实验二、蛋白质沉淀、变性反应ppt课件
- 格式:pptx
- 大小:408.12 KB
- 文档页数:16
蛋白质的沉淀与变性反应目的(1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
(2)学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
原理在水溶液中,蛋白质分子的表面,由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒,所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是,蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的,相对的。
在一定的物理化学因素影响下,蛋白质颗粒失去电荷,脱水,甚至变性,则以固态形式从溶液中析出,这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可分为以下两种类型:一、可逆淀汲反应在发生沉淀反应时,蛋白质虽已沉淀析出,但它的分子内部结构并未发生显著变化,基本上保持原有的性质,沉淀因素除去后,能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应,又叫作不变性沉淀反应。
属于这一类的反应有盐析作用; 在低温下,乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏,失去原来的天然性质,这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀反应。
重金属盐、植物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波,有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
试剂和器材一、试剂1.蛋白质溶液取5m1鸡蛋蛋白蛋清,用蒸馏水稀释至100ml,搅拌均匀后用4-8层纱布过滤,新鲜配制。
2.蛋白质氯化钠溶液取20ml蛋清,加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml,充分搅匀后,以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
硫酸铵粉末,饱和硫酸铵溶液,3%硝酸银,0.5% 醋酸铅,10% 三氯醋酸,浓盐酸,浓硫酸,浓硝酸,5% 磺基水杨酸(sulfosalicyclic acid),0.1% 硫酸铜,饱和硫酸铜溶液,0.1% 醋酸,10% 醋酸,饱和氯化钠溶液,10%氢氧化钠溶液。
二、器材试管,试管架,小玻璃漏斗,滤纸,玻璃纸,玻璃棒,500ml烧杯,10 ml量筒。