中国本土优良酵母筛选和性能研究实验报告
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酿酒酵母菌的筛选及性能评价第一章:引言酿酒是一项古老的饮食文化,其历史可以追溯到公元前6000年前的中国。
在现代,酿酒已经成为全球广泛的产业。
在酿酒过程中,酵母菌是其中不可或缺的重要成分之一。
酿酒酵母菌可以将谷物、水果和其他淀粉质原料发酵成酒精和二氧化碳,因此其筛选和性能评价显得尤为重要。
第二章:酿酒酵母菌的分类酒类酵母菌被分类为酒酵母和野生酵母两种。
酒酵母是在酿酒产业中使用的菌株,野生酵母是来自自然的菌株。
酵母菌一般分为两大类,即酿酒酵母和工业酵母。
工业酵母包括酵母菌、乳酸菌、细菌和酵母菌等,广泛应用于食品、药品和工业生产中。
第三章:酿酒酵母菌选育策略在酿酒过程中,酿酒酵母菌的选育过程是非常重要的。
选育过程中,一般采取以下策略:1. 从天然的酵母菌中进行挑选。
这是一种常见的策略,因为天然的酵母菌通常拥有比较好的适应性和稳定性。
2. 利用化学诱导或基因工程技术,使酿酒酵母菌产生更好的性能。
这种方法需要高度的技术,但可以使酿酒酵母菌的性能得到一定的提高。
3. 直接从商家购买优秀的酿酒酵母菌,或利用遗传学技术改良已有菌株。
第四章:酿酒酵母菌性能评价酿酒酵母菌的性能评价分为以下几个方面:1. 酵母菌的耐温性、耐酸碱性和适应性。
这是评价酵母菌的重要指标之一。
酵母菌的适应性能力好,可以适应多样化的温度和环境,使得酒类的产量和品质得到提高。
2. 酵母菌的发酵能力和产量。
这也是一个重要的指标,好的酵母菌可以加速发酵的速度,提高发酵的产量。
3. 酿酒酵母菌的产品质量和口感。
口感是最基本的指标,而且是消费者最关心的指标,酿酒酵母的好坏与酒类质量和口感密不可分。
第五章:酿酒酵母菌的未来发展在未来,酿酒酵母菌还有很大的发展空间。
一方面,可以通过探索新的菌株和新的酵母菌菌株来提高酿酒效率和酒类质量;另一方面,可以利用先进的技术手段来改良酿酒酵母菌的性能。
结论:本文简要介绍了酿酒酵母菌的筛选、评价以及未来的发展方向。
这些内容可以为酿酒业者提供一定的指导帮助。
伊犁地区发酵酸马乳优良酵母菌的筛选及其发酵性能研究目录一、内容简述 (2)1. 研究背景和意义 (3)2. 研究目的和任务 (4)3. 研究现状和发展趋势 (5)二、材料与方法 (6)1. 实验材料 (7)1.1 酸马乳样本 (8)1.2 培养基及试剂 (9)2. 实验方法 (10)2.1 酵母菌的筛选与分离 (11)2.2 酵母菌的鉴定与纯化培养 (12)2.3 酵母菌发酵性能研究 (13)三、伊犁地区发酵酸马乳酵母菌的筛选 (14)1. 酵母菌的初步筛选 (16)2. 酵母菌的分离与纯化 (16)3. 酵母菌的鉴定及分类 (17)四、酵母菌发酵性能研究 (18)1. 酵母菌的生长曲线测定 (19)2. 酵母菌的产酸性能研究 (20)3. 酵母菌的产乙醇性能研究 (22)4. 酵母菌的耐糖性能研究 (22)五、优良酵母菌的筛选及发酵性能评价 (23)1. 优良酵母菌的筛选标准 (24)2. 优良酵母菌的确定及发酵性能评价 (24)六、讨论与分析 (26)1. 伊犁地区发酵酸马乳酵母菌的多样性分析 (27)2. 酵母菌发酵性能与菌株特性的关系分析 (28)3. 优良酵母菌在实际应用中的潜力分析 (29)七、结论与建议 (30)1. 研究结论 (30)2. 研究创新点 (31)3. 对未来研究的建议与展望 (32)一、内容简述本研究旨在伊犁地区发掘并筛选出优良品质的酵母菌株,并通过系统性分析,研究其发酵性能,以期为开发优质的酸马乳产品提供理论和实践指导。
研究团队针对伊犁地区的自然环境,从多个牧场采集样本,运用微生物培养技术和分子生物学方法,对所采集样品中酵母菌群落进行全面的筛选与鉴定。
通过一系列的生长条件测试,如温度、pH、糖源浓度等,确定最适生长条件下的酵母菌株,进一步探究这些酵母菌株对马乳的酸化速度、产酸能力以及乳态维生素等产物的影响。
采用不同酵母菌株进行酸马乳的生物发酵实验,比较发酵前后的马乳理化特征变化,包括酸度变化、香气形成、乳凝效果以及口感改善等方面。
一、引言酿酒酵母细胞透明,呈圆形或椭圆形,形体比拟大,一般为7×12μm,含有转化酶能将葡萄汁中的糖转化成乙醇、二氧化碳和其它代谢产物。
优良纯种酵母应具备以下性能:〔1〕除酿酒水果本身的果香外,酵母也应产生良好的果香与酒香。
〔2〕生长速度快,有较高的发酵能力,能将糖分全部发酵完。
〔3〕具有较高能力,有较好的凝集力和较快的沉降速度。
〔4〕培养基成分简单,来源的抗S02广泛,价格低廉,对温度,pH,离子强度,溶氧等环境因素不敏感。
〔5〕能在低温或果酒适宜温度下发酵,以保持果香和新鲜清爽的口味。
由此可见,酵母的品质对果酒的产量和质量影响很大。
要获得优良的酿酒酵母,必须对其进展别离选育。
果酒酵母的筛选应从相应的果品及其种植环境中采样别离,如成熟果实的表皮、自然腐烂发酵的果肉或果汁和果园的土壤等相关场所。
根据实践经历,在果汁和自然发酵的果酒醪液中检出率较高,因为它们的基质环境与酿酒环境很相似。
为使我们需要的酵母易于检出,应对采集的样品进、调整pH 等手段抑制不需要展富集培养,通过设置较高的酒精浓度、添加SO2的微生物的生长,使希望检出的微生物得到增殖。
酵母检出后,应对其的发酵性能进展考察,包括酵母的一系列生理生化特性和风味物质形成的能力等,这些可通过作生理生化实验和三角瓶小型发酵实验分析和测定。
二、实验仪器与材料样品:新鲜苹果〔未经清洗〕榨汁。
YEPD 培养基〔富集培养基〕: 蛋白胨20g,葡萄糖20g,酵母膏10g,蒸馏水定容至1000ml. 〔每次根据需要量按如此比例配置,下同〕PDA培养基〔酿酒酵母培养基〕:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水定容至1000ml.〔马铃薯去皮,切成块煮沸后再煮30分钟,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂溶化后定容至1000 ml。
121℃灭菌30分钟。
〕PYG培养基〔菌种保藏培养基〕:蛋白胨3.5g,葡萄糖15g,酵母膏1.5g,KH2PO42.0 g,MgSO4·7H2O1.0 g,〔NH4〕2SO41.0 g,琼脂20g,蒸馏水定容至1000ml.试剂:亚硫酸钠、乙醇,碘液,无菌生理盐水等。
酵母在面粉发酵中的优良性测定广东海洋大学农学院10级农资罗洋664398广东海洋大学水产学院10级海科苏行697933广东海洋大学水产学院10级海科张敏657451摘要在日常生活中,面食是我们不可或缺的食品。
然而值得我们注意的是:同样是面食,可发酵后的馒头、面包就比大饼、面条等没有发酵的食品营养更丰富。
研究证明,酵母不仅改变了面团的结构,让它们变得更松软好吃,还大大地增加了馒头、面包的营养价值。
单就面粉中的蛋白含量来说,发酵前后其增量接近2倍。
该实验的目的即在:通过“双缩脲法”及“凯氏定氮法”来测定面粉发酵前后的蛋白含量差异来论证酵母发酵的优越性,并加以推广。
关键词:酵母发酵蛋白含量双缩脲法凯氏定氮法1、前言面粉的发酵方式有小苏打发酵、老面发酵、酵母发酵等,但除了酵母发酵外其他方法均有不利之处。
本实验作为验证性实验即通过测定面粉发酵前后的蛋白含量差异来论证酵母发酵的优越性。
由于发酵前后面粉的理化性质不同,故此实验可分为两个部分:1,未发酵的干燥面粉可以溶于有机溶剂四氯化碳所以采用“双缩脲法”来测定其蛋白含量。
2,发酵后的面粉呈糊状,无适当的试剂来将其溶解,故此处采用“凯氏定氮法”测量其蛋白含量。
2、实验目的测定未发酵及发酵过的面粉的蛋白含量,比较其差异值。
来证明酵母的发酵优良性。
3、实验原理3.1 双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。
在一定的浓度范围内,紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系(即:颜色的深浅与蛋白质浓度成正比)而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可在540nm 处比色用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质/ml。
干扰这一测定的物质主要此法的优点是较快速,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。
一、实验目的:1.通过酒母中酵母的筛选实验,熟悉微生物分离纯化、接种微生物操作实验;2.熟悉产酒精酵母的TTC显色平板等性能筛选实验;二、实验材料与仪器:培养基:YPD培养基、MEB、TTC显色培养基;酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%吕氏碱性美蓝仪器:灭菌锅、恒温培养箱、厌氧培养箱;移液管、涂布棒,接种环,平板、三角瓶、试管(15*150mm)、硅胶塞、杜氏小倒管、纱布、报纸;三、实验步骤:1.1 培养基的配制YPDS固体培养基(1L):称取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水当中,分装到三角瓶中后加入2%琼脂粉,115℃灭菌20min;注:为抑制霉菌菌丝的生长。
可在培养基中加入0.5%-1%的脱氧胆酸钠。
YPD液体培养基(1L):按YPDS配方配制,不加琼脂,121℃灭菌20min;TTC显色培养基:每100mlYPDS培养基中加入0.05g的TTC;1.2 酵母的分离纯化:1.2.1 梯度稀释将酒样混匀后取1ml加入到9ml的无菌水中制成10-1浓度梯度,之后从中取出1ml再加入到9ml的无菌水当中,浓度梯度为10-2,依次往下推,分别制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的菌液;1.2.2 涂布将稀释得到的10-2,10-3,10-4三个梯度的菌液取0.5 ml到预先倒好的TTC显色培养基平板中,沿一个方向均匀的进行涂布,然后将涂布好的平板用报纸包好避光培养,倒置于恒温厌氧培养箱中28℃培养2-3d。
1.3 酵母的保藏将划线纯化后的酵母菌株接种在YPDS斜面试管上,用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者,28℃培养1-2d,培养好后放置于4℃冰箱保存;四、实验结果1、对实验过程中所得到的实验结果进行拍照;注:左上图浓度梯度10-2,右上图浓度梯度10-3左下图浓度梯度10-4,右下图为酵母菌株接种在YPDS 斜面试管2、 记录所筛选到酵母菌株的颜色分级并进行编号;酵母菌株的颜色随浓度梯度增加而变深,如颜色深:10-2>10-3>10-4五、思考题1、涂布之前稀释的目的?答:稀释涂布平板的目的是降低菌的浓度.浓度过高的菌会在培养基上长出过多的菌落,以至于没法挑出单菌落,那样就无法获得单一种类的菌,或者无法统计菌落数来计算菌液浓度了.2、如何获得纯化的微生物菌株? 答:1)划线分离法2)稀释分离法3)组织分离法3、酵母菌TTC 筛选的原理是什么?答:TTC (2,3,5一氯化苯基四氮哇)是一种显示剂。
第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。
2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。
3. 筛选具有特定生理功能的菌株。
二、实验原理土壤中存在着大量的微生物,包括细菌、真菌、放线菌等。
通过选择合适的培养基和分离方法,可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。
本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法,对土壤样品进行分离纯化,并对筛选出的菌株进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料:土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。
2. 仪器:恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品处理:取一定量的土壤样品,用无菌水进行稀释,制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。
2. 分离纯化:(1)平板划线法:将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,用接种环进行划线分离,培养24小时后观察菌落形态。
(2)涂布分离法:将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,用无菌玻璃棒轻轻涂布,培养24小时后观察菌落形态。
3. 菌落鉴定:(1)形态特征观察:观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征,记录下来。
(2)生理生化试验:对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验,如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等,以确定菌株的属种。
4. 结果分析:根据形态特征和生理生化试验结果,对筛选出的菌株进行鉴定,并统计不同生理功能菌株的筛选数量。
五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察:在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,观察到不同形态的菌落,如圆形、卵圆形、长条形等,颜色有白色、黄色、红色等。
2. 生理生化试验结果:(1)革兰氏染色:部分菌株为革兰氏阳性菌,部分菌株为革兰氏阴性菌。
(2)氧化酶试验:部分菌株产生氧化酶,部分菌株不产生氧化酶。
(3)过氧化氢酶试验:部分菌株产生过氧化氢酶,部分菌株不产生过氧化氢酶。
3. 结果分析:根据形态特征和生理生化试验结果,筛选出以下具有特定生理功能的菌株:(1)革兰氏阳性菌:可能为葡萄球菌、链球菌等。
酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养[摘要]在无菌条件下,用紫外线对酵母菌(yeast)进行不同时长的照射诱变处理,选出合适的诱变菌种进行振荡培养。
经振荡培养后的诱变菌种运用正交试验设计的方法采用四个因素三个水平选出最适的菌种培养基,进行进一步的发酵培养。
在发酵罐中加入最适培养基成分和合适的酵母菌诱变菌种进行发酵扩培,最终获得大量的菌种和发酵产物。
[关键词]酵母菌,紫外线,最适培养基,正交试验设计,发酵培养面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种单细胞微生物,是酵母菌的一种,它含蛋白质50%左右,氨基酸含量高,富含B族维生素,还有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质。
几千年前人类就用面包酵母发酵面包和酒类,在现代食品工业方面,广泛用作人类主食面包、馒头、包子、饼干糕点等食品的优良发酵剂和营养剂。
本实验选用的物理诱变因子为紫外线,DNA能强烈吸收紫外线,尤其是碱基中的胸腺嘧啶,从而在形成二聚体,改变DNA结构,引起基因突变。
本实验的面包酵母菌经不同时长的紫外线诱变处理,培养出的适合的诱变菌种进行最适的菌种培养基的筛选和发酵培养。
最适菌种培养基的筛选是通过正交实验设计进行的。
正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法,它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验,这些有代表性的点具备了“均匀分散,齐整可比”的特点,正交试验设计是分式析因设计的主要方法,是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。
正交表是一整套规则的设计表格,用L为正交表的代号,n为试验的次数,t为水平数,c为列数,也就是可能安排最多的因素个数,本实验采用了四因素三水平进行最适培养基的筛选。
选出合适的诱变菌种和适合诱变的酵母菌生长的培养基后,便可以能过发酵罐进行发酵培养,分时段观察记录发酵过程中的PH,溶氧,菌种数。
绘制出面包酵母的生长曲线1材料与方法1.1实验材料菌种:面包酵母菌仪器:高压蒸汽灭菌锅,超净工作台,光学显微镜,恒温培养摇床,分析天平,小型发酵罐用品:枪头及1mL和0.5mL移液器,三角瓶,试管,玻璃涂棒,平皿,血球计数板,酒精灯,棉塞,试管架,盖玻片,记号笔试剂:酵母膏,蛋白胨,(NH4)SO4,葡萄糖PDA培养基,PDA液体培养基(不加琼脂):去皮马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、自来水1000毫升、自然PH [其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸半个小时,纱布过滤,再加10~20g葡萄糖和17~20g琼脂,,高压蒸气(121℃)灭菌20分钟,冷却后贮存备用。
本土葡萄酒酵母的选育及低醇葡萄酒的酿造的开题报告一、研究背景葡萄酒是一种历史悠久的饮品,源远流长,许多国家拥有自己的酒文化和酿酒技术。
在中国,葡萄酒产业逐渐兴起并发展壮大,但由于气候环境和酿酒技术等方面的限制,国产葡萄酒在品质上与国外同类产品相比还有较大差距。
在酿酒技术方面,其中一个重要的环节是酵母的选育和应用。
目前,国产葡萄酒酵母多数来自国外进口,而这些酵母对环境适应性不足,会影响酒的风味和品质。
因此,通过选育适应中国本土环境的葡萄酒酵母,可以提升国产葡萄酒的品质和特色。
此外,近年来,随着消费者健康意识逐渐增强,低度酒的市场需求也在逐步上升。
因此,研究低醇葡萄酒的酿造技术,可以满足市场需求,同时也有利于葡萄酒产业的可持续发展。
二、研究内容和方法本研究将以国产葡萄酒酵母的选育和低醇葡萄酒的酿造为主要研究内容。
具体研究方法如下:1. 对国内不同产区的葡萄酒酵母进行筛选和鉴定,选出适应中国本土环境的优质酵母菌种。
2. 对所选菌种进行实验室和酒厂试验,考察其在酿造葡萄酒中的发酵特性和对酒品质的影响。
3. 研究低醇葡萄酒的酿造技术,通过调整发酵条件、控制酒精度数等方式,制备出口感醇厚、香气纯正的低醇葡萄酒。
4. 运用化学成分分析等方法,对所酿葡萄酒的香气、口感、色泽等进行综合评估,探讨葡萄酒酵母和酿造工艺对酒品质的影响。
三、研究意义本研究的意义如下:1. 选育适应中国本土环境的葡萄酒酵母,可以提升国产葡萄酒的品质和特色,促进葡萄酒产业的可持续发展。
2. 研究低醇葡萄酒的酿造技术,可以适应市场需求,满足消费者健康需求,同时也有利于葡萄酒产业的可持续发展。
3. 通过研究酿造工艺和葡萄酒酵母对酒品质的影响,可以为国内葡萄酒生产企业提供技术支持和科研参考,推动国内葡萄酒产业的发展和提高。
四、研究计划安排本研究预计在两年内完成,主要安排如下:第一年:1. 文献阅读和理论研究,对国内外葡萄酒酵母选育和低醇葡萄酒酿造技术进行全面了解。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤:
1.实验前准备:准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品,加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理:将悬浮液通过过滤器过滤,以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基:根据酵母菌的生长要求,配制适宜的培养基。
5.接种培养基:将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面,避免接种过多的菌落。
6.培养条件:将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果:在培养一定时间后,观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化:选择单个菌落,用无菌技术将其移至新的培养基上,重复培养步骤,直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果:
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态,颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下,酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构,直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面,并具有边缘清晰的特点。
实验结论:
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验,成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一,符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
实验报告
中国本土优良酵母筛选和性能研究
1. 实验目的
酿酒酵母细胞透明,呈圆形或椭圆形,形体比较大,一般为7×12μm,其转化酶能将葡萄汁中的糖转化成乙醇、二氧化碳和其它代谢产物。
优良纯种酵母应具备下列性能:(1)除酿酒葡萄本身的品种香外,酵母也应产生良好的果香与酒香;(2)生长速度快,有较高的发酵能力,能将糖分全部发酵完;(3)具有较高的抗SO2能力,有较好的凝集力和较快的沉降速度;(4)培养基成分简单,来源广泛,价格低廉,对温度,pH,离子强度,溶氧等环境因素不敏感;(5)能在低温或适宜温度下发酵,以保持果香和新鲜清爽的口味。
由此可见,酵母的品质对葡萄酒的产量和质量影响很大。
要获得优良的酿酒酵母,必须对其进行分离选育。
葡萄酒酵母的筛选后,应对其的发酵性能进行考察,包括酵母的一系列生理生化特性和风味物质形成的能力等。
通过对本土酵母筛选和性能研究,可以掌握酵母培养基和酵母菌的接种方式,酵母菌的细胞形态及生长繁殖过程,酵母菌筛选方法和步骤,同时掌握其性能研究方式。
2. 实验原理
培养基是微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。
通常根据微生物生长繁殖所需要的各种营养物配制而成。
其中含水分、碳水化合物、氮化合物、无机盐和生长因子等,这些营养物可提供微生物碳源、能源、氯源等,组成细胞及调节代谢活动。
按培养目的不同,或微生物种类不同可配成各种培养基。
不同微生物对pH值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不同微生物对pH值的要求将培养基调到合适的pH值范围。
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落,通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的,故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
3. 材料和培养基
3.1 材料和仪器
葡萄酒样品、玻璃培养皿、高压灭菌锅等;
3.2.1 WL培养基
琼脂20 g/L,葡萄糖50 g/L,蛋白胨5 g/L,酵母浸粉4 g/L,储液A 4%,储液B 0.1%,储液C 0.11%,pH自然(储液A:磷酸二氢钾13.75 g/L、氯化钾10.625 g/L、氯化钙3.125 g/L、硫酸镁3.125 g/L;储液B:三氯化铁2.5 g/L、硫酸锰2.5 g/L;储液C:0.444 g溴甲酚绿溶于10 mL蒸馏水,与10 mL 95乙醇混合)。
3.2.2 YPD培养基
酵母浸粉10 g/L,葡萄糖20 g/L,蛋白胨20 g/L,w/v,pH自然。
3.2.3 模拟葡萄汁培养基
葡萄糖100 g/L,果糖100 g/L,酒石酸5 g/L,苹果酸5 g/L,磷酸二氢钾5 g/L,硫酸铵2 g/L,七水合硫酸镁0.586 g/L,一水合柠檬酸0.328 g/L,NaCl 0.2 g/L,一水合硫酸锰0.056 g/L,酵母浸粉1.5 g/L,用9 mol/L的NaOH调节pH至3.5。
4. 实验步骤
4.1 酵母菌的分离初筛
4.1.1 酵母菌接种
葡萄酒样品镜检后计算出酵母菌菌落大约数量,然后根据培养基生长100个菌落左右来确定样品稀释倍数。
配制WL培养液于500ml三角瓶内并高温灭菌,短时间冷却到56-60℃后,在超净工作台的酒精灯火焰旁边倒平板。
将酵母菌按梯度稀释后,分别标记好10、102、103、104、105 五种稀释液。
待培养基冷却凝固后分别取104、105浓度的适量酵母菌样品接种于两个玻璃培养皿,然后在适宜条件下培养一段时间。
4.1.2 酵母菌分离纯化
待菌种长出小菌落后,配制YPD培养液于500ml三角瓶内并高温灭菌,短时间冷却56-60℃后,在超净工作台的酒精灯火焰旁边倒平板。
观察WL培养基中酵母菌生长情况并简单鉴定后,将长势良好并鉴定完毕的酵母菌群挑取于YPD平板划线并标号后28℃恒温培养。
待再次长出单菌落后,挑取划线于YPD 培养基上,28℃恒温培养,菌种划线三到四次后基本纯化。
4.2 酿酒酵母鉴定
4.2.1 形态与培养特征
将菌种接种到WL培养基中,25℃培养3~7d,观察是否发酵、培养液是否混浊,是否形成环或岛,沉淀量多少及松紧状况,以及酵母细胞的形状大小。
将酵母在YPD培养基上划线,于28℃培养3d~4d,观察其菌落形态并确定所筛选出的酵母菌品类。
4.3 筛选酵母菌性能研究
配制模拟葡萄汁培养基,然后取30ml装于50ml 离心管中。
然后接种分离后的酵母菌于模拟酒中,每天观察其发酵情况及分析其发酵性能。
第一天:模拟汁无明显变化,酵母菌发酵不明显;
第二天:酵母发酵不明显,有极少微小气泡;
第三天:开始有少量小气泡;
第四天:有小气泡,开始有香气、啤酒香;
第五~十五天:继续发酵,气泡明显,有轻微果香和二类香气,香气较协调,开始出现沉淀;
第十六~十八天:继续发酵,气泡变少;
第十九天:果香花香比较突出,香气较协调,沉淀较少;
第二十天:基本上停止发酵。
5. 分析与讨论
酿酒酵母属于酵母菌的一种,具有酵母菌的大部分特征与生理习性,影响因素也几近相同。
酿酒酵母同其他的活的有机体一样需要相似的营养物质,它有一套胞内和胞外酶系统,用以将大分子物质分解成细胞新陈代谢易利用的小分子物质。
属于异养微生物。
培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同,营养类型各异以及实验目的不同,因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同,在配置时根据微生物对温度、pH等要求选择合适的培养条件。
酿酒酵母菌在酸性条件下,发酵能力最强,最适pH值为pH4.5~5.0;同时酿酒酵母还是一种嗜温性微生物,它的最低温度是1~3℃,最高温度是54℃,最适生长温度一般在20℃~30℃。
接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染,关键在于严格进行正确的无菌操作,但是绝对无菌是不可能的,只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
葡萄酒样品中酵母菌种类较多,通过稀释并接种培养后可以筛选分离获得形状良好的酵母菌,筛选后的酵母菌在模拟酒中表现较好,发酵性能良好,可以产生较愉快的香气。
6. 心得与体会
正如我们所知,微生物也有着不一样的特点和生活方式,对葡萄酒的工业生产有着好或坏的影响。
只有当我们能真实的认识这些微生物以后,我们才能够更好地与它们和睦共处。
此次中国本土优良酵母筛选及性能研究实验让我得到了很多的锻炼。
自然在此次实验也裸露出了我们好多的问题。
例如实验用的原料比率我们都未能很好的掌握。
可是随后经过我们的不懈努力,最后仍是比较圆满的达成了任务。
实验中我们先对培育基进行了制备,然后按照规范操作完成了一系列实验,为获得预期结果奠定了基础。
此次实验还增强了我们小组之间配合的默契程度,我们小组分工合作,井井有条,经过大家共同的努力,我们的实验达成的很快。
并且也使我们每一个人的着手能力的都获取了较好的锻炼。
实验中其余组做的实验也赐予了我们很大的帮助,大家互相帮助,对我们实验过程应该注意的操作给了许多诚心适用的建议。
因此,在这次实验中,我们不仅加深了对葡萄酒微生物的了解以及其分离筛选的方法,还学习到了许多实验操作和注意事项,为我们以后的学习和科研奠定了良好的基础。