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⽣物化学实验实验⼀1、糖类的颜⾊反应1. α-萘酚反应糖在浓⽆机酸（硫酸或盐酸）作⽤下，脱⽔⽣成糠醛及糠醛衍⽣物，后者能与α-萘酚⽣成紫红⾊物质。
注意：因糠醛及糠醛衍⽣物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯⼆酚反应在酸作⽤下，酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛，后者再与间苯⼆酚作⽤⽣成红⾊物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈⾊反应缓慢，只有在糖浓度较⾼或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作⽤许多糖类由于其分⼦中含有⾃由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等⾦属离⼦还原，同时糖类本⾝被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利⽤于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所⽤的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化⽽本⾝被还原成红⾊（颗粒⼤）或黄⾊（颗粒⼩）的Cu2O沉淀。
实验⼆脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在⼀定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的⼀个重要常数，可⽤以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有⼀个或多个双键，能与卤素起加成作⽤⽽吸收卤素。
常⽤碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作⽤。
脂肪的不饱和程度越⾼，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作⽤的碘量就越多，碘值就越⾼。
故可⽤碘值表⽰脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验⽤溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
⽤⼀定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作⽤后，⽤硫代硫酸钠滴定的⽅法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作⽤：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再⽤硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空⽩溶液和空⽩实验？空⽩实验有何意义？在各种分析⽅法中，为消除⼲扰，⽤与测定试样时完全⼀致的条件进⾏测定的溶液。
高中生物常见试剂及变色反应高中生物常见试剂大全1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺：用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿：用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红：检测RNA，呈红色7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的某些物质可以溶解于酒精10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖，使细胞分离开来。
“有丝分裂观察”和“低温诱导染色体加倍”中15％盐酸能够使洋葱细胞的细胞壁软化,并使细胞间的中胶层物质溶解,从而达到分离细胞的目的。
洗去卡诺氏液8％盐酸：（1）盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输；（2）盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色改良苯酚品红染液：检测染色体，红色健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
实验一糖和蛋白质的理化性质检验（4学时）第一部分蛋白质的理化性质第一节蛋白质的颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
二、实验原理蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
三、实验器材与试剂实验器材1. 鸡蛋1个2. 吸管1.0mL（×1）3. 试管１.5cm×15cm（×2）4. 试管架5. 试管夹2个6. PH试纸（5-7）7. 水浴锅实验试剂1. 卵清蛋白液：将鸡（鸭）蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，离心，上清液冷藏备用。
2.1%茚三酮溶液：1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100mL。
3. 浓硝酸：比重1.42。
4. 10%NaOH溶液：10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mL。
四、实验方法A. 黄色反应蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等）。
遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物（苯及苯丙氨酸较难硝化，需用浓硫酸促进之。
反应如下：操作方法：于一试管内，置蛋白质溶液10滴及浓硝酸5滴，加热，冷却后再加10％NaOH溶液20滴，观察颜色变化。
B. 茚三酮反应蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
此反应为一切蛋白质及ａ-氨基酸所共有。
含有氨基的其他物质亦呈此反应。
亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色。
操作方法：取1mL蛋白质溶液置于试管中，加3-5滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现。
注意：此反应必须在pH5－7进行。
C.双缩脲反应（参考实验）将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。
双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物，此反应称为双缩脲反应。
糖的呈色反应和还原糖的检验（讲稿）本次实验目的是了解鉴定糖和还原糖的原理以及方法，并通过实验操作予以验证。
2人一组，前1-18组1个实验室。
二、实验原理。
糖的鉴定：糖经浓无机酸处理，脱水产生糠醛或糠醛衍生物。
戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛。
这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。
与一元酚如α-萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。
与多元酚如间苯二酚作用，则形成氧杂蒽有色物质。
通常使用的无机酸为硫酸。
如用盐酸，则必须加热。
常用的酚类为α-萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。
还原糖和非还原糖的鉴别：含有自由醛基(-CHO)或酮基(>C=O)的单糖和二糖为还原糖。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质常用于检验糖的还原性，并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。
三、实验内容本次实验一共采用了6种糖液作为测试糖液，2％葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，1％淀粉溶液和1种未知糖液，每种糖液均有专门的移液管移取（贴有标签，有些实验可能只需加几滴，可以在移液管头部套上胶头滴加），不要弄混，所有试剂都有相应的移液管移取（大概4个组公用1套），用后请放回原位，方便别的同学使用。
实验包括2个部分，共7个实验。
（一）糖的呈色反应1．Molish反应(α-萘酚反应)本实验是鉴定糖类最常用的颜色反应。
糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。
在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
步骤：取6支已标号的试管，分别加入各种测试糖液lmL(约15滴)，再各加入Molish 试剂2滴，摇匀。
实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
《生物化学实验》教学大纲一．实验目的二．实验内容三．实验学时安排四．考试方法五．参考教材一．实验目的生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。
本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。
生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。
返回顶部二．实验内容•实验一糖的呈色反应及还原糖的检验一．实验目的学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。
二．实验内容Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling 反应。
三.实验过程1.呈色反应（1） Molish 反应（2）蒽酮反应（3） Seliwanoff反应（4） Bial反应2.还原糖的检验（1） Fehling反应（2） Benedict反应（3） Barfoed反应四.作业与思考1.列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用.2.应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？3.举例说明那些糖属于还原糖.•实验二脂类组成对脂类单分子层通透性的影响一、实验目的学习制作脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。
二、实验内容以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。
三.实验过程1.溶液准备2.分光光度计测样四.作业与思考1.试述生物膜的基本结构与功能2.解释下列名词：双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质.•实验三蛋白质浓度的测定（1）——Folin-酚法一、实验目的学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。
