(完整版)微生物学实验指导书

1 实验一 产酶微生物的分离、纯化与选育

酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒,环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。目前,能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶,葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的.通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。

2。 蛋白酶产生菌的分离与纯化

2。1 实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化.

2。2 实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌.本实验将土壤样品（或其他样品)悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛.也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。

2.3 实验仪器与材料 土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。

2。4 实验方法与步骤

2。4.1 分离

1)采集土壤样品，用无菌水制备1:10土壤悬液；

2）取1:10土壤悬液5ml,注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75—80 ℃水浴中热处理10 min，以杀死非芽孢细菌；

3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置,于30-32 ℃培养24-48 h；

4)对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片,做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。

2。4。2 筛选 1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基,再点接于含酪蛋白的平板，30-32 ℃培养24—48 h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径.2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。

微⽣物实验指导书-教材

微⽣物学实验指导书

⽬录

实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术 (3)

实验⼆培养基的配制 (8)

实验三从⼟壤中分离微⽣物及纯化 (11)

实验四微⽣物的接种技术 (14)

试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 (17)

实验六细菌的简单染⾊和⾰兰⽒染⾊ (20)

实验七⼤肠杆菌⽣长曲线的测定 (23)

实验⼋实验室环境和⼈体表⾯微⽣物的检查 (25)

实验九乳酸菌的检测 (28)

实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术

【⽬的要求】1. 学习并掌握棉塞制作的⽬的、原理及⽅法；

2. 学习并掌握玻璃器⽫清洗及包扎⽅法；

3.掌握⾼压蒸汽灭菌的基本原理及操作⽅法。

4.了解其它常⽤消毒灭菌技术原理及技术

【基本原理】

棉塞的作⽤有⼆：⼀是防⽌杂菌污染，⼆是保证通⽓良好。因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较⼤的影响。

微⽣物学实验所⽤的器⽫，⼤多数要进⾏清洗、消毒、灭菌，才能⽤来培养微⽣物。玻璃器⽫的包扎⽅法正确合理，在使⽤过程中才能有效防⽌杂菌的污染。玻璃器⽫包扎好后，⼀般⽤⾼压蒸⽓灭菌法进⾏灭菌。

⾼压蒸⽓灭菌是将待灭菌的物品放在⼀个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的⽔沸腾⽽产⽣蒸⽓。待⽔蒸⽓急剧地将锅内的冷空⽓从排⽓阀中驱尽，然后关闭排⽓阀，继续加热，此时由于蒸⽓不能溢出，⽽增加了灭菌锅内的压⼒，从⽽使沸点增⾼，得到100℃以上的⾼温，导致菌体蛋⽩质凝固变性⽽达到灭菌的⽬的。此外，常见灭菌⽅法还有⼲热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。对空间灭菌常使⽤甲醛加⾼锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌⽅法。

【实验⽤品】

棉花，试管，培养⽫，纱布，三⾓瓶，棉线，量筒，⽜⽪纸（或旧报纸），LDZX-50KBS ⽴式⾼压蒸⽓灭菌锅，常⽤灭菌⽤具、药剂等等。

【⽅法步骤】

⼀、棉塞的制作

正确的棉塞要求形状，⼤⼩，松紧与试管⼝（或三⾓瓶⼝）完全适合，过紧妨碍空⽓流通，操作不便；过松则达不到滤菌的⽬的。制作过程见图1，包括取棉花、整理、折⾓、卷紧、成形、塞试管等步骤。塞上棉塞时，应使棉塞长度的1/3在试管⼝外，2/3在试管⼝内。

水微生物学实验指导书

武汉科技大学城市建设学院

给排水工程系

2007.12

1 目录页

实验一 光学显微镜的使用及微生物形态的观察

活性污泥生物相的观察

实验二 培养基的制备及灭菌

微生物的纯种分离及计数

实验三 微生物生理生化特性

2 实验一 光学显微镜的使用及微生物形态的观察

一、实验目的

1.了解普通光学显微镜的构造，学习显微镜的使用方法和保养方法。

2.观察蓝细菌、霉菌、酵母菌、放线菌的个体形态，学会生物图的绘制。

二. 实验内容

1．显微镜的使用方法和保养方法

2．微生物形态的观察

三、实验仪器、设备及材料

1.光学显微镜、载玻片、盖玻片等

2.示范片：颤藻、曲霉、青霉、酵母菌、放线菌。

四、实验原理

显微镜的结构和各部分的作用

图1是微生物实验常用的双目电光源生物显微镜，其构造分机械和光学两部分：

机械部分主要包括：

1．镜筒 镜筒是双筒，两筒间距离可调，长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。

2．载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。

3．调节器 镜臂旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降载物台，调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。

光学部分主要包括：

1．接目镜 一股使用的显微镜具有2—3种放大倍数的接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”等数字及符号。意即使用时可放大5倍、10倍或16倍。观察微生物时常用放大10倍或16倍的接目镜。

2．接物镜 接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40 (45)、100。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如：用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400。如果用放大100倍的接物镜则放大倍数为100×10＝1000。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的用低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。

1 微生物学实验指导书

目 录

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 ····················································································2

实验二 普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 ·········································································5

实验三 细菌的革兰氏染色和芽孢染色 ································································································· 12

实验四 放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 ············································································ 16

实验五 酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法············································ 20

生命科学学院微生物学教研室编写

2 实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查

微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。