分光光度法测定的基本原理说课

分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法一、分光光度计的原理分光光度计是一种测量样品溶液中吸收或透射光强的仪器。

它的基本原理是通过将可见光或紫外光通过样品溶液后，测量出光强的变化，从而得知样品溶液中物质的浓度或其他性质。

分光光度计的原理可以分为下面几个步骤：1. 光源发射：分光光度计通常使用可见光或紫外光作为光源。

这些光经过滤波器减少杂散光，通过准直系统形成平行光束。

2. 样品测量：经过准直系统形成的平行光束通过样品溶液，样品中吸收或透射一部分光。

被吸收的光与未经样品的光进行比较，通过这种比较可以得到吸光度或透光度。

3. 光电传感器检测：被吸收或透射后的光通过光电传感器检测并转化为电信号。

光电传感器常用的有光电二极管或光电倍增管。

4. 信号处理和显示：光电传感器转化的电信号经过放大和滤波处理后，通过计算机或显示器显示出吸光度或透光度的数值。

二、分光光度计的操作方法1. 准备工作：在使用分光光度计之前，需要进行准备工作。

这包括检查仪器是否处于正常工作状态，校准仪器的零点，确认样品槽或比色皿是否清洁干净。

2. 设定波长：根据需要测量的物质，设定合适的波长。

分光光度计通常具有可以选择波长的旋钮或按钮，通过旋转或按键来设定所需的波长。

3. 参比校正：为了确保测量结果的准确性，需要进行参比校正。

这可以通过将参比溶液放入样品槽，并记录下参比物质的吸光度或透光度值。

然后将样品溶液放入样品槽中进行测量。

4. 测量样品：将待测样品溶液放入样品槽中，确保溶液填满槽，并将样品槽放入分光光度计中。

根据需要选择透射模式或吸收模式，开始测量。

5. 记录和分析：根据测量结果记录样品的吸光度或透光度值。

可以根据所测得的数值进行进一步的数据分析和计算。

6. 清洁操作：在使用完毕后，及时清洁分光光度计的样品槽和其他部件，以确保下次使用时的准确性和可靠性。

三、注意事项1. 避免阳光直射：分光光度计的使用需要避免阳光直射，以免影响测量的准确性。

分光光度法的原理
分光光度法是一种常用的分析测量方法，它利用物质在特定波长下的吸收特性来确定其浓度。

具体来说，分光光度法是基于比尔-朗伯定律而建立的。

比尔-朗伯定律表示了物质吸收光的强度与其浓度之间的关系。

根据该定律，当一束单色光通过一定浓度的溶液时，被溶液吸收的光的强度和溶液的浓度成正比，即吸光度与浓度之间存在线性关系。

在分光光度法中，首先需要将要测定的样品转化为溶液，然后通过分光器将一束光分成不同波长的光线（称为光谱）。

接下来，将吸收比较强的光波长选择为测定波长，通过测定溶液对该波长光的吸光度，可以得到溶液中待测物质的浓度。

分光光度法的原理是基于颜色对光的吸收特性的利用。

不同物质对不同波长的光有不同的吸收特性，在特定波长下，吸光度与物质的浓度呈线性关系。

因此，通过分析样品吸收光的强度，再根据已知物质浓度的标准曲线，可以确定样品中待测物质的浓度。

分光光度法的优点是操作简单、灵敏度高且广泛适用于不同种类的化学物质分析。

因此，它在环境监测、食品安全、药物分析等领域得到了广泛应用。

分光光度法云南先锋化工有限公司质量监测中心1、分光光度法引言（1）概念：分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

（是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。

）（2）阐述概念：在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到不同波长相对应的吸收强度。

如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。

利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。

用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。

它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。

上述的紫外光区与可见光区是常用的。

但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。

（3）特点：灵敏度高、精确度高、操作简便、快速。

对于复杂的组分系统，无须分离即可检测出其中所含的微量组分的特点。

（4）波长范围(1)200～400nm的紫外光区，(2)400～760nm的可见光区，(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光区。

2、分光光度法的原理• Lambert 定律：一束单色光在通过透明溶液时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱，若溶液浓度不变，则溶液的厚度越大，光线强度的减弱也越显著，即光吸收的量与溶液的厚度成比例关系。

若以I 0表示入射光强度，I 表示透过光强度，L 表示溶液的厚度，而I/ I 0表示光线透过溶液的程度，称为透光率，用T 表示，则T= I/I 0。

K 为消光系数，在入射波长、溶液种类和温度一定的条件下，K是一个定值。

• Beer 定律：一束单色光在通过透明溶液时，若溶液的厚度不变，则溶液浓度愈高，光线强度的减弱也愈显著，即溶液对光的吸收与溶液的浓度成比例关系。

分光光度分析法基本原理
分光光度分析法是一种常用的光学分析方法，基于分子或离子的吸收、散射、荧光等光学性质来定量分析化学物质的方法。

其基本原理可以归纳为以下几个步骤：
1.样品处理：首先，需要将待测的化学物质转化为可测量的形式。

这可能包括溶解、稀释、提取或反应等一系列的样品处理步骤。

2.光源：分光光度分析法使用一种合适的光源，例如白炽灯、
汞灯或滤光片光源，以产生一定波长范围内的光线。

3.选择光谱范围：根据物质的吸收特性，选择适当的光谱范围
用于测试。

常用的光谱范围包括紫外-可见光谱范围、红外光
谱范围等。

4.样品吸收：将样品吸收测量。

通过光源发出的光经过样品后，被样品中的化学物质吸收。

吸收的程度与待测物质的浓度成正比。

可以使用单光束光度计或双光束光度计进行测量。

5.基线校正：为了减少其他介质的吸收对测量结果的影响，需
要进行基线校正。

通常会测量一个不含待测物质的参比溶液，并将其光谱作为基线进行校正。

6.标准曲线：为了获得待测物质的浓度，需要建立一个标准曲线。

通过测量一系列已知浓度的标准溶液的吸光度，并绘制吸光度和浓度的关系曲线，可以确定未知样品的浓度。

7.结果分析：通过进行吸光度测量、基线校正和标准曲线拟合，可以计算出待测物质的浓度。

总的来说，分光光度分析法基于根据待测物质吸收特性对其进行量化分析。

通过选择合适的光源、光谱范围，进行样品吸收测量，并依靠标准曲线和基线校正，可以得出待测物质的浓度。

分光光度计的使用原理
分光光度计是一种用于测量光的强度和波长的仪器。

它的基本原理是通过光的分光作用将进入仪器的光线分成不同波长的光束，然后利用光的强度来测量样品对不同波长的吸光度。

首先，进入光度计的光线经过一个入射光栅或棱镜，被分解成不同波长的光束。

这些光束被聚焦到一个狭缝上，经过狭缝后形成一条狭窄的光束。

然后，样品被置于光束路径中，光束通过样品时会产生吸收或透射。

光通过样品后，进入一个检测器中。

检测器可以是光电二极管、光电倍增管或光电管等。

当光通过检测器时，会产生一个电信号，其大小与光的强度成正比。

测量过程中，仪器会记录下不同波长下的光的强度对数，即吸光度。

通过测量不同波长下的吸光度，可以得到样品的吸收谱。

根据比尔-朗伯定律，吸光度与样品浓度成正比。

因此，可以
利用分光光度计来测量样品浓度。

为了减小误差，分光光度计通常会进行白光校正和背景校正。

白光校正是通过一个透明样品（如纯水）来调整仪器的零点，以消除仪器自身的漂移。

背景校正则是通过在测量中引入一个未加样品的“空白”溶液，用于纠正样品中其他杂质的影响。

通过上述原理，分光光度计可以广泛应用于化学分析、生物分析、环境监测等领域，用于测量物质的浓度、反应速率等。

分光光度法的原理分光光度法是一种广泛应用于化学分析和生物化学领域的分析方法，它利用物质对光的吸收、散射或透射特性来定量分析物质的含量。

其原理是利用物质对特定波长的光的吸收特性来确定物质的浓度，是一种非常重要的分析方法。

首先，我们来了解一下分光光度法的基本原理。

分光光度法是利用物质对特定波长的光的吸收特性来进行定量分析的一种方法。

当物质处于基态时，它会吸收特定波长的光，使得物质内部的电子跃迁至激发态，这种吸收是有选择性的，只有特定波长的光才能被吸收。

根据比尔-朗伯定律，物质吸收光的强度与物质的浓度成正比，因此可以通过测量吸收光的强度来确定物质的浓度。

其次，分光光度法的原理还涉及到光的衰减规律。

当光通过含有物质的溶液时，部分光会被溶液吸收、散射或透射，导致光的强度减弱。

根据比尔-朗伯定律，溶液中物质的浓度越高，光的衰减越严重，因此可以通过测量衰减后的光强度来确定溶液中物质的浓度。

另外，分光光度法还需要考虑到光的色散效应。

由于不同波长的光在物质中的吸收程度不同，因此需要使用具有一定波长范围的光源，并通过光栅或棱镜将光分解成不同波长的光，然后选择特定波长的光进行测量。

这样可以避免由于光的色散效应而导致的测量误差。

总的来说，分光光度法的原理是基于物质对特定波长光的吸收特性来进行定量分析。

通过测量吸收光的强度、分析光的衰减规律以及考虑光的色散效应，可以准确地确定物质的浓度。

这种分析方法具有灵敏度高、准确性高、操作简便等优点，因此在化学分析和生物化学领域得到了广泛的应用。

在实际应用中，分光光度法可以用于测定各种物质的浓度，如溶液中金属离子、有机物质、生物分子等的含量。

它不仅可以用于定性分析，还可以用于定量分析，具有广泛的应用前景。

综上所述，分光光度法是一种重要的分析方法，其原理基于物质对光的吸收特性来进行定量分析。

通过测量吸收光的强度、分析光的衰减规律以及考虑光的色散效应，可以准确地确定物质的浓度。

这种分析方法具有灵敏度高、准确性高、操作简便等优点，在化学分析和生物化学领域得到了广泛的应用。

分光光度计的原理与使用一、目的要求：1、学会紫外-可见分光光度计的原理和使用方法2、学会测量溶液的浓度.二、实验原理：1、分光光度计原理：分光光度计是目前化验室中使用比较广泛的一种分析仪器,其测定原理是利用物质对光的选择性吸收特性,以较纯的单色光作为入射光,测定物质对光的吸收,从而确定溶液中物质的含量.其特点是灵敏度高；准确度高；测量范围广；在一定条件下,可同时测定水样中两种或两种以上的物质组分含量等.分光光度计按其波长范围可分为可见分光光度计〔工作范围360～800nm〕、紫外-可见分光光度计〔工作范围200～1000nm〕和红外分光光度计〔工作范围760～400000nm〕等.2、在日常使用与维护当中应注意以下几点：第一,在使用仪器前,必须仔细阅读其使用说明书.第二,若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新调零与满度后,再测量.第三,指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上.若不是这种情况,需进行机械调零.第四,操作人员不应轻易触动灯泡与反光镜灯,以免影响光效率.第五,放大器灵敏度换挡后,必须重新调零.第六,比色皿使用时要注意其方向性,并应配套使用,以延长其使用寿命.新的比色皿使用前必须进行配对选择,测定其相对厚度,互相偏差不得超过2%透光度,否则影响测定结果.使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净〔测定有色溶液后,应先用相应的溶剂或〔1+3〕的硝酸进行浸泡,浸泡时间不宜过长,再用蒸馏水冲洗干净〕,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率.第七,比色皿架与比色皿在使用中的正确到位问题.首先,应保证比色皿不倾斜.因为稍许倾斜,就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致,还有可能使入射光不能全部通过样品池,导致测试准确度不符合要求.其次,应保证每次测试时,比色皿架推拉到位.若不到位,将影响到测试值的重复性或准确度.第八,干燥剂的使用问题.干燥剂失效将会导致以下问题：①数显不稳,无法调零或满度.②反射镜发霉或沾污,影响光效率,杂散光增加.因此分光光度计应放置在远离水池等湿度大的地方,并且干燥剂应定期更换或烘烤.第九,分光光度计的放置位置应符合以下条件：避免阳光直射；避免强电场；避免与较大功率的电器设备共电；避开腐蚀性气体等.3、吸光光度法测定溶液浓度原理基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法. 〔1〕光线：光线的波长： 200nm-400nm 紫外线,400-750nm可见光, >750nm 红外线光具有波粒二相性,波长不同,其能量不同.〔2〕物质的吸收光谱与颜色：A．物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱.激发态原子恢复到基态,则释放出特征波长的光子,形成原子发射光谱.不同的溶液其光谱不同,即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同,对某一特定波长的光存在吸收峰. B．可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成,当可见光穿过某一溶液时,由于特定波长的光被吸收而使溶液呈现相应的颜色.〔如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光<600nm>而成蓝色〕不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同. 〔3〕光吸收的基本定律〔Lambert-Beer 定律〕：一束平行单色光〔Io〕通过有色的透明溶液时,一部分的光可以透过溶液〔It〕,另一部分被溶液吸收〔Ia〕,还有一部分被器皿表面反射〔Ir〕,则：Io=It+Ia+Ir .那么,该溶液透光率为: T = It / Io .1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=Ig<Io/It>=Ig<1/T>=k2bk2 为吸光系数,为常数.与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度〔又称光密度O.D 或消光度E〕,当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时,A 与b 成正比.2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:A=lg<Io/It>=Ig<1/T>=k4ck2 为常数.由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时,A 与c 成正比.3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时,A 与b、c 成正比.〔4〕吸光光度法的基本原理：1、不同物质,由于其分子结构和原子组成不同,故对光的吸收光谱不同〔如：CuSO4〕,在测定不同颜色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光,这样测量的灵敏度最高.2、同一种物质,若浓度不同,则对同一波长的入射光的吸收能力〔吸光度〕也不同,且成正比关系.3、应此,利用特定波长的单色光〔通常用最大吸收波长的入射光〕照射不同浓度的某一溶液时,所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系,故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度.〔5〕吸光光度法特点：1．灵敏度高：mg%级、甚至ug%级.2．准确度高：误差2-5%3．操作简便、快速,仪器设备不复杂,价格低廉,故应用广泛.三、实验器材：UV2000分光光度计四、实验步骤〔一〕 UV2000 型分光光度计的使用与注意事项1、插上插头,接通电源,打开暗箱盖,预热20min.* 注意：分光光度计在接通电源而不用时,必须打开暗箱盖,以免光电管老化.2、将准备好的试剂倒入比色杯中,用吸水纸擦去比色杯外侧水珠,并依次放入比色杯架中.* 注意：手拿比色杯毛面,试剂倒入杯中满2/3 即可,不得将比色杯放在仪器上.3、调节所需波长,选择功能至"T".4、调"0"：放入挡光板,按调"0"键调节.5、调"100%"：取出挡光板,盖上暗箱盖,调"100%",让光线通过"空白管".6、重复调"0"和调"100%"数次.7、将选择键由"T"调至"A",此时读数应由"100"至"0",若不为"0",可用"0%"键调节.8、拉动拉杆,分别读取"A 标"和"A 样".9、取出比色杯,弃去溶液,洗净晾干,备用.〔二〕计算1．利用标准管计算测定物含量：A 样=K 样b 样c 样A 标=K 标b 标c 标因为入射光的波长,溶液性质和温度以与比色杯的厚度都一样,即：K 样=K 标 b 样=b 标所以：A 样/ A 标= c 样/ c 标得：c 样= c 标×A 样/ A 标2．利用标准曲线进行计算：3．偏离Lambert-Beer 定律的原因1〕由于非但色光引起的偏离.2〕由于溶液本身原因引起的偏离：①由于介质不均匀引起的偏离②由于溶液中化学反应引起的偏离浓度的测定〔三〕CuSO4比色波长=650nm按上述操作步骤测定硫酸铜溶液A 样和A 标,按下式计算样品浓度：C 样 = C 标 * A 样 / A 标五、结果与思考1、如果用标准曲线法测定硫酸铜溶液浓度,该如何设计实验？2、分光光度计的维护要注意什么？3、比较各种分光光度计的使用范围.。

分光光度法的原理分光光度法是一种用于测定溶液中物质浓度的分析方法，其原理基于溶液中物质对特定波长的光的吸收特性。

通过测量溶液对光的吸收程度，可以推断出其中物质的浓度，从而实现对溶液中物质含量的定量分析。

在进行分光光度法测定时，首先需要选择一种适合的光源，通常会选择具有单一波长的光源，如汞灯、钠灯或氖灯等。

然后，将光源发出的光线通过准直器和单色器，使其变成单一波长的单色光，再通过样品室中的溶液，溶液中的物质会吸收特定波长的光，其吸收程度与溶液中物质的浓度成正比。

最后，通过光电检测器测量透过样品室的光的强度，根据光的吸收程度可以计算出溶液中物质的浓度。

分光光度法的原理简单清晰，测定精度高，操作方便快捷，因此在实际应用中得到了广泛的应用。

在环境监测、生物医学、食品安全等领域，分光光度法都发挥着重要作用。

例如，在环境监测中，可以利用分光光度法测定水体中有机物、重金属离子等的浓度，从而评估水质的污染程度；在生物医学领域，可以利用分光光度法测定血液中的葡萄糖、蛋白质等物质的浓度，用于疾病诊断和治疗监测；在食品安全领域，可以利用分光光度法测定食品中的添加剂、农药残留等有害物质的含量，保障食品安全。

当然，分光光度法也存在一些局限性，例如在样品中存在多种吸收波长相近的物质时，会造成测定的误差；另外，在测定高浓度样品时，也会受到吸收饱和的影响。

因此，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的分光光度法测定条件，以确保测定结果的准确性和可靠性。

总之，分光光度法作为一种重要的分析方法，具有测定精度高、操作简便、应用广泛等优点，对于溶液中物质浓度的测定具有重要意义。

在今后的实验和工作中，我们可以根据具体情况选择合适的分光光度法测定条件，灵活运用这一分析方法，为科研和生产工作提供可靠的数据支持。

分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法1、引言1.1 本文档旨在介绍分光光度计的使用原理及操作方法，以便读者能够正确并有效地操作分光光度计。

2、分光光度计的原理2.1 光的特性2.1.1 光的波粒二象性2.1.2 光的频率和波长2.1.3 光的传播速度2.2 光的吸收和透射2.2.1 原子、分子和离子的能级2.2.2 原子、分子和离子的吸收和透射2.3 分光光度计的工作原理2.3.1 光源和单色器2.3.2 样品室和探测器2.3.3 数据处理和显示3、分光光度计的操作方法3.1 仪器准备3.1.1 确保光源和单色器正常工作 3.1.2 清洁样品室和探测器3.2 样品的处理3.2.1 准备待测样品3.2.2 设置参比样品3.3 测量操作3.3.1 设置光强度和波长范围3.3.2 执行空白测量3.3.3 执行样品测量3.4 数据处理3.4.1 计算吸光度3.4.2 绘制吸光度-波长曲线3.4.3 分析实验结果4、附件本文档不包含附件内容。

5、法律名词及注释5.1 光的波粒二象性：光既可以像波一样传播也可以像粒子一样进行相互作用5.2 光的频率和波长：光的频率和波长是决定光的颜色和能量的两个重要参数5.3 光的传播速度：光在真空中的传播速度为光速，约为每秒30万公里5.4 光的吸收和透射：光在物质中的传播过程中，有一部分能量被物质吸收，另一部分能量透过物质5.5 原子、分子和离子的能级：原子、分子和离子在能级上存在能量差距5.6 原子、分子和离子的吸收和透射：原子、分子和离子在特定波长的光作用下，会发生吸收或透射5.7 光源和单色器：分光光度计使用特定光源和单色器来产生特定波长的光5.8样品室和探测器：样品室用于容纳待测样品和参比样品，探测器用于测量吸收光强度5.9数据处理和显示：分光光度计将测量到的数据进行数字化处理并显示出来。

分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法⒈ Introduction分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测量物质对光的吸收和透过性。

本文将详细介绍分光光度计的工作原理及操作方法。

⒉原理⑴光的传播在分光光度计中，光源发出的光经过准直系统，通过进样口进入样品池。

光在样品池中被样品吸收或透过，并进入光电探测器。

探测器测量光的强度，通过计算得出样品的吸光度。

⑵吸光度测量原理光的吸光度（A）与样品的浓度（C）和摩尔吸光系数（ε）有关。

Beers定律表明吸光度与样品的吸收光程（b）和摩尔吸光系数（ε）之间存在线性关系，即A = εbC。

根据Beers定律，可以通过测量吸光度来确定样品的浓度。

⒊仪器组成及操作方法⑴仪器组成分光光度计由以下几个主要部件组成：光源，准直系统，进样口，样品池，光电探测器以及数显仪表等。

详细的仪器组成如下：⒊⑴光源：光源是分光光度计的核心部件，常用的光源有白炽灯、钨丝灯和氘灯等。

⒊⑵准直系统：准直系统用于使光线均匀、平行进入样品池。

⒊⑶进样口：进样口用于将待测样品引入样品池。

⒊⑷样品池：样品池是存放样品的容器，可以是玻璃或石英制成。

⒊⑸光电探测器：光电探测器用于测量光的强度，通常采用光电二极管或光敏二极管等。

⒊⑹数显仪表：数显仪表用于显示测量结果，包括吸光度、波长等。

⑵操作方法⒊⑴打开仪器电源，并预热一定时间，确保仪器处于正常工作状态。

⒊⑵调节仪器的参比光强度，使其达到最佳状态。

⒊⑶将样品放入样品池中，并选择所需测量的波长。

⒊⑷调节仪器的零点，使吸光度为零。

⒊⑸启动测量，记录吸光度和相关信息。

⒊⑹根据需要，可以进行多次测量和平均值计算，以提高测量结果的准确性。

⒋附件在本文档中未涉及附件。

⒌法律名词及注释⑴ Beers定律：一种描述溶液光学吸收规律的定律。

根据Beers定律，溶液的吸光度与溶液中溶质浓度和样品光程之间存在线性关系。

⑵摩尔吸光系数：摩尔吸光系数是一种物质对光的吸收能力的定量指标，通常用ε表示。