葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。

2）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。

3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。

主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。

4 人E选择素(ESelectin/CD62E)检测试剂盒包被：将免疫活性物质(抗原或抗体)结合于固相载体上的过程称为包被。

常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。

常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：用无菌管收集。

离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

（5）培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0930规格：50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；试剂四：液体×1支，-20℃保存；产品说明：葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。

3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

g6pd实验室检查项目G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）是一种重要的酶，它在人体中扮演着关键角色。

G6PD实验室检查项目是通过测量血液中G6PD酶的活性来评估患者是否存在G6PD缺乏或缺陷。

下面将详细介绍G6PD实验室检查项目的意义、方法和结果的解读。

G6PD是一种参与氧化还原过程中的酶，它在细胞内负责将葡萄糖-6-磷酸转化为6-磷酸葡萄糖，并产生NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐），NADPH在细胞内起着重要的抗氧化作用，并参与脂质和蛋白质的合成。

如果G6PD酶活性降低或存在突变，会导致G6PD缺乏或缺陷，并进而引发一系列相关疾病。

G6PD实验室检查一般采用静脉采血的方式进行，通常在早上空腹进行。

采集的血液样本会送到实验室进行检测。

目前最常用的检测方法是测量血液中G6PD酶的活性水平。

该方法主要通过检测血红蛋白的还原能力，由于G6PD在氧化磷酸葡萄糖过程中产生的NADPH对还原剂有较强的还原能力，故G6PD活性越高，还原能力越强。

常见的测定方法有定量比色法、酶免疫测定法和筛选性比色法等。

G6PD实验室检查的结果通常是通过比较被测者的G6PD活性水平与正常参考范围来进行判断。

一般来说，正常成年人的G6PD活性范围在4-15单位/克血红蛋白。

如果活性水平低于正常范围，说明该患者存在G6PD缺乏或缺陷。

根据不同的检测方法和实验室的设备和标准，可能会有略微的差异，因此准确的结果需要结合临床医生的判断。

G6PD缺乏或缺陷与一些药物和食物有关，例如氯喹（抗疟疾药）、石碱（染料）和苯妥英钠（抗癫痫药物）等。

对于患有G6PD缺陷的人，这些药物或食物可能会引发溶血危机。

因此，在临床应用中，如果患者怀疑自己患有G6PD缺乏或缺陷，或者需要使用相关药物治疗，就需要进行G6PD实验室检查。

G6PD缺乏或缺陷是一种遗传性疾病，主要表现为溶血性贫血和黄疸。

在溶血危机期间，患者的红细胞会受到破坏，导致贫血。

黄疸是由于溶血引起的大量胆红素释放到血液中，无法被肝脏正常代谢而堆积在体内。

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC2100规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

；产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的处理称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。

3.加样表：在比色皿中依次加入试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL）样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。

记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。

三、6PGDH活性计算：1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。

6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr（2）按样本鲜重计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。

葡萄糖-6-磷酸检测标准葡萄糖-6-磷酸(G6PD)缺乏是遗传性的红细胞缺陷，影响到葡萄糖代谢。

该缺陷可能会在接触到某些药物、疾病或环境压力后导致溶血性贫血。

因此，对G6PD缺乏的筛查尤为重要，而G6PD缺乏筛查的标准就是G6PD检测。

G6PD检测是通过分析红细胞中G6PD酶活性来确定G6PD缺乏。

下面将会介绍G6PD检测的标准方法。

1. G6PD活性检测G6PD活性检测是最常见的G6PD检测方法，它的思路是测量红细胞中G6PD酶的活性。

常用的测量方法有酵母三磷酸脱氢酶(yeast triosephosphate dehydrogenase)法和比色法。

酵母三磷酸脱氢酶法的原理是比较待测血液与正常血液在同一时间内对酵母三磷酸脱氢酶活性的变化，然后计算G6PD酶活性。

比色法是根据G6PD酶的还原剂作用来测量NADP/H的形成。

在进行G6PD活性检测的时候，需要注意以下几点：1)对于新生儿，G6PD酶活性会在出生后数日内升高，因此最好在出生后1个月后再测量。

2)血液抽取应注意避免对红细胞的损伤，通常采用静脉抽血或经表皮血流动力学监测系统(EMLA)麻醉后进行皮下抽血。

3)使用酶活性仪分析，不同仪器标准、笔头、反应体积等有较大影响，不同仪器的测量结果并不一致。

2.基因检测基因检测是另一种诊断G6PD缺乏的方法，其思路是检测G6PD基因的序列或突变。

现代基因检测技术使得这种方法越来越准确和可靠。

基因检测的优点是能够检测到隐性G6PD缺乏，而基于酶活性的检测方法无法检测到隐性缺陷。

此外，基因检测也更能够指导个性化的治疗计划。

3.红细胞形态学检测红细胞形态学检测是另一种筛查G6PD缺乏的方法。

红细胞在G6PD 缺乏的情况下更容易受损或产生微小的有色附着物质。

通过检查血涂片上红细胞的形态和有色附着物质，就可以初步判断是否存在G6PD缺乏的可能性。

在实际检测中，红细胞形态学检测通常与G6PD活性检测或基因检测结合使用，以增强诊断准确性。

小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E0716m10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

11. 覆膜：5张12. 使用说明书：1份自备物品1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加样品稀释液50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl（在使用前半小时内配制），轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3. 弃去液体，甩干，洗板3次。

每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介：葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。

Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下：G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。

在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min)，上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。

100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、预备溶血液：取新奇抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。

临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。

4℃保存10h ，编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。

6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测定方法(1)6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定方法根据文献略有改动6979。

测定反应体系(5ml)为：0.1mI浓度为1M的Tris-HCl缓冲液、0.1ml 浓度为25mM的底物G-6-P溶液、0.1ml浓度为2mM的NADP+、0.1ml 浓度为0. 2 M的氯化镁溶液及2.5ml ddH20，混合均匀后，在340 nm 下测定吸光度值A0，作为空白值。

再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与25℃条件下保温，每30S于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。

以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。

根据公式计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟G6PDH催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。

式中：△A/min为340 nm处每分钟吸光度的变化值；V为酶促反应体积(mL)；为NADH的摩尔消光系数(6.22×103L／mol·cm-1)；b 为比色皿光程(cm)。

(2)苹果酸酶(ME)活力测定测定反应体系(3ml)为：0.5 mI浓度为0.4 M的Tris-HCl缓冲液、0.1 ml 浓度为30 mM的底物苹果酸溶液、0.2ml浓度为3.4 mM的NADP+、0.1ml浓度为0.12 M的氯化镁溶液及2 ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。

再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与250C条件下保温，每30s于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。

以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。

根据公式2-1计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟ME催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。

赣州市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症筛查分析发布时间：2022-03-10T06:01:38.876Z 来源：《医师在线》2021年11月22期作者：刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤[导读]刘聪邹翠翠李小玉张丽琴肖德俊唐金凤（赣州市人民医院检验科分子遗传室；江西赣州341000）[摘要] 目的对赣州市新生儿葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD）缺失症的基因测序结果进行分析。

方法收集赣州市2018年11月至2019年11月出生的共计1000例新生儿标本，采用酶法进行G6PD活性筛查，并对筛查阳性者进行基因测序分析。

结果初筛检出50例阳性，初筛阳性率为2.0%，其中男性 44例，女性6例；通过对50例阳性患者进行基因测序分析。

结论总体赣州市新生儿G6PD突变率较低，其中以G1388A为主，G1376T次之，A95G较少见，采用G6PD酶活性检测有利于提高女性杂合子表型存在差异的患者的检测率。

[关键词] 新生儿；葡萄糖-6磷酸脱氢酶缺乏症；酶法；实时荧光定量法Screening and analysis of neonatal glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in Ganzhou [Abstract] Objective To investigate the distribution of glucose-6 phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency in newborns in Ganzhou city. Methods A total of 1,000 specimens of newborns born in Ganzhou City from November 2018 to November 2019 were collected, and G6PD activity was screened by the enzymatic method, and gene sequencing analysis was performed on those who were screened positive. Result Preliminary screening detected 50 positive cases, with a positive rate of 2.0%, including 44 male cases and 6 female cases. Gene sequencing was performed in 50 positive patients. Conclusion Overall, the neonatal rate of G6PD mutation rate is low, among which G1388A is followed by G1376T and A95G is rare. The detection of G6PD enzyme activity is conducive to improve the detection rate of female patients with different heterozygous phenotypes [Keywords] The newborn; Glucose-6 phosphate dehydrogenase deficiency; Enzym-atic; Real-time fluorescence quantification葡萄糖-6磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase,G-6PD）缺乏症是人类常见的酶缺陷遗传病之一，该酶是磷酸戊糖旁路途径的第一个限速酶，伴有X染色体不完全显性，其发病率存在地区与种族差异[1]，迄今全球有近4亿人发病[2]。