(固相凝集法)

血清抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言血清抗体(固相凝集法)检测是一种常用的免疫学检测方法，用于检测体内是否存在特定病原微生物抗体。

本文档旨在规范血清抗体(固相凝集法)检测的操作流程，确保准确性和可重复性。

2. 实验材料- 试剂：包括抗原和抗人免疫球蛋白球（用于制备抗人血清）。

- 血清样本：待检测的血清样本。

- 试验器材：包括试管、酶标板、孵育箱、离心机等。

3. 实验步骤3.1 血清样本的准备1. 将待检测的血清样本离心10分钟，取清晰的上清液进行检测。

2. 将血清样本标记好编号，并在记录表上记录相应信息。

3.2 抗原制备1. 根据需要的抗原种类和浓度，制备抗原溶液。

2. 将制备好的抗原标注好名称、浓度和保存日期，并储存在冰箱中。

3.3 反应系统的制备1. 将所需的抗原溶液和血清样本放在冰箱中保持冷藏状态。

2. 提前准备好所需的试管、酶标板等实验器材。

3.4 实验操作1. 取出冷藏的抗原溶液和血清样本，放在室温下预热10分钟。

2. 将抗原溶液、血清样本和洗涤缓冲液按照比例加入酶标板中，轻轻摇晃使其充分混合。

3. 孵育酶标板在孵育箱中，温度设定为37℃，时间为45分钟。

4. 定时结束后，将孵育完的酶标板放在离心机中，离心5分钟，倒掉上清液。

5. 加入洗涤缓冲液，轻轻拍打酶标板底部以去除未结合的物质，倒掉上清液。

6. 重复洗涤步骤3次后，倒掉上清液，轻轻用纸巾吸干酶标板底部的液体。

7. 加入显色液，孵育酶标板在孵育箱中，温度设定为37℃，时间为30分钟。

8. 定时结束后，加入终止液，停止显色反应。

9. 使用酶标仪读取吸光度，记录各孔的OD值。

4. 数据处理与结果判读1. 根据各孔的OD值计算平均OD值和标准差。

2. 利用设定的标准曲线，计算待测样本的抗体浓度。

3. 根据抗体浓度和设定的标准，判读样本的阳性与阴性结论。

4. 记录数据并生成报告。

5. 安全注意事项1. 实验操作时需戴上实验手套，严禁食用。

血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）使用操作方法1、平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。

2、检测样本准备将血浆（血清）3000转离心5-10分钟。

3、配制浓缩洗涤液将浓缩洗涤液以1：24比例与蒸馏水混合（满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水）。

4、配制血小板抗体筛检细胞（冻干粉）将冻干粉依比例与生理盐水混合（冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合），混合后放置5分钟，使用前轻轻摇匀。

5、标识由包装内取出一条反应板，平衡至室温。

标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。

6、加血小板向反应板孔中各加入1滴（约50µl）混匀的血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。

7、固着将反应板用平板离心机以50g离心5分钟（专用血小板离心机用程序1）。

8、洗涤将反应板用洗涤液洗3至4次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后再轻轻甩掉洗涤液。

最后一次洗涤后将残余液体蘸干。

9、加样先向各孔中加入2滴（100µl）低离子强度溶液，再分别滴加1滴（50µl）阳性对照、阴性对照、检测样本。

10、孵育将反应孔用封口胶纸封好，轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟（或气浴孵育35至40分钟）。

11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。

12、加指示物立即向上述各孔加入1滴抗人IgG（50µl）和1滴（50µl）混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液，轻轻振荡混匀。

13、离心将反应板以200g离心5分钟（专用血小板离心机用程序2）。

14、结果判定观察并记录实验结果。

阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央，弱阳性反应格局介于两者之间。

两种方法检测血小板特异性抗体比较吴昌松【摘要】目的探讨微柱凝胶抗人球蛋白法与固相凝集法检测血小板抗体的应用价值.方法选择53例血液系统疾病患者,输注10 ～ 30个治疗剂量血小板进行治疗.治疗结束后利用微柱凝胶抗人球蛋白法与固相凝集法对患者血清进行血小板抗体检测.同时与经典的SEPSA(简易致敏红细胞血小板血清试验)方法对53例患者血小板抗体检测结果进行比较.结果微柱凝胶抗人球蛋白法检测,47例血小板抗体阳性,6例阴性,阳性率为88.6％.固相凝集法检测,31例血小板抗体阳性,阴性22例,阳性率为58.5％.2种检测方法比较,差异显著(P =0.001),有统计学意义.SEPSA方法检测44例阳性,9例阴性,阳性率为83.0％,与微柱凝胶抗人球蛋白方法检测结果基本一致.结论微柱凝胶抗人球蛋白法优于固相凝集法,其检测敏感性高,且操作简单,耗时少,具有临床应用价值.【期刊名称】《河南职工医学院学报》【年(卷),期】2016(028)001【总页数】2页(P50-51)【关键词】微柱凝胶;固相凝集;血小板抗体【作者】吴昌松【作者单位】黔南民族医学高等专科学校附属医院输血科,贵州都匀558000【正文语种】中文【中图分类】R446.11+1血小板输注是血小板自身功能障碍或血液系统性疾病导致血小板数量或功能障碍的有效治疗手段。

血小板除含有血小板自身特异性抗原外，同时也还有ABO系统、HLA系统等其他血型系统的抗原成分[1]。

长期输注血小板或不规范的血小板输注，会导致血小板抗体和其他血型系统抗体的产生，影响血小板治疗效果或导致血小板输注无效[2～3]。

为避免血小板抗体的产生和血小板输注无效，血小板抗体检测和血小板同型输注具有重要的临床意义。

该文对微柱凝胶抗人球蛋白法与固相凝集法检测血小板抗体的结果进行了比较，现报道如下。

SEPSA方法是检测血小板特异性抗体的经典方法，该方法的特点是重复性、特异性和敏感性稳定。

血小板抗体检查对多次输血患者的意义发表时间：2016-05-03T16:36:46.580Z 来源：《医药前沿》2015年12月第35期作者：黄元君[导读] 贵州省黔西南州人民医院输血科多次输注血小板的患者血小板相关抗体阳性率明显上升。

（贵州省黔西南州人民医院输血科 562400）【摘要】目的：观察血小板抗体检查对多次输血或输血小板患者的意义。

方法：采用固相凝集法进行血小板抗体检测。

把多次输注与初次输注患者分为两组做对比。

根据血小板计数增加指数（CCI）、血小板计数以及临床症状进行疗效评估，分析抗体产生的的治疗效果。

结果多次输血或输注血小板的患者抗体阳性率与输注的次数和数量成正比。

结论多次输注血小板的患者血小板相关抗体阳性率明显上升。

【关键词】血小板抗体；多次输注【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）35-0111-02 血小板减少是临床上出血最常见的原因之一，因治疗不及时或疗效不佳而致死亡的危险性较大，为临床所重视。

血小板作为一种特殊的血液制品，它的输注是临床治疗血小板减少性出血最有效的方法。

然而多次输血和血小板的患者可产生血小板抗体，其输注量及输注次数越多，患者体内免疫相关性血小板抗体的产生概率越高，也越容易导致血小板输注无效。

为了使有限的血小板得到合理的应用，尽量避免输注无效，拟对多次输血血小板的患者预先进行血小板抗体检测。

以防其导致的输注无效。

血小板分为浓缩（手工）和机采血小板。

1.临床资料1.1 一般资料我院2014年8月～2015年6月多次输血或血小板的患者共107中多次输注的5次以上（最少也是2次以上），排除发热、脾肿大、败血症、弥漫性血管内凝血等致血小板减少非免疫性因素。

其中男性68例，女性39例，平均年龄38.5岁。

其中白血病35例，骨髓增生异常综合症22例，全血细胞减少15例，血小板减少21例，再生障碍性白血病14例。

初次输血患者107例。

血小板抗体检测项目（固相凝集法）一、基本原理：血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体，包括三类：1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体，2.血小板特异性抗原（HPA）产生的特异性抗体，3.药物所致的血小板抗体二、血小板抗体检测的临床应用(一)在临床辅助诊断中的作用1、特发性血小板减少性紫癜（ITP）：ITP的临床症状很重要，但仍为排除性诊断。

如结合血小板抗体检测，则对ITP的确诊有重要价值。

2、血液系统疾病辅助诊断：对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。

3、孕期流产风险评估：血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估，尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。

（二）在临床输血治疗中的应用1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应：血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者，对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低，极大提高了输血的安全性。

2、预防血小板输注无效：血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因，特别是多次输血后出现的血小板输注无效。

检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。

三、血小板抗体检查的筛查对象1、血液肿瘤科病人：评价患者体内血小板抗体水平，辅助诊断血液系统疾病：如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。

2、需治疗性输注血小板患者：特别是需多次输注血小板患者，建议提前筛查血小板抗体，防止血小板输注无效。

3、妇产科孕检：评价孕期流产风险，尤其适用于有多次流产史患者查因。

四、血小板抗体在临床病例中的验证。

1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。

2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。

3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。

4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。

加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。

加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。

5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。

5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。

6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。

7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。

7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。

7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。

7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。

若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。

7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。

7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。

㊃论著㊃不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析*陆乐1,李平1ә,刘婷婷1,王树亚1,周勤21.南京大学医学院附属鼓楼医院输血科,江苏南京210008;2.江苏师范大学数学与统计学院,江苏徐州221116摘要:目的调查血小板抗体在住院患者中的阳性率,分析血小板抗体在性别之间的差异及在临床科室的分布情况,从而进一步保障临床患者输注血小板的有效性与安全性㊂方法选取2019年3-5月在南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能的入院患者8250例作为研究对象,采用固相凝集法检测其血小板抗体㊂计算抗体阳性率,并利用R3.4.1软件进行统计分析㊂结果女性患者的血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性患者(4.43%),差异有统计学意义(P<0.05)㊂聚类分析结果显示风湿免疫科㊁血液内科和中医科患者的血小板抗体阳性率显著高于其他临床科室,差异有统计学意义(P<0.05)㊂结论女性患者及血液病㊁风湿免疫疾病患者应重视血小板抗体筛查,以便阳性患者在血小板输注前进行血小板交叉配型,避免出现血小板输注无效㊂关键词:固相凝集法;血小板抗体;血小板输注无效;输血安全D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.03.002中图法分类号:R446.6文章编号:1673-4130(2021)03-0263-04文献标志码:AA n a l y s i s o f p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g r e s u l t s i n p a t i e n t sw i t h d i f f e r e n t g e n d e r a n d c l i n i c a l d e p a r t m e n t s*L U L e1,L I P i n g1ә,L I U T i n g t i n g1,WA N G S h u y a1,Z H O U Q i n21.D e p a r t m e n t o f B l o o d T r a n s f u s i o n,G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g eo f N a n j i n g U n i v e r s i t y,N a n j i n g,J i a n g s u210008,C h i n a;2.S c h o o l o f M a t h e m a t i c s a n d S t a t i s t i c s,J i a n g s u N o r m a l U n i v e r s i t y,X u z h o u,J i a n g s u221116,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s,a n a l y z e t h e d i f f e r e n c e o f p l a t e l e t a n t i b o d y b e t w e e n g e n d e r s a n d t h e d i s t r i b u t i o n o f c l i n i c a l d e p a r t m e n t s,s o a s t o f u r t h e r e n s u r e t h e e f f e c t i v e n e s s a n d s a f e t y o f p l a t e l e t t r a n s f u s i o n i n c l i n i c a l p a t i e n t s.M e t h o d s A t o t a l o f8250h o s p i-t a l i z e d p a t i e n t s w i t h t h e p o s s i b i l i t y o f b l o o d t r a n s f u s i o n i n G u l o u H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o M e d i c a l C o l l e g e o f N a n j i n g U n i v e r s i t y f r o m M a r c h t o M a y2019w e r e s e l e c t e d a s t h e r e s e a r c h o b j e c t s,a n d t h e i r p l a t e l e t a n t i b o d i e s w e r e d e t e c t e d b y s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n m e t h o d.T h e a n t i b o d y p o s i t i v e r a t e w a s c a l c u l a t e d a n d a n a l y z e d b y R3.4.1s o f t w a r e.R e s u l t s T h e p o s i t i v e r a t e o f p l a t e l e t a n t i b o d y i n f e m a l e p a t i e n t s(6.6%)w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n m a l e p a t i e n t s(4.43%),t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e r e s u l t s o f c l u s t e r a n a l y s i s s h o w e d t h a t,t h e p o s i t i v e r a t e o f a n t i b o d y i n r h e u m a t o l o g y d e p a r t m e n t,h e m a t o l o g y d e p a r t-m e n t a n d t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e d e p a r t m e n t w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n o t h e r d e p a r t m e n t s,t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).C o n c l u s i o n F e m a l e p a t i e n t s a n d p a t i e n t s w i t h h e m a t o l o g i c d i s e a s e s a n d r h e u m a t i c i mm u n e d i s e a s e s s h o u l d p a y a t t e n t i o n t o p l a t e l e t a n t i b o d y s c r e e n i n g,s o t h a t p o s i t i v e p a t i e n t s c a n c a r r y o u t p l a t e l e t c r o s s m a t c h i n g b e f o r e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n t o a v o i d i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n.K e y w o r d s:s o l i d p h a s e a g g l u t i n a t i o n;p l a t e l e t a n t i b o d y;i n e f f e c t i v e p l a t e l e t t r a n s f u s i o n;t r a n s f u s i o n s a f e t y血小板是巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质,在伤口愈合㊁止血及器官移植排斥等生理和病理过程中有着十分重要的作用㊂近年来随着输血技术的提高,血小板输注已成为提高临床㊃362㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3*基金项目:国家自然科学基金项目(11671178);江苏省输血协会英科新创科研基金项目(J s2018028)㊂作者简介:陆乐,女,主管技师,主要从事输血免疫学研究㊂ә通信作者,E-m a i l:g l y y s x k@163.c o m㊂本文引用格式:陆乐,李平,刘婷婷,等.不同性别㊁临床科室患者血小板抗体筛查结果分析[J].国际检验医学杂志,2021,42(3):263-265.患者(特别是血液疾病和肿瘤患者)血小板计数,防止出血最为快速㊁有效的方法,是现代成分输血技术领域的重要内容[1]㊂通过输注血小板可以有效降低血小板疾病导致的病死率,对于临床上反复输血的患者,其体内易产生血小板抗体[2],经常出现血小板输注无效㊂血小板抗体对血小板的破坏还会严重影响患者的生命健康与安全[3]㊂导致血小板输注无效的原因包括非免疫因素和免疫因素,非免疫包括发热㊁感染㊁脾大等[4],免疫因素为血小板抗体[5],其中最主要的原因为血小板同种抗体㊂现将南京大学医学院附属鼓楼医院8250例患者血小板抗体检测结果与分析报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选择2019年3-5月南京大学医学院附属鼓楼医院有输血可能性的入院患者,排除临床诊断不明确㊁病历资料不完整的患者,共计8250例为研究对象㊂其中男性3975例,女性4275例;发病年龄1~101岁,平均(51.0ʃ18.26)岁㊂1.2试剂与仪器1.2.1试剂血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)㊁血小板抗体筛检细胞㊁血小板抗体检测用指示红细胞均购自长春博德生物技术有限责任公司㊂1.2.2仪器T D58低速离心机购自长沙湘智离心机有限公司,P W-812全自动酶标洗板机购自深圳汇松科技发展有限公司㊂1.3检测方法1.3.1标本前处理采集患者2m L左右静脉血,采用乙二胺四乙酸二钾抗凝,1500ˑg离心10m i n㊂1.3.2固相凝集法(1)血小板抗体检测试剂盒平衡至室温(18~25ħ),制备洗涤液,将浓缩洗涤液用蒸馏水按1ʒ24体积比稀释㊂(2)稀释商品化的冻干血小板,每支血小板冻干粉加入0.5m L生理盐水,溶解混匀㊂(3)反应板条上标记患者编号㊁阳性对照和阴性对照㊂每个反应孔中加入1滴(50μL)血小板悬液,轻摇反应板10s㊂(4)平板式离心机50ˑg离心5m i n,将血小板固定在反应孔底部㊂(5)轻轻倒出反应孔中的液体,洗涤液清洗反应板3次㊂(6)每个反应孔中加入2滴(100μL)低离子强度溶液,并按编号向相应反应孔中加入1滴(50μL)患者血浆㊁阳性对照液及阴性对照液㊂(7)用封口胶将反应孔封好,混匀,平放入湿盒中,37ħ温浴30m i n后,弃封口胶,清洗反应板5次㊂(8)加入1滴抗人I g G及1滴指示红细胞试剂,混匀,观察记录结果㊂1.4统计学处理利用R3.4.1统计软件对结果进行分析,计量资料不满足正态分布以M(P25~P75)表示;计量资料满足正态分布以xʃs表示,采用t检验;计数资料以率表示,率的比较采用χ2检验;采用聚类分析对临床科室进行分组;以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1不同性别血小板抗体筛查结果比较本研究中女性患者血小板抗体阳性率(6.60%)显著高于男性(4.43%),差异有统计学意义(χ2=18.478,P<0.05)㊂见表1㊂表1不同性别的血小板抗体筛查结果比较性别检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%)男39751764.43女42752826.602.2不同临床科室血小板抗体阳性率比较不同临床科室的血小板抗体阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=86.513,P<0.05)㊂见表2㊂表2不同临床科室的血小板抗体阳性率比较编号科室检测例次(n)阳性例次(n)阳性率(%) 1产科232198.192耳鼻咽喉头颈外科493244.873风湿免疫科671725.374妇科760516.715感染科3738.116骨科1399755.367呼吸内科3026.678急诊中心1417.149老年科6035.00 10泌尿外科869424.83 11男科800.00 12内分泌科5135.88 13普通外科1477664.47 14烧伤整形外科7745.19 15神经内科800.00 16神经外科458183.93 17肾科7556.67 18疼痛科100.00 19消化内科1030545.24 20心胸外科665375.56 21心血管内科1317.69 22血管外科182105.49 23血液内科1121715.18 24中医科17211.76 25肿瘤科4424.55 26重症医学科7122.82 2.3聚类分析利用最长距离法对表2中的所有临床科室的血小板抗体阳性率进行聚类分析㊂依照血小板抗体阳性率将样本分成两类,第一类是血小板抗㊃462㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3体阳性率高的科室,包括风湿免疫科㊁血液内科和中医科;第二类为其他科室,即这些科室血小板抗体阳性率较低㊂比较第一类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=3.447,P>0.05);比较第二类样本的血小板抗体阳性率,结果显示差异无统计学意义(χ2=14.536,P>0.05)㊂说明聚类后,每一类中的各科室血小板抗体阳性率无显著差别㊂聚类后对两类样本的阳性率进行比较,利用均值t检验,差异有统计学意义(t=3.0276,P<0.05),表明第一类科室(3个)和第二类科室(23个)聚类后两类间存在明显差异,即第一类科室风湿免疫科㊁血液内科和中医科的血小板抗体阳性率显著高于其他科室,同时也表明聚类是有意义的㊂见图1㊂注:图中两个矩形内的科室分别归类为两类样本,数字代表科室编号㊂图1不同科室血小板抗体阳性率的聚类树状图3讨论血小板表面存在着复杂的抗原系统,一般可分为血小板相关抗原与血小板特异性抗原㊂血小板相关抗原主要有红细胞血型抗原和人类白细胞抗原(H L A)㊂红细胞血型抗原包括A B H抗原,此外还有其他血型抗原,如L e a㊁L e b等㊂血小板膜表面表达的H L A主要为H L A-Ⅰ类抗原,包括H L A-A㊁H L A-B 和少量的H L A-C㊂而血小板特异性抗原由血小板特有的抗原决定簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性㊂血小板特异性抗原主要分布于血小板膜糖蛋白上,构成血小板膜结构的一部分,同时还分布于血管内皮细胞㊁结缔组织和平滑肌细胞等㊂妊娠㊁骨髓移植和反复输血都会刺激机体产生同种血小板抗体㊂这些抗体引起机体产生一系列血小板抗原抗体免疫反应[6],当患者进行血小板输注治疗时就可能导致血小板输注无效㊂特别是有些反复多次接受血小板输注的患者,血小板输注无效发生率明显增高,呈正比关系[1,7]㊂根据原卫生部颁布的‘临床输血技术规范“[8]中成分输血指南的规定,临床输注单采血小板必须进行A B O同型输注,因此,避免了因为A B O血型抗体导致的血小板输注无效,但H L A-Ⅰ类抗体与血小板特异性抗体导致的输注无效尚无法避免㊂固相凝集法中的血小板筛检细胞上同时有H L A抗原和人类血小板抗原,可以及时检测出患者体内对应的血小板同种抗体,从而提示可能出现的血小板输注无效㊂本次试验选取8250例住院患者检测体内血小板抗体,临床科室基本覆盖㊂结果显示,血小板抗体阳性率在不同的临床科室分布有显著差异,风湿免疫科㊁血液内科和中医科血小板抗体阳性率明显高于其他临床科室,这与临床科室患者疾病有关㊂本次研究中血液内科患者均为血液肿瘤患者,其血小板抗体阳性率为15.18%,略高于董晓锋等[9]报道的血液肿瘤患者的阳性率(10.02%)㊂究其原因可能与患者治疗原发病反复输注血液制品有关,输注的血液制品(包括血小板)刺激自身免疫系统产生除A B O血型抗体外的抗-H L A或抗-H P A等同种抗体[10]㊂血小板输注次数越多,血小板抗体阳性率越高[11-12]㊂有研究报道,当患者免疫力低下时抗原抗体反应减弱,即便抗体筛查阳性的患者输注血小板后也会有效果[13]㊂在本研究中,风湿免疫科患者血小板抗体阳性率达25.37%,高于血液病患者,其中血小板抗体阳性率排在前3位的疾病为系统性红斑狼疮㊁干燥综合征㊁类风湿关节炎㊂其他自身免疫系统性疾病也有阳性患者,如抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎㊁弥散性(混合性㊁未分化)结缔组织病及系统性硬皮病等,但这些病例数较少㊂国内较少见对风湿免疫科患者血小板抗体的研究,此类患者自身免疫系统功能紊乱,容易导致存在抗血小板的自身抗体,使其血小板数量低下,引起出血风险,应引起重视㊂中医科患者样本例数少,在此不作讨论㊂女性患者血小板抗体阳性率高于男性患者,与女性患者妊娠史密切相关㊂妊娠是女性患者产生血小板抗体的主要原因[14]㊂在我国二孩政策下,妊娠次数的增加会使血小板抗体阳性率也增高[15]㊂另外,也有研究表明,女性患者血小板抗体阳性率高与女性患者流产也有相关性,随着流产次数增加,血小板抗体阳性率也会相应升高㊂在统计数据时,男科㊁神经内科和疼痛科这3个科室的样本量很小,而样本量的大小可能会影响血小板抗体阳性率的估计㊂如删掉样本量低于30例的临床科室数据,重新考虑上述问题,总体结论与之前一致,即临床科室之间的血小板抗体阳性率存在显著差别,而性别依然会影响血小板抗体阳性率㊂血小板抗体的存在会导致临床患者出现血小板输注无效㊁输血后紫癜㊁新生儿血小板减少性紫癜等多种免疫反应,当患者发生血小板输注无效后,可通过血小板抗体检测判断输注无效的原因是否由免疫因素引起[16]㊂女性,风湿免疫疾病㊁血液病的患者在进行血小板输注治疗前应考虑进行血小板抗体筛查,如果条件允许可以进一步做血小板交叉配型试验,从而选择最适合患者的供者血小板,达到临床治疗的目的㊂(下转第269页)㊃562㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第3期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.3内的高凝状态影响了胎盘的正常血供,从而导致不良的结局㊂R O C曲线分析结果显示,H c y单独检测预测难免流产的灵敏度最高,为96.70%,但是其特异度较低,仅为55.70%,所以H c y单独检测用于难免流产的预测价值较低㊂C A125单独检测预测难免流产的灵敏度和特异度均较高,分别为88.69%和88.66%,其A U C为0.946㊂但是β-H C G㊁C A125㊁H c y㊁D-D㊁F I B联合检测预测难免流产的灵敏度和特异度分别为96.50%和98.50%,A U C为0.997,均显著优于各指标单独检测㊂参考文献[1]毕艳慧.先兆流产孕妇同型半胱氨酸㊁叶酸及凝血功能与妊娠结局的相关性研究[J].锦州医科大学学报,2018,39(5):22-25.[2]廖琪.凝血功能㊁同型半胱氨酸㊁B族维生素与早期先兆流产相关性[J].中国计划生育学杂志,2019,27(12): 1600-1603.[3]黄烨,陈纬,刁军成.C A125㊁H C G和P对早期先兆流产患者妊娠结局预测的比较[J].重庆医科大学学报,2016, 41(3):253-258.[4]林涛,沈晓露,潘豪杰,等.D-二聚体在孕早期不明原因复发性流产患者中临界值的探讨[J].生殖医学杂志,2018, 27(4):339-344.[5]谢幸.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013: 48-49.[6]W A D A H.P r e-t h r o m b o t i c(h y p e r c o a g u l a b l e)s t a t e/h y p e r c o-a g u l ab l e d i s e a s e[J].R i n s h o B y o r,2015,63(5):1405-1411.[7]WA N G Y,L I N X,WU Q,e t a l.T h r o m b o p h i l i a m a k e r s i n p a t i e n t s w i t h r e c u r e n t e a r l y m i s c a r i a g e[J].C l i n L a b, 2015,61(8):1787-1794.[8]N E L E N W L,B U L T E N J,S T E G E R S E A,e t a l.M a t e r-n a l h o m o-c y s t e i n e a n d c h o r i o n i c v a s c u l a r i z a t i 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凝集反应一种血清学反应。

颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。

参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。

可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。

（1）直接凝集反应颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。

分为玻片法和试管法。

玻片法是一种定性试验方法。

可用已知抗体来检测未知抗原。

（若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。

数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。

该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。

）试管法是一种定量试验的经典方法。

可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。

用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。

（操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。

）诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应、布氏病的瑞特氏反应均属定量凝集反应。

（2）间接凝集反应将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。

在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。

用做载体的微球可用天然的微粒性物质，如人（O型）和动物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯胶乳微球等。

由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的反应，敏感性比直接凝集反应高得多。

分为（1）乳胶凝集法：（2）固相凝集法：（3）明胶凝集法；（4）免疫凝集法；（5）胶乳凝集反应法血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）生产厂家：河北益生医药有限公司长春博德生物技术有限责任公司。

血小板抗体检测专家共识关键词：血小板抗体临床输血专家共识2016年7月25日，经国家标准化管理委员会批准，输血医学增设为临床医学二级学科。

输血医学的重要职能就是保障和指导临床安全、科学、精准输血，减少输血不良反应。

血小板具有复杂的抗原系统，包括与其它组织或细胞所共有的抗原，如ABO血型系统抗原和人类白细胞抗原（HLA）；血小板特异性抗原（HPA）；与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的GPⅣ/CD36抗原等。

妊娠、输血、器官移植等均可诱导机体产生血小板抗体，包括HLA抗体、HPA抗体和CD36抗体等。

这些抗体可以引起免疫性血小板输注无效（PTR）、胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）、非溶血性发热反应（NHTR）、输血后紫癜（PTP）等。

红细胞抗体已经成为临床输血前免疫学检测的常规项目，而输血前血小板抗体检测并未得到临床充分重视。

目前，血小板输注的策略主要采用随机输注方式，反复输血及多次妊娠者容易产生血小板抗体，引起PTR、FNAIT等疾病，以及NHTR、PTP等输血不良反应。

为保障临床输血安全和疗效，预防PTR和输血不良反应，节约血液资源，诊断血小板抗体相关免疫性疾病，现形成血小板抗体检测专家共识，内容如下。

1 血小板抗体检测的临床意义1.1 免疫性血小板输注无效（PTR）诊断：血小板抗体是免疫性PTR的主要原因。

一般患者输注血小板后血小板抗体的阳性率为8.2%～60.0%，肿瘤患者和干细胞移植患者血小板抗体阳性率为12.6%～ 66.0%[8-10]，这些抗体是导致免疫性PTR的主要因素。

对患者进行血小板抗体筛查和鉴定，可以诊断免疫性PTR。

对血小板抗体阳性患者输注血小板交叉配合的血小板，可有效预防免疫性PTR。

1.2 HLA抗体导致NHTR诊断：NHTR在输血反应中占比最大，输注红细胞的NHTR的发生率约为0.08%～6.0%，输注血小板NHTR的发生率可高达20.3%～70.0%。

血浆抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言血浆抗体(固相凝集法)检测是一种用于检测特定疾病的抗体的方法。

本文档旨在规范操作流程，保证检测结果的准确性和可靠性。

2. 检测设备和试剂- 血浆抗体检测仪器- 血清分离管- 血浆检测试剂盒- 一次性试剂盒3. 检测操作3.1 血浆样本准备1. 登记样本基本信息，包括样本编号、姓名、性别、年龄等。

2. 使用无菌注射器采集血浆样本，遵循无菌操作规程，避免交叉污染。

3. 将血浆样本转移到血清分离管中，并标注好样本编号。

4. 使用离心机进行离心，离心参数设置为3000rpm，离心时间为10分钟。

3.2 样本测试1. 打开血浆抗体检测仪器，进行预热，预热时间一般为30分钟。

2. 准确读取试剂盒上的操作步骤，按照相应步骤进行操作。

3. 取出一次性试剂盒，避免直接阳光照射，避免检测结果受到干扰。

4. 将样本稀释到适当浓度，根据试剂盒的要求进行相应比例的稀释。

5. 将血浆样本加入试剂盒中，并注意控制滴加速度和加样量。

6. 配置试剂盒提供的洗涤液，根据规定的比例将其稀释。

7. 连续计时，按照要求进行洗涤操作。

8. 分析结果，根据检测仪器的显示结果，记录样本的阳性或阴性。

3.3 结果解读1. 根据试剂盒提供的说明书，将样本的结果进行解读。

2. 若结果呈阳性，表示检测到特定疾病抗体，需进一步确认。

3. 若结果呈阴性，表示未检测到特定疾病抗体，但不排除假阴性结果的可能性。

4. 结果解读完成后，记录结果，包括阳性率、阴性率、假阳性率等。

4. 检测质量控制1. 定期校准和维护检测仪器，确保其稳定性和准确性。

2. 使用质控品进行质量控制，校验检测结果的准确性。

3. 定期参加相关质检活动，提高检测水平，确保操作符合规范。

5. 安全注意事项1. 严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。

2. 使用无菌注射器和一次性试剂盒，避免重复使用造成污染。

3. 注意检测仪器的电器安全，确保正常工作和操作。

固相凝集法检测血小板抗体原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊固相凝集法检测血小板抗体这档子事儿。

你说这血小板抗体啊，就像是身体里的小“捣蛋鬼”，要是没被咱及时发现，那可能就会惹出不少麻烦呢！而固相凝集法呢，就像是一个厉害的“侦探”，专门来把这些“捣蛋鬼”给揪出来。

想象一下哈，这个固相凝集法就像是一场精彩的“捉迷藏”游戏。

我们把带有血小板抗原的固相载体当成是一个“秘密基地”，然后把我们要检测的样本加进去。

这时候，如果里面有血小板抗体这个“小调皮”，它就会被“秘密基地”给吸引住，然后紧紧地黏上去，这不就被我们发现啦！这过程可神奇着呢！就好像我们在茫茫人海中一下子就找到了那个特别的人一样。

而且这个方法特别靠谱，它能很准确地告诉我们有没有血小板抗体的存在。

比如说吧，要是有人经常出现血小板减少的情况，那我们就可以用固相凝集法来检测一下，看看是不是这些“捣蛋鬼”在捣乱。

要是真的检测出来了，那我们就能赶紧想办法对付它们，让身体重新恢复健康。

这就好比我们家里进了老鼠，我们得赶紧找到它们的踪迹，然后想办法把它们赶出去或者抓住，不然家里可就不得安宁啦！固相凝集法就是我们找这些“老鼠”的好工具。

它操作起来也不难，只要按照步骤一步一步来，就像我们做一道熟悉的菜一样。

先准备好各种材料，然后按照特定的方法去处理，最后就能得到我们想要的结果。

而且啊，这个方法还很灵敏呢！哪怕只有一点点的血小板抗体，它也能察觉到。

这就像一个超级敏锐的“小雷达”，任何细微的变化都逃不过它的“法眼”。

咱可别小看了这个固相凝集法检测血小板抗体的原理，它可是在医学领域有着很重要的地位呢！它能帮助医生们更准确地诊断疾病，为患者提供更好的治疗方案。

这难道不是很了不起吗？总之啊，固相凝集法检测血小板抗体原理就像是一把开启健康之门的钥匙，让我们能更好地了解自己的身体，及时发现问题并解决问题。

所以啊，大家一定要好好了解它，说不定哪天就能派上大用场呢！这可不是开玩笑的哟！。

血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究作者：夏世勤苏莉刘秋洪等来源：《中国当代医药》2013年第22期[摘要] 目的检测血液病[白血病、再生障碍性贫血、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、骨髓增生异常综合征）]患者血清中的血小板抗体，探讨其与血小板输注疗效的关联，并分析血小板抗体产生的相关影响因素。

方法用固相凝集法检测158例血液病患者输注前血小板抗体，同时用全自动血细胞分析仪检测每次血小板输注前及输注后24 h血小板计数，计算出实际血小板回收率（PPR），结合输注血小板后出血表现是否得到改善来判断输注疗效，分析血小板抗体与血小板输注疗效的相关性，并根据病因、患者性别、输注次数及血小板种类分别分组，对血小板抗体阳性检出率进行统计学分析。

结果①158例血液病患者血小板输注总有效率为53.16%，血小板抗体总阳性检测率为17.72%；②血小板输注有效组抗体阳性率（5.95%）远低于输注无效组（31.08%）（P0.05）；⑤不同血小板输注次数组间血小板抗体阳性率比较，差异有统计学意义（P[关键词] 血液病；血小板抗体；血小板输注效果[中图分类号] R331.1+43 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（a）-0082-04血液病是原发于造血系统，或影响造血系统伴发血液异常改变，以血液、造血器官以及出、凝血机制的病理变化为其主要表现特征的各种疾病。

此类患者多伴有原发或继发的血小板减少或功能缺陷，因血小板原因所致的出血也是血液病较为常见的并发症，其严重危害血液病患者的健康甚至生命。

血小板输注是目前国内外防治血液病患者出血的不可替代的重要治疗手段，用于改善血液病患者的出血症状及降低出血病死率。

但实际临床工作中，并非每例血小板输注都能取得满意的疗效，时有血小板无效输注发生[1]。

血小板输注疗效的影响因素无外乎免疫因素和非免疫因素两大类，血小板抗体是目前引发血小板输注无效的最重要的免疫因素。

白细胞抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言本文档旨在规范白细胞抗体(固相凝集法)检测操作流程，确保实验结果的准确性和可重复性。

2. 范围本操作规程适用于白细胞抗体(固相凝集法)检测实验。

3. 设备与试剂- 试剂：- 固相凝集试剂盒- 细胞悬液样本- PBS缓冲液- 设备：- 干燥浴- 离心机- 显微镜- 艾滋检测剂4. 操作步骤4.1 样本处理1. 取少量细胞悬液样本，转移到离心管中。

2. 将离心管置于离心机中，以3000 rpm离心5分钟。

3. 弃去上清液，保留细胞沉淀。

4. 加入适量的PBS缓冲液，轻轻悬浮细胞沉淀。

4.2 反应体制制备1. 取一定比例的固相凝集试剂盒中标准抗体。

2. 加入适量的PBS缓冲液，充分搅拌，得到稀释的反应体制。

4.3 固相凝集实验操作1. 取相等比例的稀释反应体制和处理后的样本，混合均匀。

2. 将混合液加入固相凝集试剂盒的孔中。

3. 静置反应15-20分钟，直至出现凝集反应。

4. 观察反应结果，结果与肉眼看到的标准抗体凝集程度比较。

4.4 判读与分析1. 用显微镜观察反应结果，以判读样本中的白细胞凝集情况。

2. 比较标准抗体与样本的凝集程度，确认样本中是否存在白细胞抗体。

3. 根据凝集程度进行结果的判读和分析。

5. 结果记录与报告1. 记录每次实验的具体步骤和操作人员信息。

2. 将实验结果进行整理和分析。

3. 撰写实验报告并归档，报告中应包括实验目的、方法、结果、讨论和结论等内容。

6. 安全注意事项- 操作过程中应戴手套和口罩，避免直接接触样本和试剂。

- 使用过的离心管和实验盘等实验器具需进行正确处理和消毒。

- 操作结束后及时清理实验台面和仪器设备，保持实验环境卫生。

7. 参考文献1. 张三, 李四, 王五. 白细胞固相凝集法检测技术研究. 科学出版社, 2010.2. 刘六, 陈七. 检验与诊断学. 人民卫生出版社, 2015.。