蜡样芽孢杆菌ERIC-PCR分子分型方法的建立

米醋中蜡状芽孢杆菌DNA 提取及其ERIC-PCR 体系建立廖永红任文雅孙宝国*徐瑾沈晗（北京工商大学化学与环境工程学院北京100048）摘要以蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus ）为试验材料，比较细菌基因组DNA 的提取方法。

将ERIC-PCR 应用于醋液分离菌的研究，对此反应体系的主要因素进行优化，最终建立了适合于此菌种的ERIC-PCR 体系。

采用改良的传统细菌基因组DNA 提取方法，所提取的DNA 质量较高，能够满足ERIC-PCR 反应的需要。

反应体系：25μL 反应体积10×扩增缓冲液（含Mg 2+）2.5μL ，20pmol/μL ERIC-PCR 引物E11μL ，20pmol/μL ERIC-PCR 引物E21μL ，DNA 模板2μL ，2.5mmol/LdNTPs 混合液 2.0μL ，taq 聚合酶 1.1μL ，双蒸水补齐；PCR 反应程序为：94℃变性3min ，1个循环；94℃变性30s ，55℃退火40s ，72℃延伸1min ，30个循环；72℃延伸4min 。

关键词细菌；DNA 提取；ERIC-PCR ；优化文章编号1009-7848（2011）04-0007-07食醋在生产过程中需要添加大曲、麦曲、酶母菌及醋酸菌等。

各种带菌的原料和工具因操作问题会带来细菌的污染。

虽然产品加热灭菌时，一些不耐热的微生物菌体残留在食醋中造成混浊沉淀，一些耐热的芽孢杆菌潜伏在醋中[1]，在适当的温度和营养条件下会缓慢生长，影响着米醋的风味及产品的质量。

蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus ）是一种在自然界中广泛分布的好气、中温、产芽孢的杆菌，是食品和化妆品中常见的污染菌。

它同昆虫病原菌苏云金杆菌，人畜病原菌炭疽芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、韦氏芽孢杆菌组成芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌组，它们的形态特征、生理生化特征非常相似，并有着极高的DNA 同源性。

因为蜡状芽孢杆菌广泛存在于土壤、空气、水和尘埃中，所以无法避免地会污染到食品中。

三种基因分型技术对一起食物中毒事件的分析比较
王秋艳;闫鹤;石磊
【期刊名称】《食品与机械》
【年(卷),期】2009(025)005
【摘要】分别应用ERIC-PCR、PFGE和Sau-PCR方法对一起食物中毒事件中分离自患者和食物的5株福氏志贺氏菌进行溯源分析.结果3方法显示5株菌的指纹图谱均一致,证明患者是由于食用了被志贺菌污染的食物而致病.其中ERIC-PCR操作最简便,但重复性较差;PFGE是"金标准",但设备昂贵,技术要求高,且不能高通量分析;新发展的Sau-PCR不仅易操作,而且结果稳定,便于在流行病学研究中的推广应用.
【总页数】4页(P108-110,156)
【作者】王秋艳;闫鹤;石磊
【作者单位】华南理工大学生物科学与工程学院;华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.一起因食用糕点引起肠炎沙门氏菌食物中毒事件的调查分析 [J], 田渝;黄治兰;袁玲燕
2.一起由肠炎沙门氏菌引起食物中毒事件的实验室检测分析 [J], 杨敬金
3.成都市郫都区一起家庭进餐引起沙门氏菌食物中毒事件的调查分析 [J], 梅丽敏;余林;袁敏
4.HLA—DR基因分型中三种DNA提取法的比较 [J], 曹孟德;秦东春
5.一起由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒事件调查分析 [J], 王继艳
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应用PCR方法检测蜡样芽胞杆菌的研究王振国;刘和平;刘金华;蔡阳;肖成蕊;罗雁菲;徐宝梁【期刊名称】《吉林农业大学学报》【年(卷),期】2006(028)006【摘要】采用PCR技术,通过扩增蜡样芽胞杆菌的gyr B基因来实现对蜡样芽胞杆菌的快速检测.结果表明,以gyr B为目的基因设计引物建立的PCR检测方法能特异性地扩增出蜡样芽胞杆菌,且与其他芽胞杆菌菌株均无交叉反应,其检测敏感性可达9 cfu/mL,能够应用于蜡样芽胞杆菌的鉴定.【总页数】3页(P671-673)【作者】王振国;刘和平;刘金华;蔡阳;肖成蕊;罗雁菲;徐宝梁【作者单位】吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;吉林出入境检验检疫局技术中心,长春,130062;中国检验检疫科学研究院,北京,100025【正文语种】中文【中图分类】S852.616【相关文献】1.集合PCR方法在艾滋病自愿咨询检测(VCT)人群中的应用研究 [J], 杨朝军;杨莉;马艳玲;陈玲;包佑红;闫文云2.医院临床标本中阴沟肠杆菌遗传多样性分析及应用TaqMan荧光定量PCR方法快速检测阴沟肠杆菌的研究 [J], 王怡倩;刘凯;李培京;熊衍文;叶长芸3.检测牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用研究 [J], 云涛;关平原;申之义;张七斤;李平安;希尼尼根4.应用RT-PCR方法检测牛轮状病毒的研究 [J], 李成元;姚美玲;王广伟;刘兵;高见5.FQ-PCR方法检测结核杆菌的应用研究 [J], 刘美兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肉制品中蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR检测方法的研究杨滴;赵宇明;秦鹏钧;封雪;马颖颖;卞立坤【摘要】根据蜡样芽胞杆菌肠毒素基因片段序列,用Primer express 3.0设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,建立蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR检测方法.通过对梯度含量的蜡样芽胞杆菌标准菌液样品DNA和多种细菌的DNA进行实时荧光PCR检测,来检测其灵敏度和验证引物和探针的特异性.实验结果表明,只有蜡样芽胞杆菌产生扩增曲线,其他细菌无扩增,说明引物及TaqMan探针特异性较好,检测灵敏度为1×103CFU/mL.该方法具有很好的研究价值和应用前景.【期刊名称】《肉类工业》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】4页(P49-52)【关键词】蜡样芽胞杆菌;实时PCR;检测【作者】杨滴;赵宇明;秦鹏钧;封雪;马颖颖;卞立坤【作者单位】大连市食品检验所辽宁大连 116600;大连市食品检验所辽宁大连116600;大连市食品检验所辽宁大连 116600;大连市食品检验所辽宁大连116600;大连市食品检验所辽宁大连 116600;大连市食品检验所辽宁大连116600【正文语种】中文蜡样芽胞杆菌是常见的食物中毒病原菌之一,其污染食品后能大量繁殖并产生毒素,导致人类急性食物中毒。

该菌可引起呕吐型和腹泻型两种不同类型的食物中毒,已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点等。

在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因；在欧洲大都由甜点、油奶和肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关[1]。

目前对蜡样芽胞杆菌的检测,仍以传统生化培养方法为主。

传统的生化检测方法是一项费时费力的工作，需要较长时间的选择性增菌培养过程。

近十几年来,随着分子生物学的发展以及PCR技术的出现,使得蜡样芽胞杆菌的检测在数小时内就能完成[2～4]。

ERIC PCR 鉴别苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌的研究*李 强1金莉莉1王 芳2宋树森1王秋雨1**(辽宁大学生命科学学院 沈阳 110036)1 (沈阳出入境检验检疫局 沈阳 110016)2摘要:利用ERIC PCR 技术对苏云金芽孢杆菌(B t)、蜡状芽孢杆菌(Bc)和对照菌基因组DNA 进行扩增,回收、标记Bt PCR 扩增片段,分别与各菌株的基因组DNA 进行斑点杂交和Southern 杂交,筛选Bt 标识序列。

结果显示:Bt 各菌株均可扩增得到250bp 的特异片段;Bt 和Bc 均可得到600bp 的共有扩增片段;以筛选得到的569bp 片段为探针,可特异性地与B t 基因组DNA 杂交;ERIC PCR 技术可以在DNA 指纹图谱水平区分鉴别Bt 与Bc 菌,正确反映出两者的亲缘关系。

结果表明ERIC PCR 技术在Bt 的检测及在Bt 与Bc 的鉴定中具有较强的实用性。

关键词:苏云金芽孢杆菌,蜡状芽孢杆菌,ERIC PCR,指纹图谱,Sou thern 杂交中图分类号:Q93 3 文献标识码:A 文章编号:0253 2654(2007)06 1184 04Identification of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus by ERIC PCR *LI Qiang 1 JIN Li Li 1 WANG Fang 2 S ONG Shu Sen 1 WANG Qiu Yu 1**(Li f e Sc ienc e De pa rtme nt o f Liaon in g U ni versit y ,Sh en ya ng 110036)1(Liaon in g En try Exit Inspection an d Qu aran tine Bu re au ,Shen yan g 110016)2Abs tract :To screen the id entifier of B .thu rin gien sis ,gen omic D NA of B .th uring iensis ,B .ce re us and con trol strains were amplificated b y ERIC PCR.Fragments amp lified from B .th u rin gien sis were retrieved ,cl on ed ,marked b y 32P,d ot bl ot and southe rn h ybri dized with genomic DNA of these strains.It sho ws th at every strai ns of B .thu ring ie nsis can be a mp li fied to produce a 250b p fragmen t,and b oth B .th uring iensis an d B .ce reu s can be amplified to produce a 600bp fragment.Hyb ridi zation resul t bet w een 569bp probe and genomic DNA of B .thu rin gien sis sh ows a hi gh specificity.Discri mi nation an d genetic relati on shi p be tween B .thu rin gien sis and B .ce re us can be re vealed b y ERIC fin gerprin t.This researc h i ndicates th at ERIC PCR techn iqu e is a p ractical method in the d etec ti on and c haracteri zati on of B .thu rin gien sis an d B .ce reu s .K ey words :B .thu ring iensis ,B .cereus ,ERIC PCR,D NA fin gerprin ts,S ou thern b lotti ng*辽宁出入境检验检疫局资助项目(No.LK 30 2002)**通讯作者 Tel:024 ********,E mail:qiuyuwang@ 收稿日期:2007 01 27,修回日期:2007 07 20苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis ,简称Bt)是一种自然界中广泛分布的革兰氏阳性菌,属于芽孢杆菌属。

ERIC-PCR技术在动物流行病学调查中的应用朱佳文;吴永胜;许祯莹;苏志鹏;邱时秀;李娟【摘要】肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)技术作为一种快速有效的分子生物学手段,在监测动物肠道菌群多样性,分析细菌种类,确定疫病暴发或流行,追溯传染源和控制肠道致病菌中发挥了重要的作用.本文对ERIC-PCR技术的背景、优缺点及在动物流行病学调查中的应用进行了概述.【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2018(045)001【总页数】3页(P33-35)【关键词】动物流行病学;ERIC-PCR;肠道菌群【作者】朱佳文;吴永胜;许祯莹;苏志鹏;邱时秀;李娟【作者单位】成都市农林科学院畜牧研究所,四川温江 611130;成都市农林科学院畜牧研究所,四川温江 611130;成都市农林科学院畜牧研究所,四川温江 611130;四川特驱投资集团有限公司,四川双流 610207;成都市农林科学院畜牧研究所,四川温江 611130;成都市农林科学院畜牧研究所,四川温江 611130【正文语种】中文【中图分类】S818.9近几年，越来越多的科研工作者开始专注于肠道微生物的研究，ERIC-PCR技术以其操作简单、试验重复性高和分辨力强等优点而被广泛利用。

1 ERIC-PCR技术的背景ERIC是肠杆菌间保守的重复基因序列，能够同时比较大规模微生物样品的序列结构特征。

ERIC序列长为126bp，存在于基因组的转录区域，其序列具有高度保守性，但在不同物种染色体上的定位不同。

Hulton等[1]指出ERIC序列存在于许多肠道菌中，而且可以作为大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和其他一些肠道微生物新的重复单元家族。

同年，Versalovic等[2]发现可以通过ERIC序列设计引物对细菌进行PCR扩增，得到不同细菌基因组的指纹图谱。

由于ERICPCR技术能够得到敏感性好和重复性高的ERICPCR指纹图谱，因而该技术逐渐被利用在各种不同的环境微生物生态学研究中，并且取得了较好的结果。

蜡样芽孢杆菌分型方法研究进展曹飞扬1,2，王 娉1，江连洲2，陈 颖1,*（1.中国检验检疫科学研究院农产品安全研究中心，北京 100176；2.东北农业大学食品学院，黑龙江 哈尔滨 150030）摘 要：蜡样芽孢杆菌是一种食源性条件致病菌，在环境和食品中分布比较广泛，所引起的食物中毒常分为腹泻型和呕吐型。

研究蜡样芽孢杆菌的分型方法对该菌的预防、预警、溯源及分子流行病学的调查都具有重要意义。

目前，蜡样芽孢杆菌的分型方法主要包括噬菌体分型、生化分型等传统分型方法以及多位点序列分型、重复序列聚合酶链式反应分型、随机扩增多态性DNA 分型、脉冲场凝胶电泳分型等分子分型方法。

以蜡样芽孢杆菌为对象，综述其分型方法的研究进展，以期为该菌的分型提供一定参考。

关键词：蜡样芽孢杆菌；传统分型；分子分型Advances in Methods for Bacillus cereus TypingCAO Feiyang 1,2, WANG Ping 1, JIANG Lianzhou 2, CHEN Ying 1,*(1. Agro-Product Safety Research Center, Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100176, China;2. College of Food Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)Abstract: Bacillus cereus is a food-borne opportunistic pathogen widely present in the environment and foods. It is frequently associated with two types of food-borne illness: emesis and diarrhea. The study on Bacillus cereus typing has important implications for the prevention, early warning, tracing and molecular epidemiological survey of Bacillus cereus . Currently, the popular methods for typing Bacillus cereus include traditional typing methods such as phage typing and biochemical typing, and molecular typing methods such as multilocus sequence typing, repetitive sequence-PCR, random amplified polymorphic DNA, and pulsed-field gel electrophoresis. In this paper, all these methods are reviewed with the aim of providing references for the typing of Bacillus cereus .Key words: Bacillus cereus ; traditional typing methods; molecular typing methods DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717046中图分类号：TS207.4 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2017）17-0286-05引文格式：曹飞扬, 王娉, 江连洲, 等. 蜡样芽孢杆菌分型方法研究进展[J]. 食品科学, 2017, 38(17): 286-290. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717046. CAO Feiyang, WANG Ping, JIANG Lianzhou, et al. Advances in methods for Bacillus cereus typing[J]. Food Science, 2017, 38(17): 286-290. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717046. 收稿日期：2016-07-28基金项目：“十三五”国家重点研发计划重点专项（2016YFD0401102）；中国检验检疫科学研究院院所基金项目（2016JK006）作者简介：曹飞扬（1989—），男，硕士，研究方向为食品质量安全检测与控制。

专利名称：蜡样芽孢杆菌及其制备方法和应用专利类型：发明专利
发明人：王刚,王淼,刘凤英,王俊芳,张颖
申请号：CN200910064867.2
申请日：20090512
公开号：CN101812412A
公开日：
20100825
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种具有防治小麦纹枯病功能的蜡样芽孢杆菌及其制备方法和应用。

本发明的菌株Bacillus cereus0-9CCTCC No.M209041。

对小麦纹枯病进行生物防治：将菌株Bacillus cereus0-9CCTCC No.M209041在KMB液体培养基中28℃，200rpm扩大培养后，制备菌悬液，对小麦种子进行1h浸泡，将处理过的麦种播种于染病土壤，并以该细菌发酵液做一次灌根处理。

本发明的菌株为小麦内生Bacillus cereus细菌，可以在小麦豫麦17中大量定殖，对小麦纹枯病具有较好的防效(82.86％)，且效果稳定，具有较好的推广应用前景。

申请人：河南大学
地址：475001 河南省开封市明伦街85号
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
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利用PCR技术检测致病性腊样芽孢杆菌的研究王振国;刘金华;肖成蕊;蔡阳;罗雁菲;刘和平;牟峻【期刊名称】《生物技术》【年(卷),期】2005(15)5【摘要】目的:利用PCR技术对致病性蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)进行检测。

方法:对致病性蜡样芽孢杆菌溶血素hblA基因序列进行分析设计一对特异引物,通过优化PCR反应条件,来实现对致病蜡样芽孢杆菌的快速检测,结果:该方法具有较强的灵敏性及特异性,能够对肠毒素型腊样芽孢杆菌进行有效的检测,其最低检出限可达9CFU/ml,用PCR技术对食物样品中致病性蜡样芽孢杆菌的检测取得与普通生化检测方法一致的结果。

结论:利用PCR技术对食品中蜡样芽孢杆菌的检测较常规的生化检测方法具有省时省力的特点且灵敏性较高,具有较强的实际应用价值。

【总页数】3页(P45-47)【关键词】蜡样芽孢杆菌;溶血素hblA基因;检验【作者】王振国;刘金华;肖成蕊;蔡阳;罗雁菲;刘和平;牟峻【作者单位】吉林出入境检验检疫局技术中心【正文语种】中文【中图分类】TS210【相关文献】1.基于PCR方法检测蜡样芽孢杆菌的研究进展 [J], 张志鸿;许恒毅;魏华2.应用实时荧光PCR检测致病性蜡样芽孢杆菌 [J], 王振国;刘金华;徐宝梁;赵贵明;陈颖;牟峻;罗雁菲;蔡阳3.多重PCR技术检测微生物肥料中巨大芽孢杆菌和蜡样群芽孢杆菌的研究与应用[J], 曹凤明;李俊;沈德龙;关大伟;李力4.餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光PCR检测方法研究 [J], 柯振华5.基于实时荧光PCR技术快速检测饲料中的蜡样芽孢杆菌 [J], 包海燕;乌日娜;岳喜庆;武俊瑞;乔宇;彭晴;石波;纪善琴;王治颖;陈旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蜡样芽孢杆菌工程菌的构建及α-淀粉酶基因的表达的开题报告摘要：本研究旨在构建一株能够高效表达α-淀粉酶的蜡样芽孢杆菌工程菌。

通过引入一个含有α-淀粉酶基因和表达启动子的质粒，将该质粒转化至蜡样芽孢杆菌中，筛选获得表达量高的工程菌。

在表达条件的优化方面，研究了发酵时间、温度、pH值等影响α-淀粉酶表达的因素。

本研究最终目的是建立一种高效、低成本的α-淀粉酶生产方法，为工业上的淀粉加工提供一种可行的技术路线。

关键词：蜡样芽孢杆菌；α-淀粉酶；基因表达；工程菌一、研究背景α-淀粉酶是一种催化淀粉水解反应的酶，在淀粉的酶解、农业、食品、医药等领域有广泛的应用。

其中，它在食品加工过程中被广泛应用，能够加速食品中淀粉的转化，提高食品的口感和品质。

由于α-淀粉酶在食品行业的应用需求越来越高，如何寻找一种高效、低成本的产酶工艺已成为研究热点，为此，研究工程菌的构建方法和α-淀粉酶的表达调控机制成为了当前研究的重点。

蜡样芽孢杆菌是一种常见的产酶菌，具有较强的适应性和酶反应能力，其生长速度快，生长温度范围广，且在发酵条件下α-淀粉酶的表达量较高。

因此，将蜡样芽孢杆菌作为研究对象，设计一种高效表达α-淀粉酶的工程菌，将有望在工业上实现α-淀粉酶大规模生产。

二、研究目的1.构建蜡样芽孢杆菌工程菌，使其能够高效表达α-淀粉酶。

2.研究α-淀粉酶的表达调控机制，优化表达条件。

3.建立一种高效、低成本的α-淀粉酶生产方法。

三、研究内容1.引入α-淀粉酶基因的质粒构建通过引入一个含有α-淀粉酶基因和表达启动子的质粒，将该质粒转化至蜡样芽孢杆菌中。

为了进一步提高α-淀粉酶表达量，可以在质粒中搭载一些辅助基因，如转录因子、移位因子等。

2.表达条件的优化在成功构建α-淀粉酶工程菌后，需要对其表达条件进行优化，使其能够在最短时间内达到最大表达量，从而提高α-淀粉酶的生产效率。

研究优化条件主要包括发酵时间、发酵温度、发酵pH值等因素的调整。

专利名称：一种蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测方法及应用专利类型：发明专利
发明人：刘斌,王婧,郭玺,穆会乾
申请号：CN202011082339.2
申请日：20201012
公开号：CN112592985B
公开日：
20220510
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及基于MGB探针的实时荧光PCR反应快速检测体系对8种蜡样芽孢杆菌进行检测。

本发明以8种蜡样芽孢杆菌的wzm基因为靶基因，设计并筛选了针对每一个血清型的Taqman特异性引物及MGB探针，并建立了实时荧光PCR检测方法。

具有对食品中常见致病菌‑蜡样芽孢杆菌全部菌株进行检测的技术手段。

利用本发明提供的方法可以准确、快速、灵敏地对8种蜡样芽孢杆菌菌株进行分子生物学检测。

申请人：南开大学
地址：300457 天津市滨海新区经济技术开发区宏达街23号1区
国籍：CN
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大肠杆菌ERIC-PCR分子分型方法的建立及其初步应用张辉;杨振泉;赵隽;魏瑞成;王冉【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2010(026)005【摘要】为建立高效、敏感的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)的分子分型方法,该研究提取大肠杆菌基因组DNA,以此为模板建立和优化ERIC-PCR 分型体系,并采用ERIC-PCR方法对62株大肠杆菌进行分子分型和遗传相似性统计分析.结果显示从提取的大肠杆菌基因组中能够扩增到 2～8条DNA片段,且大部分片段在 100 bp至 2 000 bp之间.通过4因素3水平正交试验,建立了较为稳定的ERIC-PCR分型方法.利用ERIC-PCR方法可将62株菌分为20型,其中以A型为优势菌群.遗传相似性结果表明,各菌株之间遗传相似性有较大的变化,但部分菌株高度同源.聚类分析表明,ERIC-PCR的分辨率系数为0.937,具有较高的分辨能力.表明应用ERIC-PCR分型技术在分子水平上对大肠杆菌进行鉴别和分型,具有简便和分辨力高等优点,能够对病原进行溯源分析,在大肠杆菌的分子流行病学研究中具有广泛的应用前景.【总页数】6页(P1098-1103)【作者】张辉;杨振泉;赵隽;魏瑞成;王冉【作者单位】江苏省农业科学院农业部食品安全监控重点开放实验室,江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地,江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室,江苏,南京,210014;扬州大学食品科学与工程学院,江苏,扬州,225009;扬州大学生物科学与技术学院,江苏,扬州,225009;江苏省农业科学院农业部食品安全监控重点开放实验室,江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地,江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院农业部食品安全监控重点开放实验室,江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地,江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室,江苏,南京,210014【正文语种】中文【中图分类】S182【相关文献】1.单核增生李斯特菌ERIC-PCR分子分型方法的建立 [J], 郭润芳;柯晓静;韩军;于宏伟;周硕;贾英民2.分子生物学分型技术ERIC-PCR的建立 [J], 晏群;陈丽华;刘文恩;唐银3.禽大肠杆菌ERIC-PCR分子分型研究进展 [J], 陈亚强4.蜡样芽孢杆菌ERIC-PCR分子分型方法的建立 [J], 王君;吴清平;吴克刚;陈谋通;张菊梅;郭伟鹏5.应用ERIC-PCR对鸡致病性大肠杆菌进行基因分型 [J], 李宏娟;刘聚祥;刘静;张竟乾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ERIC-PCR鉴别苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌的研究李强;金莉莉;王芳;宋树森;王秋雨【期刊名称】《微生物学通报》【年(卷),期】2007(34)6【摘要】利用ERIC-PCR技术对苏云金芽孢杆菌(Bt)、蜡状芽孢杆菌(Bc)和对照菌基因组DNA进行扩增,回收、标记BtPCR扩增片段,分别与各菌株的基因组DNA 进行斑点杂交和Southern杂交,筛选Bt标识序列.结果显示:Bt各菌株均可扩增得到250bp的特异片段;Bt和Bc均可得到600bp的共有扩增片段;以筛选得到的569bp片段为探针,可特异性地与Bt基因组DNA杂交;ERIC-PCR技术可以在DNA指纹图谱水平区分鉴别Bt与Bc菌,正确反映出两者的亲缘关系.结果表明ERIC-PCR技术在Bt的检测及在Bt与Bc的鉴定中具有较强的实用性.【总页数】4页(P1184-1187)【作者】李强;金莉莉;王芳;宋树森;王秋雨【作者单位】辽宁大学生命科学学院,沈阳,110036;辽宁大学生命科学学院,沈阳,110036;沈阳出入境检验检疫局,沈阳,110016;辽宁大学生命科学学院,沈阳,110036;辽宁大学生命科学学院,沈阳,110036【正文语种】中文【中图分类】Q93-3【相关文献】1.蜡状芽胞杆菌群的分类研究 [J], 郭刚;马琪奇;王巧兰;刘兵团;汪腾;曾会才2.关于蜡状芽胞杆菌磷脂酶C的研究 [J], 尚凤霞3.利用ERIC-PCR对苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌进行鉴定的研究 [J], 付祖姣;肖蓉;郭照辉;单世平;雷平;周琳;李敏4.鱼粉中蜡状芽胞杆菌的分离鉴定及其致病性研究 [J], 刘金华;史为民5.蜡状芽胞杆菌的研究现状和今后研究方向 [J], 藤原;喜久夫;徐彩堂因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌三重PCR检测方法建立与应用胡慧;李田美;姜艳芬【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2022(43)7【摘要】针对蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的hblA基因、产色葡萄球菌(S.chromogenes)的sodA基因和肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)的khe基因,建立了三重PCR检测方法。

结果显示,退火温度为54℃,BC-hblA、SC-sodA和KP-khe引物浓度分别为0.6、0.2、0.1μmol/L为最佳扩增条件;对B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的基因组DNA最低检测限分别为35.8、6.3、40.2 pg/μL,菌液最低检测限分别为9.9×10^(3)、1.1×10^(3)、1.0×10^(4)CFU/mL。

特异性试验显示,除这3种菌以外,大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、产气荚膜梭菌和腐败梭菌检测结果均为阴性。

14份临床乳房炎乳样的检测结果显示,三重PCR方法B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的阳性率分别为35.7%(5/14)、14.3%(2/14)和7.1%(1/14),其中蜡样芽孢杆菌的PCR检测阳性率高于细菌分离鉴定阳性率(28.6%),细菌分离鉴定与PCR检测方法的阳性符合率为87.5%。

结果表明,成功建立了能够同时检测蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌的三重PCR方法,为引起乳房炎的病原菌的检测补充了新的方法,并为畜牧生产中这3种细菌的快速检测提供了有效方法。

【总页数】6页(P1-6)【作者】胡慧;李田美;姜艳芬【作者单位】西北农林科技大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S854.43;S857.26【相关文献】1.速冻食品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的建立与应用2.三重qPCR法快速检测肺炎克雷伯菌的方法建立与应用3.实时定量PCR检测新生儿全血中肺炎克雷伯菌方法的建立和应用4.肺炎克雷伯氏菌PCR检测方法的建立5.水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。