2.高效液相色谱仪和固定相、流动相

液相色谱复习题填空：1．高效液相色谱法按分离机理的不同可分为液固吸附色谱、液液分配色谱、键合相色谱、凝胶色谱。

2．反相键合相色谱法常用的固定相是C18 ，流动相主体是水。

3．高效液相色谱仪的工作流程是：当试样进入进样器时，经进样器的流动相将试样带入色谱柱进行分离，被分离后的试样按先后顺序进入检测器，它将物质的浓度信号变成电信号，由记录仪记录下来，即得到一张液相色谱图。

4．依据分子尺寸大小的顺序来进行分离的液相色谱成为凝胶色谱，主要用来分析高分子物质的相对分子量分布。

5．反相键合相色谱法的分离机理是疏溶剂作用。

6．正相分配色谱可用于分析极性样品，被分离组分分子极性越强，在柱中停留的时间越长，流出越晚。

7．反相分配色谱固定相为非极性或弱极性固定液，流动相为以水为主体的极性（较强）溶剂。

8．折光指数检测器又称示差折光检测器，是通过连续检测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测定试样浓度的检测器。

9．蒸发光散射检测器与RI和UV比较，它消除了溶剂干扰和温度变化而引起的基线漂移，即使使用梯度洗脱也不会产生基线漂移。

10．按衍生反应在整个色谱流程中所处时间的不同，可分为柱前衍生和柱后衍生，按衍生后的产物可检测性的不同，可分为紫外衍生和荧光衍生。

选择：1．欲测定聚乙烯的分子量及分子量分布，应选用下列哪种色谱？DA、液液分配色谱B、液固吸附色谱C、键合相色谱D、凝胶色谱2．下列哪些溶剂可作为反相键合相色谱的极性改性剂？BA、正己烷B、乙腈C、氯仿D、水3．一般反相烷基键合固定相要求在pH为多少之间使用，pH值过大会引起基体硅胶的溶解？DA、2～10B、3～6C、1～9D、2～84．流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？BA、0.5μmB、0.45μmC、0.6μmD、0.55μm5．在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？CA、改变流动相的种类或柱子B、改变固定相的种类或柱长C、改变固定相的种类和流动相的种类D、改变填料的粒度和柱长6．一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为AA、甲醇/水（83/17）B、甲醇/水（57/43）C、正庚烷/异丙醇（93/7）D、乙腈/水（1.5/98.5）7．一般评价烷基键合相色谱柱时所用的样品为BA、苯、萘、联苯、尿嘧啶B、苯、萘、联苯、菲C、苯、甲苯、二甲苯、三甲苯D、苯、甲苯、二甲苯、联苯8．下列检测器中，哪两种属于通用型检测器？BA、PDA、RIB、RI 、ELSDC、UV-Vis 、PDAD、FD、UV-Vis9．在分离条件下，药物中间体吲哚羧酸产品中所有主、副产品及杂质都能分离，且在254nm 下都出峰，使用下列何种定量方法最简便？AA、归一化法B、外标法C、内标法D、标准加入法10．使用20uL的定量管（LOOP）实现20uL的精确进样，最好使用_____的进样器？D A、20uL B、25uL C、50uL D、100uL11．下列用于高效液相色谱的检测器，______检测器不能使用梯度洗脱。

高效液相色谱仪的原理及应用
高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，根据物质在固定相和流动相
间的相互作用差异来实现物质分离和测定的方法。

高效液相色谱的主要原理如下：
1. 样品进样：样品通过进样器注入到流动相中。

2. 流动相泵：流动相泵将流动相以一定的压力送入进样阀。

3. 进样阀：进样阀控制样品的进入量，并通过连接固定相柱。

4. 固定相柱：固定相在柱中，对流动相和待分离的样品进行分离。

5. 检测器：根据样品的特性和分离程度选择合适的检测器进行检测。

6. 数据处理器：将检测的信号转化为柱温度、流量和检测器信号等数据。

高效液相色谱仪的主要应用包括：
1. 分析化学：用于定性和定量分析化学样品中的成分。

2. 生物化学：用于分析蛋白质、核酸、多肽等生物大分子。

3. 药学：用于分析药物中的活性成分、控制药品的质量。

4. 环境分析：用于监测环境中的有机污染物和无机物质。

5. 食品分析：用于检测食品中的添加剂、残留农药和毒性物质。

高效液相色谱仪的优点包括分离效率高、分析速度快、样品容量小、样品制备简单等。

然而，高效液相色谱仪的操作要求严格，仪器费用较高，且需要使用高纯度的溶剂和试剂。

高效液相色谱仪的工作原理
1.色谱柱的工作原理:高效液相色谱仪是利用高压液体(主要为水)流过被分离物质,在固定相和流动相两相间进行非均相分配,使各组分分离并获得所需目标化合物。

2.高效液相色谱仪工作流程:在样品前处理部分完成色谱柱填充、脱气及预饱和等操作后,经进样口进入色谱柱;在载气输送系统中将待测组分从流动相进入固定相,与载气一起通过毛细管喷嘴到达检测器,由检测器检测出样品峰面积大小,并按组分保留时间对组分进行排序,然后在计算机上显示其峰面积大小和相应组分含量,即可得到该组分的浓度值。

高压液相色谱HPLC培训教程(六)IV．固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。

本章着重讨论填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。

一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。

无机物基质主要是硅胶和氧化铝。

无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。

有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。

有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。

1．基质的种类1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。

除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。

硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。

缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。

通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2~8。

硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。

②平均孔径及其分布。

与比表面积成反比。

③比表面积。

在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。

④含碳量及表面覆盖度（率）。

在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。

⑤含水量及表面活性。

在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。

⑥端基封尾。

在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。

⑦几何形状。

硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差；后者无此缺点。

⑧硅胶纯度。

对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。

2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。

它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。

但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。

不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。

高效液相色谱仪实验原理咱就说这个高效液相色谱仪呀，那可老神奇啦。

它的原理呢，就是利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异来进行分离的。

你想啊，就像一群小伙伴在两条不同的路上走，有的小伙伴喜欢在这条路上待着，有的就更喜欢另一条路，这样慢慢的，他们就分开啦。

在高效液相色谱仪里呢，这个固定相就像是一条比较特殊的路，流动相就像带着小伙伴们走的一股力量。

这个流动相带着样品在柱子里跑，柱子里装着固定相。

样品里的各种成分呢，就会根据自己和固定相、流动相的“亲疏关系”，有的跑得快，有的跑得慢。

这样，不同的成分就会在不同的时间从柱子里出来啦。

比如说，有一些物质和固定相的相互作用比较强，那它在柱子里就会待得久一点，出来得就慢；而那些和固定相相互作用弱的物质呢，就会比较快地被流动相带着跑出来。

而且呀，高效液相色谱仪还可以通过检测这些物质从柱子里出来的时间和量，来确定样品里都有啥东西，有多少东西。

这就像是给每个小伙伴都做了个标记，然后看看有多少个这样的小伙伴。

它的原理还涉及到好多好多小知识呢。

比如说这个流动相的选择就很有讲究，不同的流动相可以影响物质的分离效果。

就像不同的交通工具会影响小伙伴们到达目的地的速度和顺序一样。

如果流动相选得不合适，那可能就会导致有些物质分不开，就像小伙伴们挤在一块儿，分不出谁是谁了。

再比如说这个柱子的类型也很重要。

不同的柱子有不同的固定相，就像不同的路有不同的特点一样。

有的柱子适合分离大分子的物质，有的柱子就更擅长分离小分子的物质。

这就像是有的路适合大车走，有的路适合小车走一样。

反正这个高效液相色谱仪的实验原理就是通过这些复杂又有趣的过程，来达到分离和检测样品成分的目的啦。

感觉就像是一场微观世界里的超级马拉松比赛，每个物质都在自己的跑道上奋力奔跑，而我们就在终点等着看谁先到，谁后到，这样就能知道这个样品里都有些啥啦。

液相色谱仪的工作原理液相色谱仪（HPLC）是一种高效分离和分析化学物质的仪器，广泛应用于制药、生物化学、环境监测等领域。

其工作原理基于化学物质在液相流动中的分配和分离特性，通过不同化学物质在固定相和流动相之间的相互作用来实现分离和检测。

1. 流动相在液相色谱仪中，流动相是指用于将样品输送到色谱柱中的溶剂。

流动相通常是由溶剂混合而成的，常用的溶剂包括水、甲醇、乙腈等。

流动相的选择取决于待分离的化合物的特性，如极性、溶解度等。

流动相的选择对色谱分离的效果有重要影响。

2. 固定相固定相是色谱柱中的填料，其作用是将化合物分离开来。

固定相通常是由多孔硅胶或者聚合物制成的微小颗粒，颗粒的大小和化学性质对分离效果起着重要作用。

固定相的选择也取决于待分离的化合物的特性，如分子大小、极性等。

3. 样品注入样品注入是将待分析的化合物引入色谱系统的过程。

通常情况下，样品会被溶解在流动相中，然后通过进样器注入色谱柱。

进样器可以采用不同的方式，如手动注射、自动进样器等。

4. 色谱柱色谱柱是液相色谱仪中最关键的部件之一，其内部填充有固定相。

当样品进入色谱柱后，不同化合物会因为与固定相的相互作用而发生分离，从而实现对化合物的分析和检测。

5. 检测器色谱柱中分离的化合物会通过检测器进行检测和定量分析。

常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器（UV-Vis）和荧光检测器等。

检测器会根据化合物的特性产生相应的信号，然后通过数据采集系统进行记录和分析。

6. 数据分析最后，液相色谱仪通过数据采集系统将检测到的信号转化为图谱或者色谱图，进而进行数据分析和定量分析。

数据分析可以帮助人们快速准确地获得化合物的信息，如浓度、纯度等。

总的来说，液相色谱仪的工作原理是基于化学物质在固定相和流动相之间的相互作用来实现分离和检测。

通过流动相、固定相、样品注入、色谱柱、检测器和数据分析等步骤，液相色谱仪能够快速准确地分离和分析化合物，为化学分析提供了重要的技术手段。