反相高效液相色谱法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的 京尼平苷酸和绿原酸

反相液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸
万春花;倪永年;龙洲雄;胡海山;鄢兵
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2007(028)001
【摘要】通过正交试验选择杜仲叶中绿原酸的最佳提取条件:30%甲醇回流20min,用反相液相色谱法测定绿原酸含量:色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为甲醇-0.02%磷酸溶液(体积比22:78),波长327nm,流速1.0ml/min.绿原酸在9.68～242μg/ml 呈良好线性关系,相关系数r为0.9999,本法快速、简单、准确、分离度好、回收率大于95.9%.
【总页数】3页(P255-257)
【作者】万春花;倪永年;龙洲雄;胡海山;鄢兵
【作者单位】南昌大学化学系,江西,南昌,330047;江西省分析测试研究所,江西,南昌,330029;南昌大学化学系,江西,南昌,330047;江西省分析测试研究所,江西,南
昌,330029;江西省分析测试研究所,江西,南昌,330029;江西省分析测试研究所,江西,南昌,330029
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.RP-HPLC法测定杜仲叶中京尼平苷酸与绿原酸的累积含量 [J], 冯攀;马养民;朱
军峰;陈立红
2.杜仲叶中绿原酸的协同增敏荧光光谱法测定 [J], 刘媚;林颖云;苏艳;吴颖;杨秀培
3.可见分光光度法测定杜仲叶中的绿原酸 [J], 袁华;邓良;孙炎彬;杨小俊;闫志国;吴元欣
4.络合显色法测定杜仲叶中的绿原酸(英文) [J], 袁华;孙炎彬;池汝安;吴元欣
5.高效液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸含量方法学研究 [J], 熊建斌
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响应面法优化超声提取杜仲雄花中黄酮类化合物的工艺参数董发明１，白喜婷２（１．河南科技大学动物科技学院，河南 洛阳 ４７１００３；２．河南科技大学食品与生物工程学院，河南　洛阳 ４７１００３）摘 要：在单因素试验的基础上，对乙醇浓度、提取时间和超声功率三因素进行二次通用旋转组合试验设计并通过响应面分析，优化杜仲雄花中黄铜类化合物的超声波提取工艺。

结果表明：超声辅助提取杜仲雄花中黄酮类化合物的最佳工艺参数为乙醇浓度６０％、提取时间３４ｍｉｎ、超声功率３２０Ｗ。

在此条件下，黄酮类化合物的实际提取率为１３．１３ｍｇ／ｇ，与预测值基本一致。

在三个因素中，乙醇浓度对提取率影响最大，其次是超声功率，提取时间对黄酮类化合物的提取率影响较小，并且三因素之间无交互作用。

关键词：杜仲雄花；超声提取；黄酮类化合物；响应面优化Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｓｔａｍｉｎａｔｅ　Ｆｌｏｗｅｒ　ｂｙ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｓｕｒｆａｃｅ　ＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙＤＯＮＧ　Ｆａ－ｍｉｎｇ１，ＢＡＩ　Ｘｉ－ｔｉｎｇ２（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｈｅｎａｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ，　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｅｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｓｔａｍｉｎａｔｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｑｕａｄｒａｔｉｃ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｓｐｉｎｎｉｎｇ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｎ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：　ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　６０％，　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ　３４　ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　３２０　Ｗ．　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，　ｔｈｅ　ａｃｔｕａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｓ　１３．１３　ｍｇ／ｇ，ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ．　Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ａｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅ，　ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，　ａｎｄ　ｎｏ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｅｘｉｓｔｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｍ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｓｔａｍｉｎａｔｅ　ｆｌｏｗｅｒ；ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈ－ｏｄｏｌｏｇｙ中图分类号：Ｏ６２３．５４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）０８－２２７－０５收稿日期：２００８－０５－２１基金项目：河南省教育厅自然科学基金项目（２００６５５０００１）；河南科技大学博士科研启动基金项目作者简介：董发明（１９６４－），男，副教授，博士，主要从事中药研究与开发。

中外医疗中外医疗I N FOR I GN M DI L TR TM NT2008N O.20C HI N A FO REI GN M ED I CA L TR EATM ENT论著绿原酸(C hl or ogeni c aci d)又名咖啡鞣酸,属酚酸类化合物,是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径形成的一种苯丙素类物质。

绿原酸具有利胆、抗菌、抗病毒、降压,升高白细胞及兴奋中枢神经系统等多种药理作用[1],是保健品、食品、药品、化妆品等工业的重要原料。

纯的绿原酸还是重要的化学试剂,在生理生化分析和化学工业中具有广泛的应用。

近年来的研究表明杜仲叶中绿原酸含量较高,可达1%～5.5%[2]。

文献[3～4]报道了用H PLC 法测定杜仲中绿原酸的含量测定方法,但杜仲叶中成分复杂[5],用已有的色谱方法都不能使绿原酸得到很好的分离,本文系统地研究了杜仲叶的绿原酸含量H PLC 测定方法,以找出理想的方法;同时本文采用该高效液相色谱法测定了7个不同产地的杜仲叶绿原酸含量,该法操作简单,准确度、灵敏度高,精密度好,易于采用。

1实验部分1.1仪器与试剂W at e r s 2695泵,W at er s 2996紫外检测器,自动进样器,Em pow e r色谱工作站,SB5200D 超声波清洗器(宁波新芝生物科技),BP211D 电子天平(德国Sar t or i us 公司),超纯水(M i ll i por e 公司超纯水器自制),甲醇(色谱纯),乙腈(色谱纯),磷酸(分析纯),绿原酸对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号:110753-200413),杜仲叶购于各地药材公司。

1.2色谱条件色谱柱:大连E l i t e H yper si l C 18(4.6m m ×200m m )5μL 色谱柱,流动相:乙腈-0.4%磷酸(8:92),流速0.8m L/m i n,进样体积10μL,检测波长327nm ,柱温30℃,各组分达到基线分离。

ＲＰ－ＨＰＬＣ测定杜仲叶京尼平苷的含量【摘要】目的建立反相高效液相色谱法同时测定杜仲叶京尼平苷含量的方法。

方法高效液相色谱法。

结果杜仲叶京尼平苷在0.26~2.60 μg范围内线形关系良好（r=0.999 9），平均加样回收率99.94%，RSD=0.6%（n=6）。

结论成分的峰分离效果好，其测定方法操作简便、准确、重复性良好，可作为杜仲叶中京尼平苷的质量控制方法。

【Abstract】Objective To establish a new RP-HPLC method for simultaneous determination of geniposide in folium cortex eucommia.Methods HPLC method.Results The standard geniposide(showed a good linear correlation within the concentration of 0.26~2.60 μg，（r=0.999 9），the average recovery of the sample was 99.94%，RSD=0.6%（n=6）.Conclusion The peaks of the components were separated effectly，the method is simple，accurate and reproducible and can be used for the quality control of geniposide in folium cortex eucommia.【Key words】RP-HPLC；Eucommia ulmoides oliv.leaf；Geniposide杜仲（Eucommia uimoides Oliv.）具有消炎抑菌、补肾降压、增强免疫功能及抗癌、抗疲劳、抗衰老、止痛镇静、补肝肾、强筋骨和安胎等作用［1，2］，是我国珍稀濒危二级保护植物，传统以皮入药。

·临床研究·反相高效液相色谱法测定杜仲绿原酸的含量王　巧　毕开顺　田　菁＊＊　蒋午峻＊＊＊河北医科大学药学院药物分析教研室(石家庄050017) 主题词　杜仲/中草药;绿原酸/分析;色谱法,高压液相/方法 中图号　R932.11 杜仲为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的药用干燥树皮,为我国名贵滋补药材,具补肝肾、强筋骨、安胎、轻身耐老之功效。

现代药理研究证明,杜仲有降压、利尿、抗衰老、抗炎、镇静镇痛等作用[1]。

杜仲的化学成分主要有杜仲胶、木脂素类、环烯醚萜类、有机酸类等[2]。

绿原酸属有机酸的一种,是杜仲起抗炎、降压作用的有效成分之一,其定量分析方法主要有薄层色谱-分光光度法、纸色谱-紫外分光光度法、毛细管区带电泳法和高效液相色谱法等[3～6]。

为寻找更科学的杜仲质量评价方法,采用反相高效液相色谱法对其所含绿原酸的含量进行了测定。

1　材料与方法1.1　仪器、试剂与药品:250型高效液相色谱仪, LC-295紫外检测器,1022LC plus色谱工作站(均为美国PE公司);HHS-112型恒温水浴箱(江苏省医疗器械厂),ZFQ85A型旋转蒸发仪(上海医械专机厂)。

绿原酸对照品购于中国药品生物制品检定所,乙腈为色谱纯,丁香酸、甲醇、冰醋酸、氯仿均为分析纯。

32个杜仲样品(均由沈阳药科大学许春泉高工进行生药学鉴定)的产地和收集地见表1,将各样品除碎叶、砂石及粗皮后,阴凉处干燥,经粉碎机粉碎,置广口瓶中,密塞,备用。

1.2　方法与结果1.2.1　色谱条件:色谱柱,Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6m m ID,5μm,中国科学院大连化学物理研究所);流动相,乙腈-2%冰醋酸溶液(5∶95);流速,1.0ml/min;检测波长,310nm;柱温,23℃;进样量,20μl;内标,丁香酸。

1.2.2　系统适用性试验:理论板数按绿原酸峰计算为2138,绿原酸峰与相邻峰及内标峰的分离度均>1.5,峰形对称。

黑龙江农业科学２０２３(１０):６３Ｇ６７H e i l o n g j i a n g A gr i c u l t u r a l S c i e n c e s h t t p ://h l j n y k x ．h a a s e p．c n D O I :１０．１１９４２/j．i s s n １００２Ｇ２７６７．２０２３．１０．００６３朱艳,李先芝,毛琼丽,等．H P L C 法测定杜仲雄花中绿原酸含量[J ]．黑龙江农业科学,２０２３(１０):６３Ｇ６７．H P L C 法测定杜仲雄花中绿原酸含量朱㊀艳１,李先芝１,２,毛琼丽１,严㊀玲１,石㊀豪１,刘㊀洋１,胡㊀杨１,陈彦和１(１．劲牌有限公司,湖北黄石４３５１００;２．中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室,湖北黄石４３５１００)摘要:为建立一种快速简便测定杜仲雄花中绿原酸含量的方法,采用A g i l e n t ＧC １８色谱柱(４．６m mˑ２５０．０m m ,５μm ),乙腈Ｇ０．４％醋酸(１０ʒ９０)等度洗脱,流速１．０m L m i n －１,柱温箱温度３５ħ,３２７n m 单波长检测,通过试验对该方法的稳定性㊁精密度等进行优化.结果表明,杜仲雄花绿原酸在测定范围内呈良好的线性关系(R ２＝０．９９９８),平均回收率为９７．３０％.供试品溶液处理方法为环境友好型方法,能更好地减少环境污染,对实验人员安全性更高,且该方法具有较高的精密度和重复性,可用作杜仲雄花中绿原酸含量的测定.关键词:杜仲雄花;绿原酸;高效液相色谱法收稿日期:２０２３Ｇ０４Ｇ０７第一作者:朱艳(１９８７－),女,学士,工程师,从事药材质量控制研究.E Ｇm a i l :３３９５２６００６＠q q．c o m .通信作者:李先芝(１９７８－),女,硕士,高级工程师,从事药材质量控制研究.E Ｇm a i l :８３８０９７９６８＠q q．c o m .㊀㊀杜仲是我国常用的特有药材,在我国已有两千年的历史,由于其生长周期较长,传统药用部位以皮部为主,所以导致大量野生杜仲遭到破坏,且具有不可再生性质,导致其资源紧缺[１].近年来研究发现,杜仲皮㊁叶㊁花其药理作用相似,但还是有一定的差异[２Ｇ４],如杜仲不同部位水提取物的镇痛作用㊁抑菌作用效果中杜仲雄花明显优于其他部位[２].同时也有研究表明杜仲皮㊁叶㊁花等不同部位成分含量不同,如杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷和京尼平含量较高,杜仲叶中绿原酸含量较其它部位高,杜仲雄花中桃叶珊瑚苷㊁京尼平苷酸㊁等含量较高,导致这些含量差异的原因除了药用部位不同外还与其具体采收㊁提取方式也有较大关系[５Ｇ６].杜仲是一类雌雄双株的植物,雄花就是杜仲雄树开的花,其花粉是我国珍贵的药用资源[７].根据杜仲雄花调节阴虚证㊁阳虚证动物模型,推测出其可能具有补肾及改善生殖的功能[８].杜仲雄花含有丰富的蛋白质㊁氨基酸㊁矿质元素及多种维生素等,是一类营养丰富的保健饮品,不但可以改善睡眠㊁调节雌激素㊁镇痛等,而且其主要成分中绿原酸具有显著的药理活性[９Ｇ１０].绿原酸对血液系统㊁消化系统等均有疗效,其抗菌消炎作用最为突出[１０Ｇ１１].近年来随着研究的深入,学者发现杜仲雄花茶中绿原酸对肿瘤预防也有着重要的意义[９],而且对I I Ｇ型糖尿病及与衰老相关的疾病也有一定的治疗作用[９Ｇ１０].不同区域的杜仲雄花中绿原酸含量也有较大差别,如南北地域差异,海拔高度差异等影响,均会导致杜仲花中品质的差异[１２].不同的加工方式会使杜仲雄花茶呈现不同的绿色,更严重的是不当的加工提取方式会造成绿原酸等物质的损失.由于其本身含热敏性功能而导致绿原酸含量发生差异,另外在杜仲雄花处理杀青过程中,可能导致绿原酸在多酚氧化酶的作用下被氧化分解[１３],使其无法更有效地发挥其自身有效价值,降低杜仲雄花中绿原酸的利用率.作为判断杜仲雄花中重要功能成分之一的绿原酸,如何快速检测杜仲雄花中绿原酸含量至关重要,除可提高提取速度㊁保证提取率外,还可以减少实验过程试剂用量及试剂污染[１４Ｇ１５].本研究通过试验对其稳定性㊁精密度等进行优化,为快速检测杜仲雄花中绿原酸含量提供参考.１㊀材料与方法１．１㊀仪器及材料仪器设备:高效液相色谱仪(配紫外检测器或二极管阵列检测器,１２６０I n f i n i t y ⅡB i n a r y LC ,美国安捷伦科技有限公司)㊁十万分之一电子天平(A B １３５ＧS ,上海精密科学仪器有限公司).材料及试剂:２０２２年５月采于陕西汉中偏深绿色杜仲雄花㊁绿原酸对照(中国食品药品检定研究院)㊁乙腈(色谱纯,弗顿科技有限公司)㊁醋酸(分析纯,默克公司)㊁乙醇(分析纯,国药).１．２㊀方法１．２．１㊀色谱条件㊀色谱柱选用A g i l e n tC １８柱(４ ６m m ˑ２５０．０m m ,５μm );流动相:乙腈Ｇ０ ４％醋酸(１０ʒ９０)等度洗脱,流速１．０m L m i n －１;３６Copyright ©博看网. All Rights Reserved.㊀㊀㊀㊀㊀黑㊀龙㊀江㊀农㊀业㊀科㊀学１０期柱温箱温度３５ħ;检测波长３２７n m ;进样量１０μL [１５].１．２．２㊀供试品溶液制备㊀精密称定１．００g 左右粉碎试样于２５m L 棕色容量瓶中,加入２０m L５０％乙醇,超声提取４５m i n ,用５０％乙醇定容至刻度,混匀,过０．２２μm 滤膜,滤液作为待测样品备用[１０Ｇ１１].１．２．３㊀对照品溶液制备㊀精密称取绿原酸标准品１３．０m g 至１０m L 容量瓶中,加流动相溶解[０．４％醋酸Ｇ乙腈(９０ʒ１０)]定容,摇匀,得到绿原酸标准溶液母液(浓度１３３０m gL －１);分别精密量取绿原酸标准溶液母液０．１０,０．４０,０．８０,１．２５和２．５０m L 至５m L 容量瓶中,加流动相溶解定容,摇匀,得到绿原酸标准样品２６．６m gL －１(２＃)㊁１０６．４m g L －１(３＃)㊁２１２．８m g L －１(４＃)㊁３３２．５m g L －１(５＃)㊁６６５．０m g L －１(６＃),再取２６．６m gL －１(２＃)标准溶液１．０m L 至１０m L 容量瓶中,加流动相溶解定容,摇匀,得到绿原酸标准溶液２．６６m gL －１(１＃).１．２．４㊀提取时间的确定㊀分别精密称定１．００g 左右粉碎试样于２５m L 棕色容量瓶中,分别加入５０％乙醇按１５,３０,４５和６０m i n 时间进行超声提取.超声冷却后,使用提取溶剂定容至刻度,混匀,过０．２２μm 滤膜,按１．２．１色谱条件进行色谱分析,比较不同提取时间的绿原酸浓度差异.１．２．５㊀提取溶剂的筛选㊀分别精密称定１．００g 左右粉碎试样于２５m L 棕色容量瓶中,分别加入２０m L 纯水㊁５０％乙醇㊁７０％甲醇超声提取３０m i n,超声冷却后,分别使用提取溶剂定容至刻度,混匀,过０．２２μm 滤膜,按１．２．１色谱条件进行色谱分析,比较不同提取溶剂处理的绿原酸浓度差异.１．２．６㊀色谱峰面积与绿原酸浓度的关系㊀将上述标准溶液１＃~６＃,在上述色谱条件下进行分析,得到各浓度的绿原酸色谱峰的峰面积,以浓度为横坐标,相对应的色谱峰面积为纵坐标建立曲线.１．２．７㊀精密度试验㊀取某批次陕西汉中偏深绿色杜仲雄花按照１．２．２方法制备供试品溶液,并按１．２．１中色谱条件连续进样分析６次,得到各次分析时测得的绿原酸浓度,计算浓度的R S D 值.１．２．８㊀稳定性试验㊀取１．２．３中供试品溶液进行稳定性试验考察,按照１．２．１中液相色谱条件分别在０．７５,１．５０,３．００,４．５０,７．５０和９．７５h 对供试品溶液中绿原酸进行检测,得到各次分析时绿原酸浓度,计算浓度的R S D 值.１．２．９㊀重复性试验㊀取某批次陕西汉中偏深绿色杜仲雄花进行重复性试验,分别称取６份供试品１．００１１,１．０１０３,１．００５６,１．００３７,１．００４３和１．００９３g ,以１．２．２中样品制备方法,按照１．２．１中色谱方法进行分析,利用已建立的标准曲线计算样品中各目标成分的含量.１．２．１０㊀加标回收试验㊀标准溶液制备:精密称取绿原酸２５．７３m g,绿原酸含量１００％,用流动相定容到２０m L 容量瓶中,摇匀,得到绿原酸标准溶液１２８６．５０００m gL －１.加标回收试验供试品制备:分别称取９份供试品(原则取样品量１/２进行加标试验,由于此样品含量较高,故取样品量约１/４进行加标试验)０ １００４,０．１００９,０．１０７２,０．１００８,０．１００８,０ １００３,０．１０６１,０．１０００和０．１０５６g ,分别加入０．５,１．０和１．５m L 浓度为１２８６．５０００m gL －１标准溶液,按１．２．２进行样品前处理定容至１０m L ,再按照１．２．１中色谱方法进行色谱分析,利用已建立的标准曲线计算加标回收样品中绿原酸的加标量,与实际加入量进行比较,计算回收率.２㊀结果与分析２．１㊀供试品溶液制备考察２．１．１㊀提取时间的确定㊀由表１可知,在提取１５,３０,４５和６０m i n ４个时间段所测得浓度相近,而３０m i n 提取浓度略高,综合考虑选择提取时间３０m i n 较为合适.表１㊀不同提取时间对绿原酸浓度的影响时间/m i n 溶液浓度/(m gL －１)１５３０９．７１０５３０３１２．７３１３４５３０９．７１１９６０３１０．９８２３２．１．２㊀提取溶剂的筛选㊀由表２可知,纯水超声提取所测得浓度略低,５０％乙醇与７０％甲醇超声提取所测得浓度无明显差异,考虑到实验人员及环境污染等原因,选择５０％乙醇进行超声提取.表２㊀不同提取溶剂对绿原酸浓度的影响提取溶剂溶液浓度/(m gL －１)纯水２７８．８９６２５０％乙醇２９３．２０２５７０％甲醇２９４．２００５４６Copyright ©博看网. All Rights Reserved.１０期㊀㊀朱㊀艳等:H P L C 法测定杜仲雄花中绿原酸含量㊀㊀㊀㊀㊀㊀２．２㊀检出限试验精密称取绿原酸标准物质适量,加流动相溶解至适当浓度,在１．２．１色谱条件下进行色谱分析,使得绿原酸的色谱峰高与基线噪音的比值约为３,经试验,确定绿原酸浓度为０．０２６６m gL －１时为最低检出浓度,最低检出浓度标准溶液色谱图见图１.图１㊀最低检出浓度的标准溶液色谱图２．３㊀线性范围试验不同浓度标准品与对应的色谱峰峰面积数据如表３所示,相关标准曲线为绿原酸(y )＝２９．９５x －１４０．０２,R ２＝０ ９９９９(图２).表３㊀标准曲线建立相关数据序号浓度/(m gL －１)峰面积/(m A U )１２．６６６１．１７１２２６．６０６９１．８５６３１０６．４０２９５９．８９７４２１２．８０６１８４．５１３５３３２．５０９７２０．６９４６６６５．００１９８５３．０１５图２㊀绿原酸标准曲线２．４㊀精密度试验由表４可知,绿原酸精密度试验R S D 值均ɤ５％,满足G B /T２７４０４－２００８«实验室质量控制规范食品理化检测»精密度试验要求,表明仪器方法性能稳定,检测结果的随机误差较小.表４㊀绿原酸精密度试验数据及R S D 值序号测得浓度/(m gL －１)１３０５．０１４０２３０６．１１２２３３０６．７３０３４３０６．７８４１５３０６．７１３４６３０７．３９３０R S D/％０．２７２．５㊀稳定性试验由表５可知,绿原酸稳定性试验R S D 值均ɤ５％,满足G B /T２７４０４－２００８«实验室质量控制规范食品理化检测»稳定性试验要求,绿原酸在９．７５h 内稳定性良好.表５㊀绿原酸稳定性试验数据及R S D 值序号稳定性时间/h测得浓度/(m gL －１)１０．７５３０６．１１２２２１．５０３０６．７３０３３３．００３０６．７１３４４４．５０３０７．２６７７５７．５０３０７．７２８１６９．７５３０７．９９８４R S D/％－０．２３５６Copyright ©博看网. All Rights Reserved.㊀㊀㊀㊀㊀黑㊀龙㊀江㊀农㊀业㊀科㊀学１０期２．６㊀重复性试验由表６可知,绿原酸重复性试验R S D 值均ɤ５％,满足G B /T２７４０４－２００８«实验室质量控制规范食品理化检测»稳定性试验要求,表明绿原酸检测方法重复性良好.２．７㊀加标回收试验由表７可知,绿原酸加标回收收率在９７．３５％~１０１．３５％,满足G B /T２７４０４－２００８«实验室质量控制规范食品理化检测»中回收率试验的技术要求,表明方法准确可靠.表６㊀重复性试验数据及R S D 值序号样品质量/g 测得浓度/(m gL －１)样品含量/％１１．００１１３０７．３３１６０．７６７５２１．０１０３３０９．３９３２０．７６５６３１．００５６３０８．４９１００．７６６９４１．００３７３０６．８１８８０．７６４２５１．００４３３０７．０８０８０．７６４４６１．００９３３０９．８２３５０．７６７４R S D/％－－０．１９表７㊀杜仲雄花中绿原酸加标回收率及R S D 值称样量/g 实际测得浓度/(m g L －１)样品理论含量/m g加标后含量/m g加标含量/m g 回收率/％平均值/％R S D/％０．１００４１３９．５３５１０．７６９１１．３９５４０．６４３３９７．３５０．１００９１４２．４９１８０．７７２９１．４２４９１０１．３５０．１０７２１４６．３８２６０．８２１２１．４６３８９９．９００．１００８２０５．６２６４０．７７２１２．０５６３１．２８６５９９．８２０．１００８２０５．４０４５０．７７２１２．０５４０９９．６４９７．３０３．１２０．１００３２０３．６６７００．７６８３２．０３６７９８．５９０．１０６１２７１．２５３３０．８１２７２．７１２５１．９２９８９８．４５０．１０００２７１．１０８５０．７６６０２．７１１１１００．７９０．１０５６２７３．３７６８０．８０８９２．７３３８９９．７４２．８㊀不同采收批次成品杜仲雄花中绿原酸含量由表８可知,不同采收批次杜仲雄花中绿原酸含量存在明显差异,同区域杜仲雄花中绿原酸含量无明显差异.表８㊀不同批次仲杜雄花中绿原酸含量样品样品含量/％陕西汉中深色杜仲雄花茶７．０４５２陕西汉中绿色杜仲雄花茶７．３６８７杜仲雄花茶１＃６．３８２３杜仲雄花茶２＃４．７３８４张家界杜仲雄花茶３．７７１６３㊀讨论杜仲雄花中绿原酸含量检测过程中,提取方式主要参考杜仲叶的提取方式,且方式也较为多样化,如以水为溶剂,可进行煎煮㊁热回流㊁超声㊁酶法提取等方法,其中热回流法绿原酸提取率高于其他提取方法[１６Ｇ１９],通过水提法对提取过程中温度等参数进行了控制,其提取率可超过８０％,其他方法绿原酸提取率在９０％以上[１８Ｇ１９].在医药㊁食品等其他行业中对原料有极高要求,或从提取步骤㊁耗时及提取有效成分的差异等各方面进行综合考虑,可以根据需要选用更加合适的方法进行提取.任小宁等[２０]在提取杜仲叶粉的时候选择使用不同工艺的酶提取法,可以提高提取效率且无污染.胡小祥等[２１]在与芦丁同时提取时选择采用７０％甲醇作为提取溶剂.王燕等[２２]从金银花粗产品中一次分离得到高纯度绿原酸时,选择采用微波辅助乙醇提取方法.目前,研究提取金银花中绿原酸的报道较多,对杜仲雄花及杜仲叶中单一绿原酸的提取分离较少,且提取分离步骤较为繁琐,使用有毒有害试剂较多,试验过程可能会造成环境污染等.本实验室前期通过相关试验分析证明,不同溶剂对杜仲雄花进行提取后绿原酸含量差异性较小,纯水超声提取所得绿原酸浓度略低,５０％乙醇与７０％甲醇超声提取所得绿原酸浓度无明显差异,故在无特殊含量要求的情况下可以选择５０％乙醇作为提取溶液更加安全可靠.本试验已通过方法学考察,验证该试验方法具有良好的精密度㊁稳定性和重复性.对单一研究杜仲雄花茶中绿原酸含量有较高的专属性,可以更加有效地分析研究不同品种杜仲雄花茶的品质.另外也有文献记载同产地不同批次杜仲雄花茶绿原酸含量存在较大差异,如魏媛媛等[５]研究６６Copyright ©博看网. All Rights Reserved.１０期㊀㊀朱㊀艳等:H P L C法测定杜仲雄花中绿原酸含量㊀㊀㊀㊀㊀㊀表明,张家界不同采样点的绿原酸含量存在较大波动.而本试验主要采用陕西地区杜仲雄花茶,其绿原酸含量相较于文献报道的张家界产区中的绿原酸含量高[５].本研究中绿原酸含量较高的原因可能是供试品溶液处理过程参数影响了最终绿原酸的含量.因此后续研究中应采用较为方便快捷的方法,分析研究不同品种杜仲雄花茶生产㊁采摘等方面的品质控制.４㊀结论研究结果表明本试验条件下H P L C法测定杜仲雄化中绿原酸含量最佳提取时间为３０m i n,考虑实验室环境污染及实验人员安全,选择较为实用的５０％乙醇作为提取溶液.经过方法学考察,该试验方法具有良好的精密度㊁稳定性和重复性,可快速简便测定杜仲雄花中绿原酸含量.参考文献:[１]㊀刘锟,王健英,魏莉,等．H P L C法测定杜仲皮㊁叶㊁雄花中８种成分[J]．中成药,２０２１,４３(３):６８６Ｇ６９１．[２]㊀陈晓俊,王凤琛,袁颖,等．杜仲皮㊁杜仲叶㊁杜仲雄花的药效学比较研究[J]．甘肃中医药大学学报,２０１６,３３(５):５Ｇ８．[３]㊀刘星．杜仲不同药用部位化学成分和含量的比较研究及在中成药中的应用[D]．南京:南京中医药大学,２０２２．[４]㊀张威鹏．杜仲主要活性成分的时空分布特征及其血管舒张作用差异分析[D]．哈尔滨:东北林业大学,２０２０．[５]㊀魏媛媛,李伟业,温晓,等．H P L C法同时测定不同产地杜仲雄花茶中３种活性成分含量[J]．安徽农业科学,２０１９,４７(８):１９２Ｇ１９４,１９７．[６]㊀郭洋静,丁艳霞,许兰波,等．H P L C法同时测定杜仲雄花中５种活性成分[J]．中成药,２０１４,３６(１０):２１３１Ｇ２１３４．[７]㊀白喜婷,朱文学,罗磊,等．杜仲雄花及花茶中绿原酸含量分析[J]．食品工业科技,２００７(６):２１６Ｇ２１７,１２７．[８]㊀谭丹,曾丹,唐利东,等．基于阴虚证㊁阳虚证及卵巢功能减退小鼠模型探讨杜仲雄花的补肾功效[J]．时珍国医国药,２０２２,３３(１２):２８７５Ｇ２８７８．[９]㊀魏媛媛．杜仲雄花茶质量评价及其破壁咀嚼片的研制[D]．吉首:吉首大学,２０１９．[１０]㊀郭佩佩．杜仲叶中绿原酸的分离及其生物活性研究[D]．杨凌:西北农林科技大学,２０２１．[１１]㊀王玲娜,姚佳欢,马超美．绿原酸的研究进展[J]．食品与生物技术学报,２０１７,３６(１１):１１２１Ｇ１１３０．[１２]㊀魏媛媛,于华忠,温晓．破壁技术及其在杜仲雄花茶中的应用进展[J]．贵州农业科学,２０１８,４６(１０):１０９Ｇ１１１．[１３]㊀徐文泱,唐小兰,宋阳,等．基于响应面法优化杜仲雄花茶中活性成分及加工工艺[J]．食品安全质量检测学报,２０２１,１２(７):２５６１Ｇ２５６８．[１４]㊀雷燕妮,张小斌,李多伟．杜仲叶提取绿原酸的工业化生产工艺优化[J]．商洛学院学报,２０２２,３６(２):１４Ｇ１９．[１５]㊀中国林业产业联合会．杜仲雄花茶:T L Y C Y０１０－２０２０[S]．北京:中国林业产业联合会,２０２０．[１６]㊀黄广君,梁锦添,蒋小云．金银花有效成分绿原酸的提取工艺研究[J]．山东化工,２０１７,４６(１０):９Ｇ１１．[１７]㊀李辉,逯桃桃,陈佳,等．金银花绿原酸提取方法研究[J]．分析测试技术与仪器,２０２２,２８(４):４１６Ｇ４２１．[１８]㊀丁敏,王丽玲,秦玉川,等．金银花中绿原酸的水提取工艺研究[J]．浙江林业科技,２０２２,４２(２):１５Ｇ２０．[１９]㊀黄琛斐,张哲,王茁,等．不同采收时间下杜仲叶绿原酸含量的差异及绿原酸提取工艺的优化研究[J]．饲料研究,２０２２,４５(１５):８４Ｇ８７．[２０]㊀任小宁,杨伟东．正交试验优化杜仲叶中绿原酸酶法提取工艺研究[J]．食品与发酵科技,２０１９,５５(５):１Ｇ４,９．[２１]㊀胡小祥,何艳,张霞,等．高效液相色谱变波长法同时测定杜仲平压片中绿原酸和芦丁的含量[J]．甘肃中医药大学学报,２０２０,３７(４):１０Ｇ１４．[２２]㊀王燕,卢恒,邹晓菊,等．金银花中绿原酸提取分离纯化方法研究进展[J]．中华中医药学刊,２０２２,４０(８):１８６Ｇ１８９．D e t e r m i n a t i o no fC h l o r o g e n i cA c i d i nE u c o m m i a M a l eF l o w e r s b y H P L CZ H UY a n１,L I X i a n z h i１,２,M A O Q i o n g l i１,Y A NL i n g１,S H IH a o１,L I UY a n g１,H UY a n g１,C H E NY a n h e１(１．J i n g B r a n dC o．,L t d．,H u a n g s h i４３５１００,C h i n a;２．H u b e iK e y L a b o r a t o r y o fQ u a l i t y a n dS a f e t y o fT r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n eH e a l t hF o o d,H u a n g s h i４３５１００,C h i n a)A b s t r a c t:I n o r d e r t o e s t a b l i s h a r a p i d a n d s i m p l em e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f c h l o r o g e n i c a c i d i nm a l e f l o w e r s o f E u c o m m i a u l m o i d e s,t h e c h r o m a t o g r a p h y w a s p e r f o r m e d o nA g i l e n tＧC１８c o l u m n(４．６m mˑ２５０．０m m,５μm) w i t h i s o m e t r i c e l u t i o no f a c e t o n i t r i l eＧ０．４％a c e t i c a c i d(１０ʒ９０)a t t h e f l o wr a t e o f１．０m L m i n－１a t３５ħ,s i n g l e w a v e l e n g t hd e t e c t i o n３２７n m．T h e s t a b i l i t y a n d p r e c i s i o no f t h em e t h o dw e r e o p t i m i z e d t h r o u g he x p e r i m e n t s．T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e c h l o r o g e n i c a c i d s h o w e d a g o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i p(R２＝０．９９９８)a n d t h e a v e r a g e r e c o v e r y w a s９７．３０％．T h e t r e a t m e n tm e t h o do f t h e t e s t s o l u t i o n i se n v i r o n m e n tＧf r i e n d l y,w h i c hc a nb e t t e r r e d u c e e n v i r o n m e n t a l p o l l u t i o n a n d p r o t e c t t h e e x p e r i m e n t e r s．T h em e t h o dh a s h i g h p r e c i s i o n a n d r e p e a t a b i l i t y,a n d c a nb eu s e da s t h e d e t e r m i n a t i o no f c h l o r o g e n i c a c i d c o n t e n t i n E u c o m m i a m a l e f l o w e r s．K e y w o r d s:E u c o m m i a m a l e f l o w e r;c h l o r o g e n i c a c i d;H i g hP e r f o r m a n c eL i q u i dC h r o m a t o g r a p h y(H P L C)７６Copyright©博看网. 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高效液相色谱法测定杜仲中绿原酸的含量刘圣金;狄留庆;吴德康;宋燕【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2006(013)001【摘要】目的研究杜仲原药材中绿原酸的含量测定方法.方法采用高效液相色谱(HPLC)法,对杜仲中绿原酸提取时的提取溶剂、方法、时间和次数进行了优选.以Lichrospher C18(4.6 mm × 250mm ,5μm)为分析柱,流动相为乙腈-水-磷酸溶液(1 3:86.5:0.5);柱温:25℃;检测波长:327 nm;流速:0.8 mL/min,采用面积外标法.结果杜仲粉用体积分数为60%甲醇水溶液回流提取2次(每次1 00 mL,第1次1.5 h,第2次0.5 h),可提出杜仲原药材中绿原酸总量的95.68%.线性范围2.22×10-2～55.40×10-2 μg,平均回收率为99.55%,RSD=1.98%(n=6).结论本法简便、灵敏、重现性好,可用于测定杜仲中绿原酸的含量.【总页数】2页(P44-45)【作者】刘圣金;狄留庆;吴德康;宋燕【作者单位】南京中医药大学,江苏,南京,210029;南京中医药大学,江苏,南京,210029;南京中医药大学,江苏,南京,210029;上海华宇药业有限公司,上海,200002【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定杜仲叶发酵液中绿原酸的含量[J], 方传代;刘传安;邹盛勤2.高效液相色谱法测定杜仲黑茶中绿原酸和咖啡因的含量 [J], 朱冰3.高效液相色谱法测定杜仲缓释滴丸中绿原酸含量 [J], 王柏强;刘福4.高效液相色谱法测定不同生长年限杜仲皮中绿原酸的含量 [J], 王丽楠;杨美华5.高效液相色谱法测定杜仲皮中绿原酸的含量 [J], 石少澜;王祝举;邵爱娟;黄璐琦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HSCCC法分离京尼平苷及京尼平的显色反应
杨丹;周敏;朱红霖;樊希望;韦万兴
【期刊名称】《广西大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2010(035)003
【摘要】用高速逆流(HSCCC)的方法,从栀子中分离得到高纯度的京尼平苷.京尼平苷在酶作用下水解,水解产物经溶剂萃取及重结晶,制备得到京尼平晶体,京尼平与氨基酸反应合成栀子蓝色素.京尼平与氨基酸反应的最佳工艺条件:料液比为1:30,蒸馏水作溶剂,pH呈中性,京尼平与氨基酸物质量比为1:1,60℃恒温水浴.反应48 h.【总页数】5页(P493-496,501)
【作者】杨丹;周敏;朱红霖;樊希望;韦万兴
【作者单位】广西大学,化学化工学院,广西,南宁530004;广西大学,化学化工学院,广西,南宁530004;广西大学,化学化工学院,广西,南宁530004;广西大学,化学化工学院,广西,南宁530004;广西大学,化学化工学院,广西,南宁530004
【正文语种】中文
【中图分类】TQ041
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乐长高
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反相高效液相色谱法测定杜仲胶囊中绿原酸的含量
周兰;王丽
【期刊名称】《贵州医药》
【年(卷),期】2001(025)006
【摘要】@@ 杜仲胶囊系以我省名贵中药杜仲(Eucommia ulmoidesOliv)叶为原料,采用现代方法,经提取加工制成的胶囊剂,具有补肝肾,强筋骨,降血压,安胎的功能.因原质量标准方法较为简单,无含量测定指标,为控制产品的质量,本文采用反相高效液相色谱法对杜仲胶囊中绿原酸的含量测定方法进行了实验研究,结果表明,该法操作简便,快速,重现性好,可用于杜仲胶囊的质量控制.
【总页数】2页(P553-554)
【作者】周兰;王丽
【作者单位】贵州省药品检验所,;贵州益康制药有限公司,
【正文语种】中文
【中图分类】R28
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向阳;陈维军;张声华
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