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实验五细胞核与线粒体的分级分离一、实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。
匀浆(homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／l 蔗糖一0.003mol／l氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。
分级分离(fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。
先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。
由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。
分析分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。
二、实验用品（一）材料和标本：小白鼠、冰块。
（二）器材和仪器：玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25ml烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、牙签。
（三）试剂：0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液、1％甲苯胺兰染液、0.02％詹纳斯绿B染液、0.9％NaCl溶液。
三、实验步骤（一）细胞核的分离提取1．用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。
2．将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／l蔗糖一0.003mol ／l氯化钙溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。
细胞核的分离与鉴定实验报告细胞核的分离与鉴定实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而细胞核则是细胞中最为重要的部分之一。
细胞核内包含了遗传物质DNA，控制着细胞的生物学活动。
因此，对细胞核的分离与鉴定具有重要意义。
本实验旨在通过一系列操作步骤，成功分离和鉴定细胞核。
实验材料与方法：实验所需材料包括：小麦胚芽、细胞壁溶解液、细胞质溶解液、显微镜玻片、盖玻片、显微镜、荧光染色剂。
首先，将小麦胚芽切碎并加入适量的细胞壁溶解液，用振荡器摇匀，使细胞壁完全溶解。
然后，离心胚芽悬液，将上清液收集到离心管中。
接下来，加入适量的细胞质溶解液，使细胞质溶解。
再次离心，将上清液收集到另一个离心管中。
最后，将收集到的上清液滴在显微镜玻片上，加入荧光染色剂，覆盖盖玻片，用显微镜观察。
实验结果与讨论：在显微镜下观察，我们可以清晰地看到细胞核的存在。
细胞核呈现出圆形或椭圆形的形态，大小约为细胞的1/10左右。
细胞核内部有明显的染色质，即DNA。
通过荧光染色剂的作用，细胞核呈现出明亮的荧光信号，进一步证实了细胞核的存在。
细胞核的分离与鉴定实验是一项基础的生物学实验，它为我们研究细胞的结构和功能提供了重要的手段。
通过分离细胞核，我们可以更加深入地了解细胞核的组成和特点。
细胞核是细胞中的遗传信息中心，它包含了细胞的遗传物质DNA，控制着细胞的生物学活动。
因此，研究细胞核的结构和功能对于我们理解生命的本质和生物体的发育过程具有重要意义。
此外，细胞核的分离与鉴定还可以应用于其他领域的研究。
例如，在医学领域，通过细胞核的分离和鉴定，可以帮助医生诊断疾病。
某些疾病的发生与细胞核的异常有关，通过对细胞核的观察和分析，可以发现异常细胞核的存在，从而提前发现和治疗疾病。
细胞核的分离与鉴定实验虽然简单，但对于我们理解细胞结构和功能具有重要意义。
通过这个实验，我们可以直观地观察到细胞核的存在和形态，进一步认识细胞的基本组成和结构。
同时，这个实验还可以应用于其他领域的研究，为我们的科学研究和医学诊断提供有力的支持。
从培养的细胞和组织中分离线粒体的方法和试剂下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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细胞核及线粒体的分级分离实验报告下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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核与线粒体分离提取方案线虫细胞核和线粒体提取N2同步化后，转移至培养皿，每皿大约4000条，2 day后到了mid-late L4，day5，day10，day15收集线虫（也有文献选择1、6、12、17day）。
初步计划收集10个皿线虫。
1.细胞核分离细胞核蛋白提取查阅的文献上都没提及是用哪个厂家的试剂盒，只简单说了自己采用的方法，也不是很具体。
查到一份Protocol采用蔗糖分离法提取细胞核，此方法开始是用于肝组织(Widnell and Tata 1964)，后来被用于动物软组织(Rickwood et al. 1997)，后来成功用于肌细胞和培养的细胞。
方法如下：1.在10cm细胞培养皿中培养的细胞系，直到它们达到90％汇合2.分离当天，吸出培养基，然后用冰冷的PBS清洗细胞。
吸出PBS。
3.将培养皿放在冰上，用1 mL PBS将细胞从板上刮掉。
转移将细胞加入到冰上的1.5mL离心管中。
4.以10000rpm短暂离心5-10秒。
5.吸掉上清液，并将沉淀物重悬在9个填充细胞体积均质培养基中6.用Potter-Elvehjem匀浆器将悬浮液均质化，冰上匀6次7.用棉布过滤匀浆8.在4℃下以600g离心滤液10分钟。
丢弃上清液。
用步骤5中一半体积的均匀培养基重悬沉淀。
4℃ 600g 离心10分钟。
丢弃上清液。
10.将9体积的高渗蔗糖缓冲液加入沉淀。
在Potter-Elvehjem匀浆器（5或6冲程）或Dounce均化器在冰上。
11.在4℃下以60,000g-80,000g离心匀浆80分钟。
12.翻转管子去除蔗糖。
从管壁擦去剩余的蔗糖，注意不要擦掉细胞核。
核在这个阶段保留其膜。
要卸下膜，请执行步骤13。
13.为了除去核膜，将来自步骤12的沉淀重悬含有0.5％Triton X-100的匀浆介质。
在4℃下以600g离心10分钟。
重复该过程。
最后，如果需要，用均质介质洗涤沉淀以除去剩余的TritonX-100。
细胞核和线粒体的分离实验报告实验五细胞核和线粒体的分离一、实验目的1、了解用差速离心的方法分级分离细胞组分的原理和过程。
2、熟悉离心机、匀浆器的使用方法。
二、实验原理1、分离纯化的方法为了研究某种细胞器的结构、功能或制备某种生物大分子，常需要大量采集细胞的某些亚组分，因此，有必要分离细胞器。
离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。
主要包括差速离心、密度梯度离心等方法。
差速离心：采取逐渐提高离心速度的方法分离大小不同的细胞器。
被分离的分子越小，需要的离心速度越高。
密度梯度离心：预先装入有一定密度梯度的材料（蔗糖或甘油），利用各种颗粒在梯度液中的沉降速度不同，使具有相同沉降速度的颗粒处于同梯度层内。
匀浆介质：常用介质是缓冲的蔗糖溶液（0.25mol/L）。
它比较接近细胞质的分散相，具有足够的渗透压，防止颗粒膨胀破裂，对酶活性干扰小，在pH7.2-7.4的条件下细胞器不易发生聚集。
2、细胞器的鉴定细胞核——姬姆萨染液线粒体——詹纳斯绿 B詹纳斯绿 B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
三、实验用品1、试剂:生理盐水、0.25mol/L蔗糖＋0.01mol/L Tris-盐酸缓冲液(pH7.4)、0.34mol/L蔗糖＋0.01mol/L Tris-盐酸缓冲液(pH7.4)、1%詹纳斯绿B 染液、姬姆萨染液2、材料: 兔子肝脏3、器材：解剖刀剪、小烧杯、冰浴、漏斗、尼龙织物、玻璃匀浆器4、设备：高速离心机四、实验步骤1、制备兔肝细胞匀浆：向兔血管注射空气针处死，剖腹取肝，迅速用生理盐水洗净血水，用滤纸吸干。
称取肝组织2g，剪碎，用预冷到0－4℃的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液洗涤数次。
然后在0－4℃条件下，按每克肝加9ml冷的0.25mol/L缓冲蔗糖溶液将肝组织匀浆化，蔗糖溶液应分数次添加，匀浆用双层尼龙织物过滤备用。
