植物组织培养
题目：烟草的再生
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2012年10月13日
烟草的再生
前言
植物组织培养是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养或试管培养。细胞全能性是指植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。细胞全能性是植物组织培养的理论基础。
一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再回复到未分化状态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。脱分化：将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
植物组织培养的过程：
植物组织培养的类型，按材料分为：愈伤组织培养、器官培养（胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养）、细胞培养（悬浮细胞培养和单细胞培养）、原生质体培养。本次实验采用的就是器官培养，以烟草叶作为培养材料。
植物组织培养可以分为初代培养和继代培养。初代培养是指外植体的最初培养。继代培养是将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，成为继代培养。
植物组织培养的特点：1、培养条件可以人为控制。2、生长周期短，繁殖率高。
3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。故植物组织培养具有良好的前景，可用于快速繁殖、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、单倍体育种等。
一、实验目的
1、了解掌握组织培养的基本概念和基本原理。
2、了解开展组织培养工作的基本设施。
3、了解无菌操作和组织培养的操作技术。
二、实验原理
植物体细胞具有细胞全能性。细胞一旦脱离了母体植株，拜托了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约，在一定的培养条件下，就会发生一种回复变化，从而失去分化状态，变为分生细胞，实现脱分化过程。然后，这些脱分化细胞经过连续的有丝分裂，形成愈伤组织，即指在人工培养基上外植体长出来的一团无序生长的薄璧细胞。当试管苗在瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完时就要转接，进行继代，可迅速得到大量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。
三、实验材料、药品及仪器
实验材料：烟草的叶片
实验药品：MS培养基所需的各类药品、蔗糖、琼脂条、1mol/LNaOH、70%酒精、升汞、蒸馏水
实验仪器：烧杯、玻璃棒、电子天平、电炉、容量瓶、pH计、塑料瓶、搪瓷杯、量筒、移液管、洗耳球、锥形瓶、漏斗、牛皮纸、棉线、高压蒸汽灭
菌锅、超净工作台、酒精灯、镊子、手术刀、接种针、培养皿、滤纸、
酒精棉培养箱、记号笔
四、实验步骤
（一）MS基本培养基贮备液的配制
在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为了使用方便和用量准确，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10-100倍。
按表1所示数据分别配制：①大量元素贮备液，②微量元素贮备液，③铁盐贮备液，④除蔗糖以外的有机物质贮备液和⑤CaCl2贮备液。
表1 MS培养基的贮备液
（1）大量元素的配制
在配制大量元素无机盐母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，各种药品必须在充分溶解后才能混合，同时在混合时要注意先后次序，把钙离子(Ca2+)、锰离子(Mn2+)、钡离子(Ba2+)和硫酸根离子(SO42-)、磷酸根离子(PO43-)错开，以免KH2PO4和MgSO4与CaCl2等发生作用，相互结合生成硫酸钙、硫酸钡、磷酸钙或磷酸锰沉淀。在混合各种无机盐时，其稀释度要大，慢慢地混合，同时边混合边搅拌。
（2）微量元素的配制
在配制微量元素混合母液时也要注意药品的添加顺序，以免产生沉淀。称取药品时要看清药品名称，以免弄错。
（3）铁盐的配制
铁盐必须单独配制，因为与其他母液混合容易产生沉淀，在培养基中，采用螯合铁的形式配制，即硫酸亚铁和Na2-EDTA的混合物，在pH值7.6~8.0时也可保证铁的供应源。配制铁盐时，要分别溶解，再混合在一起进行加热，直至澄清透明。（4）生长调节物质的配制
原液的浓度不宜配制的过大，一般每毫升原液含生长调节物质0.5mg~1mg，若经常只需配制少量培养基，可将每毫升原液的生长调节物质调至0.1mg~0.2mg，这样既方便量取，精确度也更高。
某些生长调节物质不溶于水，如生长素等，配制时可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，也可加热助溶，或用1mol/L KOH(或NaOH)助溶。激动素(KT)和6-苄基氨莽嘌呤(6-BA)，可先溶于少量1mol/L盐酸中，再加水定容。叶酸需用少量稀氨水溶解。（5）CaCl2贮备液的配制
CaCl2要单独配制，以防同硫酸根离子(SO42-)、磷酸根离子(PO43-)形成沉淀。本来要用的是CaCl2·2H2O，不过找不到CaCl2·2H2O，只找到CaCl2，故用CaCl2配制贮备液Ⅴ，用量也按CaCl2计算。
（二）MS培养基的配制和灭菌
将贮备液按顺序排好，按以下步骤配制培养基。
（三）初代培养的接种及观察
（1）前期准备
1、提前将所需的用具灭菌，接种时取出待用。
2、超净工作台灭菌：先用紫外灯照射15~20min，再关掉紫外灯，开照明灯，并用酒精擦洗台面和双手。
3、用沾有酒精的酒精棉擦拭装着培养基的锥形瓶，放进工作台。
4、把手术刀、镊子等浸于酒精中，再在火焰上消毒，然后架在装有滤纸的培养皿上，不能放在台面上。
（2）材料的消毒
1、用镊子夹取一片烟草叶，先放入75%酒精中漂一下，然后放入升汞中浸泡3~4min，期间要不时地翻动叶片，再在无菌水中漂一下，重复2次后，置于滤纸上吸去叶片表面多余的水。
2、在火焰附近切割烟草叶片，用手术刀将叶片分成两半，去掉主脉，并将叶片边缘和两端切去，留下叶肉后将叶片切得大块些。
（3）接种
1、打开瓶口，拿下牛皮纸时，要先将牛皮纸掀开个大口，在火焰附近取下，并用火焰烧瓶口，防止杂菌污染。
2、用镊子将切成块的叶片放入装有培养基的锥形瓶，盖上牛皮纸，同样的也要先弄大点再盖上去，防止杂菌污染，再用棉线扎上瓶口。
3、接种完毕，清理工作台并在锥形瓶上写上名字。
（4）定期观察与拍照
定期观察烟草叶片的生长情况，定期拍照，并及时移走发生霉变的锥形瓶。五、实验结果
接种后第一周
图片略
接种后一周，烟草叶片稍蜷曲，形成愈伤组织。
接种后第三周
图片略
接种后第三周，愈伤组织长势良好。
六、注意事项及总结
1、配制CaCl2·2H20时要注意是带几个水的，需要独立配制，以防产生沉淀。
2、实验所需的各种器皿要清洗干净。
3、定容的时候要用容量瓶，如无，则用量筒代替。
4、配制铁盐时，要分别溶解，再混合在一起进行加热，直至澄清透明。
5、组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基和培养容器等都
必须经过灭菌处理，各项操作都必须在无菌条件下进行。
6、叶片置于升汞溶液中消毒3~4min，时间太短会消毒不彻底，时间太长会杀死细胞。
7、接种时，叶片不能切得太小，并且应该小心使用镊子和手术刀，避免对叶片产生
严重的损伤。
8、接种时要经常用酒精擦拭工作台和双手，接种所用的镊子和手术刀应反复在酒精
中浸泡和在火焰上灼烧。待镊子和手术刀冷却后才使用，以防烫伤叶片。
9、接种时，打开瓶口，拿下牛皮纸时，要先将牛皮纸掀开个大口，在火焰附近取下，
并用火焰烧瓶口，防止杂菌污染，盖上牛皮纸时也要这样。
整个植物组织培养过程都要沉着、冷静、认真、小心和仔细，要认清药品的名称以免弄错，接种时要注重无菌操作，防止杂菌污染，接种后要定期去观察其长势并记录。
烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植 物细胞的全能性。实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。 培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化1 / 5 矿质营养。矿质营养又叫无机营起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括： 1. 、养，是指植物在生长发育的过程中所需要的各种化学元素，其中包括大量的元素如N、P 2. Mn、Zn、Cu等，其对植物的生长发育中有着重要的生理作用。FeK和微量元素如、B、维生素。维生素能够以辅酶的形式参与多种酶系的反映，直接影响到蛋白质、糖、脂肪等植物生长物质。其
植物组培实验室建设 目录 1、功能简述 (1) 1)准备室 (1) 2)灭菌室 (1) 3)缓冲间 (2) 4)无菌操作室 (2) 5)培养室 (2) 6)驯化室 (3) 7)温室 (3) 8)辅助实验室（非必要） (3) ①细胞学实验室 (3) ②生理生化分析室 (4) 2、设备及耗材清单 (4) 1)试验设备清单 (4) 2)常备试剂清单 (6) ①MS培养基必备试剂 (7) ②常备激素及辅助试剂 (7)
植物组培实验室建设 1、功能简述 植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。 1)准备室 用途：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、晾置、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、落水架、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平（0.1g、0.0001g分度各一台）、干热消毒柜（可省去）、蒸馏水器（可省去）、酸度计(又称pH计，为节约成本和减少维护可用pH试纸代替)、过滤灭菌器、培养皿、培养瓶、三角瓶、试管、电磁炉、水浴锅、漏斗、量筒、刻度移液管（为操作简便起见可购买移液枪1ml、5ml各一个代替）、玻璃棒、酒精灯、镊子、试管架、琼脂、纱布、棉塞、封口膜、大量元素、微量元素、蔗糖、有机物和植物激素的母液（详细内容见附表）、NaOH、盐酸、滤纸、脱脂棉、橡皮筋、牛皮纸等。 图1 准备室图2 灭菌室 2)灭菌室 用途：完成各种器具的保存、培养基的灭菌等。 1
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
名词解释生物产量：烟草在整个生长季节中所积累的干物质重量。 经济产量：单位土地面积上所收获可用干物质的重量，对烟草来说就是烟叶的产量。 烟叶品质：消费者对烟叶燃吸过程中所产生的香气、劲头、吃味、刺激性等几个主要因素的综合感受和吸烟安全性的综合评价。 成熟度：烟叶在田间发育过程中形成质量水平的反映。 身分：烟叶的组织构造密度，即叶肉细胞的大小及其排列的疏密程度。 物理特性：叶片的厚度、叶面密度、单叶重、平衡水含量、填充值、含梗率等。评吸：通过烟叶燃吸后的烟气在经过人的口腔、鼻腔和喉部等感官时所产生的感觉评定烟叶质量的方法。 劲头：烟气中的烟碱对人体器官作用时，能够引起兴奋反应的程度。 刺激性：口腔、鼻腔和喉部对烟气产生的刺激感强烈冲击的接受程度。 香气：烟叶燃烧后进入烟气中所表现出来的一种令人愉快的特殊芳香。 吃味：烟气反映在口腔内包括酸、甜、苦等味道感觉的总称，是烟气被口腔反映的味感。 种植制度：一个地区或生产单位的作物组成、配置、熟制与种植方式的总称，包括因地种植、轮作倒茬、间作套种、混作和复种等内容。 轮作：在同一块土地上于一定年限内有计划、有顺序地轮换种植不同类型作物的种植方式。 套种：在前一季作物生长后期，在其预留的行间或带间套种其他作物的种植方式。壮苗：生长发育良好，新陈代谢正常，有机物质合成积累较多，内含物丰富，碳氮比协调，抗逆性强，移栽成活率高的烟苗。 格盘育苗：使用由若干苗穴组成的育苗盘培育作物秧苗的方法。 漂浮育苗：在温室或塑料薄膜覆盖条件下，利用成型的膨化聚苯乙烯格盘为载体，装填上人工配置的培养基质，将格盘漂浮于含有完全矿质营养的苗池中，完成烟草种子的萌发、生长和成苗过程。 烟草需水量：每生产单位重量干物质由烟株蒸腾所消耗水分的数量。水分利用效率：烟株消耗单位重量水分所生产的同化物的量。 圆顶：烟株打顶10-15d后，上部叶完全展开，与中部叶大小接近，烟株呈筒形的时
烟草植物组织培养实验 一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。深刻理解植物细胞的全能性。 二实验原理 植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。 培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括：1. 矿质营养。矿质营养又叫无机营养，
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
单项选择题 1、作物产量中常说的经济系数是指 1.生物产量与经济产量之比 2.经济产量与生物产量之比 3.生物产量与经济产量的百分比 4.经济产量与生物产量的百分比 2、作物品质的评价指标中，下述属于形态指标的是 1.蛋白质 2.氨基酸 3.脂肪 4.颜色 3、作物生长的“营养三要素”是指 1. C、H、O 2. N、P、K 3. S、N、P 4. N、P、S 4、下列哪种根属于产品器官 1.气生根 2.须根 3.块根
4.不定根 5、下列属于喜钾作物的是 1.水稻 2.玉米 3.马铃薯 4.小麦 多项选择题 6、影响复种的条件包括 1.热量 2.水分 3.地力与肥料 4.劳畜力与机械化等 7、下列哪些作物需经过一定时期的低温诱导才能正常开花结实。 1.大麦 2.小麦 3.黑麦 4.油菜 8、作物的播种方式包括 1.插播
2.条播 3.点播 4.重播 9、下面哪些材料可用于繁殖下一代 1.颖果 2.块茎 3.块根 4.鳞茎 10、按照土壤质地进行分类，一般可以把土壤区分为下列几大类 1.砂土类 2.黑土类 3.壤土类 4.黏土类 11、根据作物对二氧化碳同化途径的特点，下列哪些作物属于C3作物 1.小麦 2.大豆 3.玉米 4.棉花 12、间作与套作不相同点在于 1.共生期长短不一样 2.熟制不一样 3.复种指数不一样
4.前者是成行种植，后者是成带种植 13、关于土壤质地下列表述正确的是 1.沙质土壤结构良好，保水保肥。 2.壤质土耐旱耐涝，适耕期长。 3.黏质土吸附作用强，保肥性好。 4.沙质土壤保水不保肥。 14、下列属于长日照作物的是 1.小麦 2.烟草 3.大麦 4.油菜 15、种子萌发必不可少的因素包括 1.光照 2.温度 3.水分 4.氧气 16、从引种角度看，短日照作物由北方向南方引种，下列表述正确的是 1.生育期缩短 2.生育期延长 3.生育期不变 4.营养生长期缩短 17、按照作物“S”生长进程，下列说法正确的是
第二章烟草生物学特性 我国的烤烟、晒烟和晾烟，绝大多数属于普通烟草，只有花色呈黄色的烟草属于黄花种。还有少数种如异香烟草（N. alatalioketotto）、美花烟草（N. sylverstris spegetcomes）和香花烟草（N. suaveolens Lehn）等，因其花色美丽作为观赏植物栽培。对红花烟草较全面的分类方法是Wilson和Loomis提出的以下分类，界：植物界；亚界：有胚植物亚界；门：维管植物门；亚门：羽叶亚门；纲：被子植物纲；亚纲：双子叶亚纲；目：茄目；科：茄科；属：烟草属；种：红花烟草种。 第一节烟草的植物学特征特性 烟草是多年生植物，在120~130天的大田生育期中，生长成为比种子大3000万倍的庞大植株，平均每小时增长约为种子的万倍。烟草株高叶大，需水肥很多。因此，根系在烟草一生中就显得更重要。 一．根 （一）根的形态 1．根的分布烟草的根属圆锥根系，由主根、侧根和不定根三部分组成(见图)。 烟草种子萌发时，胚根突破种皮后直接生长而成主根，主根产生的各级大小分支都叫侧根，由茎上发生的根都叫不定根。根系的密集范围比分布范围小得多，根系密集深度约在地表以下40cm，密集宽度在距茎周40cm范围，打顶以后有根系伸长到40cm以下或40cm以外。烟草的发根能力很强，采用培土的方法可使茎秆上长出很多不定根，起到充分吸收表土营养的作用。 2．烟根的初生构造 根尖由根冠、生长点、伸长区和根毛区组成， 从横切面看，烤烟根的初生结构由表皮、皮层和中柱三部分组成。 3．烟根的次生构造 主根和侧根在完成了初生生长后，还会进一步进行次生生长，使根的直径增粗，并形成次生维管组织和周皮等次生结构。次生构造是由维管形成层和木栓形成层分化而成，在根毛区上方开始出现。维管形成层向内产生次生木质部，向外产生次生韧皮部，形成根的次生维管组织；木栓形成层向外产生木栓层，向内产生栓内层，形成根的周皮。 （二）根的发生 烟草种子由种皮、胚和胚乳三部分组成。胚根正对着种孔。在适宜的温、湿度和气体交换条件下，种子吸收水分开始萌动，胚根突破种皮伸长出来，胚根突出种皮后即向地弯曲并垂直向下生长，就形成了主根。主根入土之后可以不断地形成侧根，侧根起源于中柱鞘，在根毛区的上部开始出现。 不定根是由移栽时埋于土层下方的茎上产生的，数量充足但分布较浅。 在幼苗生长的中后期，根系水平生长速度大于垂直生长，7叶期比5叶期根深增长了1.5倍，水平生长增长了1.8倍，9叶期比5叶期根深增长了1.6倍，而水平生长增长了2.6倍。 烟苗移栽到大田后，由于主根被切断，主根停止伸长，侧根大量发生，活力很强。在适
烟草叶片的组织培养 一、实验原理与实验步骤 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 植物材料：烟草植株 药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞 仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0) 、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子 二、实验方法与步骤
注意： 1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2、微量元素母液的配制 按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签 3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4、有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。（1）制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 （2）称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 生长调节剂母液配制： 为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。 不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。 三、培养基配制和灭菌 本次实验使用 （1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L； （3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。 注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50左右后，加入相应激素所得， MS固体培养基的配置过程在此不作过多赘述
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
名词解释 1、烟叶品质 2、外观质量 3、成熟度 4、种植制度： 5、轮作制度 6、壮苗： 7．烟草漂浮育苗8．早花9、烤烟产量10、外观质量： 11、身份12、油分13、弹性：14、物理特性： 15、评吸： 16、劲头： 1 7、刺激性： 1 8、苦味和辣味： 1 9、香气： 20、杂气21、吃味： 22、燃烧性： 23、阴燃性： 24、连作： 25、轮作： 26、间作： 27、套种： 28、格盘育苗： 29、托盘育苗30、需水量： 31、耗水量： 32、水分利用效率： 33、团棵： 34、旺长： 35、圆顶： 36、底烘：37．烟叶的吸湿性38．烟草的弹性39．烟草湿润育苗40．烟叶的外观质量41．晒烟42．包衣种子43．烟草优质适产44．烟草的内在质量45．烟草漂浮育苗46．早花 简答题 1.简述烟草根的初生构造和次生构造。 2.简述烟草根的生理机能。 3.简述烟草叶的构造及其生理机能。 4.简述烟草种子的萌发过程及其需要的条件。 5.简述环境条件对烟草生长发育的影响。 6.如何进行烟叶质量评价? 7.如何统一烟叶产量与质量的矛盾? 8.简述烟草产量与质量的关系。 9.烟草轮作、倒茬的意义。 10.烟草连作的危害有哪些？轮作有哪些优点？ 11.简述确定烟草移栽期的依据？ 12.简述育苗的要求及壮苗的标准。 13.如何正确决定大田期施肥量和氮、磷、钾搭配比例？ 14.简述烤烟测土配方施肥方法？ 15.简述烤烟大田需水规律和需肥规律？ 16.试述烟草大田期生长特点与管理要点。 17.烟草为什么要中耕培土，中耕培土的主要技术有哪些？ 18.试述烟田深耕的作用和技术。 19.烤烟生产时中如何划分生育期？ 20.如何确定烟草的移栽期。 21.试述打顶抹杈作用？ 22.如何决定烤烟打顶高度和留叶数？ 23.早花发生的原因及弥补措施，生产上如何避免早花的发生？ 24.如何预防烟叶底烘。 25.简述烟草地膜覆盖栽培技术。 26.分析烟田地膜覆盖栽培的优点和缺点。 27、请你根据田间烟株长势和土壤肥力情况，说明如何进行封顶打杈？（7分） 28、试论影响烟叶烟碱含量的主要因素。（5分） 29、试述烤烟进行中耕有什么作用？中耕的技术及要求有哪些？（6分） 30、请你说出硝态氮和氨态氮对烤烟生长发育的影响。（5分） 31.简述烟草的类型及其特点。 32简述烟草的生产特点。 33.简述烤烟烟区划分的依据。 34.全国烤烟种植最适宜和不适宜类型的条件？ 35.我国主栽的烤烟品种有哪些？ 36.简述烟草花的构造及其开花习性。 37.简述根、茎、叶生长的相关性。 38.简述烟草群体与个体的关系。 39.在轮作周期中确定烟草前作的原则。 40.烟稻轮作制和烟草三年五熟轮作制的优点。 41.简述烟草必需营养元素的营养作用。 42.为什么说氮素是烟草最重要的营养元素？ 43.根据烟草的需肥规律如何进行烟田施肥？ 44.如何确定烟草的施肥量？ 45.影响烟草养分吸收的因素有那些？ 46.比较烟草硝态氮和铵态氮营养的异同。 47.根据有机肥的特点，烟田应如何施用？ 48.简述烟田施用饼肥的优点及其使用方法。 49.简述优质烤烟生产的土壤条件有哪些？ 50.试述烟草对干旱胁迫的反应。 51.根据烟草的需水规律如何进行合理灌溉？ 52.简述烟田整地的方法和作用。 53.简述影响烤烟种植密度的因素。 54、试论影响烟叶烟碱含量的主要因素。（5分） 55、请你根据烤烟品种红花大金元的的品种特性谈谈其栽培和烘烤技术要点。 56、简述优质烤烟生产的土壤条件有哪些? （5分） 57、.简述烤烟大田需水规律和需肥规律。（5分） 58、优质烤烟生产所需的光照条件及云南烟区在这方面的自然优势有哪些? 59、试述优质香料烟生产的生态环境条件以及主要栽培措施（7分）。 60、概述烟叶品质评定的内容。（5分） 61、试述烟草漂浮育苗技术体系构成。（7分） 1、烟叶品质：是消费者对烟叶燃吸过程中所产生的香气、劲头、吃味、刺激性等几个主要因素的综合感受和吸烟安全性的综合评价。通常包括外观质量和内在质量两个方面， 2、外观质量：指烟叶的商品等级质量，如烟叶的成熟度、身份、结构、部位、颜色等表现出的优劣程度。 3、成熟度：是烟叶在田间发育过程中形成质量水平的反映，成熟度好的烟叶颜色均匀一致，叶片正反面颜色差异小，油份足，色度浓，香气质好量足，吃味醇和，杂气和刺激性小。 4、种植制度：是指一个地区或生产单位的作物组成、配臵、熟制与种植方式的总称，包括因地种植、轮作倒茬、间作套种、混作和复种等内容。 5、轮作制度：是指在一个轮作周期中，各种作物合理的安排顺序和田块布局。 6、壮苗：是指生长发育良好，新陈代谢正常，有机物质合成、积累较多，内含物丰富，碳氮比协调，抗逆性强，栽后成活率高的烟苗。 7．烟草漂浮育苗——所谓漂浮育苗，即采用质地很轻的泡沫塑料制成育苗盘，育苗盘的空穴中装上基质(人造土壤)，种子播种在基质内，然后将育苗盘移到育苗池中漂浮在营养液表面完成整个育苗过程。 8．早花——烟株未达到正常栽培条件下应有的叶数和高度，就提前现蕾开花，称为早花。它是营养生长受阻，生殖生长加速的结果。早花烟株矮小，叶数锐减，叶窄而薄，对产质影响很大。 2、烟制品的主要类型有卷烟，斗烟，水烟，雪茄，嚼烟，鼻烟。 3、确定烤烟移栽期的依据有气候条件、种植制度、品种特性、育苗技术、成苗因素。 4、烟草幼苗生长的最适温度是25-28℃，育苗期间低于2℃的低温和高于35℃的高温会引起冻害和灼伤幼苗。 5、优质烤烟生产所需的光照条件是和熙的光照。日照时数是500-700小时，日照百分率是40%；其中成熟期日照时数是280-300小时，日照百分率是30 %。 6、随着烟草种植密度的增加，烟田小气候中风速变小、地温降低、相对湿度增大。 7、全国烤烟适宜生态类型划分中，最适宜区的条件是1、无霜期≥120天；2、≥10°C积温＞2600°C；3、日均温≥20°C持续日数≥70天；4、0-60厘米土壤含CL量＜30mg/kg; 5、土壤PH5.5-6.5；6、地貌类型：中低山、低山、丘陵、高原；7、烟叶内在质量：香气质好，香气量足，吃味纯净。 10、影响烟草种子出苗的外界环境因素主要温度、水分和氧气（空气）。 11、烟草生产有产量与品质并重、生产工序复杂、对环境条件敏感、技术性强、烟叶的经济价值高的特点。 13、烟叶的产量是由单位面积上的株数，单株留叶数，单片叶的重量三部分所构成的。 14、烤烟的优质适产是指产量最高点与品质最高点既经济又合理地统一在一个水平上。 15、烟草适宜的前作有水稻，小麦，油菜等。 17、按调制方法分类，白肋烟属于晾烟，香料烟属于晒烟，黄花烟属于晒烟。 18、按调制方法和主要用途，烟草类型有烤烟、晾烟、晒烟、熏烟。 21、烟叶腺毛分泌物的主要成分是芳香油，树脂，蜡质。 25、烟田管理的“三一致”是指烟苗大小一致，烟株高矮一致，同部位烟叶成熟一致。 29、烟草种子萌发的三个过程是物理吸水阶段，营养物质转化的生化阶段，生理活动的生长阶段。 30、烟草根系生长的最低温度是7oC，最适温度是31oC，最高温度是43oC。 44、理想型烟株的特征为下部叶阳光充足，上部叶叶片开展，整株叶厚薄适中。 47、红花烟草属于植物界维管植物门被子植物纲双子叶亚纲茄科，烟草属。人工栽培的是红花烟草和黄花烟草。 48、烟草的根由主根、侧根、不定根三部分组成。 52、烟草的苗床期指从出苗到成苗。可分为小十字期、大十字期、猫耳期、成苗期四个生育时期。 53、烟草育苗中锻苗的方式主要有断水炼苗、揭膜锻苗和剪叶锻苗。 54、烟叶育苗的要求是苗壮、适时、量足、整齐和大小适宜。 55、生产中主要采用的育苗方式有漂浮育苗、水旱两段育苗和常规育苗等。 56、烟草漂浮育苗的壮苗的标准是根系发达、茎粗壮而柔韧、有一定的叶片数，叶色正常、抗逆性强。 57、烟草大田施氮量的确定是根据理论产量、土壤速效养分和土壤养分利用率和所用肥料利用率来确定的。 58、应变施肥主要是指看天施肥、看地施肥和看烟施肥。 59、按照烤烟大田施肥的时期分为基肥、前期追肥和叶面追肥等。施肥方法分为撒施、条施、穴施、肥料溶液灌根和肥料溶液喷施等。 61、移栽期的确定要依据气候条件、种植制度、品种特性和播种期综合考虑。 62、烟草对水分的消耗包括地表蒸发和叶面蒸腾两个方面，前者指土壤水分通过地表面蒸发散失，称为生态耗水；后者指水分通过烟株表面（主要是叶片）而散失，称为生理耗水。 64、烟田灌溉方法有穴灌、沟灌、滴灌和喷灌等。 65、烟草的早花是指烟株未达到正常栽培条件下本品种应有的高度和叶数就提前现蕾、开花的异常现象。 66、早花产生的原因是生理特性、品种特性、气候条件、栽培条件等四方面的原因。 67、烟草的底烘的指烟株下部叶为达到正常成熟时期就提前发黄或枯萎的现象。 68、底烘发生的原因有光照不足、土壤水分不足和水分过多等。 69、打顶技术包括打顶的时期、打顶的高度和留叶多少等。 73、香料烟具有特殊的浓香的特点，植株上部部位烟叶品质最好。 1、评定烟叶品质包括外观质量、内在质量、烟叶的化学成分、 烟叶的物理特性、烟叶的安全性五个方面内容。 2、“两烟”是指烤烟和卷烟。
◆名词解释 生物产量：烟草在整个生长季节中所积累的干物质重量。 经济产量：单位土地面积上所收获可用干物质的重量，对烟草来说就是烟叶的产量。 烟叶品质：消费者对烟叶燃吸过程中所产生的香气、劲头、吃味、刺激性等几个主要因素的综合感受和吸烟安全性的综合评价。 成熟度：烟叶在田间发育过程中形成质量水平的反映。身分：烟叶的组织构造密度，即叶肉细胞的大小及其排列的疏密程度。 物理特性：叶片的厚度、叶面密度、单叶重、平衡水含量、填充值、含梗率等。评吸：通过烟叶燃吸后的烟气在经过人的口腔、鼻腔和喉部等感官时所产生的感觉评定烟叶质量的方法。劲头：烟气中的烟碱对人体器官作用时，能够引起兴奋反应的程度。 刺激性：口腔、鼻腔和喉部对烟气产生的刺激感强烈冲击的接受程度。 香气：烟叶燃烧后进入烟气中所表现出来的一种令人愉快的特殊芳香。 吃味：烟气反映在口腔内包括酸、甜、苦等味道感觉的总称，是烟气被口腔反映的味感。 种植制度：一个地区或生产单位的作物组成、配置、熟制与种植方式的总称，包括因地种植、轮作倒茬、间作套种、混作和复种等内容。轮作：在同一块土地上于一定年限内有计划、有顺序地 轮换种植不同类型作物的 种植方式。 套种：在前一季作物生长后 期，在其预留的行间或带间 套种其他作物的种植方式。 壮苗：生长发育良好，新陈 代谢正常，有机物质合成积 累较多，内含物丰富，碳氮 比协调，抗逆性强，移栽成 活率高的烟苗。 格盘育苗：使用由若干苗穴 组成的育苗盘培育作物秧 苗的方法。 漂浮育苗：在温室或塑料薄 膜覆盖条件下，利用成型的 膨化聚苯乙烯格盘为载体， 装填上人工配置的培养基 质，将格盘漂浮于含有完全 矿质营养的苗池中，完成烟 草种子的萌发、生长和成苗 过程。 烟草需水量：每生产单位重 量干物质由烟株蒸腾所消 耗水分的数量。 水分利用效率：烟株消耗单 位重量水分所生产的同化 物的量。 圆顶：烟株打顶10-15d后， 上部叶完全展开，与中部叶 大小接近，烟株呈筒形的时 期。 底烘：烟株下部叶未达到正 常成熟时期就提前发黄或 枯萎的现象。 早花：烟株未达到正常栽培 条件下本品种应有的高度 和叶数就提前现蕾、开花的 异常现象。 有效积温：作物某个发育时 期或全部生育期内有效温 度的总和。 ◆简答题 1.简述苗床期烟草的生长 发育特点和管理要点。 烟草苗床期可划分为4个阶 段，根据各阶段烟苗的生长 特点进行管理。 出苗期：主要是种子萌发和 幼苗出土过程，烟苗由异养 向自养过渡。应密封薄膜保 温保湿。 十字期：烟苗生长缓慢，要 求较高的温度和湿度条件， 应密封薄膜保温保湿，当膜 内温度超过30℃时应及时 通风降温，防止烧苗。 生根期：烟苗根系生长活 跃，茎叶生长速度较慢，应 控水促根，及时间苗、定苗， 加强通风，揭膜晒苗。 成苗期：烟苗地上部分生长 速度较快，应加强练苗，及 时修剪，锻苗健壮。 2.简述以烟为主耕作制度 建立的原则。 （1）为烟草选择一个好前 作：前作氮素的残留量不能 过多；前作与烟草不能有同 源病虫害。 （2）烟田生态条件要良性 循环：秸秆还田改良土壤； 种植豆科等调节矿质营养 的作物；陪伴绿肥种植改良 土壤。 （3）优化布局，相对集中： 以村民组为单位安排轮作 布局；交通、水利建设配套； 烤房群落布局合理。 （4）轮作周期时间3年以 上：缓解消除病害的需要； 作物间营养调节的需要。 3.简述烟草中耕培土的作 用和方法。 （1）破除土壤板结，疏松 土壤，增大土壤通透性。 （2）提高地温，促进土壤 养分释放。
烟草的组织培养技术 一、目的与要求 1.验证“植物细胞全能性”理论。 2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。 二、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。 愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。 脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。 再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。 三、材料和用具 1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。 2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解 剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养 瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。 3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。 四、操作步骤 （一）诱导培养基配制（见表1）
1.加MS储液（储液配置见附表） 大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。 铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。储液中的铁盐存于棕色瓶中。配好的储液应当4℃保存。表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。 表1 诱导培养基配制表 成分实际称取量 蒸馏水120 ml MS母液15 mL 蔗糖 4.5 g 用蒸馏水粗略定容至100ml pH值 5.8 琼脂 1.2 g 2.加蔗糖（3%）（m/v）。蔗糖是碳源，同时起到维持渗透压的作用。 3.调pH=5.8。pH过低，高温处里时间过长，都可能会使培养基不凝。 4.加琼脂（0.7-0.8%）（m/v）琼脂粉是固化剂、支持物。 （二）灭菌 1.培养基、解剖刀、镊子、平皿需在高压灭菌锅120℃，灭菌15min。 2.接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30min。 3.用肥皂洗手和手腕。进入无菌间，先用70%酒精或新洁尔灭喷手。关掉 无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，关掉超净工作台上的紫外灯。（三）接种 1.坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手、培养瓶和超净台面。 2.待手上的酒精干了，点燃酒精灯。 3.将培养瓶的盖子旋松，但不要打开，放到无菌风道侧面备用。 将镊子、解剖刀在酒精灯外焰上灼烧，待其冷却后，放到培养皿上备用。 4.用镊子和解剖刀取出一块叶盘，放到平皿上，切取烟草叶芽1-2块，插 入培养基。