薄层色谱扫描法

薄层扫描法薄层扫描法一、定义薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。

回顾薄层色谱法（TLC)1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)4、检视(在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪的组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。

每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。

（1）分光器及测量范围大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。

（2）光源及检测器光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。

操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。

表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、TLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。

1. 薄层吸收扫描法的基本原理薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A—L 成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。

曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。

由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。

该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。

定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。

薄层扫描法一、定义ﻭ薄层扫描法(TLCＳ)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC)系指用一定得波长得光照射在薄层板上,对薄层色谱中有紫外或可见吸收得斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描,将扫描得到得图谱及积分值用于药品定性定量得分析方法。

ﻭ回顾薄层色谱法（TLC）1、薄层板得制备(硅胶板,Aｌ２O3板,聚酰胺薄膜等)ﻭ2、点样(选择合适得展开剂，在薄板底1cm处画基线,点样)3、展开(浸入展开剂，展开到距薄板顶端１～2cm)4、检视（在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪得组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产,型号不同,仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能就是基本相同得。

每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。

ﻫ(１)分光器及测量范围大多数薄层扫描仪得分光器为光栅，少数为棱镜,极个别得用滤光片,其测量范围光栅为200－800nm,棱镜为２0０－２500nm。

ﻫ(２)光源及检测器ﻫ光源室具有可见光源钨灯,波长范围为４０0-800,紫外光源氘灯波长范围为２00-4０0nm，荧光光源为氙灯或汞灯。

操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜得位置;检测器一般为光电倍增管。

表７-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、ＴLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。

ﻭ１、薄层吸收扫描法得基本原理ﻭ薄层吸收扫描法就是用可见光或紫外线得单色光照射展开后得薄层色谱板,测定薄层色谱斑点(简称斑点)得吸光度(A）随展开压离(L)得变化,而获得A—Ｌ成A—Ｒf曲线,即薄层色谱扫描图(简称扫描图）。

ﻭ曲线上得色谱峰峰面积可用于定量分析。

由于薄层板存在着明显得散射现象,而使斑点中物质得浓度与吸光度得关系不服从Ｂｅｅｒ定律,所以需田Kubelｋa—Ｍunk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。

该方程式就是薄层扫描法得定量分析基础。

定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。

薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。

1.仪器与材料（1）薄层板市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。

自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。

最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%~0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。

使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

（2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

（3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸，展开时须能密闭，水平展开用专用的水平展开缸。

（4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出，浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

（5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。

（6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。

2.操作方法(1) 薄层板制备市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。

聚酰胺薄膜不需活化。

铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。

如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。

薄层扫描法是用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有紫外光和可见光吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。

薄层扫描法具有分离效能高、快速、简便等特点，因而适用于中药的分析。

薄层扫描法虽然精密度不如HPLC法高，但可作为补充，，用于无紫外吸收，或不能用HPLC法分析的组分如人参皂甙、贝母生物碱等。

试验条件的选择薄层色谱条件：原则组分应完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾。

（2）检测方法：吸收测定法和荧光测定法两种。

在可见、紫外区有吸收的组分，可在200~800nm范围内采用吸收测定法测定。

有荧光的组分，可选择好激发光波长（λex）和发射波长（λem），用荧光法具有专属性强、灵敏度高和线性范围宽度等特点。

（3）测量方法：有反射法和透射法两种。

反射法是将光束照射到薄层斑点上，测量反射光的强度；反射光灵敏度较低，受薄层厚度影响较小，基线较稳，信噪比较大，因而使用较多。

透射法受薄层厚度影响较大，且玻璃对紫外光有吸收，所以实际应用较少。

（4）扫描方式：有单波长和双波长两种。

双波长是两束不同波长的光，一束测量样品称测定波长（λS）；另一束作为对照，称参比波长（λR）。

两束光通过斩光器交替照射到斑点上，以吸收度之差ΔA定量。

双波长可以消除薄层不均匀的影响，使基线变得平稳。

测定波长一般选测定组分的最大吸收波长，参比波长可选在组分无吸收的位置，若背景光谱中与λS的等吸收处，可达到排除背景干扰的目的。

单波长法通常用斑点吸收光谱的测定。

扫描方式还有线性扫描和锯齿扫描：线性扫描是用一束比斑点略长的光作单向扫描，扫描速度快，但斑点形状不规则或浓度不均匀时误差大，主要用于荧光测定；锯齿扫描是用一微小的光束同时互相垂直的两个方向进行锯齿状扫描，由于光束小（1.25mm*1.25mm），光束内部浓度差异可以忽略不计，因而受斑点形状和浓度分布的影响小。

（5）散射参数SX：由于薄层对光散射，其吸收度A和浓度KX之间不服从比尔定律，而符合K-M方程，其吸收度由于散射而减小，A-KX曲线偏向横轴，不成直线，其形状与SX有关。

药品薄层色谱扫描法一目的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。

二适用范围：适用于薄层扫描法的测定。

三责任者：品控部。

四正文：1.简述薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。

2.仪器2.1 仪器构成薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。

该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。

光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。

单色器：包括光栅与夹缝。

入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。

由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。

薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。

检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。

反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。

透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。

数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。

如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。

2.2 仪器性能检定2.2.1 仪器波长准确度的检查用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确度，汞灯谱线的已知波长为253.6、313.0、334.2、365.0、404.7、435.8、546.1、578.0nm，有的仪器规定波长准确度应不大于±8nm。

薄层色谱扫描法标准操作规程1 简述薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。

所得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。

薄层色谱扫描法可分为吸收法和荧光法。

扫描时测定薄层板上的方法称为荧光法。

吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。

反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。

荧光法测定均采用反射法。

透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。

薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。

单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。

双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。

根据扫描时光束的轨迹不同，波长色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。

线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向作单向等速扫描，它适合于形状较规则斑点的扫描。

锯齿扫描是用使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行反复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。

在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分照射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。

因此，波长扫描定量一般不符合Lambert-Beer定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk方程：（1-R）2/R=2.303εC/S其中R为反射光强，ε为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。

由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响波长扫描反射法定量的工作曲线方程。

薄层色谱扫描法范文
一、薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描（TLC）是一种常用的分析技术，它利用各种有机溶剂在特定表面上，对物质产生的色彩分布，以及气相中分子的不同分子间作用力，来确定和分离物质的组成。

它最早是用于无机或有机物质的分析，但现在它也被广泛用于生物分析。

1.原理
薄层色谱扫描的原理是用溶剂去溶解和挥发溶质，以及使溶质在色谱板上分层定位静电膜的动力学过程。

在色谱板上，每一列都有一个相同的溶剂组成，每一排都有不同的溶剂组成，这样，溶剂中的溶质就可以在色谱板上分布开来，形成一个拓扑结构，并且可以清楚的看到每一种溶质在色谱板上移动的路径。

2.操作原理
TLC操作原理比较简单，主要包括几个步骤：装载样品，用溶剂溶解样品，用色谱板浸渍溶剂，用极性梯度溶剂测定溶质移动路径，以及用高温条件烘烤色谱板，使溶质分离。

装载样品是在涂层技术的基础上，将样品溶质涂布于色谱板上，这些涂层应当是薄而稳定的，使得色谱板能够被有效的渗透。

tlc薄层色谱法薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。

待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。

薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。

一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

吸附是表面的一个重要性质。

任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。

在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。

物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。

在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。

而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。

吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。

在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。

吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。

例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。

当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。

第二部分色谱分析第一章薄层色谱法（TLC）一薄层色谱法概述薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。

与HPLC不同，TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。

被分离的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现混合组分分离。

被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。

薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快，高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复杂混合物等特点。

二薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和展开（一）薄层板TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。

可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。

此外，固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对其色谱行为产生影响。

（1）载体对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格适宜。

（2）固定相TLC固定相包括改性固定相和未改性固定相两类。

硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。

（3）粘合剂在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附剂薄层紧密的附着在载板上。

常用的粘合剂可分为无机粘合剂和有机粘合剂两类。

（4）荧光指示剂荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点）定位的试剂。

加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在激发光波照射下显出清晰的荧光，便于检测。

（二）薄层板的涂铺涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法及浸渍法四类，其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。

TLC固定相薄层涂铺大多采用湿法匀浆，要求薄层均匀、平整、无气泡、不易造成凹坑和龟裂。

薄层板活化处理可以获得适宜活性，提高色谱分离效率和选择性。

薄层扫描法一、定义薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。

回顾薄层色谱法（TLC)1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)4、检视(在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪的组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。

每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。

（1）分光器及测量范围大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。

（2）光源及检测器光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。

操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。

表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、TLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。

1. 薄层吸收扫描法的基本原理薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A —L成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。

曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。

由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。

该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。

定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。

设薄板固定相的厚度为X,入射光的强度为I.,当透过厚度x的的固定相后，照射在微分薄层厚度dx上的入射光强与反射光强分别为i和j时，如左图。

薄层色谱扫描仪原理薄层色谱法中边缘效应的基本概念在平面色谱法中,同一块色谱板基线上不同位置点上同一种物质,而产生边缘比移值大于中间比移值的现象。

他是因为边缘的溶剂蒸发比中间的快,从而加速了边缘的溶剂迁移,让边缘比移值变大。

他可以通过展开前的饱和来和点子句色谱板1cm来减小。

薄层色谱法主要的显色方法有哪些?1、加热显色；2、碘蒸气熏显色；3、喷显色剂（如香草醛浓硫酸）TLC（薄层色谱）法是一种将化学物质分离和鉴定的技术。

被分离的混合物被涂在薄层板上，然后将板放入溶剂中，溶剂会在板上移动，这样不同的化合物将在板上移动不同的距离。

通过比较样品和标准物质的移动距离，可以确定样品中的化合物。

这种方法使用简单，速度快，可以分离和鉴定大量的化合物，并且只需要少量的样品。

薄层色谱法薄层色谱法,系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层。

待点样、展开后,与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

1、仪器与材料(1)玻板除另有规定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm 的规格,要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干。

(2) 固定相或载体最常用的有硅胶G、硅胶GF 、硅胶H、硅胶HF,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F等。

其颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。

薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合剂,一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用,或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.07％)适量调成糊状,均匀涂布于玻璃板上。

也有含一定固定相或缓冲液的薄层。

(3) 涂布器应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

(4) 点样器同纸色谱法项下。

(5) 展开室应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,除另有规定外,底部应平整光滑,应便于观察。