氯化钴模拟法构建骨骼肌细胞缺氧模型

缺氧环境对宫颈腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制刘艳; 李月洁; 黄小环; 龚莉; 周铁军【期刊名称】《《山东医药》》【年(卷),期】2019(059)031【总页数】5页(P46-50)【关键词】宫颈腺癌; 缺氧环境; 缺氧诱导因子2α; 血管内皮钙黏蛋白; 细胞增殖;细胞迁移【作者】刘艳; 李月洁; 黄小环; 龚莉; 周铁军【作者单位】西南医科大学附属医院四川泸州646000; 重庆三峡医药高等专科学校【正文语种】中文【中图分类】R737.33在全球范围内，宫颈癌的发病率和病死率均居女性恶性肿瘤的第四位，是严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一[1]。

宫颈癌的发病机制非常复杂，目前尚不完全清楚。

缺氧是实体肿瘤微环境的基本特征之一，在肿瘤的生长、转移和治疗抵抗等方面发挥重要作用[2～4]。

肿瘤的缺氧适应主要通过缺氧诱导因子(HIF)调节来实现。

HIF主要有3种亚型，分别为HIF-1、HIF-2、HIF-3，其中参与调节细胞适应性缺氧的主要是HIF-1、HIF-2[5]。

这3种HIF均是由一个α亚基和一个β亚基构成的异源二聚体蛋白复合物[6]。

但迄今为止，关于HIF-2的研究较少。

本课题组前期研究发现，在宫颈腺癌组织中HIF-2α表达明显升高，表明HIF-2α可能在宫颈腺癌的发生、发展中具有一定作用。

血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)是血管内皮细胞黏附连接的主要分子，是维持血管内皮细胞极性和完整性必不可少的内皮细胞特异性钙黏蛋白。

有研究发现，HIF-2α可通过与VE-cadherin相互作用，促进肿瘤血管生成，继而促进胰腺癌进展[7]。

但在缺氧环境中HIF-2α是否通过与VE-cadherin相互作用来促进宫颈腺癌进展尚不清楚。

2014年9月～2015年4月，本研究通过氯化钴(CoCl2)干预建立宫颈腺癌细胞缺氧模型，观察了缺氧环境对宫颈腺癌细胞增殖和迁移的影响并初步探讨其可能的作用机制。

69第16卷 第8期 2014 年 8 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 8 Aug .，2014枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞保护作用申志远，张兆辉（武汉大学人民医院神经内科，湖北 武汉 430060）摘 要：目的：研究枸杞多糖对缺氧损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株PC12的保护作用。

方法：采用氯化钴（CoCl 2）建立PC12细胞，通过测定受损细胞给药后的活力、受损细胞LDH 泄露量和受损细胞ROS 生成量及线粒体膜电位，研究枸杞多糖对受损细胞的保护作用。

结果：枸杞多糖能显著增加缺氧模型细胞的活力；降低细胞LDH 泄漏量；增强缺氧损害细胞的SOD 活性；并增加缺氧损害细胞线粒体膜电位。

结论：枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。

关键词：枸杞多糖；PC12细胞；缺氧损伤中图分类号：R743.31 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 08- 0069- 03收稿日期：2014-02-20作者简介：申志远（1981-），男，湖北襄阳人，主治医师，硕士研究生，研究方向：神经内科疾病。

通讯作者：张兆辉（1963-），男，湖北武汉人，教授、主任医师，硕士研究生导师，博士，研究方向：神经内科疾病。

Protective Effects of Polysacchrides of Lycium Barbarumon Anoxia Injury in Cultured PC12 CellsSHEN Zhiyuan，ZHANG Zhaohui（Department of Neurology，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060，Hubei，China）Abstract：Objective ：To investigate the protective effect of polysacchrides of Lycium barbarum on anoxia injury in cultured PC12 cells. Methods ：Cultured PC12 cells were treated with 150 μmol/L cobalt dichloride in combination with glucose deprivation. The protective effect of polysacchrides of Lyciumbarbarum on the model was evaluated by celluar survival rate，lactatedehydrogenate（LDH）efflux assay，content of SOD and mitochondrial membrane potential. Results ：Lycium barbarum polysacchrides significantly increased the celluar survival rate，reduced releases of LDH，increased activites of SOD and mitochondrial membrane potential in PC12 cells during hypoxia injury. Conclusions ：Lycium barbarum polysacchrides have a remarkably protective effect on anoxia injury in cultured PC12 cells.Key words：Lycium barbarum polysacchrides；PC12 cells；anoxia injury部被充分吸收，加速ATP 和ADP 相互转变释放化学能，穴位局部ATP 能量代谢较3壮灸组高，达到热量的最佳转移，故而测得的最高温度较3壮灸组明显升高。

利用低氧／厌氧工作站建立H9c2细胞缺氧复氧模型的探讨储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【摘要】目的：利用低氧／厌氧工作站，结合不同的缺氧条件，探讨建立H9c2细胞缺氧复氧（hypoxia／reoxygenation， H／R）模型的最佳方法。

方法缺氧时将H9c2细胞置于低氧／厌氧工作站中，分别以完全培养基，无糖培养基和酸性缺氧液培养1、2、4、6、8 h，缺氧后换用完全培养基于培养箱中按常规条件培养1 h。

流式细胞仪测定细胞内活性氧（ reactive oxygen species ，ROS）含量，噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞生存率，倒置显微镜下观察H9c2细胞形态变化。

结果与对照组比较，缺氧时以完全培养基和无糖培养基处理的H9c2细胞H／R后，细胞内ROS含量和细胞存活率随缺氧时间延长无明显改变，且倒置显微镜下未观察到明显的形态变化。

缺氧时以酸性缺氧液处理的H9c2细胞，随H／R时程的延长，细胞内ROS含量不断增加（P＜0.01），且细胞存活率逐渐降低（P＜0.01），倒置显微镜下观察到细胞H砄1 h／R：1 h后开始出现部分细胞皱缩，少量坏死细胞漂浮，随时间延长损伤加重；缺氧8h后，细胞皱缩成圆形，大量坏死细胞漂浮，复氧1h后可见细胞膜表面不平滑，复氧液中仍有少量坏死细胞漂浮。

结论采用低氧／厌氧工作站，并结合酸性缺氧液，可成功建立重现性非常好的H9 c2细胞H／R模型。

%Objective To investigate optimal method of establishing hypoxia/reoxygenation(H/R) model ofH9c2 cell by using hypoxia/anoxic workstation under different conditionsin hypoxia.Methods H9c2 cell was placed into hypoxia/anoxic workstation and simultaneously cultured with complete medium, glucose-free DMEM and acidic hypoxic solution for 1,2,4,6 and 8 h respectively, and then reoxygenated with complete medium for 1 h in normoxic incubator.Thelevel of ROS was measured by flow cytometry.The cell viability was detected by MTT assay.The cellular morphology was observed by inverted microscope.Results With the extension of cell hypoxia time, there were no significant differences in the ROS level and cell viability in complete medium-and glucose-free DMEM-treated H/R groups compared with control group(P<0.05).There was no obvious morphologic change observed with inverted microscope, either.Nevertheless, when H9c2 cells were treated with acidic hypoxic solution in hypoxia, the ROS level continuously increased and the cell viability decreased with the extension of cell hypoxia time ( P<0.01 ).Since H:1 h/R:1 h, some of the cells shrunk and a few necrotic cells floated in the media under the inverted microscope , and the damage was aggravated with the extension of hypoxia time.After the cells were exposed in hypoxia for 8 h, they wrinkled to be round and a large number of floating necrotic cells were observed.When the cells were reoxygenated for 1 h, the cytomembrane was not smooth and there were still a few necrotic cells floating in culture dish .Conclusion The H9c2 cell H/R model with good repeatability can be established successfully by using hypoxia/anoxic workstation combining with acidic hypoxic solution.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)011【总页数】4页(P11-14)【关键词】低氧/厌氧工作站;H9 c2细胞;缺氧复氧模型【作者】储倩雯;李伟秋;鲁诗史;黄丹梅;张艳美【作者单位】汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院分析细胞实验室，广东汕头 515041;汕头大学医学院第一附属医院药剂科，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041;汕头大学医学院药理教研室，广东汕头 515041【正文语种】中文【中图分类】R363心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion， I/R)损伤是心脏缺血性疾病和心脏外科手术后常见的一种病理生理现象。

浙江理工大学学报，2021,45(1)：84-93Journal of Zhejiang Sci-Tech UniversityDOI：10.3969力.issn.l673-3851(n),2021.01.011氯化钻诱导hiPSC-CMs体外缺氧模型的建立朱梦怡-柯敏霞I,王皓齐念民益3,吴月红(1.浙江理工大学生命科学与医药学院，杭州310018；2.杭州标模生物科技有限公司，杭州310018；3.上海丽坤生物科技股份有限公司，上海201499)摘要：为进一步了解缺氧性心血管疾病的发病机制.通过使用CHIR99021和IWP2抑制剂的组合诱导和单层诱导分化方法获得人诱导性多能干细胞来源心肌细胞(Human induced pluripotent stem cells-derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs).并在hiPSC-CMs的培养系统中加入氯化祐进行处理，通过CCK-8检测,Hoechst荧光染色分析、台盼蓝染色分析、qRT-PCR检测和Western blot检测确定最佳处理浓度和时间。

CCK-8检测结果显示，低浓度CoCl2(100,300M mol/L)处理显著提高hiPSC-CMs细胞活力(/><0.01),高浓度CoCl2(900,1200M mol/L)处理显著抑制hiPSC-CMs细胞活力(p<0.001).并且作用趋势呈剂量和时间依赖性，600M mol/L CoCl2处理对于hiPSC-CMs的细胞活力影响不明显(/><0.05)；Hoechst荧光染色结果显示,CoCl2处理24h和48h后，低浓度CoCl2处理对细胞无影响，Hoechst染色阳性细胞数量少(p>0.05),高浓度CoCl2处理剂量依赖性增加阳性细胞数量(^<0.0001),且48h处理组的结果与24h处理组无显著差异；台盼蓝染色结果表明,CoCl2处理可剂量依赖性促进细胞凋亡；CoCl2处理后，促凋亡相关基因Bax和蛋白Bax表达呈剂量依赖性上调(/><0.001),抗凋亡相关基因B4-2和蛋白Bcl-2表达呈剂量依赖性下调(p<0.OODsCoCb处理可剂量依赖性促进hiPSC-CMs细胞的凋亡。

氯化钴对人eNOS基因启动子转录活性的影响樊振华;邢飞跃【期刊名称】《暨南大学学报（自然科学与医学版）》【年(卷),期】2009(030)004【摘要】目的:建立氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)缺氧模型,研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因的启动子活性变化.方法:用含不同浓度氯化钴的培养基培养细胞,检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)含量;将已构建的pGL2-eNOS-p质粒转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测在不同浓度氯化钴和不同作用时间下的eNOS启动子转录活性.结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的LDH含量随氯化钴作用浓度增加而提高;氯化钴刺激后转染细胞的eNOS启动子活性呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势,随作用时间的延长而上升的趋势.结论:成功建立氯化钴诱导HUVEC-12细胞缺氧的体外模型.【总页数】4页(P379-382)【作者】樊振华;邢飞跃【作者单位】暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心,广东,广州,510632;暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.异丙酚对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞内皮源型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的影响 [J], 陈绪贵;古妙宁;王卓强2.氯化钴对人的e NOS基因启动子S P1改构体转录活性的影响 [J], 杨云华;樊振华;邢飞跃3.siRNA干扰p38α上调人血管eNOS基因启动子转录活性 [J], 王宝玉;邢飞跃;刘娜;李卓;唐征乐4.P38α对人血管内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响 [J], 刘娜;邢飞跃5.小鼠Na+-K+-2Cl-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响[J], 武晶晶;孔令慧;贾茹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2019 年第 6 卷第 43 期2019 Vol.6 No.43167临床医药文献电子杂志Electronic Journal of Clinical Medical Literature氯化钴浓度不同对原代脑微血管内皮细胞增殖与缺氧诱导因子HIF-1α表达的研究邵玉红，刘 晶，杨 柳（塔里木油田医院体检部检验科，新疆 巴音郭楞 841000）【摘要】目的 研究不同浓度的氯化钴（CoCl 2）对原代脑微血管内皮细胞（BMECs ）细胞增殖和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。

方法 利用不同浓度的CoCl 2建立原代脑微血管内皮细胞缺氧模型。

结果 MTT 显示CoCl 2对BMECs 细胞增殖抑制作用表现出浓度依赖性抑制作用。

免疫印迹法显示HIF-1α的蛋白表达水平在（50、100、400、800）μmol/L ，HIF-1α在细胞中的表达与CoCl 2浓度0 μmol/L 没有差异改变（P ＞0.05），当其浓度达到200 μmol/L 时，与对照组CoCl 2浓度为0 μmol/L 相比，HIF-1α表达有显著差异 （P ＜0.01）。

结论 CoCl 2可抑制细胞的增殖，同时通过CoCl 2建立的化学法缺氧的模型能够体外引起BMECs 细胞导致HIF-1α上调；通过上调HIF-1α可增加对脑微血管内皮细胞的损害，为下一步耐缺氧脑损伤药物实验奠定基础。

【关键词】氯化钴；缺氧诱导因子-1【中图分类号】R743 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.43.167.01脑微血管内皮细胞（B M E C s ）作为构成血脑屏障（BBB ）[1]的主要结构基础[2]，在中枢神经系统中的血管内外物质交换中发挥着重要的作用。

因此体外培养BMECs 为研究脑血管疾病提供了一种新的方法[3]。

1 材料1.1 材料和试剂SD 大鼠20只，ECM 培养基；胎牛血清；氯化钴；β-actin 鼠单克隆抗体、HIF-1α兔多克隆抗体、HRP 标记的 二抗。

氯化钴对急性下肢缺血大鼠模型缺氧诱导因子1α表达的影响李南;陈幸生;官云彪;林梃【摘要】目的观察氯化钴对急性下肢缺血模型缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨氯化钴治疗肢体动脉闭塞症的可能性.方法 20只雄性SD大鼠,随机均分成4组:手术+氯化钴、手术+生理盐水、假手术+氯化钴、假手术+生理盐水.手术行左股动脉结扎,术后1 d腹腔注射氯化钴(60 mg/kg),或等容积生理盐水.各组术前1 d、术后1 d(腹腔注射前)、2、4、6 d左腓肠肌穿刺活检.免疫组织化学方法检测HIF-1α的表达.结果股动脉结扎手术可增加术侧肢体骨骼肌HIF-1α的表达(t=5.963,P=0.000),缺血肢体经氯化钴处理后HIF-1α的表达明显高于对照组(F=18.074,P＜0.05).结论氯化钴可以增加缺血肢体骨骼肌的HIF-1α的表达,可望用于治疗肢体动脉闭塞症.【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2010(044)006【总页数】4页(P426-428,435)【关键词】钴;缺氧诱导因子1,α亚基;动脉闭塞性疾病;股动脉;缺血;下肢;缺氧;疾病模型,动物【作者】李南;陈幸生;官云彪;林梃【作者单位】福建医科大学,附属协和医院,普外科,福州,350001;福建医科大学,附属协和医院,普外科,福州,350001;福建医科大学,附属协和医院,普外科,福州,350001;福建医科大学,附属协和医院,普外科,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】R543.5;R-332;R916.3下肢动脉闭塞症是一类严重影响患者生活质量甚至危及患者生命的肢体缺血/缺氧性疾病,尽管现在可采用药物、传统搭桥或腔内治疗等多种治疗手段,仍有相当部分患者难以避免死亡、截肢结果,尤其是那些“无解”患者,即高龄、病情危重、无法耐受有创治疗,或病变远侧端无合适流出道,无搭桥或腔内治疗指征的患者,治疗效果更差。

对于这部分患者,治疗性血管生成,可能是一种有前途的治疗选择[1]。