母种培养基的制作PPT课件

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《培养基的制备》课件

在制备培养基时，需要将培养基中的气泡排除，以确保培养基的质量。
3 除菌
必须对培养基进行严格的除菌处理，以避免外源性的微生物污染。
6. 结语
培养基的重要性
培养基是细胞培养和微生物研究的基础，对于科学研究和产业应用具有重要意义。
经验总结
制备培养基时要注意操作规范，保持实验环境的清洁，确保培养基的质量。
4. 培养基的贮存
1
贮存时间
不同类型的培养基有不同的贮存期限，要根据需要及时更新。
2
贮存温度
培养基应该在指定的温度下储存，避免因温度过高或过低而导致变质。
3
细菌培养
使用培养基时，必须遵循无菌操作，确保细菌的纯度和培养环境的卫生。
5. 培养基的常见问题
1 氧化
2 消泡
培养基暴露在空气中会发生氧化反应，影响培养效果，需在贮存时防止氧化。
《培养基的制备》PPT课件
这是一个关于培养基制备的PPT课件，课件内容包括前言、培养基的组成、培养基的配制、培养基的贮存、培养基的常见问题以及结语。
1. 前言
培养基是一种用于细菌、真菌和细胞培养的人工培养环境。它提供了细胞生长所需的营养物质和调节因子。
2. 培养基的组成
基Hale Waihona Puke 成分包括碳源、氮源、矿物质和生长因子等。
辅助成分
提供额外的营养物质和调节剂，如洋菜、琼脂和血清等。
酸碱度调节剂
控制培养基的酸碱度，维持适宜的生长环境。
3. 培养基的配制
1
操作步骤
按照特定的步骤和顺序，将不同成分加
器材准备
2
入适量的溶液中，并进行搅拌和消毒处理。
准备好所需的培养皿、量杯、瓶子、搅

培养基成分及配制课件

2
硼酸
3
硫酸锰
4
硫酸锌
5
钼酸钠
6
硫酸铜
7
氯化钾
KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCL2.6H2O
用量（mg/L)
0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025
培养基成分及配制课件
1.大量元素
2021/8/25 培养基成分及配制课件
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2021/8/25 培养基成分及配制课件
3. 肌醇（环己六醇）
促进糖类物质的相互转化和活性物质作用的发挥促进愈伤组织生长以及胚状体和芽的形成对组织细胞繁殖、分化的促进作用使用浓度100 mg/L
注：用量过多则促褐变
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2021/8/25 培养基成分及配制课件
4. 氨基酸
是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、
在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官。
3
2021/8/25 培养基成分及配制课件
在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。在植物组织培养历史进程中，事实上也紧密地伴随着培养基的研制史。
谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。
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2021/8/25 培养基成分及配制课件
5. 天然复合物
为了特殊的培养目的，在一部分培养基中还添加了一些特殊成分，如水解酪蛋白，水解乳蛋白，酵母提取物，胰蛋白胨，椰乳，西红柿汁，香蕉粉，橘子汁，可可汁等天然复合物以及活性炭，渗透调节剂等。

食用菌制种—母种培养基制作(食用菌生产课件)

• 2.原种（二级种）原种是由母种扩大培养而成的菌种。这一级菌种是为了加快食用菌繁殖速度，满足大面积栽培时生产栽培种的需要而设置。原种使用基质通常与栽培基质相同或相似，原种繁殖培养过程也是生理驯化过程。
• 在培养时应当认真检查菌丝的纯培养程度和菌丝的长势，保持纯种培养。原种制作所用容器要求使用透明度好的玻璃瓶。
接种
母种的扩大培养
培养与检验
常压高压
蒸汽灭菌
原种接种
培养与检验
菌种生产工艺流程
确定生产出发菌株
摇瓶培养基灭菌
菌株保藏
液体菌种3基
装发酵罐3基
栽培种
灭菌发酵罐培养
灭菌液体菌种
（四）培养基的制作技术 1.母种培养基的制作技术 • 母种培养基常用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，配方
为马铃薯（去皮）200～250g，葡萄糖20～ 25g，琼脂18～20g，水1000ml。马铃薯要求新鲜、无霉烂，去皮、去芽点。
1）配制步骤
试管培养基配制步骤
（1）按配方要求称取各种营养物质。（2）将去皮的马铃薯切块加水，用文火煮沸30分钟
，过滤取滤液。（3）加入葡萄糖，并补足水量。（4）搅拌均匀，自然pH值或调节至适宜的酸碱度
。
（5）加入琼脂，用文火加热使之熔化，并趁热分装试管或三角瓶中，分装量为试管长度的1/5～ 1/4（保藏用多些，生产用少些）。
3.栽培种（三级种）这是指直接用于生产栽培的菌种，多由原种扩
大培养而成，常以菌瓶或菌袋作为容器。
（三）菌种生产的流程Байду номын сангаас食用菌的固体菌种生产与液体菌种生产的设
备选型和场所要求是大不相同的。固体菌种生产也因各级菌种生产所使用基质不同而操作过程的条件和步骤也有所差异，但作为一种生产工艺流程来说是大致相同的。

第二章培养基配置PPT课件

（２）细胞分裂素类(cytokinin，CTK)
✓ 腺嘌吟的衍生物，包括6-BA、Kt、Zt 等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。
• 6—BA(6—苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) • Zt (zeatin 玉米素) ✓ 作用：
• 诱导芽的分化 • 促进侧芽萌发生长 • 促进细胞分裂与扩大（茎增粗），抑制根的分化，延缓
成分大多不清楚，一般尽量避免使用。
➢ 椰乳使用最多、效果最大。用量为10%—20%（愈伤、细胞培养）。
➢ 香蕉汁用量为150-200ml／L，缓冲pH值（兰花组培）。
➢ 马铃薯用量为150—200g／L，缓冲pH值。
➢ 其他酵母提取液、麦芽提取液、苹果和番茄的果汁等。遇热较稳定，
大多在培养困难时使用，有时有效。
第二章培养基及其配制
定义：
培养基(culture medium)——根据植物生长所需营养成分，配制成的供植物生长的人工制作的营养物质。是植物组织培养的重要基质。
•不同植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同 •没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官 •找到一合适的培养基，是培养成功的基础。
• （２）活性炭(active carbon) 目的：是利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响；利于生根。
• 使用浓度：1—5g／L。
• 它的颗粒大小决定着吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；温度低吸附力强，温度高吸附力减弱，甚至不吸附。
优点:操作简便，通气问题易解决，便于观察研究。缺点:培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各
（１）糖类（碳水化合物）
碳源，维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖。

培养基的制备-PPT课件

四、培养基成分配比的选择

培养基的组分、配比、缓冲能力、黏度、消毒是否彻底、消毒后营养破坏的程度及原料中杂质的含量都对菌体生长和产物形成有影响。理论+经验数学分析方法
• 正交实验设计，方差分析
正交表因素水平
因素水平
1 2 3
玉米粉（％） A 0.5
1.0 1.5
豆饼粉（％） B 4
③ 淀粉、糊精使用条件：微生物必须能分泌水解淀粉、糊精的酶类缺点：难利用、发酵液比较稠、一般>2.0%时加入一定的α-淀粉酶成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。优点：来源广泛、价格底难利用，可以解除葡萄糖效应
(半纤维素酶)
(1.5g麸皮)
李江华，无锡轻工大学学报，2019
二、氮源
斜面培养基

作用：这是供微生物细胞生长繁殖用的，包括细菌，酵母等的斜面培养基以及霉菌、放线菌生孢子培养基或麸曲培养基等。这类培养基主要作用是供给细胞生长繁殖所需的各类营养物质。

特点： 1.富含有机氮源，少含或不含糖分。有机氮有利于菌体的生长繁殖，能获得更多的细胞。 2.对于放线菌或霉菌的产孢子培养基，则氮源和碳源均不宜太丰富，否则容易长菌丝而较少形成孢子。 3.斜面培养基中宜加少量无机盐类，供给必要的生长因子和微量元素。
２、硫酸镁

镁是某些细菌的叶绿素的组成成分。虽不参加任何细胞结构物质的组成，但它的离子状态是许多重要的酶的激活剂。硫，含硫蛋白质的组分；酶的活性基。
• 硫酸镁
２、钾盐

钾不参加细胞结构物质的组成，但它是许多酶的激活剂。
３、微量元素

铜、锰、锌、钼、碘、溴等。避免有害离子加入到培养基中。

组织分离制食用菌母种PPT课件

75%酒精及酒精棉球等培养箱等。
复习上一节母种培养基的配制步骤
• 1.按配方称量：见下面的配方 • 2.煮制 • 3.分装 • 4.灭菌 • 5.排斜面
母种培养基配方：
1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml
2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）。此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。
2.记录你制作的母种的生长状态; 3.是否有杂菌污染,如有分析其原因.
再见!
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
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谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
人操作；第二大组可在无菌室内操作；
第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。
分组辅导
注意同学们的操作；及时纠正不规范动作。接种操作完毕，收集试管进行培养。
数显式恒温培养训第三大部分
结果观察
培养基的高压灭菌
使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？（提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压
力在0.1－0.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。
（四）组织分离操作的主要步骤：

菌种繁育—母种制作(食用菌生产技术课件)

母种分离选育
目录
一、采集种源二、培养基配制琼脂培养基三、分离与适温培养四、一级种转接五、注意事项
母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。作为一般制种专业户，可以采用人工选择方式分离培育母种。
菌种
野生担孢子或子囊孢子或组织体栽培扩大繁殖后的纯次生菌丝体
①选择种菇：前已述及。 ②种菇消毒：在种菇中部取最大的3-4张菇片，
用70%的酒精轻擦表面后置于接种箱内消毒；
③菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇片边缘处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA培养基上。每张菇片共撕10个裂面，接10支试管，一次分离共接30～40支试管；
④培养：将试管置于15～30℃下培养； ⑤纯化：培养期间每天都要检查发菌情况，从中选择菌丝浓白粗
孢子的特点：菌龄小、生命力强、变异率高。
孢子分离法
单孢分离多孢分离
难度较大较简易
单孢分离
多孢分离
概念步骤
使许多孢子在同一培养基上，萌发后自由交配成次生菌丝的方法
种菇消毒采收孢子接种孢子出菇试验
整菇插种法钩悬法孢子印法
（1）种菇消毒
菌柄去2/3
苞被
有：75%酒精棉球擦试
➢ 一般操作流程
野生菌驯化原菌株改良生物技术创新
优良菌株
扩大繁殖Leabharlann 实行纯培养基要本求
不含任何杂菌
用于生产
一、采集种源
从野生或人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源。在菇床、菌墙中选择出菇早、无杂菌侵染、株型紧凑、圆整肉厚、色泽美观、七八成熟的第一潮菇的肥壮菇体作种菇(茯苓类选择菌核或菌索)；

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脂18~22g、葡萄糖或白糖20g、水1000mL。
琼脂是由麒麟菜、石花菜或江篱（属红
藻）经加热至溶化后，加以冷却凝固而
成的海藻精华。琼脂含有丰富的膳食纤
维（含量为80.9%），蛋白质含量高，
热量低，具有排毒养颜、泻火、润肠、
降血压、降血糖和
二、实验用具：天平1台、小刀1把、搪瓷量杯2个、铝锅1个、电炉1个、玻璃分液漏斗1个、试管16支、试管架1个、高压灭菌锅1个（共用）、棉花塞16粒、漏斗架1个、纱布1块。
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母种斜面培养基的制作
三、实验材料：马铃薯40g、琼脂4g、葡萄糖或白糖4g、水200mL。
琼脂
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母种斜面培养基的制作
四、方法步骤： 1、称取材料：将马铃薯洗干净，
去皮，称取40g，切成薄片；称取琼脂4g和葡萄糖（或白糖） 4g；量取水200mL。 2、将40g马铃薯薄片放入铝锅，加入200mL水，加热煮沸30分钟，趁热用6层纱布过滤。 3、马铃薯的滤液用开水补足到 200mL，倒回铝锅，加入4g琼脂和4g葡萄糖（或白糖），用小火继续加热并不断搅拌至全部熔化为止，最后补水至200mL。
母种培养基的制作
德化鹏祥中学
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食用菌栽培
2
食用菌栽培
食用菌在分类上属于真菌。食用菌靠不断生长着的菌丝体，从它们着生的基质中吸收营养，当积累
了足够的养分，达到生理成熟后形成形形色色的子实体（也称菇体）。食用菌的可食用部分绝大多数是子实体。
3
食用菌栽培
食用菌不仅味美，而且营养丰富，富含蛋白质、多种维生素和大量糖类。
7、培养基冷却到60 ℃左右，从高压锅中取出，趁热摆成斜面，并使斜面长度约是试管长度的1/2，待培养基凝固，即成试管斜面培养基。
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德化鹏祥中学
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母种斜面培养基的制作
4、趁热分装入试管内，每支试管装至其长度的五分之一（试管口的内外3cm内粘附的培养基，必须擦拭干净），塞入棉塞（棉塞总长4cm，要求松紧适宜，塞入长度为棉塞长度的2/3）。然后以每7~10支为一捆，棉塞外再包上牛皮纸，并用绳扎好。
5、将高压锅盖拧开，加入适量的水，把包扎好的试管直立放入高压锅的内桶（不能装太紧，防止阻碍蒸气流通），盖上锅盖（依此、对称旋紧螺丝），进行灭菌。
4
食用菌栽培
菌种，即食用菌生产中的“种子”。优良菌种的制备是食用菌栽培中极其重要的环节。
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食用菌栽培
食用菌菌种的制备一般需要经过母种、原种和栽培种三个培养步骤。
菌种又称培养容器培养基
母种一级种、试管种、斜面种
试管固体（斜面）
原种二级种、瓶装种
菌种瓶固体（或液体）
栽培种三级种、袋装种、生产种
塑料袋、菌种瓶固体
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第一单元：母种培养基的制作
母种，即由组织分离（由食用菌实体的组织直接分离菌种的方法）或孢子分离（将食用菌的孢子接种在培养基上，让其萌发成菌丝而获得菌种的方法）等方法获得的菌丝体，又称一级菌种，由于菌丝生长在试管的斜面培养基上，因此又称试管种或斜面种。
生产上的母种实际上是再生母种。母种既可繁殖原种，又适用于菌种保藏。
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第一单元：母种培养基的制作
培养基是用人工方法配置的、供食用菌生长繁殖所需营养的基质。母种培养基，是专门用来培养母种的营养基质，一般用试管作容器，故
又称试管斜面培养基，常用于菌种分离、提纯及转管、保存菌种。
母种
试管斜面培养基
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母种斜面培养基的制作
按200mL水的比例称取各种材料，配制16支试管培养基，以备制种用。一、母种培养基（常用的马铃薯葡萄糖培养基）配方：马铃薯200g、琼
6、待高压锅内压力达0.5千克/平方厘米时，打开放气阀门放气，待压力表指示为“0”时，关放气阀门。在压力达1.5千克/平方厘米时，用小火维持温度126℃（灭菌期间应专人看守），30分钟后停止加热，当压力下降到接近“0”时，移入无菌室，先打开放气阀，再打开高压锅盖。
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母种斜面培养基的制作