中科院考题总结
- 格式:doc
- 大小:195.10 KB
- 文档页数:19
1 什么是生物多样性?生物多样性保护与可持续发展的关系。
生物多样性保护的生态学和经济学意义。
生物多样性包括了多个层次,主要是:遗传多样、物种多样性、生态系统多样性和景观多样性。
遗传多样性:又称基因多样性,是指广泛存在于生物体内、物种内和物种间的基因多样性。
任何一个特定个体的物种都保持着大量的遗传类型,是个基因库。
遗传多样性主要包括分子、细胞和个体三个方面的遗传变异的多样性。
物种多样性:即物种水平的多样性。
对一个地区内的物种多样性的研究可以通过分类学、生物地理学方法进行。
生态系统多样性:是指生境多样性、生物群落多样和生态过程多样性,生境多样性主要是指无机环境,如地形、地貌、气候、水文等,生境多样性是生物群落多样性的基础。
生物群落多样性是指群落的组成、结构和功能的多样性。
它们的过程是指生态系统组成、结构和功能在时间和空间上的变化,主要包括物种流、能量流、物质循环、水分循环、生物间的竞争、捕食和寄生等。
景观多样性:是指不同类型的景观在空间结构、功能机制、时间动态方面的多样性和变异性。
生物多样性需在上述四个方面加以保护。
保护的重点应是生态系统的完整性和珍稀濒危物种。
生态系统多样性既是遗传多样性和物种多样性的保证,又是景观多样性的基础。
生态系统稳定是物种进化和种内遗传变异的保证。
生物多样性是地球经过40多亿年的自然演化而形成的,是地球上最宝贵的自然资源,不但给人类社会提供了丰富的食物、药物和部分工业原料,而且在保持水土、调节气候、维持自然平衡等方面起到了举足轻重的作用。
然而在世界范围内,野生生物的多样性在不断地遭到破坏,据报,目前由于生境地的破坏导致每年大约有 1.75万种的生物从地球上消失。
导致生物多样性减少的原因有多种,归纳起来主要有以下几个:1.大面积的森林砍伐(森林中的物种众多,特别是热带森林,森林砍伐后再进行烧山种植,原来森林中的物种几乎全部被毁灭。
)2.草地的过度放牧和开垦(草地的过度放牧和开垦的直接影响是使大量原生植物遭到破坏,而过度放牧和开垦造成的荒漠化、盐碱化会导致野生物种灭绝)。
1.2.]3.辐射4.天文望远镜1)望远镜的性能指标1,聚光能力:成像亮度∝有效镜面面积∝有效口径^2;2,角分辨本领:取决于光的衍射;2)大气窗口:地球大气阻挡了空间中的大部分电磁辐射;5.量纲分析法(!!!)6.Virial定理天体自引力收缩时,自引力做功,释放的自引力能一部分用于增加系统的内能(升温),另一部分辐射出去。
若恒星内部为理想气体,则在坍缩过程中一半能量辐射出去了,另一半转变为恒星内部气体的热运动动能。
2T+W=07.Jeans不稳定判据8.太阳结构和基本物理参数1)太阳结构2)基本参数9.太阳能源机制太阳的能量来源:氢燃烧,,。
1,质子-质子链(p-p chain)(正电子迅速与负电子反应释放出gamma射线,中微子)Gamma射线在穿越太阳的过程中逐渐变成了可见光,中微子几乎不受阻碍,氦核则留在了太阳中心。
2,碳氮氧循环(CNO chain)不同温度下两种核反应过程释放的能量:10.太阳中微子目前测量到的太阳中微子数目只有理论计算值的1/3。
测量结果证实中微子没有失踪,只是在离开太阳后转化成了μ中微子和τ中微子,躲过了此前的探测,即中微子在传播途中发生了转变,这间接证明中微子具有质量。
11.传能方式能量传输的三种形式:辐射,传导,对流;太阳核心区的能量主要是通过辐射与对流向外传递。
1,辐射辐射平衡:恒星内部产生的能量全部由辐射向外传递辐射平衡下的温度梯度为:其中,κ为不透明度系数;a为辐射常数。
不透明度对恒星结构的影响:2,对流(convection)对流起着传递能量和混合物质的作用。
对流平衡下的温度梯度:(γ:绝热指数)3,恒星中辐射和对流的判据对流区出现的条件:温度低或产能率高。
12.产能方式13.太阳活动14.太阳标准模型(1)基本假设:单星,无磁场,无旋;牛顿理论足够;静态假设;(2)恒星内部平衡条件:质量连续性方程:流体静力学平衡:能量守恒:能量传输:15.造父变星周光关系16.双星物质转移17.恒星演化原理18.低质量恒星的演化19.恒星演化的终结20.相对论21.Chandrasekhar临界质量22.黑洞23.白矮星和中子星24.脉冲星25.超新星26.行星行星通常指自身不发光,围绕着恒星运转的天体;具体定义为:围绕恒星运转;形状近于球形;已清空其轨道附近区域;27.星云1)发射星云2)反射星云:星云通过尘埃反射附近热星的星光而发光,颜色偏蓝;3)暗星云:大量尘埃阻挡了星云内部或后面恒星的星光。
中科院博士入学考试构造地质学重要知识点和论述题汇总(一)补充简答题1.简述如何确定褶皱在空间的方位?答:褶皱在空间的方位可由褶皱的轴面产状、枢纽产状、两翼产状和翼间角确定。
两翼和轴面的产状要测量其倾向和倾角。
垂直面状要素的走向线向下所引的直线为倾斜线,倾斜线与其在水平面上的投影线之间的夹角即为倾角,倾斜线在水平面上的投影线向下所指岩层向下倾向的方向即为倾向。
翼间角为褶皱正交剖面上两翼间的内夹角。
圆弧形褶皱的翼间角是指过两翼两个拐点处的切线的夹角。
枢纽产状要测量枢纽的倾伏和侧伏。
倾伏包括倾伏向和倾伏角。
前者指枢纽在直立面内的水平投影线所指枢纽向下的方向,后者指枢纽与其在直立面内的水平投影线之间的锐夹角。
侧伏包括侧伏向和侧伏角,前者指轴面的走向线所指枢纽向下的方向,后者指枢纽与轴面的走向线之间的锐夹角。
对于规模较小,出露完整的褶皱,可以从露头上直接测量以上各要素。
对于规模较大,出露不完整的褶皱,往往需要系统测量其褶皱面的产状,然后通过计算方法或赤平投影方法才能较精确地确定其枢纽和轴面的产状。
2.简述重力滑动构造的基本结构。
答:重力滑动构造是由重力作用引发的滑动推覆构造,它是某些逆冲推覆构造的重要成因。
重力滑动构造基本结构为:下伏系统、滑动面、润滑层、滑动系统。
分带:后缘拉伸带、中部滑动带和前缘推挤带。
形成条件为:一定的坡度;滑动系统要有一定的厚度和重量;应由软弱层和孔隙流体的参加。
下伏系统构造较简单,基本保留了早期或基底构造的特征;滑动面沿原始地质界面(如层理面、不整合面、侵入体与围岩接触面)或破裂面发育,剖面和平面上均呈弧形,剖面上常呈犁式、铲式或勺形。
润滑层能降低滑动摩擦力,使滑动系统长距离搬运,常由软弱岩层或面理化岩层构成,如泥岩层、煤层、膏岩层、片岩、片理化的蛇纹岩、辉绿岩等。
中部滑动带岩层和构造比较复杂,往往为一系列互相叠置或切割的滑体、滑块,褶皱,断层发育。
前缘推挤带常又一系列逆冲断层叠置而成,后缘拉伸带常出露下伏系统的岩层。
中国科学院(中科院)考博历年试题汇总中科院发育遗传所2002生物化学(博士)注:请将试卷写在答题纸上;不用抄题,但要写请题号;草稿纸上答题无效。
一、名次解释:(20分)二、以动物细胞或植物细胞为例说明细胞中的膜结构及其功能。
(12分)三、在研究位置基因的功能时往往采用推定的该基因所编码的氨基酸序列与已知功能的蛋白质的氨基酸序列比较来推断,你认为这种比较应采用什么原则?为什么?(12分)四、真核基因在原核细胞中表达的蛋白质常常失去生物活性,为什么?举例说明。
(12分)五、简述信号肽的结构特点、功能和从蛋白质产物中切除的机理。
(12分)六、分子筛、离子交换和亲和层析是三种分离、醇化蛋白质的方法,你如何根据所要分离、纯化的蛋白质的性质选择使用。
(12分)七、酶联免疫吸附实验(ELISA)的基本原理是什么?如何用此方法检测样品中的抗原和抗体?(12分)八、某一个蛋白,SDS凝胶电泳表明其分子量位于16900于37100标准带之间,当用巯基乙醇和碘乙酸处理该蛋白后经SDS凝胶电泳分析仍得到一条带,但分子量接近标准带13370处,请推断此蛋白质的结构?为什么第二次用前要加碘乙酸?(8分)中科院发育遗传所2000-2001生物化学(博士)2000年博士研究生入学考试生物化学试题1.酶蛋白的构象决定了酶对底物的专一性,请描述并图示酶与底物相互关系的几种学说。
(20分)2.什么是DNA的半保留复制和半不连续复制?如何证明?真核细胞与原核细胞的DNA复制有何不同?(20分)3.概述可作为纯化依据的蛋白质性质及据此发展的方法。
(20分)4.简述酵解和发酵两个过程并说明两者的异同。
(15分)5.吃多了高蛋白食物为什么需要多喝水?(10分)6.在非极端环境的生物体中是否存在氰化物不敏感的呼吸作用?如果有,其可能的生物学意义是什么?(5分)以下两题中任选一题(10分)7.概述植物或微生物细胞感应(应答)环境刺激因子(如养分缺乏、热、冷、干旱、强光等)的可能的生物化学过程模式。
中科院政治试题及答案试题:中科院政治试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 中国科学院的简称是:A. 中科院B. 中科大C. 中科院大学D. 中科院研究所2. 中科院成立的时间是:A. 1949年B. 1950年C. 1956年D. 1960年3. 下列哪项不是中科院的主要任务?A. 科学研究B. 技术开发C. 教育培养D. 军事制造4. 中科院的最高学术机构是:A. 中国科学院院士大会B. 中国科学院学术委员会C. 中国科学院执行委员会D. 中国科学院理事会5. 中科院的核心价值观包括以下哪项?A. 创新、求实、协作、奉献B. 诚信、创新、团结、奉献C. 创新、求实、团结、奉献D. 创新、求实、协作、团结二、填空题(每空2分,共20分)6. 中科院的首任院长是________。
7. 中科院的院训是“________”。
8. 中科院拥有的院士分为________和外籍院士。
9. 中科院的科研工作主要围绕________、________、________三大领域。
10. 中科院的院士选举每________年进行一次。
三、简答题(每题10分,共30分)11. 简述中科院在国家科技创新体系中的作用。
12. 描述中科院的科研成果转化机制。
13. 阐述中科院在培养科技人才方面的贡献。
四、论述题(每题30分,共30分)14. 结合当前国际形势,论述中科院在推动国家科技进步和创新中的重要性。
答案:一、选择题1. A2. C3. D4. A5. A二、填空题6. 郭沫若7. 求实创新、厚德载物8. 院士9. 基础研究、应用研究、技术开发10. 两年三、简答题11. 中科院作为国家最高学术机构和综合性研究与发展中心,在国家科技创新体系中发挥着引领作用,推动科学技术的发展,促进科技成果转化,为国家经济建设和社会进步提供科技支撑。
12. 中科院通过建立科技成果转化平台,加强与企业的合作,推动科研成果的市场化和产业化,实现科研成果的社会价值和经济效益。
中国科学院植物研究所科技岗位招聘考试真题及答案2022第一部分常识判断1.2020年12月召开的中央农村工作会议强调,脱贫攻坚取得胜利后,“三农”工作重心历史性地转移到()A.确保粮食安全B.巩固脱贫攻坚成果C.全面推进乡村振兴D.建设美丽乡村【答案】:C2.2022年3月20日,在新加坡举行的世界乒乓球职业大联盟(WTT)新加坡大满贯女单决赛中,中国选手()夺得冠军。
A.孙颖莎B.陈梦C.丁宁D.王曼昱【答案】:B3.2021年7月20日,《中共中央国务院关于优化生育政策促进人口长期均衡发展的决定》公布,关于该决定,下列说法正确的是:A.取消社会抚养费,清理和废止相关处罚规定B.将入户、入学、入职等与个人生育情况全面挂钩C.探索建立生育登记制度,加强对出生医学证明的规范管理D.提倡早婚早育、优生优育,实施三孩生育政策【答案】:A4.“鸟鸣山更幽”包含的哲理是:A.静止的绝对性B.运动的相对性C.静止的相对性与运动的绝对性1/ 17D.静止的绝对性与运动的相对性【答案】:C5.建设富强、民主、文明的社会主义现代化国家的政治保证是:A.四项基本原则B.邓小平理论C.党的领导D.团结全国各族人民【答案】:A6.下列毛泽东诗词与创作背景对应正确的是:A.金沙水拍云崖暖,大渡桥横铁索寒——1930年第一次反“围剿”B.宜将剩勇追穷寇,不可沽名学霸王——1949年解放南京C.三十八年过去,弹指一挥间。
可上九天揽月,可下五洋捉鳖,谈笑凯歌还——1941年延安整风运动D.军叫工农革命,旗号镰刀斧头。
匡庐一带不停留,要向潇湘直进——1948年淮海战役【答案】:B7.关于冲突规范和准据法,下列哪一判断是错误的?A.当事人的属人法包括当事人的本国法和住所地法B.准据法是经冲突规范指引、能够具体确定国际民事法律关系当事人权利C.冲突规范与实体规范相似D.当事人的本国法指的是当事人国籍所属国的法律【答案】:C8.剩余价值和利润在量上的关系是( )A.剩余价值=利润B.剩余价值>利润C.剩余价值<利润D.剩余价值≠利润【答案】:A9.一个完整的认识过程是( )A.感觉—知觉—表象B.实践—认识—实践C.概念—判断—推理2/ 17D.感性认识—理性认识—感性认识【答案】:B10.组建跨国联盟反映了跨国公司主导作用( )A.将消失B.增强;C.减弱;D.不变;【答案】:B11.“鸡蛋,从外打破是食物。
中科院历年试题中科院2001--a卷一.名词解释(2/20)1.受体2细胞培养3信号转导4细胞理论5应激纤维6磷脂转换蛋白7 ES细胞8嵌合体9交叉10 Hayflick界限II是/否问题(1/20)1.亚显微结构就是超微结构.()2.光学显微镜和电子显微镜的区别在于后者的放大倍数远大于前者,因此可以看到更小的细胞结构()3.细胞外基质的作用是为细胞提供支持的框架.()4.细胞间的粘附是由层粘连蛋白介导的。
一些粘附素依赖于钙离子,有些则不依赖。
粘附分子的受体是整合素()6.细胞间的通讯就是通过细胞间形成缝隙连接,是细胞质相互沟通而实现的.()7.细胞分裂时内质网要经历解体与重建的过程.()8.当正常细胞癌变时,游离核糖体的数量增加,而附着的核糖体和内质网的数量相应减少()。
肌动蛋白存在于所有肌肉细胞和非肌肉细胞的细胞质中()10.从细胞内提取的分泌蛋白的分子量一般与分泌到细胞外的相应蛋白的分子量相同.()11.真核基因的转录是从第一个atg开始的.()癌基因是有害基因,因为它们的表达会导致肿瘤或癌症。
转录因子是具有RNA聚合酶活性的蛋白质()14.正常细胞在有丝分裂中期时,每条染色体的动粒均已分别结合来自纺锤体两极的微管.()15.端粒酶以端粒dna为模板夫指出更多的端粒重复单元,以保证染色体末端的稳定性.()16.哺乳动物受精卵在发生卵裂到16细胞前,所有细胞都是全能细胞.()17.体内的多能干细胞是不会衰老的.()18.由于细胞分裂能力的下降,高分化的细胞可能比低分化的细胞变化少。
细胞分化是组织特异性基因或奢侈基因在细胞中选择性表达的结果。
单细胞生物没有细胞分化现象(III)多项选择题(1/20)1.原核细胞与真核细胞虽有许多不同,但都有:a核仁b核糖体c线粒体d内质网2.根据光学显微镜下绘制的细胞模式图,威尔逊可以看到内质网B核糖体C吞噬小泡D核仁3.要探知细胞内某一蛋白质的表达水平,可以通过_______实现.a.southernblotb.northernblotc.westernblotd.原位分子杂交4.细胞变形足运动的本质是_______.1细胞膜的快速扩张是细胞的局部伸长。
中科院考试试题一、选择题(每题2分,共20分)1. 中科院的全称是:A. 中国科学学院B. 中国科学院C. 中国科技院D. 中国科学技术院2. 中科院成立于哪一年?A. 1949年B. 1950年C. 1955年D. 1960年3. 下列哪项不是中科院的主要职能?A. 科学研究B. 技术开发C. 教育培养D. 商业运营4. 中科院下属的研究所数量大约为:A. 100个B. 120个C. 150个D. 200个5. 中科院的最高学术机构是:A. 院士大会B. 学术委员会C. 研究所所长联席会议D. 科研成果评审委员会6. 中科院的院徽中包含的元素有:A. 五角星和齿轮B. 原子核和书籍C. 麦穗和原子核D. 地球和卫星7. 中科院的院士分为哪两类?A. 资深院士和普通院士B. 荣誉院士和外籍院士C. 学术院士和社会院士D. 终身院士和荣誉院士8. 下列哪位科学家不是中科院的院士?A. 钱学森B. 屠呦呦C. 袁隆平D. 爱因斯坦9. 中科院的国际合作主要涉及哪些领域?A. 基础科学研究B. 应用技术开发C. 国际人才培养D. 所有以上选项10. 中科院在以下哪个领域取得了重大科研成果?A. 量子通信B. 纳米技术C. 基因编辑D. 所有以上选项二、填空题(每题2分,共20分)11. 中科院的宗旨是:___________________________12. 中科院的第一任院长是:__________________13. 中科院的院歌名称为:___________________14. 中科院的院训是:“_________________________,_________________________”15. 中科院的院士增选通常每________年进行一次。
16. 中科院的下属研究所中,专注于空间科学研究的是:____________________17. 中科院在________年成功发射了中国第一颗人造卫星。
中科院研究生考试试题汇编第一部分氨基酸肽蛋白质一是非题(112题)1 自然界的多肽类物质均由L-构型的氨基酸组成,完全没有例外。
(X )2 某一生物样品,与茚三酮反应呈阳性,用羧肽酶A和B作用后测不出游离氨基酸,用胰凝乳蛋白酶作用后也不失活,因此可肯定它绝非肽类物质。
( X )[羧肽酶A:是水解由芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。
比如酪氨酸,苯丙氨酸,丙氨酸等羧肽酶B:主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。
胰凝乳蛋白酶(也叫糜蛋白酶。
)在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸(都是芳香族氨基酸)的羧基处切断肽键,从而裂解蛋白质。
胰蛋白酶选择地水解蛋白质中所有的由赖氨酸Lys或精氨酸Arg的羧基所构成的肽键。
]3 有四个二硫键的胰脏核糖核酸酶,若用巯基乙醇和尿素使其还原和变性,由于化学键遭到破坏和高级结构松散,已经无法恢复其原有功能。
(X )4 多肽合成中往往以苄氧羰基(C6H5CH2-O-CO-)保护氨基,并可用三氟乙酸轻易的将它去除,羰基可转变成叔丁酯,并用碱皂化去除。
(√)5 细胞核内的组蛋白对阻遏基因的表达起重要作用,所以需要种类繁多的组蛋白与这些基因结合。
(√??)6胶原蛋白中有重复的疏水性氨基酸序列出现,所以形成大面积的疏水区,相互作用使三股肽链稳定及整齐排列。
(X)7多肽类激素作为信使分子,需便于运转,所以都是小分子。
由于分子小,轻易通过靶细胞膜,可以深入内部,启动生化作用。
(X)8球状蛋白分子含有极性基团是氨基酸残基在起内部,所以能容于水。
片层结构只能存在于纤维状蛋白中,如丝心蛋白,所以不容于水。
(X)9胰岛素的生物合成途径是先分别产生A、B两条肽链,然后通过-S-桥键相连。
(X)10 血红蛋白与肌红蛋白结构相似,均含有一条肽链的铁卟啉结合蛋白,所以功能上都有与氧结合的能力,血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。
(X )11 合成的多聚谷氨酸在pH7时,其r -羧基电离为-COO-,由于静电相斥,分子较松散,在pH4时并不电离,容易形成螺旋结构。
2010年中科院生态中心考博生态学真题一、名词解释1、Climax2、Biological invasion3、Fundamental niche4、Energy pyramid5、Landscape process6、Heat island7、Ecosystem service8、Allelopathy9、r/k selection10、Direct grandient anylisis二、简答(六选四)1、简述生产力与生物多样性之间的关系。
2、简述氮循环过程。
3、简述我国森林生态系统主要类型及特点。
4、简述植物对光照因子的响应方式。
5、简述生态敏感评价方法。
6、简述生态工程的基本原理。
三、论述(四选二)1、论述城市生态系统的结构、功能与特征,并讨论其研究方法。
2、从碳循环的角度,论述未来全球气候变化对生态系统碳源和碳汇的影响。
3、举例说明景观生态学在生物多样性保护或区域生态环境保护中的作用。
4、从生态系统物质循环的角度,举例论述污染物的产生、传输、危害过程及控制对策。
1 何谓R对策和K对策?简述r-K选择理论的生态学意义(10分)。
2 简述演替顶极理论的三个假说(10分)。
3 简述三级营养关系的概念并举例加以说明(10分)。
4 简述物种和群落或生态系统水平上生物多样性的测定方法(10分)二论述题1 我国近年来兴建了许多大型水利工程,这些工程对生态环境有哪些影响?试举例说明并提出环保对策(15分)。
2 外来种(exotic species) 和入侵种(invasive species) 有何不同?如何防止一种外来种成为入侵种?试举例说明(15分)。
3 水生植物在水环境保护中的作用有哪些?举例说明如何利用大型水生植物保护水环境(15201X年中科院生态中心考博生态学真题一、名词解释1、MacArhthur平衡说2、恢复生态学3、净初级生产量4、空间异质性5、邻接效应6、群落排序7、湿地8、他感作用9、同资源种团10、原生演替二、简述题(每题8分,共48分)1.岛屿生物地理学(Island Biogeography)与生物多样性保护。
孙兵王逸平李澄宇金颖杨晟王勇(杨琛)鲍岚于翔金玫蕾于翔孙兵1、请比较说明三种主要制备人源化抗体方法的优缺点(04)2、单克隆抗体的制备原理和人源化抗体的分类及其主要应用(08)3、说明从杂交瘤中,分离单克隆细胞的方法。
(07)王逸平1、简述受体概念,特点,功能,并举例说明受体与配体结合试验的测定方法,以及放射配体结合法的应用。
(04、05)答案:1)概念:受体是细胞在进化过程中形成的细胞蛋白组分,是一种能够识别和选择性结合某种配体(信号分子,周围环境中某种微量化学物质)的大分子,通过信号转导作用与放大系统,将胞外信号转换为胞内化学或物理的信号,触发随后的生理反应或药理效应,即表现为生物学效应。
受体存在于细胞膜、胞浆、细胞核中,类型包括:门控离子通道型受体,G蛋白偶联型受体,具有酪氨酸激酶活性受体和细胞内受体等。
受体与配体的结合是化学性的,二者通过范德华力、离子键、氢键等分子间的吸引力结合。
2)特点:受体一般至少包括两个功能区域,与配体结合区域及产生效应区域,分别具有结合特异性和效应特异性。
其特点有1.特异性:对配体具有高度选择性,这种选择性是由分子的几何形状决定的,与其在空间结构上互补,但并不是简单的一对一关系,不同细胞对同种配体可能具有不同受体。
2.饱和性:受体在生物体内的数量是有限的,与其配体的结合能力有限。
受体-配体结合曲线(Scatchard曲线)为矩形双曲线,增加配体浓度,可使受体饱和。
3.可逆性:受体与配体结合后可解离,可置换。
4.高亲和性和敏感性:受体具有极高的识别能力。
5.特定的作用模式:受体在细胞内分布,从数量到种类,均有组织特异性,并有特定的作用模式,提示某受体与配体结合后,能引起特定的生理效应。
3)功能:1.识别和结合2.信号转导3.产生相应的生理功能4)受体与配体结合试验的测定方法1.受体与配体结合试验常用放射性配体结合法(RBA)进行测定,放射配体结合法原理为:利用受体和配体结合的高度特异性以及放射性核素测量的高灵敏度的特点, 用放射性核素标记配体, 在一定的条件下, 使其与受体结合, 形成受体-配体复合物, 通过测量此受体-配体复合物的放射活性, 达到了解受体结合活性的目的。
如已有报道采用放射配体受体结合分析法观察川芎嗪对VEGF受体(VEGF为血管内皮生长因子,被认为是座用最强、特异性最高的血管生长因子之一)最大结合容量(Bmax )和解离常数( Kd 值)的影响。
说明在川芎嗪作用下VEGF受体数目下降,结果显示川芎嗪大剂量组含药血清抑制VEGF受体与125 I-VEGF结合,提示川芎嗪可能是通过抑制VEGF受体结合而发挥其抑制血管生成的作用。
(丰俊东,徐晓玉等,中国药理学通报,2005 Aug; 21 (8) : 939)以及用此分析法进行铁蛋白受体特性研究,结果表明铁蛋白受体与铁蛋白结合具有高度特异性,可饱和性和中度亲和力。
在观察川芎嗪对VEGF受体最大结合容量(Bmax )和解离常数( Kd 值)影响的研究中放射配体受体结合实验(RBA)具体步骤如下:胰蛋白酶消化细胞,离心去上清。
用结合缓冲液( RPM I 1640 培养液含0.1% BSA, 20 mmol Hepes, pH = 7.4)调整细胞密度至6 ×105,将细胞悬液加入1-24号检测管中,每管150μL。
检测管在使用前用PBS (含1%BSA)浸泡过夜。
复管法分别加入125I-VEGF 50、80、100、150、200、350、500、700 pmol·L - 1至1-16号检测管。
非特异结合管( 17-24 号)按复管法分别加入125 I-VEGF 50、100、350、700 pmol·L – 1,并加入100倍的非标记VEGF。
上述各管再加入结合缓冲液至总体积300 μL,置于4℃,孵育3 h。
加入1 ml冰冷PBS(含011% BSA)终止反应,离心弃上清,细胞用冰冷的PBS(含0.1% BSA)洗3次。
置于γ计数器(GC-911)测量放射性。
总结合减去对应浓度点非特异性结合得出特异性结合的cpm值。
RBA专用分析软件处理数据,得出受体最大结合容量(Bmax )和平衡解离常数( Kd ) ,绘出饱和曲线,并进行Scatchard作图。
2.亲和磁共振法(affinity NMR),它的基本前提是当配体与受体结合时,该低分子量配体的扩散速率发生明显的变化,其结果是结合和非结合配体的扩散系数明显不同,从而允许采用PFG实验(PFG实验常用于测定分子的扩散系数),从该配体和众多与靶蛋白无结合作用的分子的混合物中对该配体进行识别。
该方法已经成为研究小分子配体和生物大分子相互作用的一种非常重要的手段。
可检测小分子配体信号在作用过程中的变化以识别药物分子,是核磁共振进行药物筛选的主要方法之一。
但与其他技术相比,NMR 方法在筛选混合物中的应用受到其相对不灵敏的限制。
3.原子力显微技术(atomic force microscopy,AFM)。
该技术可提供在内力及外力影响下受体-配体之间相互作用的动态变化信息。
AFM是作为一种成像工具而设计的,还能以力扫描方式进行操作。
在这种力模式下,它能以10-12牛顿的精度测量两相对表面之间的作用力。
在受体-配体间作用力的研究中,配体被偶连于的AFM弹性悬臂表面,受体则被固定于适当的基底表面。
在悬臂接近和离开基底的过程中,通过悬臂的偏折便可测得受体-配体间的作用力。
AFM作为检测受体-配体间相互作用的一种超高灵敏度的力传感器,已应用于对生物素-链亲和素复合物之间作用力的测量,红细胞的亲和力成像,钙离子通道识别,活体细胞上钙通道拮抗剂与受体之间结合力的测量等研究中。
5)放射配体结合法的应用领域1,阐明药物作用机制;2,新药设计和药物筛选;3,探讨疾病的病因,发病机理,提高临床合理用药和诊断水平;4,测定组织或血液中药物浓度;5,探寻新的受体,受体亚型和内源性配体.李澄玉1、什么是电生理技术?开展膜片钳技术需要哪些常用设备(requirements)?(04)答:Electrophysiology deals with different techniques of analyzing electrical signals (current and potential changes) generated at cell membranes, or with techniques where electrical stimuli are guided to the membrane to analyze their influence on membrane transport and function.膜片钳技术需要的常用设备:一套膜片钳系统可分为机械系统,光学系统和电子系统。
其中机械系统包括防震平台和微操作器;电子系统包括放大器,刺激器,数据采集,纸带记录,示波器,拉制仪,抛光仪等;光学系统包括成像系统(摄像头,边缘检测,荧光检测,图像显示,监视器等)和显微镜。
2、解释GABA激活神经元的Cl通道为什么既可引起超极化反应,也可引起去极化反应?(05)在神经元发育的早期,胞内的Cl-浓度要大于胞外,此时如果GABA激活离子通道型受体GABAa,引起GABAa的开放则Cl-将沿化学浓度梯度从胞内流向胞外。
在静息水平,神经元膜电位为负值即胞外侧积累了较多的正电荷,所以Cl-的大量外流势必会中和胞外的正电荷从而使膜电位上升引起去极化反应;在神经元发育成熟以后,胞内的Cl-浓度会由于一种transporter表达量的上调而低于胞外,这样,当GABAa开放时Cl-从胞外流向胞内引起细胞膜内侧负电荷的增多,膜电位降低引起超极化反应。
3、解释翻转电位及意义反转电位是一类离子通道在特定离子浓度下的特征性参数,反转电位的获得主要通过对单一种类的离子通道进行电压钳单通道记录,具体就是在电压钳模式下给具有单一种类离子通道活性的细胞一系列膜电位钳制,记录不同膜电位下某种离子通过通道引起的电流,从而得到该种通道的I-V曲线,反转电位就是当电流为0时对应的膜电位。
因为在离子通道开放后,离子流动的方向由胞内外该离子的浓度梯度及电势梯度共同决定,对钠离子而言,在膜电位较低时浓度梯度会驱使钠离子内流,当膜电位不断升高时受电势梯度影响内向电流逐渐减小到0,甚至出现外向电流。
对于不同种类的离子通道而言,离子浓度不变时反转电位是特定的,因此研究某种通道的反转电位有助于通过与已知通道特性的比较确定该通道的类型。
4、电生理方法?膜片钳全细胞记录的优点?(08)答案:一、电生理方法:1、细胞外记录:特殊的电极:尖端是碳纤(可放到膜的周围),1个电极放在细胞上,另一个电极放在很远的地方(如皮下组织),作为一个参考电极。
测出2个电极之间电压的差别,从而知道细胞外电位的变化。
电极的碳纤放在中间,周围包裹了一些像玻璃管一样的东西,当记录到细胞的膜电位后,通过细胞周围这些玻璃管往局部的组织内给予一些药物,如一些受体的阻断剂,看看神经元会有一些怎样的反应。
2、细胞内的记录(一般指尖电极记录):细胞在组织液中,电极往细胞里扎,因静息膜电位为负,在电极还在细胞外的时候,把细胞外参考电极的电位调到0,当测量电极插入细胞时,电位显示一下变为负,便知道电极扎入细胞。
电极扎入细胞分为2种:1、较原始:电极接触到膜后阻抗变大,敲击实验台使电极扎入细胞。
2、电极接触到膜后阻抗变大,给一个过补偿电流(玻璃电极内外都有电解质,也为一个电容,会充放电,需要给予补偿电流),使电极尖端振动,频率较高,使电极扎入细胞。
(过补偿电流使电极尖端振动原理还未知)细胞内记录可记录到膜电位的波动(如神经元突触后电位和动作电位),而细胞外记录只能记录到锋电位的变化。
3、膜片钳记录的不同方式:1)、细胞吸附式记录(cell-attached patch)电极向细胞靠近时,给一个正压,使电极往外“吹”,当靠近细胞后去掉正压,使得细胞膜与玻璃之间形成一个非常紧密的高阻抗封接,使从缝隙外泄的电流非常小(电阻非常大)。
在细胞膜表面隔离出一小片膜, 即通过微管电极对膜片进行电压钳制, 从而测量膜电流。
可在电极液中加入药物等物质,研究其对膜上离子通道(如配体门控通道)的作用,缺陷在于1次patch只能测定1种物质浓度对膜上通道的作用。
2)、全细胞记录:形成高阻抗封接后,给予一个非常短促的负压,使膜被吸破,电极内的溶液和细胞里的溶液导通,就能记录到细胞膜电位的变化,为全细胞记录。
全细胞记录模式可应用于记录:神经元上某些通道和受体的电信号神经元PSC—突触后电流神经元PSP—突触后电位神经元AP—动作电位3)、内面向外模式( inside-out patch)cell-attached后高阻封接形成, 将微管电极轻轻提起, 使其与细胞分离, 电极端形成密封小泡,在空气中短暂暴露几秒钟后, 小泡破裂再回到溶液中, 使小泡的外半部分破裂得到一小片膜,且膜的细胞外的这一面对的是电极液,而细胞内的这一面对的是细胞外溶液,就是所谓的inside-out patch。