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分子杂交技术用途分子杂交技术是一种通过组合两种不同的DNA序列，创造出一种新的DNA序列的技术。
这种技术已经得到广泛应用，可以被应用于医学、生物学和农业等领域。
以下是分子杂交技术的一些用途。
1. 检测基因突变分子杂交技术可以用于检测是否存在某种基因突变。
这项技术是通过将一种已知的DNA序列与待测的DNA序列进行组合来进行的。
如果待测的DNA序列存在突变，则杂交后的新DNA序列将会有所不同。
2. DNA序列比较分子杂交技术也可以用于比较两种不同的DNA序列。
这项技术是将两种DNA 序列组合在一起，然后通过对结果进行比较，来找出两种DNA序列之间的异同点。
这种技术在研究基因信息的时候非常有用。
3. 识别DNA结合蛋白DNA结合蛋白是一种可以与DNA序列结合的蛋白质。
它们在细胞中扮演着重要的角色。
分子杂交技术可以用来寻找与DNA结合蛋白结合的DNA序列。
这项技术可以帮助科学家确认蛋白质与DNA序列之间的交互作用，进一步探究蛋白质在细胞中的作用。
4. 进行原位杂交原位杂交是一种利用荧光或螢光染料标记DNA序列的技术。
这种标记可以让科学家在细胞或组织中观察DNA序列的位置。
分子杂交技术可以被用于原位杂交，从而帮助科学家对DNA序列在细胞内的分布和局部差异进行更好的了解。
5. 用于克隆分子杂交技术在基因克隆领域也得到了广泛的应用。
它被用于克隆具有特定功能的DNA序列。
通过将原有的DNA序列与待克隆的DNA序列进行组合，从而得到具有特定功能的新的DNA序列。
6. 鉴定感染病原体分子杂交技术还可以被用于鉴定感染病原体。
在不需要培养分离的情况下，通过直接检测DNA序列的存在，可以较精确地鉴定何种感染病原体引发的感染。
综上所述，分子杂交技术虽然应用广泛，但其最重要的意义在于基因探究及疾病检测的领域。
其实质为DNA的杂交，可以更好的帮助人们理解细胞和生命的本质工作，为人类疾病、农业和环境问题的解决提供了新的思路和方法。
四种分子杂交方式的区别流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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分子杂交名词解释
分子杂交是一种遗传学实验技术，用于研究基因的结构和功能。
分子杂交是通过将不同的DNA或RNA序列相互结合，形成
双链结构，从而研究这些序列的相互作用和功能。
这种方法可以用于检测和识别特定的DNA或RNA序列，研究基因的表
达和调控，以及寻找特定的基因突变。
在分子杂交中，两个不同的DNA或RNA序列被提取并标记。
这些标记可以是放射性同位素、酶或荧光染料。
然后，这些标记的序列与待测序列进行孵育，通过适当的条件，使其相互结合形成双链结构。
这样，可以用一系列的技术方法，如凝胶电泳或原位杂交等，对这些双链结构进行分析。
分子杂交有几种不同的应用。
首先，它可以用于检测和筛选
特定的DNA或RNA序列。
例如，研究人类基因组计划中，
分子杂交技术被用于筛选和检测特定的基因序列，以研究其在相关疾病中的作用。
其次，分子杂交可以用于研究基因的表达和调控。
通过将诱导表达的基因与特定的诱导条件相结合，可以研究基因在不同环境下的表达程度和调控机制。
此外，分子杂交还可以用于寻找特定的基因突变。
通过与正常基因进行比较，可以检测和鉴定基因突变，从而研究其在相关疾病中的作用。
总的来说，分子杂交是一种重要的遗传学实验技术，被广泛
应用于研究基因的结构和功能。
通过分子杂交技术，可以检测和识别特定的DNA或RNA序列，研究基因的表达和调控以
及寻找特定的基因突变。
这种方法为基因研究和疾病诊断提供了重要的工具和手段。
分子杂交概念
分子杂交是一种重要的实验室技术，用于合成具有特定特征的DNA或RNA分子。
它是通过将两个或多个不同的DNA或RNA序列结合在一起来创造新的分子。
这种技术可以用于多种目的，例如研究基因功能、学习分子相互作用、制备特定序列的DNA或RNA探针等。
在分子杂交中，通常使用互补配对的碱基序列来将两个分子结合在一起。
这通常涉及到将DNA或RNA序列引入到合适的载体中，例如质粒或病毒。
然后，在适当的条件下，这些载体与目标分子进行杂交，以使两者的序列结合形成新的复合分子。
分子杂交广泛应用于生物学和分子生物学研究中。
例如，分子杂交可以用来探索基因的结构和功能，通过将不同的DNA序列杂交，可以研究基因的编码区域、调控元件和其他功能区域。
此外，分子杂交还可用于检测特定的DNA或RNA序列，如通过合成特定的探针，可以用来检测病原体、突变基因或特定基因表达的组织。
总之，分子杂交是一种重要的实验技术，可以合成新的DNA或RNA分子，并用于多种生物学研究和应用中。
它为我们理解基因结构和功能，探索分子相互作用等提供了有力的工具。
分子杂交技术引言分子杂交技术是一种重要的实验手段，在生物学和生物化学领域被广泛应用。
它通过将两个不同源的核酸序列（DNA或RNA）进行杂交，从而得到具有特定性质和功能的新分子。
在本文中，我们将介绍分子杂交技术的原理、应用和未来发展方向。
原理分子杂交技术主要基于核酸的互补配对原理。
DNA和RNA 分子中的碱基有互补配对性质，即腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）或尿嘧啶（U）互补配对，鸟嘌呤（G）与胞嘧啶（C）互补配对。
在杂交过程中，两个互补的核酸序列会通过碱基间的氢键相互结合，形成一个稳定的双链结构。
应用分子克隆分子杂交技术在分子克隆中起到至关重要的作用。
通过将目标基因的DNA序列与载体DNA进行杂交，可以实现基因的定向克隆。
例如，使用限制性内切酶将目标基因和载体DNA切割开后，通过杂交技术将两者粘合在一起，形成重组DNA，然后可以通过转化、转染等手段将重组DNA导入到宿主细胞中，实现基因的表达。
基因探针分子杂交技术也被广泛应用于基因探针的设计和制备。
基因探针是一种用于检测目标基因在细胞或组织中表达情况的分子工具。
通过将特异性的探针与目标基因进行杂交，可以实现对目标基因的检测和定位。
分子杂交技术可以用于制备放射性或非放射性的探针，例如荧光探针或生物素标记的探针，从而实现对目标基因的高灵敏度和高特异性的检测。
基因组分析分子杂交技术还可以用于基因组分析。
例如，通过杂交技术可以将特异性的探针与目标基因组中的特定区域进行杂交，从而实现对基因组的定位和映射。
此外，分子杂交技术还可以用于研究基因组中的DNA重复序列、非编码RNA等。
DNA鉴定分子杂交技术在DNA鉴定领域也有广泛的应用。
例如，通过杂交技术可以将可疑犯罪嫌疑人的DNA样本与现场留下的DNA样本进行比对，以确定是否属于同一人。
此外，分子杂交技术还可以用于亲子鉴定、物种鉴定等。
未来发展方向随着科技的不断发展，分子杂交技术也在不断更新和发展。
未来，我们可以预见以下几个方面的发展：1.高通量分子杂交技术的发展：随着高通量测序技术的发展，分子杂交技术可以与测序技术结合，实现对大规模样本的高效分析，从而推动基因组学、转录组学等领域的研究进展。
分子杂交技术的原理及应用1. 引言分子杂交技术是一种在分子水平上研究和探索生命现象的方法。
它是通过将两个不同的DNA分子进行杂交，从而实现两者信息的交流和组合。
本文将重点介绍分子杂交技术的原理以及其在生物科学领域的应用。
2. 分子杂交技术的原理分子杂交技术的原理基于DNA的互补配对原则。
DNA是由四种碱基（腺嘌呤，鸟嘌呤，胸苷和胞嘧啶）组成的双螺旋结构，其中腺嘌呤与胞嘧啶之间通过氢键形成稳定的配对，鸟嘌呤与胸苷之间也通过氢键形成稳定的配对。
基于这种互补配对的原理，可以将两个不同的DNA分子通过杂交技术进行结合。
分子杂交技术主要包括以下几个步骤：2.1 DNA提取DNA提取是分子杂交技术的首要步骤。
可以通过破碎细胞膜，使用特定的试剂或酶来提取DNA。
2.2 DNA标记DNA标记是为了便于检测和分析杂交结果而给DNA分子添加或连接一些标记物，常见的标记物有放射性同位素、荧光染料和酶等。
2.3 DNA杂交DNA杂交是将两个标记过的DNA分子放在一起，使其互相配对。
杂交可以在液相中进行，也可以通过固相法在试剂盒中进行。
2.4 检测杂交结果检测杂交结果可以使用放射性测量、荧光检测或酶活性检测等方法。
这些方法可以帮助确定DNA分子之间的交流和结合情况。
3. 分子杂交技术的应用分子杂交技术在生物科学领域有广泛的应用，下面将介绍几个常见的应用领域：3.1 亲缘关系分析通过分子杂交技术，可以对家族成员之间的亲缘关系进行分析。
通过比较DNA 序列的相似性和差异性，可以判断是否存在血缘关系。
这对于进行亲子鉴定、法医学鉴定和家谱研究等方面具有重要意义。
3.2 病原体检测分子杂交技术可以应用于病原体的检测和鉴定。
通过将病原体的DNA与特异性探针进行杂交，可以快速准确地检测和鉴定病原体。
这在临床诊断和疫情监测方面具有重要的应用价值。
3.3 基因工程分子杂交技术在基因工程中也有广泛的应用。
通过将目的基因与载体DNA进行杂交，可以将目的基因导入到宿主细胞中，从而实现基因的转移和表达。
分子杂交技术原理引言：分子杂交技术是一种重要的生物技术手段，广泛应用于基因工程、农业育种、遗传疾病诊断等领域。
本文将介绍分子杂交技术的原理及其应用，以期加深对这一技术的理解。
一、分子杂交技术的基本原理分子杂交技术是通过将两种不同的DNA序列进行配对结合，从而产生新的DNA分子。
其基本原理可以简单地概括为以下几个步骤：1. DNA的提取和纯化：从目标生物体中提取所需的DNA，并经过一系列纯化步骤，以去除杂质和其他干扰物。
2. DNA的标记：将目标DNA标记上荧光染料或放射性同位素等标记物，以便于后续的检测和分析。
3. 杂交反应：将标记的目标DNA与待检测的DNA样本一起进行杂交反应。
这一步骤需要一定的条件，如适当的温度和盐浓度等。
4. 杂交后的检测：通过特定的检测方法，如Southern blotting或原位杂交等，对杂交后的DNA进行检测和分析。
二、分子杂交技术的应用分子杂交技术在生物学研究和应用中有着广泛的应用。
下面将重点介绍分子杂交技术在基因工程、农业育种和遗传疾病诊断等方面的应用。
1. 基因工程：分子杂交技术被广泛应用于基因工程领域。
通过将外源基因导入宿主细胞中，并与宿主基因进行杂交，可以实现基因的定点插入、基因的表达调控等功能。
2. 农业育种：分子杂交技术在农业育种中起到了重要的作用。
通过将不同植物或动物的优良基因进行杂交，可以培育出具有抗病性、高产性等优良性状的新品种。
3. 遗传疾病诊断：分子杂交技术在遗传疾病的诊断中具有重要意义。
通过将患者样本中的DNA与已知遗传病变相关的基因进行杂交，可以准确地检测出患者是否携带相关的遗传突变。
三、分子杂交技术的优势和局限性分子杂交技术作为一种重要的生物技术手段，具有以下优势：1. 高度特异性：分子杂交技术可以准确地检测目标DNA序列，具有高度特异性。
2. 灵敏度高：分子杂交技术可以检测到非常低浓度的目标DNA序列，具有很高的灵敏度。
3. 定量性强：分子杂交技术可以对目标DNA序列进行定量分析，可以精确地测量目标DNA的含量。
分子杂交名词解释
分子杂交是一种生物技术，其中利用体外条件下的超微量物质（细胞，基因，酶等），来实现两种不同物种的基因、细胞的混合，并以此来创造
一种新的有机体。
分子杂交技术将研究者与实验室之间的交流变得更加紧密，而且整个完成过程也更加便捷。
分子杂交技术可以分为遗传工程，其中利用不同物种之间的细菌、病
毒等材料，利用无节肢动物（尤其是海豚）来转化和改造基因。
其中又可
分为基因重组技术和基因变异技术，这些技术可以用来改变基因的组成，
改变有机体的遗传特征。
另一类是体外细胞杂交，利用两个或多个细胞体
系之间的对接，构成新的细胞群，从而形成新的有机体，其典型的应用就
是分子植物育种。
分子杂交技术在医学及农业领域都有广泛的应用，在医学研究中，它
可以用来创造抗性病毒、抗癌药物和抗心衰药物，从而治疗各种疾病；在
农业领域，它可以用来进行基因工程，改良作物性状，增加产量，改善质量，增强耐受性和抗病性，从而提高农业的生产率。
概述分子杂交的概念和应用领域。
分子杂交是一种重要的生物技术手段，广泛应用于基因工程、生物学研究和农业生产等领域。
它基于DNA互补性原则和DNA的重组能力，在体外合成或体内重组DNA分子，用来获得具有新功能或改良功能的重组DNA分子。
分子杂交技术的应用领域非常广泛，包括基因克隆、基因表达和功能研究、基因治疗、育种改良、疾病诊断等。
下面会逐一介绍这些领域中分子杂交的具体应用。
1.基因克隆：分子杂交可以用来克隆特定DNA序列或整个基因组DNA。
通过将感兴趣的DNA序列与DNA载体进行杂交，形成DNA杂交体，再经过细胞转化和复制，最终得到大量纯化的重组DNA。
基因克隆在基因组学研究、基因治疗、新药开发等领域都有广泛应用。
2.基因表达和功能研究：分子杂交可以用来构建转基因植物或动物，实现外源基因的表达。
将目标基因与适当的表达载体进行杂交，形成重组DNA，然后将其导入细胞，使得外源基因能够在细胞中进行表达。
通过转基因技术，可以揭示基因的功能及其调控机制。
3.基因治疗：分子杂交在基因治疗中起到重要的作用。
基因治疗是利用分子杂交技术将正常基因导入患者的细胞中，以修复或替代缺陷基因，从而治疗某些遗传性疾病。
分子杂交可通过将目标基因与载体DNA杂交，形成重组DNA，并导入患者的细胞中进行基因治疗。
4.育种改良：分子杂交在农业领域中广泛应用于育种改良。
通过分子杂交技术，可以将一种或多种优良基因导入植物或动物中，增加其抗病性、适应性、产量等优良性状。
分子杂交在培育高产量、优质、耐病害的经济作物和畜禽上有重要应用。
5.疾病诊断：分子杂交技术在疾病诊断中也起到重要作用。
例如，核酸杂交检测可以通过将临床样本中的DNA或RNA与特异性探针进行杂交，用来检测感染病原体、诊断遗传性疾病和肿瘤等。
总体而言，分子杂交是一种重要的生物技术手段，在基因工程、生物学研究和农业生产等领域有广泛的应用。
通过分子杂交技术可以克隆DNA、揭示基因功能、进行基因治疗、改良农作物和畜禽等，为人类社会的发展和健康作出了巨大贡献。
分子杂交技术分子杂交技术互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。
杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。
杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。
该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。
根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的，也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。
探针必须经过标记，以便示踪和检测。
使用最普遍的探针标记物是同位素, 但由于同位素的安全性，近年来发展了许多非同位素标记探针的方法。
核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。
因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。
第一节核酸探针标记的方法核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。
下面将介绍各种类型的探针及标记方法。
一、双链DNA探针及其标记方法分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。
双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。
1. 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时, DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。
同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。
由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,用放射性核苷酸代替原先无放射性的核苷酸，将放射性同位素掺入到合成新链中。
最合适的切口平移片段一般为50-500个核苷酸。
切口平移反应受几种因素的影响: (a) 产物的比活性取决于[α-32 P]dNTP的比活性和模板中核苷酸被置换的程度。
(b) DNA酶Ⅰ的用量和 DNA聚合酶的质量会影响产物片段的大小。
(c) DNA 模板中的抑制物如琼脂糖会抑制酶的活性, 故应使用仔细纯化后的DNA。
材料：待标记的DNA。
设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。
试剂：(1)10×切口平移缓冲液:L Tris·Cl ; L MgSO4 ; 10mmol/L DTT; 100μg/ml BSA。
(2)未标记的dNTP原液:除同位素标记的脱氧三磷酸核苷酸外,其余3种分别溶解于50mmol/L Tris·Cl 溶液中,浓度为L。
(3)[α-32 P] dCTP或[α-32 P]dATP:400 Ci/mmol, 10μCi/μl。
(4) DNA聚合酶Ⅰ(4单位/μ l):溶于50μ g/ml BSA, 1mmol/L DTT, 50%甘油，50mmol/L Tris·Cl中。
(5)DNA酶Ⅰ:1mg/ml。
(6)EDTA :200mmol/L 。
(7)10mol/L NH4Ac。
操作步骤:(1) 按下列配比混合:未标记的dNTP 10μl10×切口平移缓冲液5μl待标记的DNA 1μg[α-32 P]dCTP或dATP(70μCi) 7μlDNA聚合酶 4单位DAN酶I 1μl加水至终体积50μl(2) 置于15℃水浴60分钟。
(3) 加入5μl EDTA终止反应。
(4) 反应液中加入醋酸铵,使终浓度为L, 加入两倍体积预冷无水乙醇沉淀回收DNA探针。
[注意] 1、3H，32P及35S标记的dNTP都可使用于探针标记，但通常使用[α-32 P]-dNTP。
2、DNA酶Ⅰ的活性不同，所得到的探针比活性也不同，DNA酶Ⅰ活性高，则所得探针比活性高，但长度比较短。
2. 随机引物合成法随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。
合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。
通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。
利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活性,反应稳定,可以获得大量的有效探针。
(2)反应时对模板的要求不严格,用微量制备的质粒DNA模板也可进行反应。
(3)反应产物的比活性较高,可达4×109 cpm/μg探针。
(4)随机引物反应还可以在低熔点琼脂糖中直接进行。
材料：待标记的DNA片段。
设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。
试剂：(1)随机引物（随机六聚体或断裂的鲑鱼精子DNA）。
(2)10×随机标记缓冲液：900mmol/L HEPES ; 10mmol/L MgCl2。
(3)Klenow片段。
(4)20mmol/L DTT。
(5)未标记的dNTP溶液：dGTP、dCTP和dTTP溶液，各5mmol/L。
(6)[α-32 P] dATP：比活性>3000Ci/mmol, 10μCi/μl。
(7)缓冲液A：50mmol/L Tris·Cl （）; 50mmol/L NaCl; 5mmol/L EDTA （）; % SDS。
操作步骤:(1) 200ng双链DNA(1μl)和随机引物(1μl)混合后置于eppendorf管内,水浴煮沸5分钟后，立即置于冰浴中1分钟。
(2) 与此同时,尽快在一置于冰浴中的 eppendorf管内混合下列化合物:20mmol/L DTT 1μl未标记的dNTP溶液1μl10×随机标记缓冲液1μl[α-32 P] dATP(比活性>3000Ci/mmol; 10μCi/μl) 3μlddH2O 1μl(3) 将步骤(1)eppendorf管中的溶液移到步骤(2)管中。
(4) 加入5单位(约1μl) Klenow片段, 充分混合,在微型离心机中以12000g离心1-2秒, 使所有溶液沉于试管底部,在室温下保温3-16小时。
(5) 在反应液中加入10μl缓冲液A后,将放射性标记的探针保存在-20℃下备用。
同时计算放射比活性。
[注意]1、引物与模板的比例应仔细调整，当引物高于模板时，反应产物比较短，但产物的累积较多；反之，则可获得较长片段的探针。
2、模板DNA应是线性的，如为超螺旋DNA，则标记效率不足50%。
二、单链DNA探针用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。
而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。
采用单链探针则可解决这一问题。
单链DNA探针的合成方法主要有下列两种1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2) 以RNA为模板, 用反转录酶合成单链cDNA探针。
1. 从M13载体衍生序列合成单链DNA探针合成单链DNA探针可将模板序列克隆到噬粒或M13噬菌体载体中,以此为模板,以特定的通用引物或以人工合成的寡合苷酸为引物, 在[a-32P]-dNTP的存在下,由Klenow片段作用合成放射标记探针，反应完毕后得到部分双链分子。
在克隆序列内或下游用限制性内切酶切割这些长短不一的产物,然后通过变性凝胶电泳(如变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)将探针与模板分离开。
双链RF型M13 DNA也可用于单链DNA的制备,选用适当的引物即可制备正链或负链单链探针。
材料：已制备好的单链DNA模板（方法参见第十章中有关内容）。
设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。
试剂：(1)10×Klenow缓冲液：L NaCl, L Tris·Cl; L MgCl2。
(2)L DTT溶液。
(3) [α-32 P] dATP：3000Ci/mmol, 10μCi/μl。
(4)40mmol/L和20mmol/L的未标记的dNTP溶液。
(5)dCTP,dTTP,dGTP各20mmol/L的溶液。
(6) Klenow片段（5单位/ml）。
(7)适宜的限制酶，如EcoRⅠ、HindⅢ等。
(8)L EDTA （）。
操作步骤：(1)在 eppendorf管中混合如下溶液：单链模板（约） 1mg适当引物 5pmol10×Klenow缓冲液 3ml加水至 20ml(2)将eppendorf管加热到85℃ 5分钟，在30分钟内，使小离心管降到37℃；(3)依次加入：DTT 2ml[a-32P]dATP 5ml未标记的dATP 1mldGTP,dCTP,dTTP混合液 1ml混合均匀后，稍离心使之沉于试管底部。
(4)加1ml（5单位）Klenow酶室温下30分钟。
(5)加1ml20mmol/L未标记的dATP溶液20分钟。
(6)68℃加热10分钟，使Klenow片段失活。
调整NaCl浓度，使之适宜于酶切。
(7)加入20单位限制性内切酶（如EcoRⅠ, HindⅢ等）酶切1小时。
(8)酚/氯仿抽提DNA，乙醇沉淀以去除dNTP或加L EDTA至终浓度10mmol/L。
(9)用电泳方法分离放射性标记的探针。
2. 从RNA合成单链cDNA探针 cDNA单链探针主要用来分离cDNA文库中相应的基因。
用RNA为模板合成cDNA探针所用的引物有两种: (1)用寡聚dT为引物合成cDNA探针。
本方法只能用于带Poly(A)的mRNA,并且产生的探针极大多数偏向于mRNA 3'末端序列。
(2) 可用随机引物合成cDNA探针。
该法可避免上述缺点,产生比活性较高的探针。
但由于模板RNA中通常含有多种不同的RNA分子,所得探针的序列往往比以克隆DNA为模板所得的探针复杂得多, 应预先尽量富集mRNA中的目的序列。
反转录得到的产物RNA/DNA杂交双链经碱变性后,RNA单链可被迅速地降解成小片段,经Sephadex G-50柱层析即可得到单链探针。
材料：已提纯的RNA或mRNA设备：高速台式离心机，恒温水浴锅等。
试剂：(1)合适的引物：随机引物或oligo(dT)15-18。
(2)5mmol/L dGTP, dATP dCTP, dTTP。
(3) [a-32P]dCTP(>3000Ci/mmol, 10mCi/ml)。
(4)反转录酶(200000单位/ml)。
(5)100mmol/L DTT。
(6)250mmol/L MgCl2。
(7)1mol/L KCl。
(8)L EDTA 。
(9)10% SDS。
(10)RNasin(40单位/ml)。
操作步骤:(1)在已置于冰浴中的灭菌离心管中加入下列试剂：RNA或mRNA合适的产物(1mg/ml)1mol/L Tris·Cl1mol/L KCl250mmol/L MgCl25mmol/L dNTP[a-32P]dCTPL DTTRnasin 20U加水至 48ml反转录酶(200000单位/ml) 2ml混匀后,稍稍离心，37℃保温2小时。
