蛋白质盐析和变性的比较精品课件

盐析法分离蛋白质的步骤
制备盐溶液并调节pH值
选择合适的盐浓度并准确调节溶液的pH值。
加入待分离的蛋白质溶液
将待分离的蛋白质溶液添加到盐溶液中。
分离出蛋白质
通过盐析作用，蛋白质会从溶液中沉淀下来形成团块，可以进行进一步的纯化和分析。
实验注意事项
1 卫生和安全
实验过程中应注意卫生和安全，佩戴实验室 个人防护装备。
《盐析法分离蛋白质》 PPT课件
# 盐析法分离蛋白质 本课程将介绍盐析法分离蛋白质的基本原理、步骤及实验注意事项。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 简介
盐析法是一种常用的蛋白质分离方法。通过利用盐对蛋白质溶解度的影响，可实现蛋白质的有效分离与纯化。
盐析法的原理
盐析法利用盐对蛋白质溶解度的影响，达到分离蛋白质的目的。盐对蛋白质 溶解度的影响是因为盐对水分子的结构及运动方式产生影响。
2 盐溶液浓度
制备盐溶液需要注意选择合适的盐浓度，以 保证盐析效果。
3 pH值的调节
4 蛋白质检测
调节pH值时，应注意正确使用pH计，确保pH 值的准确度。
分离出的蛋白质需要进行检测，可使用凝胶 电泳等方法，以确认纯度和分子量。
结束语
掌握盐析法分离蛋白质的基本原理及操作步骤对于生物学研究具有重要意义。 希望本课程能为大家提供有益的指导和帮助。

的病人
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、 磺基水杨酸等生物碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类
（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生 显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后， 能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作 用，可用于蛋白质提纯。 （2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空 间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于 原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化 观察有无蛋白质的沉
钠溶液和21mL95%乙醇
淀
静置，弃去上清液，取出部分 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试管 1 ①1mL蛋白质溶液
观 察 有 无 弃去上清液，取 观察沉淀
蛋白质分 子表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实验仪器和试剂
1. 试剂
• 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至 200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加 入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法 盐析
有机试剂 盐析
原理 破坏蛋白质胶体溶液的水化
层和电荷层 脱水作用；降低水的介电常 数和蛋白质溶解度；蛋白质
析出

5.酶的应用：
（1）淀粉酶应用于食品、发酵、纺织、制药等工业；（2）蛋白酶应用于医药、制革等工业；（3）脂肪酶应用于脂肪水解、羊毛脱脂等；（4）酶还可用于疾病的诊断。
同学们再见！
授课老师：
时间：2024年9月15日
变化实质
物理变化(溶解度降低)
化学变化(蛋白质性质改变)
变化过程
可逆
不可逆
用途
分离、提纯蛋白质
杀菌、消毒
⑤显色反应 含有苯环的蛋白质遇浓硝酸会有白色沉淀产生，加热后沉淀变黄色。
实验操作
实验现象
结论
加入浓硝酸生成白色沉淀，加热后，沉淀变黄
含有苯环的蛋白质(天然蛋白质都含苯环)沾上浓硝酸会出现黄色，可用于检验蛋白质。
4.对映异构： α­-氨基酸除甘氨酸外，一般均含有连接4个不同原子或原子团的手性碳原子，具有对映异构体。5.存在： 组成生物体内蛋白质的氨基酸一般只有20种，其中必需氨基酸有8种。6.命名：
H2N—CH2COOH
甘氨酸
丙氨酸
谷氨酸
氨基乙酸
2-氨基丙酸
2-氨基戊二酸
苯丙氨酸
⑥蛋白质灼烧有烧焦羽毛气味。
5.蛋白质的用途（1）食物（人类必须的营养物质）（2）工业原料：动物的毛、蚕丝 (纺织原料)动物的皮 (皮革)动物的骨、皮、蹄 (动物胶)牛奶中的酪素 (酪素塑料)
三.酶
1.定义： 酶是一类由细胞产生的、对生物体内的化学反应具有催化作用的有机化合物，其中绝大多数是蛋白质。2.来源：3.功能：
1.定义： 蛋白质是由多种氨基酸通过肽键等相互连接形成的一类生物大分子(天然有机高分子化合物)。2.元素组成： 蛋白质中主要含有C、H、O、N、S等元素，有些蛋白质还含有P、Fe、Zn、Cu等元素。其溶液具有胶体的某些性质。

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●蔗糖与葡萄糖的比较：
C12H22O11 + H2O 催化剂 C6H12O6 + C6H12O6
(蔗糖)
(葡萄糖) (果糖)
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23
淀粉 ：
物理性质：
白色、无气味、无味道、不溶于冷水、 热水中“糊化”。植物光合作用的产物 ，种子或块根里。谷类中含淀粉较多， 大米80%；小麦70%。
4、蛋白质的颜色反应，多数蛋白质分子含有带苯
坏的氨基酸，所以遇浓硝酸有黄色反应。
5、灼烧 烧焦羽毛味
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7
蛋白质的主要应用：
动物的毛、 蚕丝是很好 的纺织原料
人类的主要食品
蛋白质
各种生物酶 均是蛋白质
动物的皮 革是衣服 的原料
驴皮熬制的
胶是一种药 材——阿胶
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牛奶中的蛋 白质与甲醛 制酪素塑料
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3
蛋白质的性质：
2、 盐析
盐析一般是指在溶液中加入无机盐类而使某种物质 溶解度降低而析出的过程。在乙酸的酯化反应中加 入饱和碳酸钠溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分 层现象更明显的过程。 一般向蛋白质溶液中加入 某些无机盐溶液后,都可以使蛋白质凝聚而从溶液 中析出。盐析的过程可复原。
鸡蛋白溶液 硫酸铵
8
[知识应用]
1、误食重金属盐类时，喝大量牛奶、蛋清 或豆浆来解毒。
重金属对身体的毒害主要来自使蛋白质变性，从而失去生物活性， 牛奶富含蛋白质，可以竞争重金属离子，使变性的蛋白质不再是人 体的蛋白质而是牛奶的蛋白质，这样就可以保护人体。其实不是解 毒，而是应急，如果已经中毒，喝牛奶就没有用了。
2、医院里用高温蒸煮来消毒。
3、在伤口处涂抹酒精溶液来消毒杀菌。

蛋白质盐析和变性的比较
概念
盐析
蛋白质溶液中加浓轻 金属盐或铵盐溶液， 使蛋白质析出
变性
蛋白质在某些条件作用下凝聚，丧失生 理活性
变化条件
浓轻金属盐或铵盐溶 受热、紫外线、强酸、强碱、重金属盐，
液
某些有机物等
变化实质 物理变化（溶解度降低） 化学变化
变化过程 用途
可逆 分离，提纯
不可逆 杀菌，消毒等
盐析和变性的区别
杀菌，消毒
化学变化
Байду номын сангаас
不可逆
受热、紫外线、强酸、 强碱、重金属盐，某些 有机物等
蛋白质在某些条件作 用下凝聚，丧失生理 活性
变性
用途
过程 实质 条件 定义
分离提纯
可逆 物理变化
（溶解度降低） 一定浓度盐溶液
蛋白质溶液中加浓无 机盐溶液，使蛋白质 析出
盐析

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3
蛋白质的变性 (denaturation)
在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结构 被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质 和生物学性质改变的现象。
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变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质变性 的物质叫蛋白质变性剂。
高温、高压
物理因素
紫外线、X射线、
变性因素
电离辐射和超声波等 强酸、强碱
在等电点的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
脱水
++ +
+
+
+
+
+
带正电荷的蛋白质
（疏水胶体）
碱
酸
不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀）
蛋白质胶精选体课颗件 粒的沉淀
-
-
-
-
-
-
-
-
带负电荷的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
-
-
-
---
带负电荷的蛋白质
（疏水胶体）
8
蛋白质的沉淀
可逆沉淀
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
实验一
蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
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1
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
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2
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
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6
蛋白质的胶体性质及沉淀:
蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗 粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。

第九页，共14页。
物质
饱和烃 与不饱 和烃
苯与苯 的同系
物Байду номын сангаас
试剂与方法 加入溴水或酸性KMnO4溶液
加酸性KMnO4溶液
现象与结论 褪色的是不饱和烃
褪色的是苯的同系物
第十页，共14页。
物质
试剂与方法
现象与结论
醛基 醇 羧酸
加银氨溶液，水浴加热；加碱 性Cu(OH)2悬浊液，加热
加入活泼金属钠；加乙酸、浓 H2SO4，加热
答案(dáàn)：A
第七页，共14页。
有机物的鉴别(jiànbié)
1．根据(gēnjù)有机物的溶解性。 通常是加水检查，观察其是否溶于水。例如，可用此法鉴别乙酸与乙酸 乙酯、乙醇与氯乙烷、甘油与油脂等。 2．根据(gēnjù)液态有机物的密度。 观察不溶于水的有机物在水中的浮沉情况，可知其密度比水的密度是小 还是大。例如，用此法可以鉴别硝基苯与苯、四氯化碳与1氯丁烷。
第十章 烃的衍生物和营养物质 高分子化合物和有机合成(yǒujī
héchéng)
第四节 基本(jīběn)营养物质
第一页，共14页。
蛋白质的盐析(yán xī)和变性的比较
蛋白质的盐析(yán xī)和变性的比较。
变化条件
变化实质 变化过程
用途
盐析
浓的盐溶液
物理变化(溶 解度降低)
可逆 分离、提纯
3．下列物质不能用来鉴别乙酸、乙醇、苯的是( )
A．碳酸氢钠溶液
B．紫色石蕊(shíruǐ)溶液
C．溴水
D．酸性高锰酸钾溶液
第十四页，共14页。
第八页，共14页。
3．根据有机物的燃烧情况。 例如，是否可燃(大部分有机物可燃，四氯化碳(sìlǜ huàtàn)和多数无机 物不可燃)；燃烧时黑烟的多少(可区分乙烷、乙烯和乙炔，己烷和苯， 聚乙烯和聚苯乙烯)；燃烧时的气味(如识别聚氯乙烯、蛋白质等)。 4．根据有机物的官能团。 思维方式为官能团→性质→方法的选择。常用的试剂与方法见下表。