少突胶质前体细胞缺血缺氧损伤模型的建立

清除率是碱性尿时的!"#倍$尿流量大时对美金胺的清除率高%提示应用美金胺时$尽量避免能够改变尿液&’值的一些饮食习惯$可更好发挥其治疗效应$而减少副反应的发生()*+%综上所述$鉴于美金胺作为治疗帕金森病的首选药物已在欧洲广泛应用),余年$罕见副作用报道()-+$同时$美金胺作为低亲和力的非竞争性./01受体拮抗剂$又具有良好的神经保护作用$因此$对今后作为治疗新生儿缺氧缺血脑损伤无疑具有潜在的重要意义%但目前对美金胺的安全性和有效性的研究$仅限于成年动物实验和成人的临床实验$有关美金胺对新生动物脑缺氧缺血性损伤的保护作用及其可能的毒副作用$尚有待进一步研究%随着美金胺在新生动物脑缺氧缺血损伤方面的研究不断深入$有关美金胺用于新生儿缺氧缺血性脑损伤的临床治疗必将有所突破%(参考文献+()+122345678$9:;65<267=$/>22670$?@A B C ./0176:6&D E 7:;474:D 675F 4D 5E G 4G H I J <J G 5D 6K &76I I 5E G 5G 74D :J 2D J 76H L 6I 6G :6&;425:G 6J 7E G 6I (M +C N 7M=;47L 4:E 2$)O O O $)P Q R )S T )P )")U ,C(P +V E W 73J 2J W 1$X 5G I Y $8E <4G E 32J9$?@A B C Z 6H J :D 5E GE [6H 6L 44G H5G [47:D 5E G <\L 6L 4G D 5G 64G H /X ]#,)4[D 67[E :42:676<7425I :;6L 544G H76&67[J I 5E G5G74D (M +C 1:D 4.6J 7E :;57$P ,,,$)-P R ))S T )P #!")P O P C(U +N 76I 5G ^_$N 6G ^6Y 1$8E 226D D ‘M $?@A B C a [[6:D I E [L 6L 4G D 5G 6E G76:E L <5G 4G D74D./0176:6&D E 7I6K &76I I 6H 5G ’a X P O U :622I (M +C N 7M =;47L 4:E 2$)O O Q $))O R P S T )O *"P ,-C (-+N 24G &56H Y 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),万方数据要作用!少突胶质细胞的前体细胞主要来源于前脑脑室下区"#$%&’()!依据抗原表达*形态和功能+少突胶质细胞系可分为先祖细胞*早期少突胶质祖细胞*晚期少突胶质祖细胞*未成熟少突胶质细胞*成熟少突胶质细胞+共,个发育阶段!二*少突胶质细胞的缺氧缺血损伤(-少突胶质细胞成熟依赖的易损性.少突胶质细胞几乎和神经元一样对缺氧缺血敏感+其对缺氧缺血的易损性与细胞成熟程度有关!实验证实+晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞在缺血启动后迅速死亡+平均死亡时间和死亡百分数显著高于成熟少突胶质细胞"/01-11(&+对缺血的敏感性高于以往所检测的任何中枢神经系统细胞+包括神经元’2)!晚期少突胶质祖细胞对缺氧缺血的敏感性高于未成熟少突胶质细胞!这两种对缺氧缺血最敏感的少突胶质细胞是胚胎后期少突胶质细胞系的主要组成部分!早期少突胶质祖细胞和成熟少突胶质细胞对缺氧缺血较为耐受’3)!2-少突胶质细胞缺氧缺血损伤.在大鼠缺氧缺血模型中+#$%的神经干细胞及少突胶质祖细胞死亡+造成慢性白质少突胶质细胞衰竭+髓鞘形成不良!顶叶皮层*皮质下白质*脑室周围白质*胼胝体等部位均有明显少突胶质细胞死亡+随后胼胝体变薄+脑室扩大+增生的星形胶质细胞取代脑室周围白质中少突胶质细胞’(+34,)!细胞死亡的电镜分析显示+缺氧缺血后56以坏死为主+54256脑室周围白质受损少突胶质细胞由早期坏死过渡到具有坏死*凋亡两种形态特征的混合性细胞死亡+再到经典的凋亡’5)!缺氧缺血后(26#$%中以混合性细胞死亡为主+至256发现典型的凋亡细胞’()!但有学者发现缺氧缺血后3456缺血侧#$%*胼胝体中凋亡细胞高于对侧’,)!损伤区周围有少突胶质细胞反应性增生+可能参与修复过程’3)!三*少突胶质细胞缺氧缺血损伤机制(-少突胶质细胞兴奋毒性损伤.兴奋毒性指以谷氨酸受体"789:;&为主的兴奋性神经递质受体过度活化引起的神经细胞死亡!少突胶质细胞表达的789:;主要是非<=>?@789:;"?=A?和B C D E C F G受体&!缺氧缺血时轴突和神经胶质释放谷氨酸"789&!通常认为+从神经末梢释放出789清除和失活的唯一途径是通过位于突触前膜和神经胶质细胞膜上的兴奋性氨基酸转运体"H??I&的摄取而实现的!H??I 对789的摄取顺<C J浓度梯度进行+是<C J依赖的耗能过程!缺氧缺血使能量供应受阻+加上强烈去极化反应使脑内<C J浓度急剧增高+最终可造成789顺胞内<C J逆向转运+从胞内排向胞外’2)!局部789浓度显著增加使?=A?KB C D E C F G受体过度活化介导L C2J内流+导致细胞内L C2J超载+同时消耗谷胱苷肽并活化L@M9E<@F G N O D E C8B D E C;G"M<P&*L C;Q C;G@3*钙激活蛋白酶引起少突胶质细胞死亡’R)!兴奋毒性可同时引起细胞坏死和凋亡!2-氧自由基导致的少突胶质细胞损伤.脑缺血产生大量氧自由基"S T:&并造成少突胶质细胞损伤!少突胶质细胞对S T:损伤高度敏感!与星形胶质细胞和神经元相比+少突胶质细胞中含有丰富的铁和铁蛋白+而还原型谷胱苷肽含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性低!一方面少突胶质细胞中的铁蛋白和转铁蛋白可作为铁螯合剂和抗氧化物保护细胞U另一方面+少突胶质细胞缺氧缺血+促使铁蛋白和转铁蛋白释放铁+通过V G E F W E反应和X C Y G N@ZG D;;反应产生大量S T:+引发脂质过氧化"[A S&!还原型谷胱苷肽在S T:清除中起关键性作用!过氧化物由谷胱苷肽过氧化物酶清除’\+])!由于少突胶质细胞内铁含量高+清除自由基能力弱且显著依赖于氧化磷酸化+少突胶质细胞更易受到氧化应激损伤!由此引发的链式脂质过氧化反应损伤细胞膜和线粒体膜+而产生的脂质过氧化物和细胞毒性副产品5@6^_N W‘^E W E G E C8等+对轴突和少突胶质细胞也具有毒性!X W88G E;a W N F6等认为氧化应激还可能损伤线粒体><?+从而增加L^F@b释放+激活b C;Q C;G@ c+启动凋亡反应’c)!3-线粒体损伤与少突胶质细胞损伤.缺血条件下+胞浆内L C2J浓度升高+线粒体从胞浆摄取L C2J+以避免胞浆L C2J 过高造成细胞损害!高浓度L C2J可损害线粒体功能+使氧化磷酸化效率降低+?I A合成减少+而线粒体钙释放过程是耗能过程!线粒体呼吸功能障碍和?I A耗竭加速和促进L C2J 浓度增加并活化L C2J依赖性蛋白水解酶系统如b C8Q C D E;! L C8Q C D E;可激活b C;Q C;G;+相反b C;Q C;G;可通过剪切内源性蛋白水解酶抑制剂b C8Q C;F C F D E来激活b C8Q C D E;!两类蛋白酶都能引起线粒体渗透性转运的发生并灭活L C2J顺序性运转系统+从而循环增加L C2J浓度和活化L C2J依赖性蛋白水解酶!同时+L C2J过量*氧化应激使线粒体通透性改变"A I&+发生不可逆性损伤+能量来源完全丧失+线粒体膜间腔内的多种潜在有害蛋白释放至胞浆+包括b C;Q C;G前体+b C;Q C;G激活剂L d F@b+具有裂解><?能力的凋亡诱导因子"?e T&*核酸内切酶7等+诱导细胞死亡U线粒体释放其积聚的L C2J+使脑浆L C2J剧烈升高+激活胞浆内各种蛋白水解酶和磷酯酶+促使细胞死亡’c+(1)!5-b C;Q C;G;与少突胶质细胞损伤.b C;Q C;G;是一组天门冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶+属e L H蛋白酶家族+被激活后发生连续的级朕反应+导致凋亡发生!缺氧后少突胶质细胞中有b C;Q C;G@3活化+但其活化程度低于神经元!肌动蛋白"?b F D E&是一种主要的细胞骨架蛋白+经b C;Q C;G@3介导裂解为肌动蛋白碎片"V N C b F D E&+缺氧缺血后大量固缩晚期少突胶质祖细胞有明显V N C b F D E标记+提示b C;Q C;G@3参与少突胶质细胞缺氧缺血损伤’3)!b C;Q C;G@((是b C;Q C;G@(和b C;Q C;G@3活化的一种启始因子+在少突胶质细胞缺氧缺血损伤中起着关键的作用’(()!,-小胶质细胞*巨噬细胞活化与少突胶质细胞损伤.脑缺氧缺血后+小胶质细胞*巨噬细胞被激活+它们通过释放一系列潜在的神经毒性物质和炎性因子+如S T:*789*一氧化氮"<S&*肿瘤坏死因于@f"I<T@f&等+造成少突胶质细胞损伤!同时+活化的小胶质细胞吞噬死亡神经细胞残骸和变性突触+分泌多种神经营养因子+并表达细胞调亡的负调控因子Y b(@2+发挥神经保护作用’,+(2)!脑缺血后小胶质细胞*巨噬细胞活化的确切作用尚待进一步研究!g(3]g实用儿科临床杂志2113年(1月第(]卷第(1期hi j j k l k m n/o p m q r s+t u r v w o s2113+x v k-(]yv-(1万方数据!"少突胶质细胞成熟依赖的易损性机制#前面已提到$不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的易损性不同%晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损%这种成熟依赖的易损性机制还不太清楚%近来&’(’)*(+等研究发现$,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中短暂上调可能与此有关%,-.,受体在非5-6,受体介导的兴奋毒性损伤中起主要作用%但并非所有,-.,受体均能介导7’89内流%/0*1: ;4是组成,-.,受体的4种亚单位%缺乏/0*18亚单位的,-.,受体对7’89具有通透性%/0*1:在各阶段的少突胶质细胞中表达极低</0*18表达稳定</0*12在早期少突胶质祖细胞中发达最高$随后逐渐下降</0*14在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中表达最高$发育为成熟少突胶质细胞后逐渐降低%离体培养的各期少突胶质细胞经/0*18抗体处理后$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14剩余最多%如果,-.,受体的各种亚单位随机组合$在晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中形成无/0*18亚单位受体的数量最多%此外$少突胶质细胞中含有/1=.$帮助/0*18和/0*12在,-.,受体中组装%因此$/0*14对于7’89通透的,-.,受体可能更为重要%实验发现$早期少突胶质祖细胞,-.,受体的7’89电导高于晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞$但由于后者浆膜表面积约为前者8倍$通过,-.,受体的总7’89流明显高于前者%由于,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达短暂上调和较高的总7’89流$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞对缺氧缺血更具易损性%而先祖细胞的,-.,受体几乎均表达/0*18亚单位$对7’89不通透%与少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞相比$成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14表达下降$,-.,受体7’89电导明显降低$所以对缺氧缺血更为耐受>:2?%此外$离体实验证实$少突胶质细胞对氧化应激的易损性也是成熟依赖的>:4?%总之$缺氧缺血后通过兴奋毒性3氧化应激及一系列级联反应造成少突胶质细胞死亡%阐明脑缺氧缺血后少突胶质细胞损伤机制将为脑缺氧缺血相关疾病的治疗提供新思路%四3药物治疗脑缺氧缺血实验显示$非@5-6,受体拮抗剂75A B或5C A B3谷氨酸逆向转运抑制剂6D,3钙离子拮抗剂3自由基清除剂3E’F G’F H@2抑制剂6I J6@7K L3E’0G’+M抑制剂.6:N O!O!等可明显减轻脑缺氧缺血后少突胶质细胞的损伤$离体实验显示去铁敏可减轻过氧化氢引起的少突胶质细胞损伤>8$!$:N?%>参考文献?>:?P H Q+F R M S T$1R U V F U H+M1.$1R W’M(R-X$Y Z[\"K)G R]+’^+F E V H W+’_H G0H U H FU V H‘’UG H‘+M’U’0F*a Q H M U‘+E*0’‘b R M H R cR0+d R_H M_‘R E)U HG‘R d H M+U R‘F’M_M H*‘’0F U H W E H00F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#824;84g">8?h H‘M1$-R i00H‘&"1’G+_+F E V H W+EE H00_H’U V+M+W W’U*‘H R0+d R_H M_‘R E)U H F#’c’U’0d0*U’W’U H‘H0H’F H c H H_a’E(0R R G>X?"X5H*‘R F E+$8O O O$8O e:f#24;48">2?C’E(S,$K’MC K$P*R5P$Y Z[\"S H0H E U+Q H Q*0M H‘’a+0+U)R c0’U H R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F U R V)G R]+’@+F E V H W+’>X?"X5H*‘R F E+$8O O8$88e8f#4N N;4!2">4?5H F F X D$1R W’M(R-X$1R U V F U H+M1.$Y Z[\".H‘+M’U’0V)G R]+’@ +F E V H W+’+M_*E H F’G R G U R U+E’M_H]E+U R U R]+E_H’U V R cG H‘+Q H M U‘+E*0’‘j V+U H W’U U H‘R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#8O2;8O k">N?7’+l$.’M dm$B+’Rh$Y Z[\"7V‘R M+E+F E V H W+’G‘H c H‘H M U+’00) E’*F 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PEDIATRICS年，卷(期)：2003,18(10)被引用次数：10次参考文献(14条)1.Levison SW;Rothstein RP;Romanko MJ Hypoxia/ischemia depletes the rat perinatal subventricular zone of oligodendrocyte progenitors and neural stem cells[外文期刊] 2001(03)2.Fern R;Mller T Rapid ischemic cell death in immature oligodendrocytes:a fatal glutamate release feedback loop 2000(01)3.Back SA;Han BH;Luo NL Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia-ischemia 2002(02)4.Ness JK;Romanko MJ;Rothstein RP Perinatal hypoxia-ischemia induces apoptotic and excitotoxic death of periventricular white matter oligodendrocyte progenitors[外文期刊] 2001(03)5.Cai Z;Pang Y;Xiao F Chronic ischemia preferentially causes white matter injury in neonatal rat brain[外文期刊] 2001(01)6.Liu HN;Giasson BI;Mushynski WE AMPA receptor-mediated toxicity in oligodendrocyte progenitors involves free radical generation and activation of JNK,calpain and caspase 3[外文期刊] 2002(02)7.Juurlink BH Response of glial cells to ischemia:roles of reactive.oxygen species and glutathione [外文期刊] 1997(02)8.Juurlink BH;Thorbume SK;Hertz L Peroxide-scavenging deficit underlies oligodendrocyte susceptibility to oxidative stress[外文期刊] 1998(04)9.Hollensworth SB;Shen C;Sim JE Glial cell type-specific responses to menadione-induced oxidative stress[外文期刊] 2000(08)10.Ravagnan L;Roumier T;Kroemer G Mitochondria,the killer organelles and their weapons[外文期刊] 2002(02)11.Shibata M;Hisahara S;Hara H Caspases determine the vulnerability of oligodendrocytes in the ischemic brain[外文期刊] 2000(05)12.Jamin N;Junier MP;Grannec G Two temporal stages of oligodendrogliaI response to excitotoxic lesion in the gray matter of the adult rat brain[外文期刊] 2001(1)13.Itoh T;Beesley J;Itoh A AMPA glutamate receptor-mediated calcium signaling is transiently enhanced during development of oligodendrocytes[外文期刊] 2002(02)14.Back SA;Gan X;Li Y Maturation-dependent vulnerability of oligodendrocytes to oxidative stress-induced death caused by glutathione depletion 1998(16)本文读者也读过(10条)1.王梅.王友群缺血引发的脑损伤发病学机理[期刊论文]-中国实用医药2008,3(25)2.卓名.陈鸿莲.蔡娜丽.张振英.叶国杰.ZHUO Ming.CHEN Hong-lian.CAI Na-li.ZHANG Zhen-ying.YE Guo-jie 黄芪注射液对新生儿缺氧缺血性脑病的临床与免疫学机制研究[期刊论文]-中国中西医结合急救杂志2008,15(1)3.孙莉.张昱.邹昕颖.金涛.吴江.姚丽芬慢性前脑缺血致痴呆大鼠皮质及皮质下白质区病理学变化的对比研究[期刊论文]-中风与神经疾病杂志2004,21(5)4.陈春富.郭述苏脑缺血缺氧后少突胶质细胞损伤[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(2)5.王斌.李敏.侯建平.张恩户基于多靶标调控策略的中医药防治脑缺血炎性损伤机制研究[会议论文]-20096.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑白质选择性缺血损伤的机制[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2001,9(6)7.赵金辉.赵娟.刘敬.贺继雯.王琪.ZHAO Jin-hui.ZHAO Juan.LIU Jing.HE Ji-wen.WANG Qi血浆渗透压、血气、血糖变化与早产儿脑室周围-脑室内出血的相关性[期刊论文]-实用儿科临床杂志2005,20(2)8.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑缺血后白质保护的研究进展[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(1)9.唐康.张均田脑缺血损伤机制和治疗策略研究进展[期刊论文]-中国新药杂志2000,9(12)10.常明则.王新来.吴海琴.赵英贤慢性脑缺血痴呆大鼠额叶细胞凋亡的研究[期刊论文]-疑难病杂志2008,7(11)引证文献(10条)1.马金凤.林宏华.刘维民.吴成.阮珊三早产儿脑室周围-脑室内出血的临床相关因素分析[期刊论文]-安徽医科大学学报 2009(5)2.徐翠琼.张奇.邵红.费世暖.黄佩脑活素及血活素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察[期刊论文]-时珍国医国药 2004(9)3.黄金芳.梁凤华.彭间英早产儿脑室内出血原因分析及护理[期刊论文]-中国保健营养（中旬刊） 2012(6)4.闫晋.贾雁平.陈欣早产儿脑室内出血相关因素分析及护理[期刊论文]-中国实用护理杂志 2009(24)5.潘广赉.杨明.莫坤梅.李文仲床旁彩超对早产儿脑室内出血的诊断价值[期刊论文]-齐齐哈尔医学院学报2009(10)6.卢昌福早产儿室内出血的临床分析及防治[期刊论文]-中国医药导报 2008(20)7.李晋辉.母得志.李德渊.夏斌.熊英早产儿脑室内出血的相关因素[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2007(2)8.谢学军.杨红.何宇.王毅.肖丹补肾活血中药对糖尿病大鼠视路胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白表达的影响[期刊论文]-中国中医眼科杂志 2007(5)9.杨友.陈惠金.钱龙华.蒋明华.陈冠仪血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1合成的影响[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2004(2)10.彭小明.高喜容.孙正香.胡月圆.张榕早产儿重度脑室周围-脑室内出血临床高危因素分析[期刊论文]-中国新生儿科杂志 2011(6)引用本文格式：王丽雁.赵聪敏脑缺氧缺血时少突胶质细胞损伤的机制[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2003(10)。

新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定【摘要】［目的］探讨新生（spraguedaley,SD）大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离，以获得纯化的少突胶质前体细胞，为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞。

［方法］出生48hSD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养，原代培养第9～10d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，继续用定向培养基传代培养。

相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况，免疫细胞化学技术进行细胞鉴定。

［结果］混合胶质细胞原代培养第9～10d时出现明显的细胞分层，少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面，胞体呈椭圆形或圆形，具有典型的双极突起，少数呈三极突起。

经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95％，少突胶质细胞特异性标记lig2反应阳性，胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性。

［结论］新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段，细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞。

【关键词】少突胶质前体细胞;细胞培养；脱髓鞘化；脊髓损伤Keyrds：ligdendrytepreursrell;ellulture;deyelinatin;spinalrdinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤，可以造成患者严重的神经功能损害。

目前，临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。

随着研究深入，人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。

脊髓损伤不仅导致神经元丢失，同时还造成大量少突胶质细胞的死亡，从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变，进一步影响了脊髓神经功能的恢复。

近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤，有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化，促进损伤脊髓的神经功能恢复［1,2］。

研究表明，少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突，同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突生长等作用［3］。

此外，少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞，既能够定向分化为成熟少突胶质细胞，同时又具有一定的增殖与迁移能力［4］，更加适合于细胞移植治疗。

体外少突胶质细胞培养的新方法翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【摘要】目的探讨小鼠鼠婴大脑皮质体外少突胶质细胞培养的新方法.方法取C57/BL6新生小鼠P0～P2(出生后0～2天)的大脑皮质,accummax室温消化10min,然后用含10％ FBS的DMEM/F-12高糖培养基体外培养,培养至第7天时,运用巴氏管吹打,从混合培养的细胞中分离纯化少突胶质前体细胞,然后加入促分化培养基促使少突胶质前体细胞分化发育成熟,行细胞免疫荧光进行鉴定.结果少突胶质前体细胞纯度较高,达到93.3％左右.加入促分化培养基后,少突胶质前体细胞可快速分化发育成熟.结论该体外少突胶质细胞培养方法较简单,细胞纯度及产量高,对临床脱髓鞘疾病的研究具有很大的应用价值.%Objective To explore a new method for oligodendrocyte cell culture from neonatal mouse cerebral cortex in vitro.Methods We selected P0-P2 (0-2 days after birth) cerebral cortex from C57/BL6 neonatal mice,and digested the tissue at room temperature for 10 minutes through accummax,then used DMEM/F-12 medium with high glucose containing 10％ FBS to culture the mixed cells in vitro.After the celles being cultured for 7 days,we used pap tube for pipetting,and purified oligodendrocyte precursor cell (OPCs) from mixed cultured cells.Finally,with oligodendrocyte differentiation medium to promote oligodendrocyte differentiation and maturation,cell lines were identified by immunofluorescence.Results Our approach produced a high yield of purified OPCs,which was about 93.3％.The oligodendrocyte differentiation medium promoted oligodendrocyte differentiation and maturation quickly,when it was added.Conclusion The new method foroligodendrocyte cell culture in vitro is relatively simple with high purity and can produce a high yield of OPCs,which is of great value for clinical demyelinated diseases.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)004【总页数】4页(P48-51)【关键词】少突胶质细胞前体细胞;纯化;增殖;分化【作者】翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【作者单位】430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R74;R3少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)髓鞘形成细胞。

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，它的主要功能是产生髓鞘包绕神经轴突，维持神经冲动沿轴突跳跃性传导；另外它还分泌多种神经营养因子，支持神经元的生长与存活[1]。

少突胶质前体细胞（oligodendrocyte pre-cursor cells，OPCs）是处于分化早期阶段的未成熟细胞，具有良好的增殖能力，能在体内增殖、迁移，最后分化为成熟少突胶质细胞并为髓鞘形成发挥重要作用。

高纯度OPCs 的制备、培养是一切研究工作的基础，目前，国内外对大鼠OPCs的培养报道很多，有关小鼠OPCs的培养方法及研究报道还比较少，本文参照国内外文献报道的新生大鼠OPCs的培养方法[2-3]，探索小鼠OPCs的培养及鉴定，并研究重组巨噬细胞移动抑制因子（rMIF）对其增殖活性的影响，为进一步深入研究其发育、分化以及移植治疗脊髓损伤等奠定基础。

少突胶质前体细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用研究段朝霞1，2张洁元1，2陈魁君1，2王建民1、2李兵仓1，21.创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室，重庆400042；2.第三军医大学野战外科研究所六室，重庆400042[摘要]目的少突胶质细胞是中枢神经系统的重要组成部分。

本文探讨获取小鼠高纯度少突胶质前体细胞系的培养及鉴定方法，以及巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对其增殖活性的调节。

方法取新生（0~2d）C57B6小鼠的大脑皮层进行混合胶质细胞培养，在9~10d时采用振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，然后用添加了神经营养因子（N2）、血小板衍生生长因子-AA（PDGF-AA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养基培养。

倒置显微镜下每天观察细胞的生长情况，免疫荧光法对表面抗原进行细胞鉴定。

然后按104个细胞/孔加入96孔板培养，细胞70%~80%融合时用不同浓度MIF处理细胞，48h后用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖程度。

结果获得纯度90%以上少突胶质前体细胞（OPCs），少突胶质前体细胞NG2及血小板衍生生长因子受体（PDGFR）抗体阳性；胶质细丝酸性蛋白（GFAP）及髓鞘碱性蛋白（MBP）均为阴性。

张巧巧 范荣珍 河北科技大学化学与制药工程学院，【摘要】缺血性脑损伤是世界范围内引起高致死率、I/R）损伤是由于缺血缺氧区域的血流再灌注引起一系列级联反应。

线粒体功能障碍一直被认为是缺血再灌注诱导的神经元死亡的标志之一。

脑缺血后线粒体从星形胶质细胞向受损伤的神经元转移会启动内源性神经保护机制，从而为神经元提供能量的支持。

本文分析讨论了线粒体在缺血性脑损伤的病理状态下的研究进展，损伤对线粒体自噬和线粒体动力学的影响，的作用以及线粒体在细胞间转移途径和机制，【关键词】缺血性脑损伤；【中图分类号】缺血性脑损伤是一种严重的神经内科系统疾病，在我国致死率是第二位的，致残率是第一位的［1］。

缺血性脑损伤的发病机制非常复杂，血管堵塞会引起细胞或者分子的损伤并伴随大量兴奋性谷氨酸的释放、钙离子的超载，造成神经炎症、神经再生和血管的重构。

美国FDA批准的药物溶栓剂阿替普酶溶栓治疗使大脑恢复血供或再灌注是治疗脑缺血最有效的方法，虽然恢复血流（再灌注）对于挽救缺血组织至关重要，但会加剧缺血区神经元结构和功能的损伤，造成缺血再灌注损伤［2］。

其它针对不同靶点的神经保护剂在临床试验阶段的失败也归因于缺血性脑损伤疾病机制的复杂和矛盾性，故寻找更好的治疗方法仍然是我们要努力的目标［3］。

线粒体最重要的功能之一是参与能量代谢［4］。

因此，线粒体提供足够的能量对于细胞的兴奋和存活至关重要。

脑缺血会引起线粒体的结构和功能损害，表现为线粒体肿胀、膜电位下降、能量合成障碍以及线粒体凋亡途径激活等，最终对细胞造成不可逆转的伤害并导致神经细胞死亡［5］。

除了基本的能量供应，线粒体还在动力学和线粒体自噬等质量控制方面起着重要作用。

线粒体功能障碍被认为是缺血再灌注损伤诱导神经元死亡的标志之一。

近年来，不同细胞类型间的细胞间线粒体转移已被广泛研究，并被认为是一种潜在的治疗方法［6］。

在这篇综述中，我们将讨论目前关于线粒体在脑缺血中治疗的进展，强调关于线粒体质量控制的关键内容以及最近关于急性缺血性脑损伤线粒体转移的途径和机制。

早产儿缺氧缺血性脑病诊治与预后最新指南要点新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)在足月儿中诊断标准明确，但在早产儿中，HIE的定义、临床病程、治疗及预后情况都更为复杂，目前仅少数研究探讨了早产儿HIE的诊治，但纳入对象及研究结果存在明显异质性。

因"医疗警讯事件"的原因，早产儿HIE 发生率可能比目前文献报道更高，且与足月儿相比，其病程更复杂、神经发育伤残率更高。

本文旨在阐明早产儿HIE的病因、病理、临床特点，探讨其诊断标准及治疗措施，以期促进将来研究设计以及神经保护策略的实施，从而改善早产儿HIE的预后。

近年来，围产医学不断发展，早产儿存活率显著提高，然而脑损伤问题仍未得到有效解决，以脑室周围白质软化为代表的脑白质损伤是早产儿脑损伤最经典的神经病理学改变[1]。

新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)在足月儿中定义明确，系因围产期缺氧窒息导致的脑缺氧缺血性损害，包括特征性的神经病理及病理生理过程，并在临床上出现一系列脑病表现。

足月儿HIE诊断标准明确，神经系统发育监测和结局评估也相对标准化。

早产儿因围产期大多接受密切监测，若发现明显宫内窘迫则需立即处理，基于如上"医疗警讯事件"原因，既往很少诊断早产儿HIE。

然而，当缺氧、感染、炎症、低血糖等多因素协同作用时，单个因素在早产儿脑损伤中的作用就复杂起来。

因此，早产儿HIE可能未得到很好的识别与监测。

本文旨在阐明缺氧缺血在早产儿复杂脑损伤过程中的作用，并在目前对其特有病理过程及临床表现认识基础上，探讨适用于早产儿的HIE诊断标准及治疗方案。

一、早产儿HIE发病率现有报道早产儿HIE发病率和流行病学的研究甚少，研究示其发病率为1.3/1 000～9/1 000不等，不同研究中纳入对象存在显著异质性，且研究样本量均较小。

・论著・茶多酚对脑缺血大鼠脑内少突胶质细胞的影响陈应柱,田野,张志琳,包仕尧 【摘要】　目的　观察茶多酚对脑缺血大鼠脑内少突胶质细胞(OLG )的影响。

方法　将雄性S D 大鼠随机分为假手术组、对照组、茶多酚组。

制备全脑缺血模型后,茶多酚组大鼠被分为3组分别按剂量25mg/kg 、50mg/kg 、100mg/kg 茶多酚予以腹腔注射,每日1次,连续7d;免疫组化法检测各组大鼠皮质前体OLG 、未成熟OLG 及成熟OLG 的变化。

结果　与假手术组比较,对照组皮质前体OLG 明显增多,未成熟OLG 及成熟OLG 明显减少(均P <0105);与对照组比较,茶多酚干预后皮质前体OLG 有不同程度的减少,未成熟OLG 及成熟OLG 则有不同程度的增加,差异有统计学意义(25mg/kg 、100mg/kg,均P <0105;50mg/kg,P <0101)。

结论　茶多酚对OLG 缺血性反应有保护作用,并呈现剂量依赖性。

【关键词】　少突胶质细胞;茶多酚;全脑缺血【中图分类号】R743 【文献标识码】A 【文章编号】100421648(2007)0320211203Effects of tea polyphenol on oli godendrocyte i n cerebra l ische m i c ra ts CHEN Y ing 2zhu,TI AN Ye,ZHAN G Zhi 2lin,et al .D epart m ent of N eurology,the Second A ffiliated Hospital of Soocho w U niversity,Suzhou 215004,ChinaAbstract:O bjecti ve To investigate the effects of tea polyphenol on oligodendr ocyte (OLG )in the cerebral ische m ic rats .M ethods Male Sp rague Da wley rats were random ly divided int o sha m 2operated gr oup,contr ol gr oup and tea polyphenol gr oup.The models of whole 2brain ische m ia were established .Then the rats of tea polyphenol gr oup were divided another 3gr oup s and injected intraperit oneally with tea polyphenol at diffenrent dose (25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg,res pectively )once a day f or seven days.The exp ressi ons of p recurs or OLG cells,pedo 2OLG cells and mature OLG cells in the cortex were exa m ined by i m munohist oche m istry and the positive cells were counted .Results Compared with sha m 2operated gr oup,the nu mber of p recurs orOLG cells increased and the number of pedo 2OLG cells and mature OLG cells decreased significantly in the contr ol gr oup (all P <0.05).Compared with contr ol gr oup,the nu mber of p recurs or OLG cells decreased significantly after tea polyphenol treat m ent,while the nu mber pedo 2OLG cells and mature OLG cells increased significantly (25mg/kg,100mg/kg ,all P <0.05;50mg/kg,P <0.01).Conclusi on Tea polyphenol p layed a p r otective r ole in OLG ische m ic reacti on at a dose dependent manner .Key words:oligodendr ocyte;tea polyphenol;gl obal cerebral ische m ia基金项目:江苏省卫生厅重大科研课题资助项目(K200406);苏州大学医学发展基金资助项目(EE123504)作者单位:215004苏州大学附属第二医院神经科[陈应柱(现在江苏省苏北人民医院),张志琳,包仕尧],肿瘤放疗科(田野)通讯作者:包仕尧 许多临床缺血缺氧事件中少突胶质细胞(OLG )有选择易损性[1]。