细胞传代标准化步骤

Vero细胞传代方法
一、传代前准备
1.用75%酒精棉球擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

2.正确摆放使用的器械，保证足够的空间，不仅便于操作，而且减少污染。

3.点燃酒精灯，注意火焰不能太小。

4.取出室温保存的培养液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

二、传代步骤：
1.从培养箱内取出细胞，注意取出细胞时不要碰到瓶盖，用酒精棉球擦拭显微
镜的台面，再在镜下观察细胞。

2.打开瓶口：将各个瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

3.倒掉培养瓶中的培养基。

4.加入500ul/小瓶（培养面积___cm2)的胰酶（4度中可存放几个月）,并晃动
瓶子,使液体浸润瓶底。

5.将瓶置入孵箱约2-3分钟。

6.目测观察,见细胞层出现针状小孔，折光增加，弃去胰酶。

7.加入3ml的DMEM培养基稀释,注意更换吸管。

8.吹打15-20次左右,刚开始轻吹5次左右，然后用力吹，使细胞良好地分散
成单个细胞，镜下观察。

孵箱。

9.一传2，作好记号，置37℃，5%CO
2
10.一般2-3天长满。

注意事项：
1.操作过程中不能碰到瓶盖；
2.加培养液前移液管烧后先在培养基内回吸一次；
3.试验结束后用完的移液管要马上用水冲洗干净，再浸泡在洗衣粉溶液内；
4.胰酶消化不开细胞的，可能是胰酶失效或者细胞老化；
5.如果细胞长满不能及时传代就放在室温下第二天传，但是只能放一天；
6.生长液5%-10%血清，维持液2%-5%血清。

小瓶1传2小瓶
中瓶1传4小瓶（或2中瓶）。

细胞传代操作步骤及注意事项细胞传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是几乎所有细胞生物学实验的基础。

当细胞随着培养时间的延长和细胞不断分裂，细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止，且也会因营养物不足和代谢物积累而不利于细胞生长或发生中毒。

因此，细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释，分种成多瓶，细胞才能继续生长。

这一过程就叫传代。

细胞传代作为一种常规的实验操作，不但可以扩大细胞培养的数量，同时也可以避免细胞因进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。

所以为了让细胞保持在对数生长期，维持细胞旺盛的分裂能力，这时候就需要进行细胞传代。

细胞传代要在严格的无菌条件下进行，并且根据不同细胞采取不同的方法：☑贴壁生长的细胞用消化法传代；☑部分贴壁生长但贴壁不牢固的细胞可以采用直接吹打传代；☑悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心沉淀后再分离传代，或直接用自然沉淀法吸除上清后，再吹打传代。

上次讲了细胞复苏操作，今天来讲讲细胞传代的操作（适用于贴壁细胞的传代培养）！细胞复苏流程图细胞传代流程图01细胞传代前准备➡实验开始前，将15mL离心管、移液管、枪头等实验需要用到的耗材放入无菌超净工作台，紫外线照射30min。

➡将完全培养基、PBS、胰酶预热至37℃。

➡倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度，当细胞生长密度达到80%~90%汇合度即可进行传代。

02胰蛋白酶/EDTA消化➡弃去旧培养基，PBS洗去残留的旧培养基，重复洗两次。

注意：贴壁加入到培养皿的边缘，不能直接对着细胞加入PBS，容易把细胞都吹起来。

这一步的目的是为了去掉残余的培养基，残余的培养基会含有血清和一些离子等，不利于接下来的消化。

➡弃去PBS，加入0.25%Trypsin-0.04%EDTA（T25培养瓶加入约1.5mL，T75培养瓶加入约3mL），迅速铺匀，保证充分接触细胞表面（消化时间视具体细胞而定）。

➡显微镜下观察消化情况，约70%~80%细胞收缩变圆后，轻拍培养容器外壁，使细胞脱离培养表面。

细胞传代标准操作流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by the editor. I hope that after you download them, they can help yousolve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts,other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!随着科学技术的不断发展，细胞传代技术在生物学研究和医学领域中扮演着至关重要的角色。

细胞传代标准操作规程细胞传代培养标准操作规程一、实验名称：细胞传代培养二、实验目的：传代培养细胞株三、背景知识：随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。

此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。

这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。

对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。

细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。

在一代中，细胞倍增3～6次。

细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。

常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。

一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。

细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

四、实验原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。

传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。

同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

五、实验材料和药品：（一）实验药品：DMEM培养基，小牛血清，0.25％胰蛋白酶，PBS缓冲液。

（二）实验仪器和材料：CO2培养箱，倒置显微镜，超净台；培养瓶，弯头吸管，废液缸，离心管；75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞六、实验步骤：1．入无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。

2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。

将实验所需培养基置37℃下预热。

3．手在进入超净台前应消毒；超净台台面应整洁，用75％酒精溶液擦净。

4．打开超净台的紫外灯照射台面30min左右，打开抽风机，关闭超净台的紫外灯，清洁空气，除去臭氧。