下载文档原格式
中国药典2015年版9012生物样品定置分析方法验证指导原则一、范围准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此，必须完整地验证和记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
本指导原则二和三主要针对色谱分析方法，四针对配体结合分析方法。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
应该在相应的生物样品分析中遵守G L P原则或GC P原则。
二、生物分析方法验证(一）分析方法的完整验证分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。
此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。
当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质替代，但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加人到空白生物基质中。
此外，色谱方法通常使用适当的内标。
应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。
对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。
当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。
9012生物样品定量分析方法验证指导原则9012生物样品定量分析方法验证指导原则是为了确保生物样品定量分析方法的准确性和可靠性而制定的一系列原则和指导。
生物样品定量分析方法验证是指通过实验和数据分析，验证该方法能够准确、可靠地定量分析生物样品中目标物质的含量。
以下是关于9012生物样品定量分析方法验证指导原则的详细介绍。
1.验证目标：明确验证的目标，即要验证的生物样品定量分析方法和目标物质的含量范围。
验证的目标应明确具体，包括检测的目标物质、所用的定量方法和样品类型等。
2.实验设计：合理设计验证实验方案。
验证实验应采用相关的生物样品，并根据目标物质的特性选择合适的样品处理方法。
实验设计应包括重复次数的确定、正负对照样品的设置和实验步骤的详细描述。
3.准确性：验证方法的准确性是指分析结果与真实值之间的一致性。
通过对一定数量的已知浓度样品进行分析，评估方法的准确性。
评估指标可包括回收率、偏差等指标。
4.精密度：验证方法的精密度是指同一样品在重复测量条件下，方法重复性的可靠性。
通过测量同一样品的重复测量值，评估方法的精密度。
评估指标可包括相对标准偏差(RSD)、变异系数等指标。
5.灵敏度：验证方法的灵敏度是指方法对目标物质浓度变化的敏感程度。
通过测量不同浓度样品的分析信号，评估方法的灵敏度。
评估指标可包括最低检测限、定量限等指标。
6.选择性：验证方法的选择性是指方法对其他干扰物质的响应能力。
通过测量其他相关物质的干扰试验，评估方法的选择性。
评估指标可包括干扰物质的峰检出率、峰分离度等指标。
7.稳定性：验证方法的稳定性是指方法在规定条件下的变化范围。
通过存储试样的时效试验、方法的变更试验等，评估方法的稳定性。
评估指标可包括试样的峰面积或峰高百分含量的变化程度。
8.结果分析：根据验证实验的结果，进行数据统计和分析。
根据评估指标的要求，判断方法是否满足准确性、精密度、灵敏度、选择性和稳定性等要求。
结果分析应包括合理的统计方法和结果显示方式。
生物样品定量分析方法验证指导原则1.设计验证计划：验证计划应明确验证的目的、范围和任务，并确定所需资源和时间。
验证计划还应包括验证参数、验证样品数量和测试条件等详细信息。
2.确定验证参数：验证参数是指确定方法准确性、精密度、线性范围、检测限和选择性等方面的参数。
根据具体的分析方法，选择适当的验证参数进行验证。
3.准确性验证：准确性验证包括回收率、加标回收率和对照品比较等方法。
在准确性验证中，使用已知浓度的标准品或对照品进行分析，并比较结果与标准值或真实值之间的差异。
4.精密度验证：精密度验证是通过重复测定同一样品，评估方法的精密度。
重复测定应在相同条件下进行，采用适当的统计方法计算结果的精密度。
5.线性范围验证：线性范围验证涉及不同浓度下的响应与浓度之间的线性关系。
通过分析一系列不同浓度的标准品或对照品，并绘制浓度与响应之间的曲线，确定方法的线性范围。
6.检测限验证：检测限是方法能够可靠检测到的最低浓度。
通过分析一系列浓度低于检测限的样品，并确定能够可靠检测到的最低浓度。
7.选择性验证：选择性验证是评估方法对目标物和干扰物的选择性。
通过分析不同的样品矩阵或添加干扰物，并验证分析结果是否受到干扰。
8.数据分析：在验证完成后，应进行数据分析和评估。
使用适当的统计方法，计算准确度、精密度和线性范围等参数，并评估分析方法的可行性和可靠性。
9.结果报告和文件管理：验证的结果应记录并报告。
应编写验证报告，包括验证计划、实验结果、数据分析和结论等。
还应制定相应的文件管理措施，以确保验证结果的追溯性。
综上所述，生物样品定量分析方法验证是确保分析结果准确性和可靠性的重要步骤。
实施验证需要设计验证计划、确定验证参数、进行准确性、精密度、线性范围、检测限和选择性等方面的验证，并进行数据分析和结果报告。
通过遵循上述指导原则，可以有效验证生物样品定量分析方法的可行性和可靠性。
生物样品定量分析方法验证指导原则（草案）11. 范围2准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和3制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动4学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此，必须完整地验证和5记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
6本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实7际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
8生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
9应该在相应的生物样品分析中遵守GLP原则或GCP原则。
102.生物分析方法验证112.1 分析方法的完整验证12分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析13物浓度的可靠性。
此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每14个物种和每种基质进行完整验证。
当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质15替代，但要说明理由。
16一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范17围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液18中储存和处理全过程中的稳定性。
19有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一20个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下，验证和21分析的原则适用于所有涉及的分析物。
22对照标准物质23在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质24中。
此外，色谱方法通常使用适当的内标。
25应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用26性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。
27对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质28不产生干扰。
29当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内30标。
分析方法验证指导原则验证的分析项目有：鉴别试验、杂质测定（限度或定量分析）、含量测定（包括特性参数和含量/效价测定，其中特性参数如：药物溶出度、释放度等）。
验证的指标有：专属性、准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
在分析方法验证中，须用标准物质进行试验。
由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。
表1中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。
①已冇重现性验证，不需验证中间精密度。
②如一种方法不够专属.可用其他分析方法予以补充。
③视具体情况予以验证。
方法验证内容如下。
专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，釆用的分析方法能正确测定出被测物的能力。
鉴别及应、杂质检查和含量测定方法，均应考察其专属性。
如方法专属性不强，应采用一种或多种不同原理的方法予以补充。
二、准确度准确度系指用所建立方法测定的结果与真实值或参比值接近的程度，一般用回收率（％）表示。
准确度应在规定的线性范围內试验。
准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。
在规定范围内，取同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品，用至少6份样品的测定结果进行评价；或设计至少3种不同浓度，每种浓度分别制备至少3份供试品溶液进行测定，用至少9份样品的测定结果进行评价，且浓度的设定应考虑样品的浓度范围。
两种方法的选定应考虑分析的目的和样品的浓度范囲。
三、精密度精密度系指在规定的测定条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。
在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一实验室内的条件改变，如不同时间、不同分析人员、不同设备等测定结果之间的精密度，称为中间精密度；不同实验室测定结果之间的精密度，称为重现性。
含量测定和杂质的定量测定应考察方法的精密度。
1. 重复性在规定范圉内，取同一浓度（分析方法拟定的样品测定浓度，相当于100%浓度水平）的供试品，用至少6份的测定结果进行评价；或设计至少3种不同浓度，每种浓度分别制备至少3份供试品溶液进行测定，用至少9份样品的测定结果进行评价。
一、验证目标和范围生物样品定量分析方法的验证目标是评估方法的适用性、准确性、精密度、灵敏度、线性范围、选择性、稳定性和测定限等指标。
验证的范围应包括常规样品、稳定样品和特殊样品等方面。
二、验证计划和报告验证计划应包括验证的目的、范围、方法、样品、检测设备和仪器的选择、验证标准和指标的确定、样品的制备与处理、实验设计和统计分析等内容。
验证报告应包括验证计划的执行情况，具体的验证结果和分析，以及结论和建议等内容。
三、适用性验证方法要考虑分析方法的适用性，包括样品的特性和要求、方法的灵敏度和特异性、样品制备和处理的方法、测定限和线性范围等因素。
四、准确性和精密度准确性和精密度是衡量定量分析方法的重要指标。
准确性的评估包括系统误差的测定和修正，常用方法有标准样品、对比法和加标回收法等。
精密度的评估要考虑到实验操作的稳定性和方法的重复性等因素。
五、选择性和特异性选择性和特异性是评估定量分析方法对目标物质的识别和测定能力的指标。
选择性的评估要考虑方法的干扰物质的影响和实际样品的复杂性。
特异性的评估要考虑到方法对其他物质的干扰以及交叉反应的影响。
六、线性范围和灵敏度线性范围是评估定量分析方法测定结果与目标物质浓度之间的关系的指标。
灵敏度是评估定量分析方法对目标物质低浓度范围内变化的敏感性的指标。
线性范围的评估要包括线性相关系数、回归方程和相关系数的确定。
灵敏度的评估要考虑到检测限和测定限等因素。
七、稳定性稳定性是评估定量分析方法在时间、温度、湿度、光照等条件下的稳定性和耐受性的指标。
稳定性的评估要包括样品的稳定性、试剂的稳定性和仪器的稳定性等方面。
八、测定限测定限是评估定量分析方法可以测定的最低浓度的指标。
测定限的评估要考虑方法的灵敏度和噪声的干扰等因素。
综上所述，中国药典2024年版生物样品定量分析方法验证指导原则（草案）主要涵盖了验证目标和范围、验证计划和报告、适用性、准确性和精密度、选择性和特异性、线性范围和灵敏度、稳定性和测定限等方面的内容。
9012生物样品定量分析方法验证指导原则生物样品定量分析方法验证是确保所采用的分析方法能够准确、可靠地定量生物样品中目标分析物的含量的过程。
验证验证是科学研究中非常重要的步骤，能够确保分析方法的可靠性和有效性。
本文将就生物样品定量分析方法验证的指导原则进行详细介绍。
一、准备工作：1.要明确分析方法的目的和要求，明确分析的目标物质、相关物质和可能影响分析结果的有害物质。
2.正确选择参考标准物质，确保其纯度、稳定性和可获得性。
二、验证方案的制定：1.根据样品的特点和目标物质的性质，制定验证方案。
验证方案应包括验证对象（样品类型、目标物质），验证方法（样品前处理、分析流程），验证指标（准确度、精密度、线性等）等内容。
2.确定验证方案的验证参数，包括样品容量、配制方案、浓度范围等。
三、验证准确度：1.准确度是指分析结果与真实值的接近程度。
验证准确度可以使用加标回收率和对照样品法进行验证。
2.加标回收率验证是在不同浓度水平下，加入一定量的目标物质，并对其进行分析，计算加标回收率。
3.对照样品法是用已知浓度的标准物质进行测定，计算其测定值与已知浓度之间的偏差。
四、验证精密度：1.精密度是指同一样品在同一实验室下，通过多次测定得到的结果的一致性。
验证精密度可以使用重复测定法进行验证。
2.重复测定法是在相同条件下，对同一样品进行多次独立测定，计算测定结果的方差或相对标准偏差。
五、验证线性范围：1.线性范围是指分析方法能够在一定范围内随着目标物质浓度的变化而呈现线性关系。
验证线性范围可以使用系列标准品浓度进行测定，绘制标准曲线。
2.根据标准曲线，分析样品中目标物质的浓度，在线性范围内，测定值与实际浓度之间的误差应在一定范围内。
六、其他验证指标：除了上述的准确度、精密度和线性范围，根据实际需要，还可以对选择性、稳定性、重复性、指标回收率等指标进行验证。
七、结果分析和报告：1.对验证结果进行评价和分析，判断分析方法是否满足要求。
四川大学华西第二医院国家药品临床试验机构Ⅰ期临床研究室实验室四川大学华西药学院临床药学教研室生物样本分析方法的建立和确证、未知样品测定及其质量控制技术指导原则第一版（仅供内部参考）制定： 复核： 签发：二○○五年十二月目 录1. 常用分析方法(Common Technique) (3)2. 方法建立前的准备(Pre-methods Preparation) (3)2.1. 文献资料的查阅与接收(Literature Preparation) (3)2.2. 试验用参比纯品的准备(Reference Standard Preparation) (4)2.3. 仪器、试剂的准备(Apparatus and Regents Preparation) (4)2.4. 工作量及试验人员的准备(Workload and Personnel Preparation) (4)2.5. 课题经费预算(Outlay budget) (5)3. 方法确证的分类(Classification of Validation) (5)3.1. 完整确证(Full Validation) (5)3.2. 部分确证(Partial Validation) (5)3.3. 交叉确证(Cross Validation) (6)4. 分析方法的建立与确证（Method Development and Validation） (6)4.1. 特异性(Specificity) (6)4.2. 准确度、精密度与回收率(Accuracy, Precision and Recovery) (7)4.3. 标准曲线（Calibration / Standard Curve） (7)4.3.1. 最低定量限(Lower Limit of Quantification (LLOQ)) (8)4.3.2. 标准曲线样品浓度与响应值之间的关系(Calibration Curve/StandardCurve/Concentration-Response) (8)4.4. 稳定性(Stability) (8)4.4.1. 冻融稳定性(Freeze and Thaw Stability) (9)4.4.2. 室温条件下稳定性(Short-Term Temperature Stability) (9)4.4.3. 长期稳定性(Long-Term Stability) (9)4.4.4. 储备液稳定性(Stock Solution Stability) (9)4.4.5. 处理后样品的稳定性(Post-Preparative Stability) (9)4.5. 相关注意事项(Specific Recommendations) (10)5. 生物样品分析测定质量控制(Quality Control) (11)5.1. 分析批(Analytical Batch/Run) (11)5.2. 随行标准曲线(Calibration Curve/Standard Curve) (11)5.3. 质控样品(Quality Control Sample) (11)5.4. 异常值、溢出值的判定与样品重测(Verdiction of Abnormity/Overflow andRepeat Analysis) (12)5.5. 相关注意事项(Specific Recommendations) (12)6. 记录与报告(Documentation) (13)6.1. 总结报告(Summary Infomation) (13)6.2. 方法的建立与确证记录(Method Development and Validation) (14)6.3. 未知样品的分析与质控记录(Application to Routine Drug Analysis) (14)6.4. 其它内容(Other Infomation) (15)7. 参考文献(Reference) (15)生物样品一般来自全血、血清、血浆、尿液或其他组织，具有取样量少、药物浓度低、干扰物质多以及个体的差异大等特点，因此必须根据待测物的结构、生物介质的特点和预期的浓度范围，建立适宜的生物样品定量分析方法，并对方法进行确证，并在测定过程中加强质量管理，方可保证研究工作的质量。
方法验证指导原则-《中国药典》2015年版第四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则量。
③应注意固体制剂的晶型原料药含量应在标准曲线的线性范围内。
④应使用外标标准物质ai2o3对仪器及数据进行校正。
方法3差示扫描量热法（DSC)定置分析方法，获得供试品晶型含量数据。
采用DSC定量分析的晶型物质一般应具有不同的熔融吸热峰值，且晶型样品质量与吸热量呈正比关系。
(a)晶型原料药分析：精密称量不同质量晶型样品，建立质量与热量的热焓值的线性关系，绘制标准曲线，定量测定样品的晶型含量。
(b)混晶原料药分析：当不同晶型含量与热焓呈正比关系，采用精密称量配制不同晶型含量的混晶样品，建立晶型含量与热焓值的线性关系，绘制标准曲线，定量测定混晶样品中的晶型含量。
(c)方法说明：①仅适用于晶型原料药定量分析。
②对熔融吸热峰值相差大的混晶原料供试品，建立标准曲线时线性范围较宽；熔融吸热峰值相差小的混晶样品，建立标准曲线时线性范围较窄。
③有时DSC法仅能作为限量检测方法。
方法4红外光谱（IR)定量分析方法，获得供试品晶型含量数据。
采用IR法可以对晶型原料药或固体制剂进行定量分析，常用的方法为相对峰强度法。
晶型特征峰选取原则：①分别选取2种晶型特有的红外光谱吸收峰作为特征峰。
②2种晶型的特征峰应独立而不受对方干扰。
③特征峰强度应与晶型成分含量呈对应线性关系。
对压力可致晶型状态发生转变的晶型原料供试品，制样时应避免压片法。
(a)晶型原料药分析：采用相对峰强度法时分别选择2 种晶型成分的特征吸收峰位置匕与b2,在同一红外光谱图上读取2种晶型成分的特征吸收峰的吸光度值V1与42，计算二者特征吸收峰的吸光度比值r。
通过配制一系列不同晶型比例的混晶样品，建立特征吸收峰的吸光度比值的对数值与晶型含量间的线性关系，绘制标准曲线，实现对混晶样品的晶型含量进行定量分析。
(b)制剂中晶型原料药成分分析：采用相对峰强度法时分别选择晶型原料药特征吸收峰位置h与空白辅料的特征吸收峰位置b2，在同一红外光谱图上读取2种晶型成分的特征吸收峰的吸光度值八1与A2，计算二者特征吸收峰的吸光度比值~通过配制一系列含有不同质量晶型原料与空白辅料比例混合样品，建立特征吸收峰的吸光度比值的对数值与晶型原料药含量间的线性关系，绘制标准曲线，实现对固体制剂中晶型原料药含量进行定量分析。
9012 生物样品定量分析方法验证指导原则1. 范围准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和 制剂研发非常重要。
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动 学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。
因此，必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实 际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。
应该在相应的生物样品分析中遵守 GLP 原则或 GCP 原则。
2. 生物分析方法验证2.1 分析方法的完整验证分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。
此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。
一般应对每个物种和每种基质进行完整验证。
当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质替代，但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。
无提取回收率有时可能需要测定多个分析物。
这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。
在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质中。
此外，色谱方法通常使用适当的内标。
应该从可追溯的来源获得对照标准物质。
应该科学论证对照标准物质的适用性。
分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。
对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。
当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。
它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免结果的偏差。
12.1.1 选择性该分析方法应该能够区分目标分析物和内标与基质的内源性组分或样品中 其他组分。
应该使用至少 6 个来源的适宜的空白基质来证明选择性，它们被分别 分析并评价干扰。
当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的 20%，并低于内 标响应的 5%时，通常即可以接受。
应该考察药物代谢物经样品预处理生成的分解产物以及可能的同服药物引 起干扰的程度。
应该考虑通常用于受试者群体试验的同服药物。
在适当情况下， 也应该评价代谢物在分析过程中回复转化为母体分析物的可能性。
2.1.2 残留应该在方法建立中考察残留并使之最小。
残留可能不影响准确度和精密度。
应通过在注射高浓度样品或校正标样后，注射空白样品来估计残留。
高浓度样品 之后在空白样品中的残留应不超过定量下限的 20%，并且不超过内标的 5%。
应 考虑特殊措施，在方法验证时检验并在试验样品分析时应用这些措施，以确保不 影响准确度和精密度。
这可能包括在高浓度样品后注射空白样品，然后分析下一 个试验样品。
2.1.3 定量下限定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的准确 度和精密度。
定量下限是标准曲线的最低点，应适用于预期的浓度和试验目的。
2.1.4 标准曲线应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应，获得标准曲线。
通过加 入已知浓度的分析物（和内标）到空白基质中，制备各浓度的校正标样，其基质 应该与目标试验样品基质相同。
方法验证中研究的每种分析物和每一分析批，都 应该有一条标准曲线。
在进行分析方法验证之前，最好应该了解预期的浓度范围。
标准曲线范围应 该尽量覆盖预期浓度范围，由定量下限和定量上限（校正标样的最高浓度）来决 定。
该范围应该足够描述分析物的药动学。
应该使用至少 6 个校正浓度水平，不包括空白样品（不含分析物和内标的处 理过的基质样品）和零浓度样品（含内标的处理过的基质）。
每个校正标样可以 被重复分析。
应该使用简单且足够描述仪器对分析物浓度响应的关系式。
空白和零浓度样 品结果不应参与计算标准曲线参数。
应该提交标准曲线参数，测定校正标样后回算得出的浓度应一并提交。
在方 法验证中，至少应该评价 3 条标准曲线。
2校正标样回算的浓度一般应该在标示值的±15%以内，定量下限处应该在 ±20%内。
至少 75%校正标样，含最少 6 个有效浓度，应满足上述标准。
如果某 个校正标样结果不符合这些标准，应该拒绝这一标样，不含这一标样的标准曲线 应被重新评价，包括回归分析。
最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线，但如果有稳定性数据支持，也可以 使用预先配制并储存的校正标样。
2.1.5 准确度分析方法的准确度描述该方法测得值与分析物标示浓度的接近程度，表示 为：（测得值/真实值）× 100%。
应采用加入已知量分析物的样品来评估准确度， 即质控样品。
质控样品的配制应该与校正标样分开进行，使用另行配制的储备液。
应该根据标准曲线分析质控样品，将获得的浓度与标示浓度对比。
准确度应 报告为标示值的百分比。
应通过单一分析批（批内准确度）和不同分析批（批间 准确度）获得质控样品值来评价准确度。
为评价一个分析批中不同时间的任何趋势，推荐以质控样品分析批来证明准 确度，其样品数不少于一个分析批预期的样品数。
批内准确度 为了验证批内准确度，应取一个分析批的定量下限及低、中、高浓度质控样 品，每个浓度至少用 5 个样品。
浓度水平覆盖标准曲线范围：定量下限，在不高 于定量下限浓度 3 倍的低浓度质控样品，标准曲线范围中部附近的中浓度质控样 品，以及标准曲线范围上限约 75%处的高浓度质控样品。
准确度均值一般应在质 控样品标示值的±15%之内，定量下限准确度应在标示值的±20%范围内。
批间准确度 通过至少 3 个分析批，且至少两天进行，每批用定量下限以及低、中、高浓 度质控样品，每个浓度至少 5 个测定值来评价。
准确度均值一般应在质控样品标 示值的±15%范围内，对于定量下限，应在标示值的±20%范围内。
4个浓度*5个样品 报告的准确度和精密度的验证数据应该包括所有获得的测定结果，但是已经 记录明显失误的情况除外。
2.1.6 精密度分析方法的精密度描述分析物重复测定的接近程度，定义为测量值的相对标 准差（变异系数）。
应使用与证明准确度相同分析批样品的结果，获得在同一批 内和不同批间定量下限以及低、中、高浓度质控样品的精密度。
4个浓度*5个样品对于验证批内精密度，至少需要一个分析批的 4 个浓度，即定量下限以及低、 中、高浓度，每个浓度至少 5 个样品。
对于质控样品，批内变异系数一般不得超 过 15%，定量下限的变异系数不得超过 20%。
3对于验证批间精密度，至少需要 3 个分析批（至少 2 天）的定量下限以及低、 中、高浓度，每个浓度至少 5 个样品。
对于质控样品，批间变异系数一般不得超 过 15%，定量下限的变异系数不得超过 20%。
2.1.7 稀释可靠性样品稀释不应影响准确度和精密度。
应该通过向基质中加入分析物至高于定 量上限浓度，并用空白基质稀释该样品（每个稀释因子至少 5 个测定值），来证 明稀释的可靠性。
准确度和精密度应在±15%之内，稀释的可靠性应该覆盖试验 样品所用的稀释倍数。
可以通过部分方法验证来评价稀释可靠性。
如果能够证明其他基质不影响精 密度和准确度，也可以接受其使用。
2.1.8 基质效应当采用质谱方法时，应该考察基质效应。
使用至少 6 批来自不同供体的空白基质，不应使用合并的基质。
如果基质难以获得，则使用少于 6 批基质，但应该说明理由。
对于每批基质，应该通过计算基质存在下的峰面积（由空白基质提取后加入分析物和内标测得），与不含基质的相应峰面积（分析物和内标的纯溶液）比值，计算每一分析物和内标的基质因子。
进一步通过分析物的基质因子除以内标的基质因子，计算经内标归一化的基质因子。
从 6 批基质计算的内标归一化的基质因 2个浓度LLOQ或者LQC子的变异系数不得大于 15%。
该测定应分别在低浓度和高浓度下进行。
ULOQ如果不能适用上述方式，例如采用在线样品预处理的情况，则应该通过分析至少 6 批基质，分别加入高浓度和低浓度（定量下限浓度 3 倍以内以及接近定量上限），来获得批间响应的变异。
其验证报告应包括分析物和内标的峰面积，以及每一样品的计算浓度。
这些浓度计算值的总体变异系数不得大于 15%。
除正常基质外，还应关注其他样品的基质效应，例如溶血的或高血脂的血浆样品等。
2.1.9 稳定性必须在分析方法的每一步骤确保稳定性，用于检查稳定性的条件，例如样品 基质、抗凝剂、容器材料、储存和分析条件，都应该与实际试验样品的条件相似。
用文献报道的数据证明稳定性是不够的。
采用低和高浓度质控样品（空白基质加入分析物至定量下限浓度 3 倍以内以 及接近定量上限），在预处理后以及在所评价的条件储存后立即分析。
由新鲜制 备的校正标样获得标准曲线，根据标准曲线分析质控样品，将测得浓度与标示浓 度相比较，每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在±15%范围内。
4应通过适当稀释，考虑到检测器的线性和测定范围，检验储备液和工作溶液 的稳定性。
稳定性检查应考察不同储存条件，时间尺度应不小于试验样品储存的时间。
通常应该进行下列稳定性考察： z 分析物和内标的储备液和工作溶液的稳定性； z 从冰箱储存条件到室温或样品处理温度，基质中分析物的冷冻和融化稳定性； z 基质中分析物在冰箱储存的长期稳定性； 此外，如果适用，也应该进行下列考察： z 处理过的样品在室温下或在试验过程储存条件下的稳定性； z 处理过的样品在自动进样器温度下的稳定性。
在多个分析物试验中，特别是对于生物等效性试验，应该关注每个分析物在 含所有分析物基质中的稳定性。
应特别关注受试者采血时，以及在储存前预处理的基质中分析物的稳定性， 以确保由分析方法获得的浓度反映受试者采样时刻的分析物浓度。
可能需要根据 分析物的结构，按具体情况证明其稳定性。
2.2 部分验证在对已被验证的分析方法进行小幅改变情况下，根据改变的实质内容，可能 需要部分方法验证。
可能的改变包括：生物分析方法转移到另一个实验室，改变 仪器、校正浓度范围、样品体积，其他基质或物种，改变抗凝剂、样品处理步骤、 储存条件等。
应报告所有的改变，并对重新验证或部分验证的范围说明理由。
2.3 交叉验证应用不同方法从一项或多项试验获得数据，或者应用同一方法从不同试验地 点获得数据时，需要互相比较这些数据时，需要进行分析方法的交叉验证。
如果 可能，应在试验样品被分析之前进行交叉验证，同一系列质控样品或试验样品应 被两种分析方法测定。
