 国 ， 对
（ ３ ）将被检样 品分别加入其 余 的检测 孔 ， ５ ０ Ｌ ／ 孔， 为
防止交叉污染 ， 不同样本应更换滴头 。
只有 当阳性对照的阻断率大 于 ５ ０ ％且阴性对照 的平均 Ｏ Ｄ ４ ５ ０ 值大于 Ｏ ． ５ ０ ， 实验方成立 ， 否则应 重新检测 。 若样本的 阻断率小于或等于 ３ ０ ％， 判为 阴性 （ 无抗 Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ抗体 ） ； 如果
（ １ Ｏ ）以 １ ０ ０ Ｌ ／ 孔 的量在各 孔 中加入 １ ０ ０ Ｌ的硫 酸 终止液终止 反应 ， 终止反应 的顺序要与加入底物的加样顺序
方法， 正 向间接血 凝 （ Ｉ Ｈ Ａ ） 法具 有成 本低 、 试验 简便容 易操 作、 不 需要专 门的仪器等 优点 ， 所 以正 向间接 血凝 （ Ｉ Ｈ Ａ） 法
保持一致。 （ １ １ ）在酶标仪上检测各孔在 ４ ５ ０ ｎ ｍ处 的吸光度值。 １ ． ３ ． １ ． ２ 计算方法和判定标准 阴性对照平均值 ＝ （ 阴性对
照 １ Ｏ Ｄ ４ ５ ０值 ＋阴性对照 ２ Ｏ Ｄ ４ ５ ０ 值） ， ２
检测样本选 自江苏某养殖场 的二元杂交猪 。
由于 猪瘟 病毒 （ Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ） 具有 的很 强 的致 病 力且 感 染猪 群死亡率 高 ， 已经 给养殖业 造成 了巨大 的损失 ， 世 界各 国都 十分重视对 该病的研究 。在血 清学诊 断方面相继 建立 了多 种 方法进行猪瘟 的诊断 。其 中主要有 以抗原 一抗 体反应为
基 础的酶联免 疫吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 、 荧 光抗 体血清 中和技术

进 行符合 验证 。具 体操作 方法按 照《 陆生 动物诊 断试 验和疫苗手册》 ｎ 进行 。
２ 结 果
２ ． １ 两 种 试 剂 盒 的检 测 结 果 及 符 合 率
在３ ０ ０ 份
血清中 ， 国产试 剂盒 检 测 出猪 瘟 抗体 阳性 血 清
１ ９ ９ 份， 阴性血清 ７ ８ 份， 可疑 ２ ３ 份； 进 口试 剂 盒 检 测 出猪 瘟 抗 体 阳 性 血 清 １ ８ ４ 份， 阴性血 清 １ ０ ６ 份，
１ ． １ Ｐ Ｋ １ ５ 传代 细胞 系 、 猪 瘟病毒 Ｔ 株、 猪瘟病 毒 荧光 抗体 ： 系 由 中 国兽 医 药 品 监 察 所 鉴 定 、 保 的符 合 率 为 ８ ３ ． ６ ７ ％（ 符合率＝
（ １ ７ ６ ＋ ７ ５ ） ／ ３ ０ ０ ｘ １ ０ ０ ％＝ ８ ３ ． ６ ７ ％） ， 见表 １ 。
阳性 收稿 日期 ： ２ ０ １ ４ — ０ ５ —１ ５ 作 者简 介 ： 李丽 （ １ ９ ８ ５ 一） ， 女， 兽医 师 ， 硕士 ， 从 事动 物疫 病 防 控丁 作 ， Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ： ３ ６ ５ ０ ８ ７ ９ ５ ５ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｎ ｒ 通讯 作者 ： 徐璐 ， Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ： ４ ２ １ ２ ０ ３ ９ １ ２ ＠ｑ ｑ ． ｅ ｏ ｍ
１ ． ２ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 剂 盒
猪瘟病毒 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ抗 体 检
表１ 国产 试 剂 盒 与进 口试剂 盒 符 合 率
进 口试 剂 盒
测试剂 盒 （ 简 称 围产 试 剂 盒 ） ： 由 中 国兽 医 药 品监
察 所 提 供 。批 号 为 ２ ０ １ ２ １ １ １ ０ 。

养猪 Ｓ ＷＩ Ｎ Ｅ Ｐ Ｒ Ｏ Ｄ Ｕ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ（ ２ ）
猪 瘟 脾 淋
２ ０ １ ４
猪 瘟 细 胞
苗 组
两 种 猪 瘟 抗 体 检 测 方 法 的 应 用 比 较 苗 组
郑教雀 （ 福建省 宁德市动物疫病预防控制中心， 福 建 宁德
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ ８ 文献标志码 ： Ｂ
１ 材料与方法 １ ． １ 材料 １ ． １ ． １ 血清 收集 自福建部 分地 区猪 场的 ３ ５ ７ 份送
８
８
８
８
８
８
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
检猪血 （ 其 中规模场 ２ ４ ９份， 散养 户 １ ０ ８ 份） ， 分 离血 清， ４℃保存待检 。 ２ ８ ７ ２ ６ １ ． １ ． ２ 主要试 剂 猪瘟 病 毒抗 体 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测 试 剂 盒购 自北京 爱德士元 亨生物科技有 限公司 ；猪瘟病 毒抗 体胶体 金检 测卡购 自深 圳市 康百 得生物 科 技 有限公司。 １ ． １ － ３ 主要设备 高速 台式冷冻离心机 、 Ｓ Ｗ－ Ｃ Ｊ 净化 工作 台、 电热恒温培养箱 、 酶标仪、 可调微 量移液器 。
２ ０ １ ４第 ２期
郑 教 雀． 两 种 猪瘟 抗体 检测 方 法 的应用 比较
９ ５
备用 。２ ） 加 稀释液 ： 分别吸取 ５ ０ Ｌ Ｌ Ｌ处 理好 的样 品 品 中 ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 剂 检 测 阳性 ６ ８份 ， 阳 性 率 为 稀释 液 ， 加入 检测 孔和 对照 孔 中 ， 并记 录好 各样 品 ６ ２ ． ９ ６ ％；胶 体金检 测卡检 测 阳性 ６ ３份 ，阳性 率为 和对照 孔 的次序位 置 。３ ） 加样 ： 分别取 ５ ０ Ｌ的阳 ５ ８ ． ３ ３ ％。对 于待检血清 ， 二者 的检测 结果一致 率达 性、 阴性 对照 以及 被检 样 品加 入到相 应 孔 内 ， 并轻 ９ １ ． ６ ％； 试剂盒 中 ６ 份标准 阳、 阴性血清 ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂 弹微量 反应板或 用振荡器振 荡 ， 将 反应板 中的溶 液 检测 结果和胶体金检测结果完全一致 。 混匀 ， 注 意在吸 取不 同的对 照 以及 样 品时需要 更换 表 １ 规模场猪瘟抗体 Ｅ ｕＳ Ａ与 胶 体 金 检 测 比 对 结 果 吸头 。 ４ ） 孵 育： 加样完成后 ， 将微 量反应板用 封条封 血清类型 数量 Ｅ ｕｓ Ａ试剂盒份 胶体金检测卡／ 份 一致率 闭或 于湿箱 中 （ ３ ７℃） 孵育 ２ ｈ ， 也可将 微 量反应 板 —■— ＿ ＿ ＝ —■—＿ ， ％ 用封条 封 闭或于湿 箱 中室 温孵 育过 夜 （ １ ２ ～ １ ８ ｈ ） 。 ５ ） 洗板 ： 用３ ０ ０ Ｌ左右洗 涤液 洗涤 每个板 孔 ３ 次。 每 次洗涤 后 ， 甩 去每 个板 孔 中的液体 ， 在最 后一 次 甩掉后 ， 在吸水材 料上用 力扣板 ， 吸去剩 余液体 ， 注 意在加 入下一个试 剂前 ， 避 免孔壁变干 。 ６ ） 加酶 ： 加 表 ２ 散养户猪瘟抗体 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ与胶体金检测比对 结果 入１ ０ ０ Ｌ Ｌ Ｌ辣根 过氧 化物 酶 标记 （ Ｈ Ｒ Ｐ Ｏ ） 的抗 猪 瘟 血清类型 数量 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试制盒份 胶体金检测卡／ 份 一致率 病毒 的酶标抗体 （ 即取即用） 加 入反应 孔 中， 用封 条 ／ 份 — — ■＿ — — ■＿ ／ ％ 封 闭反应 板或于湿 盒中室温孵 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。７ ） 洗板 ： 同步骤 ５ 。８ ） 显色： 每 孔加 入 １ ０ ０ Ｌ底 物溶 液 ， 并 待 阳 阴 合 待 阳 阴 合 于避 光 、 室温 条件 下放 置 １ ０ ｍ ｉ ｎ ， 加 完 第 １ 孔 后 即 检 性 性 计 检 性 性 计 血 血 血 血 血 可计 时 。９ ） 终止： 每孔 加入 １ ０ ０ Ｌ终 止 液终 止 反 血 清 清 清 清 清 清 应 ，注意加 终止液 的顺 序须 与底物加 相同。 试 齐 试 入顺序 试 试 齐 剂 １ ０ ） 测定 ： 在４ ５ ０ ｎ ｍ波长处测 定样 品 以及对 照 的吸 ３剂分析与讨论 盒 盒 盒 盒 光度值 。１ １ ） 结果 ： 阴性 对照 的平均 ０ Ｄ 伽 大于 ０ ． ５ ， 自从 １ ９ ７ １ 年胶 体金 标记技 术被 引入免 疫化学 ９ ４ ６ ６ ６ ｌ ８ ６ ６ Ｏ 阳性对照 的阻断率大 于 ５ ０ ％，证 明检 测 结果有效 。 ｍ 和组织化 学后 ， 这 一技 术在近 ２ ０多年来 已发展成为 １ ２ ） 计算 方法 ： 阴性对照 Ｏ Ｄ平均值用 Ｏ ２ Ｎ表示 ２ １ ， 样 品 门成熟 的诊断技术 ，被广泛应用于胶体金试纸膜 ６ Ｏ Ｏ Ｄ用 ｓ表 示 ， 样 品阻 断率 （ Ｂ ％） ＝（ Ｎ — Ｓ ） ／ Ｎ ｘ ｌ ０ ０ ％。 鹋 和胶体金试剂盒检测 。 胶体金检测法 不仅操作简便 、 １ ３ ） 结果 判定 ： Ｂ ％≥４ ０ ％， 表 明该样 品为 阳性 ， 说 明 不 受条件 限制 、 无 需特 殊设 备 ， 省去 了 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验 ２ Ｏ ６ ８ Ｏ ６ 抗体达 到 保护 水平 ； 若Ｂ ％＜ ３ ０ ％， 则表 明该样 品 为 ∞ 中温育 、 洗涤等操作过程 ， 而且快速准确 、 灵敏度高 ， 阴性 。 更有意义 的是尽可

猪瘟诊断技术标准
猪瘟（非洲猪瘟）是一种严重的猪类传染病，为了及早发现和控制疫情，需要使用特定的诊断技术。

以下是一般用于猪瘟诊断的主要技术标准：
1. PCR（聚合酶链反应）检测：PCR是一种高灵敏度的分子生物学技术，可检测病毒的核酸（DNA或RNA）。

通过针对猪瘟病毒基因组的特定区域进行PCR扩增，可以确认是否存在病毒感染。

2. ELISA（酶联免疫吸附试验）：ELISA是一种常用的免疫学技术，用于检测特定病原体的抗体。

通过检测猪血清中的猪瘟病毒特异性抗体，可以确定猪是否曾经感染猪瘟病毒。

3. 病理学检查：猪瘟病毒感染会引起明显的病理变化，如内脏器官的出血、淋巴组织的萎缩等。

通过对病死猪或临床病例的病理学检查，可以观察到病变特征，进一步确认猪瘟的诊断。

4. 实时荧光定量PCR：该技术是一种PCR技术的改进，结合了PCR扩增和荧光探针检测，可以快速准确地检测猪瘟病毒的存在和数量。

5. 病毒分离：通过将样品（如血液、组织）接种到猪瘟病毒敏感的细胞系中，观察是否能够分离出病毒，从而确认感染。

需要注意的是，猪瘟诊断的技术标准可能因国家或地区而有所不同。

因此，在具体的诊断过程中，应当参考当地相关机构或疾病控制部门发布的最新技术指南和标准，确保诊断结果的准确性和可靠性。