实验一：葡萄柚扩繁培养基的制备（1L)
实验时间：9月1日
实验地点:西南林业大学六楼实验室
实验步骤：
1．量取液体。大量元素100 ml（用100 ml的量筒量），微量元素、有机元素、铁盐均10 ml（用10ml的量筒量），将上述量取的溶液混合于1L大烧杯中。
2.加纯水至500-600 ml刻度线稀释。
3.称取蔗糖30 g，用玻璃棒搅拌至溶解。
4.定容。用1000 ml量杯定容后转移至大烧杯
5.用移液枪取6-BA100μml,IBA 40μml。
6.混匀，调PH至5.9。
7.称取琼脂7g于塑料盆内。将调好PH的培养基倒入塑料盆，置于微波炉内煮14min。
8．分装，封口，标记。
9. 121℃高温灭菌20min。
1000ml约一共分装33个瓶，加上实验老师给予的3个培养基我们组一共有36个瓶。
实验二：葡萄柚组培接种工作
实验时间：9月3日
实验地点：西南林业大学A栋六楼接种实验室
实验过程：
准备材料及器材：葡萄柚脱毒苗、超净工作台，手套、剪刀（3把）、镊子（3把）、酒精灯两盏、无菌皿。
实验步骤：
1.接种前准备工作：
用酒精棉球将超净工作台台面擦拭一遍，然后将所需物品放入超净工作台内。
2.接种操作：
⑴将超净台的门打开至1/3，带上手套，用酒精将双手进行消毒，反复揉搓双手使手上酒精挥发
完全，将手伸入超净台内。
⑵点燃酒精灯。点燃前要确保手上的酒精已完全挥发，否则容易造成危险
打开无菌皿。
⑶镊子消毒。先用手将报纸打开，后在酒精灯上灼烧（除手捏的地方不烧，其余的均要烧，烧
到烫为止。镊子用完都要放到特定放镊子的架子中，且每次用时均要灼烧消毒）。
⑷挑拣材料。先将盛放葡萄柚脱毒苗的瓶子上的塑料膜取下。拿取镊子和剪刀（注意取放剪刀
与镊子时要绕过培养基的瓶口，防止污染）。用镊子将所需脱毒苗从玻璃瓶中夹到无菌皿上。
用剪刀及镊子小心的将脱毒苗的分支分开，将较高大的苗剪短。放在培养皿上备用。
⑸接种：先将培养瓶的瓶口打开（拎着密封膜两角将密封膜揭起，将其朝向外面的一面向下置
于工作台上）。将培养瓶斜拿，在酒精灯前稍灼烧瓶口，后用镊子夹住葡萄柚插入培养瓶中（注意芽朝上，以免插倒），后将盖子密封膜盖上并用皮筋扎紧密封。整个接种过程要尽量在离酒精灯十厘米内的地方进行，防止污染。
⑹清理台面。把用过的废弃物及不用的东西拿出超净台，将台面用酒精擦净。关上超净台的门。
3.做记录：
在培养瓶上标上葡萄柚首字母大写，日期及编号，以便日后观察记录。
备注：
因小组成员有六名，所以是两个人同时进行的接种操作。每人接种5~7瓶，上一人接种完成后，将
剪刀、镊子用酒精灯灼烧消毒，放置于专用架子上。下一人进行操作时，用的是之前已灼烧消毒并
已冷却的剪刀与镊子，而不是上一人刚消好毒还有些灼热的剪刀与镊子。
接种实验过程图片如下：
9月3日，小组成员在认真的进行接种
现将不同时间节点的葡萄柚组培苗图片归纳如下：
9月11日，组培苗无明显变化，部分形成愈伤组织。
9月16日，可清晰地看到愈伤组织，部分已分化出芽。同时有一瓶已被污染。
9月23日，组培苗继续生长，愈伤组织持续增大，分化出新的小芽。少数出现停止生长，叶片变得微黄。
10月8日，发现六瓶葡萄柚被污染。有些虽被污染，但里面的幼苗长势仍很好。而少数的有生长缓慢、叶片下垂，没有生气的现象。停止生长的原因可能是由于培养基的养分不均匀，导致生长不均衡。 经过讨论，现在此将我们接种的葡萄柚组培苗未生长原因归纳如下：
（1）在接种过程中，用镊子接种叶片时，镊子在灼烧灭菌后，冷却时间不足，导致植物细胞大面积烫伤或烫死。（2）激素、培养基中的营养不足抑制其生长或生长缓慢。3、接种后叶片生长一段时间后染菌原因：（1）葡萄枝条灭菌时，使用酒精对其进行灭菌浸泡时某些叶片可能接触不均匀，导致灭菌不彻底。（2）接种环节中，在打开培养瓶时，未在酒精灯火焰旁，以及培养瓶口未在酒精灯上稍加灼烧灭菌，导致空气中的细菌进入培养瓶造成了染菌。（3）在接种完成后，盖封口膜时未在火焰旁，致使空气中的细菌进入培养瓶造成染菌。（4）植物在形成了愈伤组织后由于植物类细菌的出现，导致其染菌。
实验心得
在整个实验的过程中，我们小组成员获益良多，也意识到了自己的知识和经验是多么的不足，总的来说，整个实验让我们整个小组都团结合作起来，那些生长良好的组培苗就是我们成功的见证。我们小组算是一个比较大的组，成员6人，两位女生，四位男生，但大家都还算是挺努力的，当然女生的表现更好一些。
以下分别是我们小组成员的实验心得：
邹巧意20120555082
这是我第一次进行这样有趣的实验，当初选这门课的时候，也是因为在高中生物时了解过无性繁殖方面的内容，里面涉及了组织培养，当初就对这神奇的技术充满好奇。现在这学期有幸上了这门课，真觉得生命体太强大了，细胞也太神奇了，因为这全都是根据细胞的全能性为基础而实现的。我们操作的实验先是配制了葡萄柚扩繁培养基(1L)并将其灭菌；,然后第二天把葡萄柚接种到培养基上。在这次培养基的配制中，我体验了一次比较准确精细的配比和称量过程，知道了科学的实验是非常严谨的，丝毫的差错都会带来挺大的差别和引起不同的实验结果。过程中我们还用到了以前从未接触到的实验设备和实验材料，如高压灭菌锅，超净工作台和凝固剂琼脂等等。这都使我对组培这方面了解不少，也培养了我对组织培养技术的兴趣，也增加了我对组培的好奇心和激发了希望更多的接触这门技术的兴趣。在接种葡萄柚时，刚开始因为要用酒精进行严格的消毒和对器皿进行灭菌觉得有点繁琐，但通过我们整组成员的实验结果明白了那是非常重要和关键的步骤，如果没做好真会造成培养基被污染的，幸好我们组的污染率也还不算高，这都与我们严谨的实验态度密切相关啊。而我做了7瓶，污染了两瓶，我还是挺伤心的，可能是由于我们小组人数较多，所以安排了两人共用一个操作台，导致空气流通加大，细菌入侵率较高。这告诉我们做实验千万不能存在有侥幸心理啊，每一步都得认真对待。通过参与这次实验，我深刻得认识到了，仅有理论是不够的，许多技巧和经验都是在实验中获得的，实验还未结束，我们实验的组培苗仍在生长，我会反思我们的操作和工作态度，继续观察我们的实验成果的，相信我们会比那些污染培养基的细菌有更强的毅力。
王煊博20120555056
在做完组织培养后，通过具体的实验检验了老师在课堂上所讲的内容并且更加深刻的体会到了组培的进行步骤与结果。实际操作时并不是像想象中的那么简单，首先实验需要非常严谨的实验环境，其次也考研了团队协作的能力，在实验的开始，由于大家对于组培的实践非常陌生所以实验进程进行的特别缓慢，但是所谓熟能生巧，在实验的进程中，随着大家对实验的理解越来越深，实验做的也越来越熟练，最后，通过几个小时的探索与奋斗，大家共同完成了实验。不过由于开始对于实验的不熟练也产生了许多对实验的不可控性。
陆文豪20120555038
通过这次组织培养实验呢，实在的了解了组培的内容和操作。首先制作培养基的过程中，与小组同学相互配合，共同完成培养基制作。增进感情又熟悉实验，自己有所不足的地方他们也可以指出来并且帮助纠正，以求更好。然后是在
