HemosIL Heparin(发色底物法测定肝素)

HemosIL®In-vitro DiagnostikumDe uso diagnóstico in vitroDispositif mèdical de diagnostic in vitroPer uso diagnostico in vitroDispositivo médico para utilização em diagnóstico in vitro Chargen-BezeichnungIdentificación número de loteDésignation du lotNumero del lottoNúmero de loteVerwendbar bisCaducidadUtilisable jusqu’àDa utilizzare prima delData límite de utilizaçãoFestgelegte T emperaturT emperatura de AlmacenamientoT empératures limites de conservationLimiti di temperaturaLímite de temperaturaBeilage beachtenConsultar la metódicaLire le mode d’emploiVedere istruzioni per l’usoConsultar as instruções de utilizaçãoKontrollenControlContrôleControlloControloBiologisches RisikoRiesgo biológicoRisque biologiqueRischio biologicoRisco biológicoHergestellt vonFabricado porFabricantProdotto daFabricado porBevollmächtigterRepresentante autorizadoMandataireRappresentanza autorizzataRepresentante autorizadoAplicaciónT est Cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la actividad de Heparina no Fraccionada (UFH) y de Heparina de Bajo Peso Molecular (LMWH) en plasma humano citratado para los Sistemas de Coagulación IL.Principioglicosaminoglicano reside en su habilidad para acelerar (hasta 2000 veces) el efecto inhibidor de la antitrombina sobre las proteasas de la coagulación. En los últimos años se ha demostrado que la LMWH, además de ser tan útil terapéuticamente como la UFH, tiene una vida media más larga.El kit Heparina es una técnica basada en un substrato cromogénico sintético y la inactivación del FXa. El nivel de la Heparina en el plasma de los pacientes es medido automáticamente en los sistemas de coagulación IL en dos etapas:1. La Heparina es analizada como un complejo con la antitrombina presente en la muestra. La concentraciónde este complejo es dependiente de la disponibilidad de antitrombina. Para obtener una concentración más constante de antitrombina, se añade antitrombina humana purificada al plasma del test.1 El Factor Xa se añade en exceso y es neutralizado por el complejo antitrombina-heparina.2. El Factor Xa residual es cuantificado con un sustrato cromogénico sintético. La Paranitroanilina liberada esmedida cinéticamente a 405 nm siendo su nivel inversamente proporcional a la actividad de la Heparina de la muestra.2Dado que las diferentes clases de Heparina (tanto UFH como LMWH) tienen su propia actividad específica anti-factor Xa, la misma clase de heparina usada en el tratamiento del paciente debe usarse en la calibración de la curva estándar.3,4ComposiciónEl kit Heparin consta de:S Chromogenic substrate (N° Cat. 00020009410): 1 x 4 mL vial de substrato cromogénico liofilizado S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/vial) y estabilizantes.E Factor Xa reagent (N° Cat. 00020009420): 1 x 5 mL vial de una preparación liofilizada que contieneFactor bovino Xa (68 nkat/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.A Antithrombin (N° Cat. 00020009430): 1 x 3 mL vial de una preparación liofilizada que contieneAntitrombina humana (3 IU/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.B Buffer (N° Cat. 00020009440): 1 x 8 mL vial de solución concentrada que contiene tampón T ris, pH 8,4,EDT A, cloruro sódico y detergente.PRECAUCIÓN:El material usado en este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontradono reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con precaución como si fuese potencialmente infeccioso.5Indicaciones de Peligro: NingunaFrases de Riesgo: NingunaFrases de Seguridad: NingunaT odos los productos derivados de animales deberán manejarse como potencialmente infecciosos.Este reactivo es para diagnóstico in vitro.PreparaciónChromogenic substrate: Disolver el contenido de cada vial con 4 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.Factor Xa reagent: Disolver el contenido de cada vial con 5 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.Antithrombin: Disolver el contenido de cada vial con 3 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.Buffer: Diluir la cantidad necesaria de T ampón concentrado 1:10 (1+9) con agua tipo CLR de CLSI.6 Mezclar antes de su uso.Working buffer (Diluyente funcional): A 24 mL de T ampón diluido, añadir 1 mL de reactivo reconstituido de Antitrombina.Nota: Una opalescencia instantánea ocurrirá temporalmente al reconstituir los reactivos liofilizado, pero desaparecerá en un par de minutos.Conservación y estabilidad de los reactivosLos reactivos que no hayan sido abiertos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el vial si semantienen a 2-8°C.Chromogenic substrate - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vialoriginal ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP®.Factor Xa reagent - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial originaló 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.Antithrombin - Estabilidad después de la reconstitución: 3 meses a 2-8°C en el vial original.Buffer - El reactivo abierto es estable 3 meses a 2-8°C.Working buffer (Diluyente funcional) - Estabilidad después de su preparación: 7 días a 15°C y 2-8°C en unvial cerrado ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.Para obtener una estabilidad óptima del reactivo reconstituido, sugerimos que acabado el trabajo, conserve elreactivo en su vial original almacenado en nevera entre 2 y 8°C.Método de EnsayoSeguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual del Operador de los instrumentos IL o bien alManual de Aplicaciones.Nota: Se recomienda un ciclo de lavado después de cada sesión de ensayos de Heparina en los modelos ACLClásicos (100-7000).Recolección y Preparación de las muestrastrisódico. Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documentoH21-A5 de la CLSI.7EstandarizaciónPara la preparación del estándar de 0.8 U/ml utilice la misma heparina que la empleada para la terapia delpaciente.Atención: para preparar el estándar de 0.8 U/mL deberá utilizarse plasma calibrador o un Pool de PlasmaNormal (NPP), dependiendo del analizador que se vaya a emplear.Familia ACL TOP: preparar el estándar de 0.8 U/ mL utilizando Pool de Plasma Normal (NPP).ACL Futura/ACL Advance: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mLdeberá utilizarse plasma calibrador.ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8U/ mL debería utilizarse plasma calibrador.ACL Clásico (100-7000): tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mLdebería utilizarse Pool de Plasma Normal (NPP).Reactivos adicionales y plasmas de controlLos siguientes reactivos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado.Américas y Pacific Rim EuropaN° Cat. N° Cat.Plasma de Calibración 0020003700 0020003700Agente de Limpieza 0009831700 0009831700Agente de Limpieza 0009832700 0009832700Control de CalidadPara realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de dos niveles de control.8T anto el Control Heparina Bajo*, como el Control Heparina Alto* están diseñados específicamente para esteprograma. Cada laboratorio debe establecer su propia media y desviación estándar, asimismo establecer unprograma de Control de Calidad para monitorizar los resultados de su laboratorio. Los controles deben serusados como mínimo una vez dentro del turno de 8 horas, de acuerdo a la normativa de Buenas Prácticasen el Laboratorio. Referirse al Manual del Operador para información adicional. Consultar la publicación deWestgard y col. para una identificación y resolución de situaciones anormales del Control de Calidad.9ResultadosLos resultados de la Heparina se informan en U/mL. Referirse al Manual del Operador para informaciónadicional.Limitaciones/InterferenciasConcentraciones de Hemoglobina hasta 200 mg/dL, Bilirrubina hasta 20 mg/dL y T riglicéridos hasta 700 mg/dLno alteran los resultados de la Heparina en los ACL Futura/ACL Advance.Concentraciones de Hemoglobina hasta 375 mg/dL, Bilirrubina hasta 25 mg/dL y T riglicéridos hasta 1630mg/dL no alteran los resultados de la Heparina en la Familia ACL TOP.Valores esperadosactividad de la heparina debe estar en el rango de actividad recomendado por el fabricante del fármaco.10Características técnicasPrecisión:Se evaluó la precisión intraserie y total (serie a serie y dia a dia) a partir de múltiples series utilizando dosniveles de muestras tanto para la Heparina UFH como para la Heparina LMWH.Familia ACL Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)UFH 0,77 1,84 2,18UFH 0,23 7,76 8,23LMWH 0,79 2,68 3,09LMWH 0,23 7,99 9,69ACL Futura/ACL Advance Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)UFH 0,79 3,0 6,6UFH 0,52 5,7 7,3UFH 0,26 9,1 10,0LMWH 0,76 4,1 4,5LMWH 0,42 6,2 7,9LMWH 0,22 10,7 11,9Familia ACL TOP Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)UFH 0,82 1,8 6,4UFH 0,53 3,4 4,3UFH 0,25 4,6 8,5LMWH 0,86 2,4 4,4LMWH 0,49 6,1 8,2LMWH 0,25 5,7 11,3Correlación:Sistema Pendiente Intersección r Método de ComparaciónFamilia ACL 0,968 0,014 0,988 IL Heparina (Xa)ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparina (Xa)ACL AdvanceFamilia ACL TOP 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparina (Xa)en ACL AdvanceEstos resultados de precisión y correlación se obtuvieron utilizando lotes específicos de reactivos y controles.Linealidad:SistemaFamilia ACL y ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mLFamilia ACL TOP 0 - 1,1 U/mLVerwendungAutomatisierter chromogener T est zur quantitativen Bestimmung der Aktivität von unfraktionierten oder niedermolekularen Heparinen in menschlichem Plasma auf IL-Analysensystemen.Testprinzip und ZusammenfassungHeparin ist der am häufigsten eingesetzte antithrombotische Wirkstoff. Die biologische Aktivität der sulfatierten Glykosaminoglykane beruht auf ihrer Fähigkeit den inhibitorischen Effekt des Antithrombin auf die Gerinnungsproteasen um das bis zu 2000-fache zu beschleunigen. In den letzten Jahren wurde gezeigt, dass niedermolekulare Heparine ebenso wie unfraktionierte Heparine zur Therapie eingesetzt werden können und zudem eine längere Halbwertszeit besitzen.Der Heparin T estkit basiert auf einem synthetischen chromogenen Substrat über die Inaktivierung von Faktor Xa. Der Heparin-Spiegel des Patientenplasmas wird mit IL Gerinnungssystemen automatisch gemessen:1. Heparin bildet mit dem in der Probe vorhanden Antithrombin einen Komplex. Die Konzentration diesesKomplexes ist von der Verfügbarkeit des Antithrombin abhängig. Um eine möglichst konstante Konzentration an Antithrombin zu erhalten, wird gereinigtes menschliches Antithrombin der Probe zugeführt.1 Faktor Xa wird im Überschuss zugegeben und durch den Heparin-Antithrombin-Komplex neutralisiert.2. Die Restaktivität von Faktor Xa wird mit einem synthetischen chromogenen Substrat gemessen. Dasfreigesetzte Paranitroanilin wird kinetisch bei einer Wellenlänge von 405 nm erfasst und ist umgekehrt proportional zum Heparin Spiegel der Probe.2Da verschiedene Arten von unfraktionierten und niedermolekularen Heparinen unterschiedliche spezifische Anti-Faktor Xa-Aktivitäten aufweisen, sollte bei der Kalibration der Standardkurve immer dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.3,4InhaltDie Heparin Packung enthält:S Chromogenic substrate (Art. Nr. 00020009410): 1 Flasche x 4 mL lyophilisiertes chromogenes Substrat [S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/Flasche)].E Factor Xa reagent (Art. Nr. 00020009420): 1 Flasche x 5 mL eines lyophilisierten Präparates, das FaktorXa bovinen Ursprungs (68 nkat/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enthält.A Antithrombin (Art. Nr. 00020009430): 1 Flasche x 3 mL eines lyophilisierten Präparates, das Human-Antithrombin (3 IU/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enthält.B Buffer (Art. Nr. 00020009440): 1 Flasche x 8 mL einer konzentrierten Lösung, die T ris-Puffer, pH 8,4,EDT A, Natriumchlorid und Detergenz enthält.WARNUNG:Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten T estmethoden auf HIV 1/2-Antikörper, Hepatitis-B-Antigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infektiösen Materialien.5Gefahrenklasse: keineRisikoeinstufung: keineSicherheitseinstufung: keineAlle Tierprodukte sollten als potentiell infektiös behandelt werden.Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.HerstellungChromogenic substrate: Zum Inhalt einer Flasche wird 4 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.Factor Xa reagent: Zum Inhalt einer Flasche wird 5 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Antithrombin: Zum Inhalt einer Flasche wird 3 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.Buffer: Die benötigte Menge des konzentrierten Diluents 1:10 (1+9) mit CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) verdünnen.6 Vor dem Gebrauch mischen.Working buffer (Arbeitslösung): Zu 24 mL verdünntem Puffer wird 1 mL des rekonstituierten Antithrombin Reagenzes zugegeben.Hinweis: Auftretende T rübungen verschwinden innerhalb kurzer gerung und HaltbarkeitDie ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem Etikett angegebenenVerfallsdatum haltbar.Chromogenic substrate - Haltbarkeit nach Rekonstitution:- bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 StundenFactor Xa reagent - Haltbarkeit nach Rekonstitution:- bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 StundenAntithrombin - Haltbarkeit nach Rekonstitution:- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 MonateBuffer - geöffnetes Reagenz:- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 MonateWorking buffer (Arbeitslösung) - Haltbarkeit nach Herstellung:- bei 15°C im geschlossenen Behälter: 7 T age- bei 2-8°C im geschlossenen Behälter: 7 T age- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 StundenFür eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem Gerät entnommen und imKühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt werden.BestimmungsansatzDie ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem Geräte-Bedienerhandbuch und/oder demApplikationshandbuch zu entnehmen.Hinweis: Es wird empfohlen im Anschluss an den Heparin T est einen Reinigungszyklus am ACL Classic (ACL100-7000) durchzuführen.Probenmaterial und -gewinnung9 T eile frisches venöses Blut und 1 T eil T rinatriumcitratlösung werden sorgfältig in einem silikonisiertenGlasröhrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Institutsfür Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Document H21-A5 zu entnehmen.7StandardisierungZur Herstellung des 0,8 U/mL Standards sollte dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.Hinweis: Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards wird in Abhängigkeit vom verwendeten Gerät entwederKalibrationsplasma oder Normalpoolplasma (NPP) eingesetzt.ACL TOP Familie: Normalpoolplasma (NPP) sollte zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.ACL Futura/ACL Advance: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma zurHerstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasmazur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.ACL Classic (ACL 100-7000): Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Normalpoolplasma (NPP)zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.Zusätzliche Reagenzien und KontrollplasmenDie folgenden Reagenzien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich bestellt werden:Amerikan. und Pazifischer Raum EuropaArt. Nr. Art. Nr.Kalibrationsplasma 0020003700 0020003700Reinigungslösung 0009831700 0009831700Reinigungslösung 0009832700 0009832700Qualitätskontrollepathologischen Bereich zu überprüfen.8 Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial die oben angegebenenKontrollen zu verwenden. Die Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes Labor sollteseinen eigenen Kontrollbereich ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden sollte eine Qualitätskontrolledurchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe z.B Westgard et al.9Siehe auch “Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung quantitativerlaboratoriumsmedizinischer Untersuchungen” in der jeweils gültigen Fassung.ErgebnisseHeparin Ergebnisse werden in U/mL dargestellt. Zusätzliche Informationen sind dem Bedienerhandbuch zuentnehmen.EinschränkungenHeparin Ergebnisse auf ACL- und ACL Futura/ACL Advance-Analysensystemen werden durch Konzentrationenan Hämoglobin bis zu 200 mg/dL, Bilirubin bis zu 20 mg/dL und T riglyceriden bis zu 700 mg/dL nicht beeinflusst.Heparin Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP® Familie werden durch Konzentrationen an Hämoglobin bis zu375 mg/dL, Bilirubin bis zu 25 mg/dL und T riglyceriden bis zu 1630 mg/dL nicht beeinflusst.ReferenzbereicheUm einen optimalen Effekt bei einem minimierten Risiko bezüglich Blutungen oder thrombotischenKomplikationen zu erzielen, sollte die Heparin-Aktivität in dem vom Heparin-Hersteller empfohlenen Bereichliegen.10TestcharakteristikPräzision Die Präzision im Lauf und von T ag zu T ag wurde in mehreren Läufen unter Verwendung von jezwei unterschiedlichen Konzentrationen mit unfraktioniertem (UFH) und niedermolekularem Heparin (LMWH)ermittelt.ACL Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)unfrakt. Heparin 0,77 1,84 2,18unfrakt. Heparin 0,23 7,76 8,23niedermolek. Heparin 0,79 2,68 3,09niedermolek. Heparin 0,23 7,99 9,69ACL Futura/ACL Advance Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)unfrakt. Heparin 0,79 3,0 6,6unfrakt. Heparin 0,52 5,7 7,3unfrakt. Heparin 0,26 9,1 10,0niedermolek. Heparin 0,76 4,1 4,5niedermolek. Heparin 0,42 6,2 7,9niedermolek. Heparin 0,22 10,7 11,9ACL TOP Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)unfrakt. Heparin 0,82 1,8 6,4unfrakt. Heparin 0,53 3,4 4,3unfrakt. Heparin 0,25 4,6 8,5niedermolek. Heparin 0,86 2,4 4,4niedermolek. Heparin 0,49 6,1 8,2niedermolek. Heparin 0,25 5,7 11,3Korrelation:System Steigung Ordinatenabschnitt r ReferenzmethodeACL Familie 0,968 0,014 0,988 IL Heparin (Xa)ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparin (Xa)ACL AdvanceACL TOP Familie 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparin (Xa) amACL AdvanceD ie Präzisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermitteltworden.Linearität:SystemACL Familie und ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mLACL TOP Familie 0 - 1,1 U/mLIntended useAutomated chromogenic assay for the quantitative determination of unfractionated heparin (UFH) and low molecular weight heparin (LMWH) activity in human citrated plasma on the IL Coagulation Systems. Summary and principleHeparin is the most frequently used antithrombotic drug. The biological activity of this sulphated glycosaminoglycan resides in its ability to accelerate (up to 2000-fold) the inhibitory effect of antithrombin on coagulation proteases. In recent years, it has been shown that LMWH, besides being as useful therapeutically as UFH, also has a longer half-life.The Heparin kit is an assay based on a synthetic chromogenic substrate and on Factor Xa inactivation. Heparin levels in patient plasma are measured automatically on IL Coagulation Systems in two stages.1. Heparin is analyzed as a complex with antithrombin present in the sample. The concentration of thiscomplex is dependent on the availability of antithrombin. In order to obtain a more constant concentration of antithrombin, purified human antithrombin is added to the test plasma.1 Factor Xa is added in excess and is neutralized by heparin-antithrombin complex.2. Residual Factor Xa is quantified with a synthetic chromogenic substrate. The paranitroaniline released ismonitored kinetically at 405 nm and is inversely proportional to the heparin level in the sample.2Since different kinds of UF- and LMW- Heparins have their own specific anti-Factor Xa activity, the same kind of heparin as is used in the patient sample should also be used for calibrating the standard curve.3,4 CompositionThe Heparin kit consists of:S Chromogenic substrate (Cat. No. 00020009410): 1 x 4 mL vial of the lyophilized chromogenic substrate S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/vial) and bulking agent.E Factor Xa reagent (Cat. No. 00020009420): 1 x 5 mL vial of a lyophilized preparation containing purifiedbovine Factor Xa (68 nkat/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin.A Antithrombin (Cat. No. 00020009430): 1 x 3 mL vial of a lyophilized preparation containing humanantithrombin (3 IU/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin.B Buffer (Cat. No. 00020009440): 1 x 8 mL vial of a concentrated solution containing T ris-buffer, pH 8.4,EDT A, sodium chloride and detergent.PRECAUTIONS AND WARNINGS:The material in this product was tested with FDA cleared methods and found nonreactive for Hepatitis B surface Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies. Handle as if potentially infectious.5Hazard class: NoneRisk phrases: NoneSafety phrases: NoneAll animal products should be treated as potentially infectious.This product is For in vitro Diagnostic Use.PreparationChromogenic substrate: Dissolve the vial contents with 4 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep the substrate at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.Factor Xa reagent: Dissolve the vial contents with 5 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.Antithrombin: Dissolve the vial contents with 3 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.Buffer: Dilute the necessary quantity of concentrated buffer 1:10 (1+9) with CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Mix before use.Working buffer: T o 24 mL of diluted buffer add 1 mL of reconstituted antithrombin reagent.Note: An instant opalescence will occur in the lyophilized reagents but it will fade away within 2 minutes.Reagent storage and stabilityUnopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial when stored at 2-8°C.Chromogenic substrate - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP® Family.Factor Xa reagent - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or 48hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.Antithrombin - Stability after reconstitution: 3 months at 2-8°C in the original vial.Buffer - Opened reagent is stable 3 months at 2-8°C.Working buffer - Stability after preparation: 7 days at 15°C and 2-8°C in a closed container or 48 hours at 15°Con the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the original vial.Instrument/test proceduresprocedure instructions.Note: A cleaning cycle is recommended after running the Heparin assay on the ACL Classic (100-7000)Systems.Specimen collection and preparationNine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to CLSI DocumentH21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and storage.7StandardizationFor preparation of the 0.8 U/mL standard use the same heparin as used for patient therapy.Please Note: When preparing the 0.8 U/mL standard depending on the instrument being used either calibrationplasma or Normal Pooled Plasma (NPP) should be used.ACL TOP Family: Normal Pooled Plasma (NPP) should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard.ACL Futura/ACL Advance: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used inpreparation of the 0.8 U/mL standard.ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used inpreparation of the 0.8 U/mL standard.ACL Classic (100-7000): As indicated in the Operator’s manual, Normal Pooled Plasma (NPP) should be usedin preparation of the 0.8 U/mL standard.Additional reagent and control plasmasThe following are not supplied with the kit and must be purchased separately.Americas and Pacific Rim EuropeCat. No. Cat No.Calibration plasma 0020003700 0020003700Cleaning solution 0009831700 0009831700Cleaning agent 0009832700 0009832700Quality control8establish its own mean and standard deviation and should establish a quality control program to monitorlaboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in accordance with goodlaboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Refer to Westgard etal for identification and resolution for out-of-control situations.9ResultsHeparin results are reported in U/mL. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information.Limitations/interfering substancesHeparin results on the ACL and ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by hemoglobin up to 200mg/dL, bilirubin up to 20 mg/dL and triglycerides up to 700 mg/dL.Heparin results on the ACL TOP Family are not affected by hemoglobin up to 375 mg/dL, bilirubin up to 25mg/dL and triglycerides up to 1630 mg/dL.Expected valuesT o obtain an optimal effect with minimum risk of bleeding or thromboembolic complications the heparin activityshould be in the range recommended by the heparin manufacturer.10Performance characteristicsPrecision:Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs using two levels ofsample of both UFH Heparin and LMWH Heparin.ACL® Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)UFH 0.77 1.84 2.18UFH 0.23 7.76 8.23LMWH 0.79 2.68 3.09LMWH 0.23 7.99 9.69ACL Futura/ACL Advance Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)UFH 0.52 5.7 7.3UFH 0.26 9.1 10.0LMWH 0.76 4.1 4.5LMWH 0.42 6.2 7.9LMWH 0.22 10.7 11.9ACL TOP Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)UFH 0.82 1.8 6.4UFH 0.53 3.4 4.3UFH 0.25 4.6 8.5LMWH 0.86 2.4 4.4LMWH 0.49 6.1 8.2LMWH 0.25 5.7 11.3Correlation:System slope intercept r Reference methodACL Family 0.968 0.014 0.988 IL Heparin (Xa)ACL Futura/ACL Advance 0.944 0.035 0.989 IL Heparin (Xa)ACL TOP Family 1.012 -0.005 0.992 HemosIL Heparin (Xa)on ACL AdvanceThe precision and correlation results were obtained using specific lots of reagent and controls.Linearity:SystemACL Family and ACL Futura/ACL Advance 0 - 1.0 U/mLACL TOP Family 0 - 1.1 U/mL。