小鼠结肠癌肝转移模型的构建

小鼠肝癌模型的建立及PTP1B表达的研究肝癌是目前世界上最常见的癌症之一，而小鼠肝癌模型是研究肝癌病理生理学、分子遗传学等方面的重要工具。

本文将介绍小鼠肝癌模型的建立过程及PTP1B表达的研究。

1. 小鼠肝癌模型的建立小鼠肝癌模型可以通过许多方法进行建立，其中最常用的是化学诱导法、基因改造法和放射性物质诱导法。

本文将着重介绍化学诱导法建立小鼠肝癌模型的过程。

首先，选择适合的小鼠品系进行实验，一般选择C57BL/6J品系的雄性小鼠。

然后，通过口服或注射的方式给小鼠灌服化学致癌物质二甲基亚硝胺（DMN）、二乙二酸氮氫鈉（DEN）或对二氯苯胺（2-AAF）等化学物质，导致肝脏发生损伤和炎症反应，进而促进肝癌的发生。

此后，可根据肝癌的形态特征、肿瘤大小和数量、肿瘤组织学特征等指标对小鼠进行肝癌诊断。

2. PTP1B表达的研究PTP1B是一种酪氨酸磷酸酶，在正常情况下具有负调控胰岛素和胰高血糖素信号通路的作用。

PTP1B在多种人类肿瘤中发挥着重要的作用，如乳腺癌、前列腺癌和肝癌等。

因此，对PTP1B在肝癌发生发展中的作用进行深入研究具有重要意义。

通过小鼠肝癌模型可以获得不同发展阶段的肝癌组织标本，可用于研究PTP1B的表达情况。

目前主要采用免疫组织化学、Western blot、实时荧光定量PCR等技术手段进行测定。

研究结果显示，肝癌组织中PTP1B的表达显著升高，与肝癌细胞增殖和转移相关。

另外，PTP1B抑制剂等新型治疗手段的出现为治疗肝癌带来了新的机遇。

通过对PTP1B的研究，不仅可以深入了解肝癌的发生发展过程，还可以为肝癌的治疗提供新思路和策略。

总之，小鼠肝癌模型的建立和PTP1B表达的研究对于肝癌相关研究具有重要的意义。

未来还需要进一步加强肝癌发生机制和新型治疗手段的研究，为肝癌的预防和治疗提供更有效的手段。

结直肠癌肝转移小鼠模型建立及应用现状向彦臻１ꎬ陈欢１ꎬ殷佩浩１ꎬ２ａꎬ徐可１ꎬ２ｂꎬ詹月萍１ꎬ２ｂ(１.成都中医药大学上海普陀教学基地ꎬ上海２０００６２ꎻ２.上海中医药大学附属普陀医院ａ.普外科ꎬｂ.中西医结合肿瘤介入研究所ꎬ上海２０００６２)㊀㊀ＤＯＩ:１０ ３９６９/ｊ ｉｓｓｎ １００６￣２０８４ ２０２０ ０１ ０１４基金项目:上海市普陀区中心医院育英计划(２０１６２１９Ａ)ꎻ上海市中医药大学预算内项目(２０１９ＬＫ０３９)通信作者:詹月萍ꎬＥｍａｉｌ:ｚｈａｎｙｕｅｐｉｎｇ＠１６３.ｃｏｍ中图分类号:Ｒ７３￣３５４㊀㊀㊀㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:１００６￣２０８４(２０２０)０１￣００７１￣０５㊀㊀摘要:结直肠癌转移是导致结直肠癌患者死亡的首要原因ꎬ而肝脏是结直肠癌转移的最主要器官ꎮ结直肠癌肝转移小鼠模型在揭示肝转移的机制和评估有效预防及治疗措施中发挥着不可替代的作用ꎬ已被广泛应用于结直肠癌肝转移的基础和临床研究ꎮ直接种植造模是建立肝转移小鼠模型最常用的方式ꎬ包括盲肠种植法㊁脾脏种植法㊁肝脏直接种植法及门静脉种植法等ꎮ了解近年来各种植模型在结直肠癌肝转移研究中的建立及应用ꎬ可以为小鼠模型的选择提供参考思路ꎮ关键词:结直肠癌ꎻ肝转移ꎻ小鼠模型建立ꎻ造模方法ꎻ种植法ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＬｉｖｅｒＭｅｔａｓｔａｓｉｓＭｏｄｅｌｏｆＣｏｌｏｒｅｃｔａｌＣａｎｃｅｒｉｎＭｉｃｅＸＩＡＮＧＹａｎｚｈｅｎ１ꎬＣＨＥＮＨｕａｎ１ꎬＹＩＮＰｅｉｈａｏ１ꎬ２ａꎬＸＵＫｅ１ꎬ２ｂꎬＺＨＡＮＹｕｅｐｉｎｇ１ꎬ２ｂ１.ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｔｕｏＴｅａｃｈｉｎｇＢａｓｅｏｆＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０００６２ꎬＣｈｉｎａꎻ２ａ.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙꎬ２ｂ.ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＰｕｔｕｏＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０００６２ꎬＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ:ＺＨＡＮＹｕｅｐｉｎｇꎬＥｍａｉｌ:ｚｈａｎｙｕｅｐｉｎｇ＠１６３.ｃｏｍＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｓｔｈｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｏｆｄｅａｔｈｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒꎬａｎｄｌｉｖｅｒｉｓｔｈｅｍａｊｏｒａｆｆｅｃｔｅｄｏｒｇａｎｏｆｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ.Ｔｈｅｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｆｒｏｍｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｐｌａｙｓａｎｉｒｒｅｐｌａｃｅａｂｌｅｒｏｌｅｉｎｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｍｅａｓｕｒｅｓꎬｗｈｉｃｈｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｂａｓｉｃａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｆｒｏｍｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ.Ｄｉｒｅｃｔｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｓｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｍｅｔｈｏｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｍｏｄｅｌｉｎｍｉｃｅꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｅｃｕｍｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎬｓｐｌｅｅｎｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎬｌｉｖｅｒｄｉｒｅｃｔｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｄｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ.Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒ￣ｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒꎻＬｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓꎻＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌꎻＭｏｄｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓꎻＩｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ㊀㊀结直肠癌是美国第三大最常见癌症[１]ꎬ也是中国最常见的恶性肿瘤之一ꎮ在全球确诊的１３６万例结直肠癌中ꎬ中国结直肠癌的新发病例达２５.３万例ꎬ是全球结直肠癌每年新发病例数最多的国家[２]ꎮ对于结肠癌患者ꎬ即使在早期切除原发病灶也仍有可能发生转移ꎬ最终导致患者死亡ꎮ肝脏是结直肠癌转移最常见的部位ꎬ常经门脉循环行血源性传播[３]ꎮ结直肠癌肝转移的生物学过程极为复杂ꎬ是由多因素调控㊁多步骤构成的过程ꎬ其具体机制目前仍不明确ꎮ肝转移的过程可分为几个连续步骤ꎮ首先ꎬ原发肿瘤灶中的癌细胞分泌血管生成因子导致血管扩张ꎬ经激活蛋白酶的局部作用ꎬ癌细胞进入薄壁静脉血管和淋巴管ꎬ从而进入血液循环ꎬ大多数循环癌细胞在此过程中受到免疫系统和血流剪切力的攻击而破坏ꎬ存活的癌细胞或团块形成栓塞阻塞远处器官毛细血管床ꎬ最终癌细胞向肝实质外渗并形成微转移灶[４]ꎮ深入研究结直肠癌肝转移的具体机制以及探索有效的抗转移治疗方法ꎬ需要建立人结直肠癌肝转移动物模型ꎮ根据成瘤机制ꎬ结直肠癌小鼠造模方法主要分为致癌剂诱发小鼠成瘤法㊁基因工程小鼠成瘤法及直接种植肿瘤细胞或组织成瘤法ꎮ致癌剂诱发法耗时长㊁变异大㊁组间不易获得病程及癌块相似的小鼠ꎮ基因工程法成瘤率和转移率低ꎬ实验周期长ꎮ故前两种造模法极少用于结直肠癌肝转移的造模ꎮ现就结直肠癌肝转移常用的直接种植法造模及应用情况予以综述ꎮ１㊀盲肠种植法盲肠种植法是开腹后将结直肠癌肿瘤细胞或组织直接移植于盲肠浆膜下所产生的结直肠癌肝转移模型ꎬ此法为原位种植形成的自发性肝转移模型ꎬ能较为客观地模拟人类结直肠癌细胞的淋巴道转移和血运播散ꎬ较好地体现结直肠癌的生物学特性ꎮ与肿瘤组织移植法相比ꎬ细胞注射法流程简便㊁操作易行ꎬ且更为常用ꎬ建模成功的关键在于所选肿瘤细胞的侵袭能力和肿瘤细胞的数量ꎮ为证明微ＲＮＡ(ｍｉｃｒｏＲＮＡꎬｍｉＲ)￣１９２的表达能抑制体内结直肠癌细胞向肝转移ꎬＧｅｎｇ等[５]将绿色荧光蛋白标记的表达ｍｉＲ￣１９２的２ˑ１０６个ＨＣＴ１１６细胞直接注射到４~５周裸鼠的盲肠ꎮ４~５周处死裸鼠ꎬ切除盲肠及肝脏进行评估发现ꎬ对照组肝转移发生率为５３％ꎬ而ｍｉＲ￣１９２表达组肝转移的发生率低至８％ꎮＬｉｍａｎｉ等[６]将ＭＣ￣３８结肠癌细胞注射至Ｃ５７Ｂ１/６小鼠的盲肠壁ꎬ用肌醇三焦磷酸酯和ＦＯＬＦＯＸ(叶酸㊁氟尿嘧啶㊁奥沙利铂)处理小鼠ꎬ６周后评估小鼠肝转移指标ꎬ结果显示ꎬ肌醇三焦磷酸酯较ＦＯＬＦＯＸ抗结肠癌肝转移作用更明显ꎮ为证实在肝转移和源于远处转移的结直肠癌细胞系中ｍｉＲ￣８８５￣５Ｐ的表达上调ꎬＬａｍ等[７]将１ˑ１０６个ＨＣＴ１１６细胞原位注射于６~８周的ＮＯＤ/ＳＣＩＤ小鼠的盲肠壁ꎬ观察肿瘤转移及ｍｉＲ￣８８５￣５Ｐ的表达情况ꎮ细胞注射虽然相对简便ꎬ但接种后的肿瘤细胞易从浆膜中漏出ꎮＺｈａｎｇ等[８]在建模时做了进一步改善ꎬ将含有２ˑ１０６个结肠癌细胞的１０~１５ｍＬ磷酸缓冲盐溶液(ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓａｌｉｎｅꎬＰＢＳ)用３３号微注射器注入野生型Ｃ５７ＢＬ/６和白细胞介素￣３３(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣３３ꎬＩＬ￣３３)敲除小鼠的盲肠浆膜下ꎬ注射部位用组织胶密封㊁７０％的乙醇和ＰＢＳ清洗ꎬ以防止渗漏ꎮ６周后处死小鼠ꎬ收集并评估自发性肝转移肿瘤组织ꎮ结果表明ꎬ在结肠癌细胞中ＩＬ￣３３的表达增加了肿瘤的发生和肝转移ꎮ肿瘤组织移植是将结直肠癌细胞先注射于动物皮下或其他部位ꎬ待形成肿瘤块后再移植到盲肠的方法ꎮ由于此法与临床结直肠癌肝转移的突破方式和时间更为接近ꎬ因而认为其形成肝转移的可信度更高ꎮ但此种方式的手术要求高㊁过程复杂ꎬ且耗时较长ꎮＴａｏ等[９]将２ˑ１０７个ＨＣＴ１１６细胞注射至裸鼠的右腋窝ꎬ３周后用无菌技术切除肿瘤并切至１~２ｍｍ３大小ꎬ将切下的肿瘤块移植至４８只裸鼠的盲肠中ꎬ７ｄ后随机分为４组给药ꎬ即对照组㊁胃肠安组㊁５￣氟尿嘧啶组㊁胃肠安＋５￣氟尿嘧啶组ꎬ７周后处死裸鼠并收集原位肿瘤㊁肝转移瘤及肿瘤邻近组织ꎬ检查结果显示ꎬ与对照组相比ꎬ胃肠安＋５￣氟尿嘧啶组和胃肠安组肝转移更少ꎮＡｇａｒｗａｌ等[１０]将非靶向短发夹ＲＮＡ(ｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡꎬｓｈＲＮＡ)㊁蛋白激酶Ｂ(ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢꎬＰＫＢ/Ａｋｔ)ｓｈＲＮＡ２或Ａｋｔ２ｓｈＲＮＡ２转染的绿色荧光标记的７ˑ１０６个ＧＥＯ细胞注射到雄性裸鼠的背侧皮下ꎬ形成异种移植物后切除肿瘤并切成１ｍｍ３的碎片ꎬ将两块碎片植入另一只裸鼠的盲肠ꎮ采用ˑ７倍放大和显微外科技术ꎬ用８￣０尼龙缝合线将异种移植物缝入浆膜下两个不同位置ꎮ由于手术的复杂性ꎬ术后每组２５只小鼠只有１７~２２只存活ꎬ９周后处死小鼠评估肝转移ꎬ结果表明ꎬＡｋｔ２缺失抑制体内结直肠癌转移ꎮＹａｎｇ等[１１]将２ˑ１０６个Ｌｏｖｏ￣Ｌｕｃ细胞悬浮于Ｆ１２Ｋ培养基中ꎬ再将０.２ｍＬ悬浮液皮下接种于ＢＡＬＢ/ｃ裸鼠的右前肢ꎮ当肿瘤生长到约１ｃｍ３时取出皮下肿瘤浸入含有青霉素和链霉素的Ｆ１２Ｋ培养基中ꎬ肿瘤组织切块备用ꎮ另取裸鼠ꎬ在盲肠血供充足处插入备用肿瘤块ꎬ无菌纱布吸取周围液体ꎬ肿瘤表面涂上适量的医用ＯＢ胶ꎬ确保肿瘤扩散至盲肠壁ꎬ静置４５ｓ胶凝固后回纳盲肠并关腹ꎬ术后７ｄ开始接受药物处理３周ꎬ最后评估裸鼠肝转移情况ꎮ２㊀脾脏种植法经脾脏建立结直肠癌肝转移模型是最常用的方式ꎬ可分为脾脏保留法和去脾法ꎮ虽与盲肠种植法相比ꎬ其不能客观模拟结直肠癌肝转移的宏观过程ꎬ但脾脏种植法可用于筛选高转移倾向的恶性结直肠癌细胞㊁研究肿瘤免疫疗法㊁开发抗转移药物等ꎮ保脾法是一种易于实施且重复性好的用于建立结直肠癌肝转移模型的方法ꎮ脾脏是机体的免疫器官ꎬ肿瘤细胞经过脾脏免疫细胞后转移至肝脏更符合体内肿瘤转移过程ꎮ此法注射肿瘤细胞时需谨防细胞溢出而造成腹膜内肿瘤ꎮＺｈｏｕ等[１２]将１ˑ１０６个ＳＷ４８０或ＳＷ６２０细胞悬浮在５０μＬＰＢＳ中ꎬ注入脾远端ꎬ６周后处死小鼠ꎬ切除脾脏和肝脏ꎬ结果发现ꎬ酸离子通道２过表达促进ＳＷ４８０细胞的肝转移ꎬ其敲除将减少ＳＷ６２０细胞的肝脏转移ꎮＺｈａｎｇ等[１３]将５ˑ１０５个ＨＣＴ１１６细胞注射至ＢＡＬＢ/ｃ裸鼠脾脏后ꎬ分别用小檗碱和０.９％氯化钠(对照组)灌肠４周ꎬ实验结束处死裸鼠ꎬ收集裸鼠肝脏发现ꎬ与对照组相比ꎬ小檗碱组肝转移灶的体积明显较小㊁数量较少ꎮ脾脏切除法所建模型可以避免保脾法形成的脾脏原位肿瘤对小鼠的影响ꎬ能较好地模拟结直肠癌肝转移血行转移过程ꎬ形成的肝转移灶集中而明显ꎮ但切除脾脏易致实验小鼠死亡ꎬ因此此法对实验要求较高ꎮＳｈｉｍｉｚｕ等[１４]麻醉小鼠后ꎬ在靠近脾脏左侧处行０.５ｃｍ切口ꎬ用２７Ｇ针头将含有２.０ˑ１０６个ＣＭＴ￣９３结直肠癌细胞的２００μＬＰＢＳ分别缓慢注射至野生型和血管紧张素Ⅱ亚型受体１α敲除小鼠的脾脏ꎬ５ｍｉｎ后取脾关腹ꎬ２周后处死小鼠ꎬ取出肝脏ꎬ与野生型相比ꎬ血管紧张素Ⅱ亚型受体１α敲除小鼠肝脏的重量及肝转移率明显降低ꎮＺｈａｎｇ等[１５]为获得体内高转移性结肠癌细胞ꎬ将含有１ˑ１０５个ＭＣ３８细胞的１００μＬＰＢＳ注射至Ｃ５７ＢＬ/６小鼠脾脏ꎬ５ｍｉｎ后去脾ꎬ３周后获得肝转移瘤ꎬ用胶原酶处理获得肝转移瘤细胞ꎬ从而提取出单个无菌细胞ꎬ选出的细胞再用Ｇ４１８(４００μｇ/ｍＬ)处理至少１周后再次注射至小鼠脾脏ꎬ重复９个循环以获得高侵袭性的ＭＣ３８￣ＬＭ１０细胞ꎮＴｏｈｍｅ等[１６]建立缺血再灌注模型ꎬ在再灌注时ꎬ用２７Ｇ针头将５ˑ１０４个ＭＣ３８细胞注射至小鼠脾脏ꎬ与此同时小鼠接受聚环氧乙烷或聚乙二醇处理ꎬ肿瘤细胞注射１０ｍｉｎ后去脾ꎬ评估聚环氧乙烷是否能抑制肝转移灶的生长ꎮ结果显示ꎬ聚环氧乙烷能减少肝缺血再灌注后新肝转移瘤的形成ꎮ考虑到保脾法所形成的肝转移瘤不佳及切脾法对动物自身免疫系统的破坏ꎬ在某些实验中常运用脾脏半切除法ꎬ此法可兼顾保脾法和切脾法的优点ꎬ又能减少两者对小鼠的伤害ꎮＲａｈｂａｒｉ等[１７]为模拟结直肠癌肝转移ꎬ将脾脏分成两个部分ꎬ将１ˑ１０５个ＣＴ２６细胞注射到远端脾尾部ꎬ然后切除注射的脾半球ꎬ其余半球保持在原来位置ꎮ为评估肿瘤负荷ꎬ他们将小鼠随机分组ꎬ并在出现肉眼可见的肝转移瘤后(注射后８~１２ｄ)开始治疗ꎮＣｈｅｎ等[１８]将小鼠分为ＳＷ６２０￣血管内皮样蛋白１组和ＳＷ６２０￣对照组ꎬ麻醉后暴露脾脏ꎬ脾脏分为两半后分别被夹住ꎬ将２ˑ１０６个结直肠癌细胞经其中一个半脾的血管注入ꎬ经ＰＢＳ冲洗后切断引流半脾的脾血管ꎬ并切除注入肿瘤细胞的半脾ꎬ逐层关腹ꎬ监测肝转移情况ꎬ２个月后对肝转移瘤进行组织学分析ꎮ结果发现ꎬＳＷ６２０￣血管内皮样蛋白１组的肝转移率低于ＳＷ６２０￣对照组ꎮ３　肝脏直接种植法肝脏直接种植法是将结直肠癌细胞或瘤块直接接种到肝脏所形成的结直肠癌肝转移灶ꎮ肝脏直接种植法虽不能客观模拟肿瘤细胞的生长㊁侵袭及转移的全过程ꎬ但成瘤率高ꎬ且成瘤速度快ꎬ更适合于晚期结直肠癌肝转移的研究ꎮ肝脏直接种植法中的细胞注射法具有简单易行㊁重复性好的特点ꎮＳｕｎ等[１９]为证明胰岛素诱导基因２与结肠癌晚期的关系ꎬ在小鼠肝脏右下叶注射胰岛素诱导基因２ｓｈＲＮＡ或荧光素酶ｓｈＲＮＡ转染稳定的ＨＴ２９细胞ꎬ在第２８天处死小鼠后计算肝左叶的转移结节数ꎬ结果发现ꎬ稳定的胰岛素诱导基因２ｓｈＲＮＡ转染ＨＴ２９细胞可显著抑制非移植肝叶中肝肿瘤结节的形成ꎮ细胞注射法中非常关键的一点是防止肿瘤细胞外渗ꎬＦｒｉｅｓ等[２０]对此做了进一步改善ꎬ沿腹中线打开腹壁后ꎬ用２７Ｇ针头的结核菌素注射器将含有５ˑ１０５个结肠癌细胞的悬液注射到左肝叶ꎮ为了防止肿瘤细胞溢出和出血ꎬ压迫注射部位５ｍｉｎꎬ随后关腹ꎮＣｈｏｕ等[２１]证明ꎬＳｃｅｌｌｉｎ在肝转移性结肠癌细胞系中特异性表达ꎬ将结肠癌细胞对照组和Ｓｃｅｌｌｉｎ敲除的结肠癌细胞组分别与基质凝胶混合ꎬ向５周龄的雄性ＢＡＬＢ/ｃ裸鼠肝内注射(１ˑ１０５个/５０μＬ)ꎬ监测肿瘤生长ꎬ８周后处死小鼠并检测肝转移瘤的生长情况ꎬ结果发现ꎬＳｃｅｌｌｉｎ的敲除增加了结肠癌的迁移和侵袭ꎮＶａｓｑｕｅｚ等[２２]将５ˑ１０５个ＭＣ３８细胞注射到６~８周的Ｃ５７ＢＬ/６雄鼠的肝左叶ꎬ建立结直肠癌肝转移模型ꎬ用两种不同剂量的编码α干扰素的腺相关病毒(ａｄｅｎｏ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓｅｎｃｏｄｉｎｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎαꎬＡＡＶ￣ＩＦＮα)处理小鼠:１ˑ１０１０ＡＡＶ￣ＩＦＮα㊁５ˑ１０１１ＡＡＶ￣ＩＦＮα㊁ＡＡＶ￣荧光素ꎬ２１ｄ后测量肿瘤体积发现ꎬＡＡＶ￣荧光素组和低剂量ＡＶＶ￣ＩＦＮα组小鼠出现了肿瘤ꎬ而接受最高剂量的ＡＶＶ￣ＩＦＮα小鼠未出现肿瘤ꎮ在部分实验中ꎬ考虑到肝转移建模的成功率及针对性研究ꎬ往往会将肿瘤细胞先注射于小鼠各部位形成肿瘤块后ꎬ再将肿瘤块植入研究小鼠的肝脏ꎮＭｕｒａｋａｍｉ等[２３]将５ˑ１０５个绿色荧光蛋白标记的ＨＴ２９细胞注射至小鼠脾脏上㊁下极ꎬ３周后获得肝转移瘤ꎬ将形成的肿瘤块切至８ｍｍ３小块备用ꎬ另取裸鼠暴露其肝脏左叶ꎬ将切下的备用肿瘤碎片３ｍｍ３植入肝脏左叶ꎬ回纳肝左叶并关腹ꎬ从而获得原位肝转移模型ꎮＨｉｒｏｓｈｉｍａ等[２４]将５ˑ１０５个绿色荧光蛋白标记的ＨＴ￣２９细胞在无血清介质中清洗２遍后注射到４~５周的胸腺裸鼠脾脏ꎬ４周形成多叶肝转移灶后处死裸鼠ꎬ获得结肠癌肝转移肿块ꎬ另取裸鼠在其肝脏左叶下植入３ｍｍ３先前切下的肿瘤碎片ꎬ３周形成单侧转移肿瘤ꎮＳáｎｃｈｅｚ￣Ｖｅｌáｚｑｕｅｚ等[２５]用转移性较差的ＫＭ１２Ｃ人结肠癌细胞株皮下植入供体裸鼠体内生长ꎬ之后取出形成的肿瘤并切割至２ｍｍ３大小的肿瘤碎片备用ꎬ将备用肿瘤碎片植入另一只裸鼠的肝包膜内侧并缝合ꎬ１５ｄ后结肠癌肝转移瘤长到适合手术大小ꎬ对裸鼠施以不同电压(２０００Ｖ/ｃｍ㊁１０００Ｖ/ｃｍ)的不可逆电泳化ꎬ以确定高电泳不可逆化处理裸鼠是否能延长生存期ꎬ以及肿瘤组织学是否发生改变ꎮ４㊀门静脉种植法门静脉种植法是经门静脉系统注射结直肠癌细胞ꎬ经过血行转运至肝脏而形成的结直肠癌肝转移肿瘤的方法ꎮ虽此法不能客观模拟转移瘤转移的临床特征ꎬ但门静脉易显露ꎬ操作较容易ꎬ肿瘤形成速度快ꎬ形成率高ꎬ是较好的研究晚期结肠癌肝转移的方法ꎮＫｅｅ等[２６]为研究ＣＸＣ趋化因子配体１６对大肠癌肝转移的影响ꎬ在Ｃ５７ＢＬ/６小鼠门静脉注射了ＳＬ４(对照组)和ＳＬ４ＣＸＣ趋化因子配体１６(细胞组ꎬ７.５ˑ１０４个细胞/２００μＬＰＢＳ)ꎬ１７ｄ后处死小鼠并评估肝转移情况ꎬ结果显示ꎬ肿瘤源性ＣＸＣ趋化因子配体１６的表达抑制了肝转移ꎮＨａｓｈｉｍｏｔｏ等[２７]通过门静脉将结肠癌细胞注射到１２周的ＮＯＤ/Ｊｉｃ雄性小鼠肝脏ꎬ分别在４组小鼠的门静脉中植入ＳＷ４８０干扰细胞㊁ＳＷ４８０Ｓｈ￣Ｐｒｕｎｅ(ｈ￣ｐｒｕｎｅ敲低的ＳＷ４８０)㊁ＨＣＴ１１６对照细胞和ＨＣＴ１１６Ｐｒｕｎｅ(ｈ￣ｐｒｕｎｅ表达的ＨＣＴ１１６)细胞ꎮ每周通过体内成像记录肿瘤的生长情况ꎬ４周后评估肝转移情况ꎮ结果提示ꎬｈ￣ｐｒｕｎｅ与肿瘤侵袭和远处转移相关ꎮＷｕ等[２８]为确定ａｓｐｏｒｉｎ在结直肠癌肝转移中的作用ꎬ将数量相等的ＲＫＯ/ＮＣ㊁ＲＫＯ/ｓｈ１￣ａｓｐｏｒｉｎ㊁ＨＴ￣２９/Ｖｅｃｔｏｒ和ＨＴ￣２９/ａｓｐｏｒｉｎ细胞注入ＢＡＬＢ/ｃ裸鼠的门静脉ꎬ６周后取出肝脏进行分析ꎬ结果显示ꎬ与ＨＴ￣２９/Ｖｅｃｔｏｒ组相比ꎬＨＴ￣２９/ａｓｐｏｒｉｎ细胞组肝转移明显增加ꎬ而与ＲＫＯ/ＮＣ相比ꎬＲＫＯ/ｓｈ１￣ａｓｐｏｒｉｎ组的肝转移瘤明显减少ꎮＢｏｃｕｋ等[２９]暴露Ｃ５７ＢＬ/６ＮＣｒｌ雄鼠门静脉ꎬ用３０Ｇ针头向门静脉内注射１０μＬ含有１ˑ１０７个ＣＭＴ￣９３细胞的ＰＢＳ缓冲液ꎬ４周后处死小鼠并取出肝脏分析转移情况ꎮＢｅｃｋｅｒ等[３０]认为ꎬ肝脏核磁共振能预测小鼠结肠癌肝转移ꎬ在麻醉小鼠腹部行３ｃｍ切口暴露门静脉ꎬ将１ˑ１０５个ＭＣ３８细胞注入８只雄鼠的门静脉内ꎬ另取２只雄鼠注射缓冲溶液作为对照ꎬ注射后的第４㊁８㊁１２㊁１６和２０天采用Ｔ２加权自旋回波序列行小型动物磁共振成像ꎬ２０ｄ后磁共振成像显示出现肿瘤ꎮＴａｕｒｉｅｌｌｏ等[３１]在ＢＡＬＢ/ｃｎｕ/ｎｕ小鼠７周时ꎬ使用３０Ｇ注射器向门静脉内直接注射１００μＬ结肠癌肿瘤细胞悬浮液以构造结肠癌肝转移模型ꎮ５㊀小㊀结结直肠癌肝转移的过程十分复杂ꎬ小鼠建模方式的选择需根据具体的实验要求及实验条件决定ꎮ除上述４种常用建模方式外ꎬ皮下种植法㊁尾静脉种植法㊁腋窝种植法及腹膜种植法等也是常用的结直肠癌小鼠造模方式ꎬ但这些方法因难以表现出恶性结直肠癌细胞向肝脏浸润和转移的特性ꎬ而不易构建出结直肠癌肝转移模型ꎮ目前ꎬ尚未有一种小鼠模型能与人类结直肠癌肝转移的发生发展完全契合ꎬ因此需致力于构建新的更便捷㊁更贴近人类肿瘤发展进程的动物模型ꎬ为揭示结直肠癌发病㊁转移机制及探索治疗措施提供有效手段ꎮ参考文献[１]㊀ＳｉｅｇｅｌＲＬꎬＭｉｌｌｅｒＫＤꎬＦｅｄｅｗａＳＡꎬｅｔａｌ.Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｓｔａｔｉｓ￣ｔｉｃｓꎬ２０１７[Ｊ].ＣＡＡＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎꎬ２０１７ꎬ６７(３):１７７￣１９３.[２]㊀中国结直肠癌诊疗规范(２０１７版)专家组.中国结直肠癌诊疗规范(２０１７版)主要更新概要[Ｊ].中华胃肠外科杂志ꎬ２０１８ꎬ２１(１):９０￣９１.[３]㊀ＡｋｇüｌÖꎬÇｅｔｉｎｋａｙａＥꎬＥｒｓöｚŞꎬｅｔａｌ.Ｒｏｌｅｏｆｓｕｒｇｅｒｙｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙꎬ２０１４ꎬ２０(２０):６１１３￣６１２２.[４]㊀ＭｉｚｕｎｏＲꎬＫａｗａｄａＫꎬＩｔａｔａｎｉＹꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｔｕｍｏｒ￣ａｓｓｏｃｉａｔ￣ｅｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１９ꎬ２０(３):Ｅ５２９.[５]㊀ＧｅｎｇＬꎬＣｈａｕｄｈｕｒｉＡꎬＴａｌｍｏｎＧꎬｅｔａｌ.ＭｉｃｒｏＲＮＡ￣１９２ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２０１４ꎬ３３(４６):５３３２￣５３４０.[６]㊀ＬｉｍａｎｉＰꎬＬｉｎｅｃｋｅｒＭꎬＳｃｈｎｅｉｄｅｒＭＡꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｌｌｏｓｔｅｒｉｃｈｅｍｏ￣ｇｌｏｂｉｎｅｆｆｅｃｔｏｒＩＴＰＰｉｎｈｉｂｉｔｓｍｅｔａｓｔａｔｉｃｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＡｎｎＳｕｒｇꎬ２０１７ꎬ２６６(５):７４６￣７５３.[７]㊀ＬａｍＣＳꎬＮｇＬꎬＣｈｏｗＡＫꎬｅｔａｌ.ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ８８５￣５ｐａｓａｎｏｖｅｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｔｕｍｏｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＣＰＥＢ２ｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１７ꎬ８(１６):２６８５８￣２６８７０. [８]㊀ＺｈａｎｇＹꎬＤａｖｉｓＣꎬＳｈａｈＳꎬｅｔａｌ.ＩＬ￣３３ｐｒｏｍｏｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｎｍｉｃｅｂｙｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇｔｈｅｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄｉｎｄｕｃｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ[Ｊ].ＭｏｌＣａｒｃｉｎｏｇꎬ２０１６ꎬ５６(１):２７２￣２８７.[９]㊀ＴａｏＬꎬＹａｎｇＪＫꎬＧｕＹꎬｅｔａｌ.Ｗｅｉｃｈａｎｇᶄａｎａｎｄ５￣ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌｓｕｐ￣ｐｒｅｓｓｅｓｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ[Ｊ].ＷｏｒｄＪＧａｓｔｒｏｅｎ￣ｔｅｒｏｌꎬ２０１５ꎬ２１(４):１１２５￣１１３９.[１０]㊀ＡｇａｒｗａｌＥꎬＲｏｂｂＣＭꎬＳｍｉｔｈＬＭꎬｅｔａｌ.ＲｏｌｅｏｆＡｋｔ２ｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｅｔａｓｔａｓｉｓｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓ￣ｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２０１７ꎬ３６(２２):３１０４￣３１１８.[１１]㊀ＹａｎｇＢꎬＰａｎＣＳꎬＬｉＱꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｈａｎｌｉｎｇＧａｏｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１９ꎬ１４(２):ｅ２０１５０４￣２０１５１７.[１２]㊀ＺｈｏｕＺＨꎬＳｏｎｇＪＷꎬＬｉＷꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｃｉｄ￣ｓｅｎｓｉｎｇｉｏｎｃｈａｎｎｅｌꎬＡＳＩＣ２ꎬｐｒｏｍｏｔｅｓｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｕｎｄｅｒａｃｉｄｏｓｉｓｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｈｅｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ/ＮＦＡＴ１ａｘｉｓ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１７ꎬ３６(１):１３０.[１３]㊀ＺｈａｎｇＪＷꎬＬｉＬＸꎬＷｕＷＺꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ￣ｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ￣ｔｏ￣ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＭｅｄＳｃｉＭｏｎｉｔꎬ２０１８ꎬ２４:６４０５￣６４１３.[１４]㊀ＳｈｉｍｉｚｕＹꎬＡｍａｎｏＨꎬＩｔｏＹꎬｅｔａｌ.ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡｓｕｂｔｙｐｅ１ａｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｒｅｓｉｄｅｎｔｈｅｐａｔｉｃｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｉｎｄｕｃｅｓｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＳｃｉꎬ２０１７ꎬ１０８(９):１７５７￣１７６８. [１５]㊀ＺｈａｎｇＷꎬＺｈａｎｇＢꎬＶｕＴꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｒｏ￣ｍｅｔａｓｔａｔｉｃｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆβ４￣ｉｎｔｅｇｒｉｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｏｎｃｏ￣ｔａｒｇｅｔꎬ２０１７ꎬ８(５４):９２３３３￣９２３４５.[１６]㊀ＴｏｈｍｅＳꎬＫａｍｅｎｅｖａＭＶꎬＹａｚｄａｎｉＨＯꎬｅｔａｌ.Ｄｒａｇｒｅｄｕｃｉｎｇｐｏｌｙ￣ｍｅｒｓｄｅｃｒｅａｓｅｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｅｓａｆｔｅｒｌｉｖｅｒｉｓｃｈｅｍｉａ￣ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１７ꎬ８(３５):５９８５４￣５９８６６. [１７]㊀ＲａｈｂａｒｉＮＮꎬＫｅｄｒｉｎＤꎬＩｎｃｉｏＪꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ￣ＶＥＧＦｔｈｅｒａｐｙｉｎｄｕｃｅｓＥＣＭｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄｍｅｃｈａｎｉｃａｌｂａｒｒｉｅｒｓｔｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓ[Ｊ].ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄꎬ２０１６ꎬ８(３６０):３６０ｒａ１３５.[１８]㊀ＣｈｅｎＨꎬＸｉａｏＱꎬＨｕＹꎬｅｔａｌ.ＡＮＧＰＴＬ１ａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｂｙｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍｉｃｒｏＲＮＡ￣１３８[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１７ꎬ３６(１):７８.[１９]㊀ＳｕｎＳꎬＺｈａｎｇＧꎬＳｕｎＱꎬｅｔａｌ.Ｉｎｓｕｌｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄｇｅｎｅ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅｏｕｔｃｏｍｅ[Ｊ].ＩＵＢＭＢＬｉｆｅꎬ２０１６ꎬ６８(１):６５￣７１.[２０]㊀ＦｒｉｅｓＰꎬＭｏｒｒＤꎬＭüｌｌｅｒＡꎬｅｔꎬａｌ.Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ￣ｂａｓｅｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ(ＡＧｕＩＸ)ｆｏｒｃｏｎｔｒａｓｔ￣ｅｎｈａｎｃｅｄＭＲＩｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｉｃｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓａｔ９.４ｔｅｓｌａ[Ｊ].Ｒｏｆｏꎬ２０１５ꎬ１８７(１２):１１０８￣１１１５.[２１]㊀ＣｈｏｕＣＫꎬＦａｎＣＣꎬＬｉｎＰＳꎬｅｔａｌ.Ｓｃｉｅｌｉｎｍｅｄｉａｔｅｓｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ￣ｔｏ￣ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｈｅｐａｔｉｃｍｅｔａｓｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１６ꎬ７(１８):２５７４２￣２５７５４.[２２]㊀ＶａｓｑｕｅｚＭꎬＰａｒｅｄｅｓ￣ＣｅｒｖａｎｔｅｓＶꎬＡｒａｎｄａＦꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｏｆａｎａｄｅｎｏ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡ￣１ｆｕｓｅｄｔｏｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａｉｎａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｐｈａ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｒｉｎｅｔｕｍｏｒｍｏｄｅｌ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１７ꎬ８(３):５２４７￣５２５５. [２３]㊀ＭｕｒａｋａｍｉＴꎬＨｉｒｏｓｈｉｍａＹꎬＺｈａｎｇＹꎬｅｔａｌ.Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ￣ｇｕｉｄｅｄｓｕｒｇｅｒｙｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｎｕｄｅ￣ｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１５ꎬ１０(１０):ｅ０１３８７５２￣０１３８７６２.[２４]㊀ＨｉｒｏｓｈｉｍａＹꎬＬｗｉｎＴＭꎬＭｕｒａｋａｍｉＴꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ￣ｇｕｉｄｅｄｓｕｒｇｅｒｙｏｆｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｕｓｉｎｇａｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｎｔｉ￣ＣＥＡａｎｔｉｂｏｄｙ[Ｊ].ＪＳｕｒｇＯｎｃｏꎬ２０１６ꎬ１１４(８):９５１￣９５８.[２５]㊀Ｓáｎｃｈｅｚ￣ＶｅｌáｚｑｕｅｚＰꎬＣａｓｔｅｌｌｖíＱꎬＶｉｌｌａｎｕｅｖａＡꎬｅｔａｌ.Ｌｏｎｇ￣ｔｅｒｍｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎｉｎａｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１７ꎬ７:４４８２１￣４４８２９. [２６]㊀ＫｅｅＪＹꎬＩｔｏＡꎬＨｏｊｏＳꎬｅｔａｌ.ＣＸＣＬ１６ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇＴＮＦ￣α￣ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙｔｕｍｏｒ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ[Ｊ].ＢＭＣＣａｎｃｅｒꎬ２０１４ꎬ１４:９４９￣９６０.[２７]㊀ＨａｓｈｉｍｏｔｏＭꎬＫｏｂａｙａｓｈｉＴꎬＴａｓｈｉｒｏＨꎬｅｔａｌ.ｈ￣Ｐｒｕｎｅｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ￣ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｅｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒꎬ２０１６ꎬ１３９(４):８１２￣８２３.[２８]㊀ＷｕＨꎬＪｉｎｇＸꎬＣｈｅｎｇＸꎬｅｔａｌ.ＡｓｐｏｒｉｎｅｎｈａｎｃｅｓｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｈｅＥＧＦＲ/Ｓｒｃ/ｃｏｒｔａｃｔｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔꎬ２０１６ꎬ７(４５):７３４０２￣７３４１３. [２９]㊀ＢｏｃｕｋＤꎬＷｏｌｆｆＡꎬＫｒａｕｓｅＰꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｄａｐｔａｔｉｏｎｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｈｅｎｆｏｒｍｉｎｇｍｅｔａｓｔａｓｅｓｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒ:Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅｓａｎｄｐａｔｈｗａｙｓｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ[Ｊ].ＢＭＣＣａｎｃｅｒꎬ２０１７ꎬ１７(１):３４２￣３５７.[３０]㊀ＢｅｃｋｅｒＡＳꎬＳｃｈｎｅｉｄｅｒＭＡꎬＷｕｒｎｉｇＭＣꎬｅｔａｌ.ＲａｄｉｏｍｉｃｓｏｆｌｉｖｅｒＭＲＩｐｒｅｄｉｃｔｍｅｔａｓｔａｓｅｓｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＥｕｒＲａｄｉｏｌＥｘｐꎬ２０１８ꎬ２(１):１１.[３１]㊀ＴａｕｒｉｅｌｌｏＤＶＦꎬＰａｌｏｍｏ￣ＰｏｎｃｅＳꎬＳｔｏｒｋＤꎬｅｔａｌ.ＴＧＦβｄｒｉｖｅｓｉｍｍｕｎｅｅｖａｓｉｏｎｉｎｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｍｅｔａ￣ｓｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２０１８ꎬ５５４(７６９３):５３８￣５４３.收稿日期:２０１９￣０３￣２７㊀修回日期:２０１９￣０９￣２４㊀编辑:辛欣。

小鼠肝癌原位移植模型的建立及其意义的研究项亮亮;侯杰;王婕;焦成斌【摘要】目的:探讨用肝癌H22细胞建立小鼠肝癌原位移植模型.方法:将肝癌H22细胞注入小鼠腹腔内,建立异位移植模型;抽取腹水中癌细胞接种于小鼠肝实质内,建立原位移植模型.结果:移植后10d可扪及肿瘤生长,模型成功率94.4％;晚期自发转移率79.4％,腹水产生率35.3％,无自发消退;移植瘤保持甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(DCP)高分泌及γ-氨基酰转氨酶(γ～GT)同工酶阳性的特点;模型平均自然生存期28d.结论:小鼠肝癌原位模型成功率高,易于制作,生物学特征符合模拟人类肝癌在体内发生发展的全过程,可成为今后人类研究肝癌的重要动物模型.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2015(038)006【总页数】2页(P48-49)【关键词】肝癌;H22细胞;原位移植模型;小鼠【作者】项亮亮;侯杰;王婕;焦成斌【作者单位】佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院普外二科,黑龙江佳木斯154003【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，因其发病率高、恶性程度高、死亡率高，素有“癌中之王”的称号[1]。

目前已有大量研究为肝癌临床的治疗提供基础依据，而肝癌动物模型一直是肝癌临床与基础研究工作的重要工具。

目前有关人肿瘤转移模型大多是用裸大鼠、裸小鼠,动物肿瘤则多数是用Wistar或SD大鼠建立的,而用小鼠建立原位肿瘤移植模型国内外报道较少。

小鼠作为一种更经济，易饲养，易获得的实验研究载体，在发挥其普遍应用性方面有着重大的作用。

小鼠肝癌原位移植模型作为一种新型的动物模型是否能更好地模拟人肝癌在体内发生、发展、侵袭及转移的过程，本实验将研究报道如下。

ByDONGCP2015-03-17C6-/-转基因小鼠肠癌脾肝转protocol研究目的以C6-/-转基因小鼠为受试动物，评价补体系统抑制后对鼠CT26.WT肠癌脾肝转移模型的影响。

试验动物C6-/-转基因小鼠。

小鼠以C6-/-转基因小鼠与C57BL6Crossbreed十代以上。

实验材料麻醉剂：水合氯醛（或者戊巴比妥钠替代），生理盐水注射器：1ml注射器，2-5ml注射器手术器械：固定班，胶带，止血钳，眼科镊，手术缝合针术后：青霉素，电热毯（也可以无），纱布试验方法1, 小鼠肠癌CT-26细胞悬液的制备。

取对数生长期细胞，用0.25% 胰蛋白酶消化收集细胞，PBS或者无血清培养基洗涤重悬制成单细胞悬液。

台盼蓝染色测定活细胞率≥95%，细胞浓度为：1X10^7/只。

个人感觉是70-80%细胞活力最强。

注意将收集好的细胞放置于冰盒内。

2，小鼠麻醉与固定。

麻醉剂水合氯醛，一次配制10ml（10ml生理盐水融入0.38g水合氯醛）。

注射时候按照0.01ml/g体重注射。

麻醉后用胶带固定在手术展板上。

20g可以考虑0.25ml腹腔注射。

3，脾脏注射切脾组小鼠左上腹行横切口约6mm，逐层剥离进腹后于腹外侧找到柳叶状脾脏，小心显露脾脏，使脾上托于切口外用1ml注射器5号针头从脾上极进针约3mm，注意进针与脾脏平行，将肿瘤细胞悬液注入至脾被膜下，每只缓慢注入细胞浓度为1X10^7/ml细胞悬液0.2ml,可见注射部位脾被膜发白肿胀，待白色肿胀被膜消退后拔出针头压迫止血2分钟（结扎脾蒂,切除脾脏）查无出血，逐层关腹。

黄色字体步骤为切除脾脏方案的操作3，仔细缝合，两层缝合。

缝合后伤口用青霉素涂敷。

也可追加青霉素溶液注射，注射单位参考青霉素说明书。

注意：术中保持脾脏表面湿润，用5ml注射器滴加生理盐水。

术后小鼠的保暖工作对生存有一定影响。

可以用电热毯辅热。

结肠癌肝转移裸鼠模型的建立李华驰;熊治国;谢敏;谈凯;殷涛;冯茂辉【摘要】目的构建一种转移率高、操作简便、结果可靠的结肠癌肝转移模型,用于结肠癌转移防治的实验研究.方法 15只Balb/c裸鼠平均分为3组(A组、B组、C 组),5只Balb/c小鼠单独为D组,以细胞浓度2.5×107/mL的HCT116、CT26细胞悬液0.2 mL分别行脾种植保脾法及切脾法构建结肠癌肝转移模型,对比四组动物模型造模成功率及肝转移灶大小、数目及腹腔内转移情况.结果 A组裸鼠造模成功率100％(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较少,较分散,多分布于肝右叶,生存时间平均为(26.6±3.4)d;B组裸鼠造模成功率40％(2/5),转移瘤分散于肝表面,体积较A 组大,生存时间平均为(36.8±4.2)d;C组裸鼠造模成功率100％(5/5),肝及脾均成瘤,肝转移瘤数目较多,多个转移瘤融合成团,占据整个肝右叶,生存时间平均为(20.2±2.6)d;D组肝未发现转移灶.三组裸鼠部分出现腹腔转移(A组2只,C组3只),均未出现心、肺、脑、肾转移灶.3组裸鼠肝转移瘤组织细胞学形态符合腺癌的特征.结论保脾法能获得较高的造模成功率,能有效模拟人类结肠癌细胞经血行转移至肝的途径和过程.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2019(029)005【总页数】6页(P63-68)【关键词】结肠癌;肝转移;裸鼠【作者】李华驰;熊治国;谢敏;谈凯;殷涛;冯茂辉【作者单位】湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉430079;湖北省肿瘤医院胃肠外科,武汉 430079;武汉大学中南医院胃肠外科,武汉430000【正文语种】中文【中图分类】R-33结肠癌血行转移最常见的靶器官是肝，约50%以上的患者最终会出现肝转移[1]。

结直肠癌小鼠模型是什么？结直肠癌小鼠详细介绍根据《临床医师癌症杂志》在线发表的“2018年全球癌症统计数据”，去年全球有约180万结直肠癌新发病例，发病率（10.2%）及死亡率（9.2%）都在排行榜前三（Table1）[1]，是最常确诊且危害最严重的癌症之一，由于人口增长、衰老以及人类生活方式的改变，结直肠癌的发病负担还在逐年加重，而搞清其发病机制，对找到正确的预防治疗方式、改善患者不良预后和降低死亡率至关重要。

结直肠癌小鼠模型能够模拟人体结直肠癌的发生发展，在疾病发生机理研究，药物新靶点发现及临床前药效学评价等方面具有十分重要的理论价值和临床意义。

本期将带大家了解一下这些常用的结直肠癌模型。

Table1 2018年全球主要癌症发病率及死亡率统计结直肠癌模型主要分为移植瘤模型和原发瘤模型两种。

结直肠癌移植瘤模型结直肠癌移植瘤模型就是将人体或小鼠原发的结直肠癌组织或细胞移植到小鼠身上使其生长成肿瘤的动物模型。

该模型的优点是周期短、成本低，目前在实验室中应用较为广泛。

根据移植物来源可分为同种移植和异种移植。

同种移植采用鼠源组织或细胞，其中MC38小鼠结肠癌细胞的移植最为常见，多用作结直肠癌发生及转移方向研究，并成为肿瘤药效验证的常用途径。

异种移植采用人源组织或细胞，更接近人体肿瘤真实情况，也因此更受欢迎，但其需要免疫缺陷小鼠作为宿主.目前人源性结直肠癌移植瘤（异种移植）模型主要分为两种，一种是将人源的结直肠癌细胞系接种到免疫缺陷小鼠体内，称为CDX模型（cell-line-derived xenograft），另一种是将来源于患者的结直肠癌组织块接种到免疫缺陷小鼠体内，称为PDX模型（patient-derived xenograft）。

由于用作CDX模型的人源结直肠癌细胞系具有易获取，成瘤效果好，验证数据详实（有大量细胞功能学和药效数据可供参考）以及操作成本低等优势，在各类实验室中都有使用。

在结直肠癌研究当中，KRAS基因突变已被鉴定为预测西妥昔（Cetuximab）疗效的生物学标志物；在很多病例当中，BRAF、TP53等基因突变被发现于结直肠癌不同的发展阶段；而MSI （microsatellite instability）是判断结直肠癌类型的一种重要指标。

小鼠结肠癌肝转移模型的构建
杨扬;李乃卿
【期刊名称】《中国医药指南》
【年(卷),期】2010(8)17
【摘要】目的建立适合基因表述谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型.方法将小鼠结肠癌细胞(C26)悬液接种于BALB/C小鼠脾内,分为切脾组和保脾组,观察小鼠生存时间及腹腔内肿瘤生长情况.结果切脾小鼠自然生存期11～15d,平均
(13.05±0.71)d,保脾小鼠自然生存期9～15d,平均(11.64±1.49)d.小鼠肝脏转移率均为100%.切脾小鼠肝各叶完全被肿瘤占据,保脾小鼠脾内肿瘤巨大,肝内转移多为散在的米粒大小瘤结节转移.结论用于基因表达谱研究的小鼠结肠癌肝转移模型应采用脾内注射切脾法.
【总页数】2页(P53-54)
【作者】杨扬;李乃卿
【作者单位】广东省中山市人民医院,528400;北京中医药大学东直门属医
院,100700
【正文语种】中文
【中图分类】R-332
【相关文献】
1.肝气郁结对结肠癌模型小鼠肝转移的影响 [J], 马梦雨;杨晓燕;赵璐;梁芳;张勇;徐可;樊瀛哲;许建华
2.中药抵当汤对小鼠结肠癌脾移植肝转移模型肿瘤增殖细胞核抗原的影响 [J], 杨运高;华何与;陈先明;王学良;王程
3.小鼠结肠癌肝转移模型的建立及其活化肝星状细胞的表达 [J], 朱巍莹;张学利;陈宗祐n;夏蓓莉;陈忠清;项建斌
4.BALB/c与SCID裸小鼠高侵袭性人结肠癌肝转移模型的比较研究 [J], 廖坚松;陈斯泽;柯尊富
5.MC38-luc稳转细胞株的构建及在小鼠结肠癌肝转移模型中的应用 [J], 林怡婷;林雨虹;阮梅;朱艳阳;张秋玉
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