下载文档原格式
标本采集、运送、接收、拒收及保存程序第一部分 HPV检测标本1 目的：保证HPV标本的质量。
2 范围：临床采集、运送、接收及实验操作人员。
3 内容：3.1 HPV标本采集标准操作流程3.1.1由经过宫颈脱落细胞标本采集专业培训的妇科医生用窥阴器或阴道张开器暴露宫颈（取样前先用棉签擦去宫颈分泌物）。
3.1.2将专用宫颈刷以适中力度接触于宫颈口，轻轻转动宫颈刷使其顺时针旋转3-5圈，并停留数秒钟。
3.1.3慢慢取出宫颈刷，将其放入标有病人编号的专用标本管中，折断其刷柄，拧紧瓶盖。
3.2 HPV标本采集注意事项3.2.1月经期不可采集标本（减少给受检者的损伤）。
3.2.2月经正常妇女，在月经来潮后10～18天为最佳检查时间。
3.2.3不可在碘试验和醋酸试验之后采集样本（可能会抑制PCR反应）。
3.2.4取标本前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物（可能会抑制PCR反应）。
3.2.5取标本前48小时最好不要行性生活（可能出现一过性假阳性）。
3.2.6样本采集后，注意避免交叉污染。
3.3 HPV标本运送的标准操作流程所有临床标本在采集后立即送至实验室放在2~8℃保存。
3.4 HPV标本接收的标准操作流程3.4.1 HPV标本由实验室标本室进行接收，查对是否贴有标签、标本是否有洒落、破损，查对标本、申请单信息、刷卡信息是否相符，有异常情况的标本，视为拒收标本，应填写《标本拒收登记表》并根据情况处理。
3.4.2标本室实验人员对接收的标本进行编号，（此编号为样本唯一编号），然后与PCR实验室人员进行交接并实行严格登记制度。
3.4.3 PCR实验室人员对已接收的标本按正常标本、血性标本、粘液标本进行分类登记。
3.4.4 由指定人员对接收的标本进行常规涂片用显微镜查看是否有上皮细胞，细胞数量在每视野≥3个为可进行HPV检测的标本。
3.4.5对于特殊的样本（包括危重病人或急出报告的标本等），实行“首接”负责制，及时处理，并进行登记。
1 PCR 实验操作流程（TB/LP/MPCP ）一、标本的核酸提取（痰标本）1、痰液液化：痰液加入四倍体积的4%NaOH ，摇匀静置30min ；（样本编号，离心管编号）2、将液化后的液体0.5ml 转至1.5ml 离心管中，再加入0.5ml 4%NaOH ，混匀静置10min 继续液化，13000rpm 离心5min ，去上清；3、加入1ml 生理盐水洗一次，振荡器震荡混匀，13000rpm 离心5min ，上清去除干净；4、沉淀直接加入100μl 核酸提取液（提取液使用之前混匀），混匀数秒，干热仪100℃加热10min ，然后13,000rpm 离心5min ，取上清4μl 作为PCR 反应模板。
二、试剂配制、加样三、PCR 扩增设置扩增循环参数设置：37℃×2min ，94℃×2min ，循环一次；93℃×15s ，60℃×60s ，循环40次，荧光检测在60℃×60s ，荧光通道FAM 和VIC 通道。
反应体系40μl 。
四、结果判断MPCP ：FAM 通道Ct ≤38，报告MP 为阳性；VIC 通道Ct ≤38， 报告CP 为阳性；如果Ct 值在38-40之间，复检一次，如果Ct 显示仍在38~40之间，则判断为低于检测线，判为阴性LP ：FAM 通道Ct ≤38，报告LP 为阳性；如果Ct 值在38-40之间，复检一次，如果Ct 显示仍在38~40之间，则判断为低于检测线，判为阴性TB ：FAM 通道Ct ≤38，报告TB 为阳性；如果Ct 值在38-40之间，复检一次，如果Ct 显示仍在38~40之间，且扩增曲线呈典型的S 型，则判断为阳性；若非典型S 型曲线，则判断为低于检测线，判为阴性。
PCR实验室临床标本的采集、运送、接收程序1．目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。
2．适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。
3．负责人：操作人：4．程序：4．1 标本的采集4．1．1 标本由临床各科室接受过临床基因扩增检测有关标本采集、保存、运输知识培训的医护人员采集并送至实验室。
4．1．2标本采集要求a）血液标本：用2ml真空采集管或1.5ml高压灭菌离心管采集血液标本，血标本采集后在2小时内送达实验室（HCV采用EDTA 抗凝的血浆）。
离心（检验单与标本一道）后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒的1.5ml的离心管中，编号。
b）痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。
（对于无痰或少痰的患者，可用45℃加温的100g/L NaCl 水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。
）标本在室温下保存不能超过24小时。
c）生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。
采集生殖道拭子标本，要求男性病人在采样前2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2～3cm，转动一周以获得上皮细胞。
d）尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。
e）脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。
注意：所有上述用于临床标本采集的容器如试管或离心管，均应使用前高压灭菌和密封。
4．2 标本的运送标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必须用冰盒送至实验室。
标本中如加入了适当的稳定剂，如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）的血清（浆）标本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等，则可在室温下运送或邮寄。
4．5 接收4．5．1严格对各类样本的查对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。
PCR实验室临床标本的保存程序
1. 目的：为保持标本的状态，防止因外界条件改变对标本产生影响，保证检验结果的准确性。
2．范围：PCR实验室接收的标本。
3．职责：工作人员负责标本的贮存，保证标本状态的稳定。
4．程序：
4.1 工作人员应认真核对所接收的标本，按检测项目将送检标本分类。
4.2 血清/血浆样品：将样品离心，吸出血清/血浆，作好标记，按编号排列，置-20℃贮存。
4.3 用于DNA检测的核酸样本如需要保存时应在10mmol/Ltris、1mmol/LEDTA缓冲液（pH7.5-8.0）中，放置在标本处理区冰箱中4℃保存。
用于RNA检测的核酸要本应在缓冲液中-80℃保存。
4.4 样品出现问题的处理：样品在保管期内，一旦出现变质丢失等问题，有关人员应如实向科主任或技术负责人报告，并通知送样科室。
必要时，重新送样品。
4.5 所有样品均留有备用样品，供复检时使用。
4.6 样品移交：当样品在室之间或者虽在同一室内但在不同组间移交时应有移交记录和签字。
4.7 安全处理：自生物体的任何样品都应认定具有传染性，应按《实验室生物污染物处理程序》由专人进行处理。
4.8 样品保留时间：样品应在报告发出后，至少保留一月。
由专人处理，并记录。
4.9 诚实性、保密性：科室有义务为委托方保密，保证检验公正性和保密性。
5 引用的记录本附表003 标本超低温保存及处置记
录表。
1.目的对标本采集前患者的准备、标本采集、接收、保存进行规范，以控制各环节可能出现的误差，确保检验结果准确可靠。
2.范围核酸检测的所有标本。
3.职责由PCR实验室负责制定程序文件，由专业技术人员负责执行。
4.内容4.1标本采集4.1.1血液标本：4.1.1.1原始标本采集的标本类型是静脉血，根据不同检测项目选用不同类型的一次性真空采集管。
全血或血浆标本采用EDTA抗凝的紫色真空采血管，不可使用肝素或肝素盐抗凝，此类抗凝剂能强烈抑制Taq酶的活性。
血清标本采用不含抗凝剂的真空采血管。
4.1.1.2用于RNA检测的标本，应用核酸专用管或无RNase的采集管，应尽快送检，以立即分离血清为好，将血清转移至1.5ml无RNA酶的无菌离心管中，冷藏或冷冻保存，以避免RNA的降解。
标本若不能及时检测，应保存于-20℃，并避免标本的反复冻融。
4.1.2分泌物标本：4.1.2.1尿道：对男性患者，先用生理盐水清洗尿道口，将男用取材拭子插入尿道内2cm-4cm，旋转10-20秒再取出，以采集到粘膜上皮细胞。
对女性患者，可抵着耻骨联合轻轻按摩尿道后，用同男性相似的方法取材。
如有明显溃疡或疣状物，可取溃疡或挑破疣体取分泌物。
男性尿道样本采集前24小时内禁止尿道用药，2小时内不能小便。
4.1.2.2女性生殖道：取用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内约2-6cm，旋转10-20秒采集宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌专用管，密闭送检。
女性生殖道样本采集需选择在非月经期，采样前24小时内应禁止阴道冲洗、阴道用药。
4.1.2.3样本的处理：将取样后的拭子放入1.0ml的无菌生理盐水中漂洗片刻。
吸取液体转移至1.5ml 离心管中用于检测。
待测样本在2-8℃保存2周，-20℃保存不超过3个月，-70℃以下长期保存，应避免反复冻融。
4.1.3痰液标本的采集:4.1.3.1患者清晨清水漱口后，深咳出气管深处第一口痰于清洁干燥无菌带盖的容器内。
pcr实验室核酸提取流程PCR实验室核酸提取流程。
PCR实验室核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中提取DNA或RNA的过程。
本文将介绍PCR实验室核酸提取的流程及注意事项，希望能为实验人员提供一些帮助。
首先，准备样本。
样本可以是血液、组织、细胞培养物等，根据实验需要选择合适的样本。
样本的质量和纯度对提取的核酸质量有重要影响，因此在实验前要确保样本的质量良好。
其次，裂解细胞膜。
裂解细胞膜是核酸提取的关键步骤，可以选择化学法、物理法或酶法进行裂解。
常用的方法包括加入裂解缓冲液、冻融法和酶消化法等，根据不同的样本选择合适的裂解方法。
接着，使用载体吸附核酸。
在裂解后，核酸会以游离态存在于溶液中，需要使用载体将核酸吸附并固定。
常用的载体包括硅胶膜、硅胶柱或磁珠等，选择合适的载体可以提高核酸的纯度和回收率。
然后，洗脱核酸。
经过载体吸附后，核酸需要进行洗脱步骤，去除杂质和提高核酸的纯度。
洗脱液的选择和洗脱条件的控制对核酸提取的效果有重要影响，需要严格按照实验步骤进行操作。
最后，进行核酸定量和保存。
提取得到的核酸需要进行定量检测，可以使用紫外分光光度计或荧光定量仪进行测量，确保核酸的浓度和纯度符合实验要求。
另外，在保存核酸时，要避免冻融循环和长时间暴露在光线下，以保证核酸的稳定性和完整性。
在进行PCR实验室核酸提取时，需要注意以下几点，首先，严格控制实验条件，避免外源DNA或RNA的污染；其次，避免核酸降解，尽快进行提取和保存；最后，遵循实验步骤，避免操作失误导致实验失败。
总之，PCR实验室核酸提取是一项关键的实验步骤，正确的操作可以保证提取得到高质量的核酸样品，为后续实验提供可靠的基础。
希望本文的介绍能够帮助实验人员更好地进行核酸提取实验，提高实验效率和结果的可靠性。
