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几种中药及生物样品的液相色谱分离—电化学检测新方法液相色谱-电化学联用技术(HPLC-ECD)在多组分复杂样品分析中是一个有趣的实用技术,它将高效液相色谱(HPLC)的高分离效能和电化学检测(ECD)的高灵敏性和高选择性相结合,较好的实现了高效分离和高灵敏度检测。
本论文采用HPLC-ECD及HPLC-MS联用技术,建立了几种中药和生物样品中活性成分的分析新方法；扩展了液相色谱和电分析化学的应用范围,具有较好的理论和应用价值。
具体研究内容如下: 1.采用超声提取法对中药材汉防己中的汉防己甲素和汉防己乙素进行有效提取,并应用HPLC-ECD技术对两种生物碱进行了分离检测。
该方法灵敏度高,操作简单易行,分析结果准确可靠,可应用于汉防己中防己生物碱的检测。
分析结果显示,汉防己甲素和汉防己乙素的浓度分别在1.3×10-6～1.07×10-4mol/L和1.4×10-6～1.09×10-4mol/L范围内和峰面积有良好的线性关系；二种生物碱的检测限分别达到了2.6×10-7mol/L和2.7×10-7mol/L,检测灵敏度比同等条件下紫外检测提高一个数量级；回收率均在95%-105%之间；测得汉防己中汉防己甲、乙素的百分含量分别为0.781%和0.401%。
实验采用LC-ESI-MS 方法验证了建立的HPLC-ECD方法的准确性。
2.建立了一种稳定性好、灵敏度高的中药黄连中四种生物碱的同时检测的液相色谱-电化学检测方法,并成功应用于大鼠血浆样品中对四种生物碱的分析。
采用该方法测定四种生物碱的检测限在1.0×10-8mol/L到3.0×10-8mol/L,与文献LC-UV方法相比较,小檗碱的检测灵敏度提高了了80倍,并且克服了LC-UV方法难以对具有不同最大吸收波长的多种化合物进行同时灵敏检测的缺陷。
采用流动注射分析法,比较了小檗碱样品在电化学检测器与商品化的紫外检测器检测时在重复性方面的差异性,结果显示两种检测器无显著性差异。
发酵饲料色氨酸代谢产物测定标准下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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色氨酸试验操作方法
色氨酸试验是一种常用的生物化学实验方法，用于检测物质中是否含有色氨酸。
操作方法如下：
1. 准备试剂和材料：色氨酸试剂盒、待检测物质溶液、显微镜片、显微镜、吸光度计等。
2. 取一定量的待检测物质溶液，加入试管中。
3. 按照试剂盒说明书的指导，添加试剂。
通常包括显色剂、显色底液等。
按照比例加入试管中。
4. 混合试管溶液，轻轻摇晃，使试剂和待检测物质充分混合。
5. 将试管放入吸光度计中，设置所需检测的波长。
吸光度计会测量溶液的吸光度。
6. 根据试剂盒说明书中的步骤，读取吸光度计的测量值。
7. 根据试剂盒说明书中提供的标准曲线或浓度计算方法，计算待检测物质中色氨酸的浓度。
8. 对于需要进一步确认的结果，可以使用显微镜观察待测物质溶液的特征，例如颜色、沉淀等。
需要注意的是，操作过程中应遵守实验室的安全操作规范，注意试剂的保存和处置。
同时，根据实验目的和样品特性，可以根据需要进行一定的实验优化和方法修改。
色氨酸含量测定方法
1. 你知道高效液相色谱法吗？就像给色氨酸做一次特别的“体检”。
比如说，我们想知道牛奶里色氨酸的含量，就可以用这个方法呀！把样本放进去，仪器就像个聪明的侦探，能准确找出色氨酸的量呢！
2. 纸层析法也不错哦！这就好像给色氨酸画一张独特的“地图”。
比如检测麦粒里的色氨酸，用这种方法慢慢展开，色氨酸的位置就清晰可见啦，神奇吧！
3. 分光光度法呢，如同给色氨酸安上一个“信号灯”。
像是在研究某种保健品中色氨酸含量时，通过特定的光线照射，就能知道色氨酸有多少啦。
4. 荧光光度法呀，简直就是给色氨酸加上了一层“闪耀的外衣”。
举个例子，检测药品里的色氨酸含量，那闪烁的光芒就是色氨酸在“亮相”呢！
5. 氨基酸分析仪测定法，好像是为色氨酸准备的专属“舞台”。
想要精确知道饲料里色氨酸的量，让它在这个“舞台”上好好表现一下就知道啦。
6. 酶联免疫吸附测定法呢，就像是给色氨酸设下的一个“陷阱”。
比如在检测血液样本中的色氨酸时，它乖乖地就“落网”啦。
7. 气相色谱法也能用来测定色氨酸哦，这相当于为色氨酸造了一条特别的“跑道”。
拿植物样本来说，色氨酸就能在这条跑道上被检测到呢。
8. 微生物法呀，就如同让色氨酸去参加一场“比赛”。
好比检测食品中的色氨酸含量，它在这个“比赛”中的表现就决定了它的数量呢！我觉得呀，这些方法都各有奇妙之处，都能帮我们准确了解色氨酸的含量呢！。
1.前言1.1测定色氨酸的意义色氨酸(Tryptophan ,Trp)β-吲哚基丙氨酸，化学式C11H12N2O2，相对分子质量204.23,为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。
色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在。
色氨酸是人体所需的一种重要的氨基酸，对预防糙皮病、抑郁症，改善睡眠和调节情绪，有着很重要的作用，氨基酸被广泛应用于食品、医药和饲料添加领域。
因此,研究色氨酸的分析测定在生物、医学和化学领域有重要意义。
1．2目前国内外测量色氨酸的研究现状目前测定色氨酸的方法主要有分光光度法[1]、荧光法[2]、高效液相色谱法[3]、毛细管电泳法[4]、原子吸收光谱法[5]和电化学法[6-9]等。
电化学分析法具有灵敏度高、选择性强、准确度好、分析速度快等特点，因而利用电化学方法测定色氨酸引起了人们极大的兴趣。
作为芳香类氨基酸的一种，色氨酸具有一定电化学活性，因此，采用电分析方法直接检测色氨酸是较理想的选择。
如邹永德等人[6]研究了多壁纳米碳管修饰玻碳电极伏安法测定色氨酸，研究了色氨酸在该电极上的电化学行为并优化了测定条件.与玻碳电极相比,该修饰电极明显降低了色氨酸的氧化峰电位,提高了氧化峰电流. 在pH7. 2的磷酸盐缓冲溶液中,测定色氨酸的线性范围为2. 5～140μmol/L,检出限为0. 12μmol/L. 对10μmol/L色氨酸测定的相对标准偏差为3. 4 % ( n = 8). 一些常见物质对测定无干扰,应用于人体尿样中色氨酸的含量测定。
姚军等人[7]利用聚对苯二酚修饰电极对多巴胺和L-色氨酸的电化学进行研究。
实验发现,在pH 515 的NaH2PO4-2Na2HPO4 缓冲溶液中,可用PHQ/ GCE 测定溶液中的DA 和L2Trp ,两者氧化峰电流均与浓度在1 ×10 - 3～5 ×10 - 6 mol/L 范围内呈良好线性关系,相关系数分别为01998 3 和01996 5 ,检出限分别为1 ×10 - 6 mol/L 和5 ×10 - 7 mol/L ,该方法简便快捷。
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
色氨酸、含硫氨基酸和18种蛋白水解氨基酸的检测
色氨酸、含硫氨基酸和蛋白水解氨基酸的检测是氨基酸例行分析中的三个重要组成部分。
色氨酸Tryptophan)是一种重要的人体和畜禽、鱼类生长的必需氨基酸，广泛用于医药、食品和饲料添加剂。
色氨酸分析方法有色谱法（离子交换、HPLC）、比色法、荧光法等。
色谱法由于兼有分离和检测双重功能而被广泛采用。
如何一机多用利用已有的氨基酸分析仪取代HPLC仪器完成色氨酸分析，具有实际意义。
含硫氨基酸是指蛋氨酸（Methionine）和胱氨酸（Cystine）。
它们是动物发育的必需氨基酸。
由于常规的酸水解法导致含硫氨基酸的破坏，测定含硫氨基酸时须采用氧化酸水解法。
经氧化水解后蛋氨酸1:1转化为蛋氨砜（Methionine sulphone），胱氨酸1:1转化为磺基丙氨酸(Cysteic acid)。
本文根据阳离子交换分离、柱后茚三酮衍生光度法检测的化学原理， 借助最新型氨基酸分析仪A300的仪器技术，提出了包括色氨酸、含硫氨基酸和蛋白水解氨基酸在内的21种氨基酸的分析方法。
方法操作简便,重现性好, 灵敏度高。
附图1: 蛋白水解氨基酸、含硫氨基酸和色氨酸的标准谱图
蛋白水解氨基酸、含硫氨基酸和色氨酸的标准谱图。
色氨酸BTP-色氨酸代谢相关物质分析动物体色氨酸代谢的色氨酸有两个来源：一个是组织蛋白质分解的内源氨基酸，约占2/3；另外一个是从日粮中消化吸收的外源性氨基酸，约占1/3。
色氨酸代谢途径也有两个：一个是合成组织蛋白质，另一个则是分解代谢。
色氨酸的吸收半周期为1.73 h，清除半周期为0.73～0.74h，其生物利用率为76%。
色氨酸在代谢过程中与碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素和微量元素等各种营养素之间有十分密切的关系。
色氨酸是营养必需的氨基酸，来自饮食中蛋白质供应。
除了自身能够组成体内蛋白质外，色氨酸还是血清素的前体，是一种重要的神经介质，也是犬尿氨酸的前体，生成烟酸、CO2、犬尿喹啉和黄尿酸。
不同的组织中色氨酸的代谢与多种生理功能有关。
肝脏通过降解过量色氨酸调节体内色氨酸平衡。
免疫细胞参与色氨酸降解为犬尿氨酸，在感染、炎症、免疫反应和妊娠反应导致的免疫应答过程中发挥关键作用。
在肠道和脑中，血清紊由色氨酸合成，其中色氨酸利用率能够影响情绪紊乱的敏感性。
百泰派克公司建立了以ACQUITY UPLC/TripleQuad5500（Waters/AB Sciex）为主的分析手段，能够实现对多个色氨酸代谢相关物质进行的定量及定性分析。
BTP可检测色氨酸代谢物百泰派克的技术员们经过多年的技术积累，采用ACQUITY UPLC/TripleQuad5500（Waters/AB Sciex）结合色氨酸及相关物质分析标准品，配合色氨酸及相关物质同位素标准品进行定量及定性分析：色氨酸代谢物分析服务列表。
关于样品血清、血浆、尿液、胆汁、胆酸；细胞、肝脏、脑组织等动物组织及粪便等；植物、酵母、微生物等。
样本需求量：血样、胆汁等：10微升。
各种组织：10毫克。
粪便等：10毫克。
其它样本类型及用量请与百泰派克销售联系。
样品运输：以3-4公斤干冰挥发一天计算，请使用足量的干冰运输（建议尽量选用较大块的干冰，大块的干冰挥发较慢），并用泡沫盒封闭。
