高效液相色谱法测定猪肉中土霉素、四环素残留量
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清液 。
固相萃取 净化： 固相萃取柱依 次用 １ｍ 甲 将 ０ｌ
醇 、５ ｌ 进 行 活 化 ， １ｍ 水 然后 将 上 清 液过 柱 ， １ｍ 用 ０Ｌ 超 纯水洗 柱 ， 液滴滴 下为止 ， 固相萃取 洗脱液 以无 用 １ｍｏ Ｌ草酸 甲醇溶液 １ｍ ０ ｌ ／ ５ Ｌ进行洗 脱 ， 洗脱 液收 将
钠溶液 （ Ｈ ． ） 柱 温 ：５ 、 速 ： ． ｍ ／ ｉ、 ｐ２ ５ 、 ３％ 流 １ ０ Ｌ ｍ ｎ 进 样 量 １ｍ 、 ０ Ｌ 检测 波长 ：８ ｎ ３ ５ ｍ。 Ｉ３ ３ 土霉素 、 ．． 四环素标 准溶液 的配制
目 四环素族抗生素的主要检测方法有高效液 前 相色谱法、 微生物法和分 光光度法【 。其中高效液 ７ Ｊ 相色谱法应用最多， 但提取方法大多采用固相萃取 柱净 化 （ 双柱净 化 ）操 作 步骤 繁琐 Ｊ 或 ， 。在 以往方
样 品提 取 ： 取 ５～１ｇ搅 碎 的 猪 肉 样 品 于 称 ０
第 ｌ 期 ８
陆
龙： 高效液相色谱法测定猪肉中土霉素、 四环素残留量
４ ３
化性 ， 对色谱柱 也有一定的腐蚀性 ， 影响 了测定结 果， 故不宜选用 。单用甲醇作提取液时 ， 虽然四环素 族 抗生 素在 甲醇 中 的溶解 度 比较 大 ， 甲醇 的提 取 但
第２ ６卷 第 １ 期 ８ ２１ ００年 ９月
甘肃 科技
Ｇａ ｓ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｎ ｕ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ
２ ２ Ｎｏ ８ ．６ ．１
Ｓ ｐ． ２ ０ ｅ Ｏ１
高效 液相 色谱 法 测定 猪 肉 中土 霉素 、 四环素 残 留量
安捷伦 １０ ２０高效液相色谱仪（ 配有 自动进样 器、 四元泵、 真空在线脱气机、 多波长检测器 ） 离心 、 机（００／ ｉ）旋涡混合器、Ｈ计 、 ４０ ｒｍｎ 、 ｐ 超声波清洗仪。 １ ２ 试 剂与 药品 ． 甲醇（ 色谱纯） 乙腈（ ， 色谱纯） 超纯水 ， ， 磷酸二 氢钠、 柠檬酸、 高氯酸 、 氢氧化钠、 新鲜猪 肉（ 市售 ） 。 １３ 试 验方 法 ．
集 到试管 中 ， ４ ℃ 下 氮 气 吹干 ， 草 酸 甲醇 水 溶 于 ５ 用
液 ２０ ．ｍＬ溶解 残渣 ， 高效液相 色谱仪 分析 。 供
１ ３ ２ 色谱 条件 ．．
色 谱 柱 ： Ｏ Ｂ Ｘ Ｅｔ ｄ—Ｃ ８柱 （ ５ｍ Ｚ Ｒ Ａ ｘｎ ｅ １ ２０ ｍ Ｘ ４６ ｍ，５ ｒ ； ．ｍ １０ ｍ） 流动 相 ： ａ 甲醇 一１ｍ ｌＬ磷酸 二氢 ０ｏ ／
操作简便、 检出限低、 敏度高的优点 ， 灵 适于畜禽组 织 中四环素族 类抗 生素 的检测 。
液。将两种溶液个取 １ｍ 等体积混合后 ， 甲醇将 ０ｌ 用
１ 试验部分
１ １ 仪器 设备 ．
上述溶 液分别 进行 一 系列 稀 释 ， 土霉 素 浓 度依 次 为 ７ ． 、９５ １．５９ ８ 、．４ ｇＬ 四环 素浓 度依 ９０ ３ ． 、９ ７ 、．８４ ９８ ／ ， 次为 ９ ． 、６０ ２ ． 、 １５ ５ ７ ｇＬ ２０ ４ ． 、３ ０ １． 、．５ ／ 。用 于 测定 两 种抗 生素 的线 性范 围。
陆 龙
（ 兰州工业研究院 ， 甘肃 兰州 ７ ０ ５ ） ３０ ０
摘
要： 建立 了高效液相色谱法测定猪肉中四环素族抗生素留量 的方法。通过对样 品前处理方法进行 优化 ， 高效 用
液相色谱 法测定 了猪 肉中土霉素 、 四环素 ２种四环 素族抗生素的残 留量。该法对土霉素 、 四环素检 出限分别为 １
１３ １ 样 品前 处理 ．．
２ 结果 与讨论
２、 甲醇、 乙腈、 甲醇 一 磷酸二氢钠 缓冲液作为提取液进行 了比较试验。结果表 明， 用 高氯酸 作提取 液 时 ， 然可 以沉淀样 品 中的蛋 白 ， 虽 减 少基质的干扰 ， 但它对 四环素族抗生素有较强的氧
最新 限量为不 超过 ０ １ ｇ ｋ 。 ． ／ ｇ ｍ
５ｍｌ 心管 中 ， 入缓 冲液 １ｍ ， 旋 涡 混合 器 上 ０ 离 加 ５ ｌ在
混匀 ２ ｎ 在离 心 机上 离 心 １ ｍ ｎ 取 上 清 液 ， 渣 ｍｉ， ０ ｉ， 残
分别用 １ｍ ５ Ｌ和 １ｍ缓冲液 提取两次 ， ０ 离心 ， 合取 上
法的基础上 ， 改进 了提取 方 法 ， 验 表 明 ， 法具 有 试 本
准确 称取土 霉素标 准品 １５ ｍ ， ．８ ｇ 四环 素标 准品 １８ｒｇ分 别 用 甲醇 定 容 １０ ｌ 量 瓶 中 ， 质 ．４ ， ａ ０ｍ 容 得 量浓 度分 别 是 ０ ０５ ｍ ／ ｌ０ ０８ｍｇｍ 的标 准 ． １８ ｇｍ 、 ． １４ ／ ｌ
Ｌ １８ ￣ ／ ， 、．８ ｇ Ｌ 相对标准偏差为 ３２ － ．％ ， ．％ ３ ３ 平均 回收率 为 ８ ８ 。 ２～ ６ 关键词 ： 高效液相色谱 法 ； 肉； 猪 四环素族抗生素
中图 分 类 号 ： ６ ７７ ０ ５ ．２
土霉素 、 四环 素为 四环素族 类抗 生素药 ， 一类 是 对革兰 氏 阴性 菌和 阳性 菌均 有 抑 制作 用 ， 同时对 立 克次体 、 螺旋体 及某些 原虫 亦具有 抑制作 用 ， 产 是生 和临床应用 最久 的抗 生 素之 一 。近 年 来 ， 四环 素族 抗生素作 为一种 饲料 添加剂 大量 而广泛地 用于畜 禽 养殖业 。作 为饲料 添加 剂 ， 主 要起 疾 病 防治 和促 它 进 生长 的作用 ， 是这 类 药 物 长期 使 用 就会 在 动物 但 体 内累积 ， 而在 动 物 性食 品 中残 留。若 长 期食 用 从 这些动 物性 食 品及 其 制 品就 会 危 害人 类 的身 体 健 康 。为 了保证 食 品的卫生 安全 和提高我 国食 品在 出 口贸易 中的竞 争力 ， 业 部 对兽 药 中抗生 素残 留 的 农
固相萃取 净化： 固相萃取柱依 次用 １ｍ 甲 将 ０ｌ
醇 、５ ｌ 进 行 活 化 ， １ｍ 水 然后 将 上 清 液过 柱 ， １ｍ 用 ０Ｌ 超 纯水洗 柱 ， 液滴滴 下为止 ， 固相萃取 洗脱液 以无 用 １ｍｏ Ｌ草酸 甲醇溶液 １ｍ ０ ｌ ／ ５ Ｌ进行洗 脱 ， 洗脱 液收 将
钠溶液 （ Ｈ ． ） 柱 温 ：５ 、 速 ： ． ｍ ／ ｉ、 ｐ２ ５ 、 ３％ 流 １ ０ Ｌ ｍ ｎ 进 样 量 １ｍ 、 ０ Ｌ 检测 波长 ：８ ｎ ３ ５ ｍ。 Ｉ３ ３ 土霉素 、 ．． 四环素标 准溶液 的配制
目 四环素族抗生素的主要检测方法有高效液 前 相色谱法、 微生物法和分 光光度法【 。其中高效液 ７ Ｊ 相色谱法应用最多， 但提取方法大多采用固相萃取 柱净 化 （ 双柱净 化 ）操 作 步骤 繁琐 Ｊ 或 ， 。在 以往方
样 品提 取 ： 取 ５～１ｇ搅 碎 的 猪 肉 样 品 于 称 ０
第 ｌ 期 ８
陆
龙： 高效液相色谱法测定猪肉中土霉素、 四环素残留量
４ ３
化性 ， 对色谱柱 也有一定的腐蚀性 ， 影响 了测定结 果， 故不宜选用 。单用甲醇作提取液时 ， 虽然四环素 族 抗生 素在 甲醇 中 的溶解 度 比较 大 ， 甲醇 的提 取 但
第２ ６卷 第 １ 期 ８ ２１ ００年 ９月
甘肃 科技
Ｇａ ｓ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｎ ｕ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ
２ ２ Ｎｏ ８ ．６ ．１
Ｓ ｐ． ２ ０ ｅ Ｏ１
高效 液相 色谱 法 测定 猪 肉 中土 霉素 、 四环素 残 留量
安捷伦 １０ ２０高效液相色谱仪（ 配有 自动进样 器、 四元泵、 真空在线脱气机、 多波长检测器 ） 离心 、 机（００／ ｉ）旋涡混合器、Ｈ计 、 ４０ ｒｍｎ 、 ｐ 超声波清洗仪。 １ ２ 试 剂与 药品 ． 甲醇（ 色谱纯） 乙腈（ ， 色谱纯） 超纯水 ， ， 磷酸二 氢钠、 柠檬酸、 高氯酸 、 氢氧化钠、 新鲜猪 肉（ 市售 ） 。 １３ 试 验方 法 ．
集 到试管 中 ， ４ ℃ 下 氮 气 吹干 ， 草 酸 甲醇 水 溶 于 ５ 用
液 ２０ ．ｍＬ溶解 残渣 ， 高效液相 色谱仪 分析 。 供
１ ３ ２ 色谱 条件 ．．
色 谱 柱 ： Ｏ Ｂ Ｘ Ｅｔ ｄ—Ｃ ８柱 （ ５ｍ Ｚ Ｒ Ａ ｘｎ ｅ １ ２０ ｍ Ｘ ４６ ｍ，５ ｒ ； ．ｍ １０ ｍ） 流动 相 ： ａ 甲醇 一１ｍ ｌＬ磷酸 二氢 ０ｏ ／
操作简便、 检出限低、 敏度高的优点 ， 灵 适于畜禽组 织 中四环素族 类抗 生素 的检测 。
液。将两种溶液个取 １ｍ 等体积混合后 ， 甲醇将 ０ｌ 用
１ 试验部分
１ １ 仪器 设备 ．
上述溶 液分别 进行 一 系列 稀 释 ， 土霉 素 浓 度依 次 为 ７ ． 、９５ １．５９ ８ 、．４ ｇＬ 四环 素浓 度依 ９０ ３ ． 、９ ７ 、．８４ ９８ ／ ， 次为 ９ ． 、６０ ２ ． 、 １５ ５ ７ ｇＬ ２０ ４ ． 、３ ０ １． 、．５ ／ 。用 于 测定 两 种抗 生素 的线 性范 围。
陆 龙
（ 兰州工业研究院 ， 甘肃 兰州 ７ ０ ５ ） ３０ ０
摘
要： 建立 了高效液相色谱法测定猪肉中四环素族抗生素留量 的方法。通过对样 品前处理方法进行 优化 ， 高效 用
液相色谱 法测定 了猪 肉中土霉素 、 四环素 ２种四环 素族抗生素的残 留量。该法对土霉素 、 四环素检 出限分别为 １
１３ １ 样 品前 处理 ．．
２ 结果 与讨论
２、 甲醇、 乙腈、 甲醇 一 磷酸二氢钠 缓冲液作为提取液进行 了比较试验。结果表 明， 用 高氯酸 作提取 液 时 ， 然可 以沉淀样 品 中的蛋 白 ， 虽 减 少基质的干扰 ， 但它对 四环素族抗生素有较强的氧
最新 限量为不 超过 ０ １ ｇ ｋ 。 ． ／ ｇ ｍ
５ｍｌ 心管 中 ， 入缓 冲液 １ｍ ， 旋 涡 混合 器 上 ０ 离 加 ５ ｌ在
混匀 ２ ｎ 在离 心 机上 离 心 １ ｍ ｎ 取 上 清 液 ， 渣 ｍｉ， ０ ｉ， 残
分别用 １ｍ ５ Ｌ和 １ｍ缓冲液 提取两次 ， ０ 离心 ， 合取 上
法的基础上 ， 改进 了提取 方 法 ， 验 表 明 ， 法具 有 试 本
准确 称取土 霉素标 准品 １５ ｍ ， ．８ ｇ 四环 素标 准品 １８ｒｇ分 别 用 甲醇 定 容 １０ ｌ 量 瓶 中 ， 质 ．４ ， ａ ０ｍ 容 得 量浓 度分 别 是 ０ ０５ ｍ ／ ｌ０ ０８ｍｇｍ 的标 准 ． １８ ｇｍ 、 ． １４ ／ ｌ
Ｌ １８ ￣ ／ ， 、．８ ｇ Ｌ 相对标准偏差为 ３２ － ．％ ， ．％ ３ ３ 平均 回收率 为 ８ ８ 。 ２～ ６ 关键词 ： 高效液相色谱 法 ； 肉； 猪 四环素族抗生素
中图 分 类 号 ： ６ ７７ ０ ５ ．２
土霉素 、 四环 素为 四环素族 类抗 生素药 ， 一类 是 对革兰 氏 阴性 菌和 阳性 菌均 有 抑 制作 用 ， 同时对 立 克次体 、 螺旋体 及某些 原虫 亦具有 抑制作 用 ， 产 是生 和临床应用 最久 的抗 生 素之 一 。近 年 来 ， 四环 素族 抗生素作 为一种 饲料 添加剂 大量 而广泛地 用于畜 禽 养殖业 。作 为饲料 添加 剂 ， 主 要起 疾 病 防治 和促 它 进 生长 的作用 ， 是这 类 药 物 长期 使 用 就会 在 动物 但 体 内累积 ， 而在 动 物 性食 品 中残 留。若 长 期食 用 从 这些动 物性 食 品及 其 制 品就 会 危 害人 类 的身 体 健 康 。为 了保证 食 品的卫生 安全 和提高我 国食 品在 出 口贸易 中的竞 争力 ， 业 部 对兽 药 中抗生 素残 留 的 农
