药品薄层色谱扫描法
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薄层扫描法知识分享
薄层扫描法薄层扫描法一、定义薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。
回顾薄层色谱法（TLC)1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)4、检视(在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪的组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。
每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。
（1）分光器及测量范围大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。
（2）光源及检测器光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。
操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。
表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、TLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。
1. 薄层吸收扫描法的基本原理薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A—L 成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。
曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。
由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。
该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。
定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。
薄层扫描法
薄层扫描法一、定义ﻭ薄层扫描法(TLCＳ)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC)系指用一定得波长得光照射在薄层板上,对薄层色谱中有紫外或可见吸收得斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描,将扫描得到得图谱及积分值用于药品定性定量得分析方法。
ﻭ回顾薄层色谱法（TLC）1、薄层板得制备(硅胶板,Aｌ２O3板,聚酰胺薄膜等)ﻭ2、点样(选择合适得展开剂，在薄板底1cm处画基线,点样)3、展开(浸入展开剂，展开到距薄板顶端１～2cm)4、检视（在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪得组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产,型号不同,仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能就是基本相同得。
每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。
ﻫ(１)分光器及测量范围大多数薄层扫描仪得分光器为光栅，少数为棱镜,极个别得用滤光片,其测量范围光栅为200－800nm,棱镜为２0０－２500nm。
ﻫ(２)光源及检测器ﻫ光源室具有可见光源钨灯,波长范围为４０0-800,紫外光源氘灯波长范围为２00-4０0nm，荧光光源为氙灯或汞灯。
操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜得位置;检测器一般为光电倍增管。
表７-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、ＴLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。
ﻭ１、薄层吸收扫描法得基本原理ﻭ薄层吸收扫描法就是用可见光或紫外线得单色光照射展开后得薄层色谱板,测定薄层色谱斑点(简称斑点)得吸光度(A）随展开压离(L)得变化,而获得A—Ｌ成A—Ｒf曲线,即薄层色谱扫描图(简称扫描图）。
ﻭ曲线上得色谱峰峰面积可用于定量分析。
由于薄层板存在着明显得散射现象,而使斑点中物质得浓度与吸光度得关系不服从Ｂｅｅｒ定律,所以需田Kubelｋa—Ｍunk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。
该方程式就是薄层扫描法得定量分析基础。
定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。
薄层色谱法在药物分析中的应用
薄层色谱在药物分析中的应用摘要：随着高效液相色谱法的兴起与发展，薄层色谱法曾一度被忽略，直至高效薄层材料和预制板的出现，特别是20世纪80年代后期薄层色谱扫描仪的出现，形成现代仪器化薄层色谱法，才得到了更多的关注。
TLC法被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面，且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一，具有设备简单、操作简便、分离速度快，灵敏度和分辨率较高等优点。
关键词：薄层色谱，药物分析薄层色谱法(The layer chromatography，TLC)是将固定相均匀的涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法，它属于平板色谱，是一种常用的色谱分离方法。
但随着高效液相色谱法的兴起与发展，薄层色谱法曾一度被忽略，直至高效薄层材料和预制板的出现，特别是20世纪80年代后期薄层色谱扫描仪的出现，形成现代仪器化薄层色谱法，才得到了更多的关注。
TLC法被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面，且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一，具有设备简单、操作简便、分离速度快，灵敏度和分辨率较高等优点。
其中，薄层色谱法用于药物中杂质检查常用的方法有：杂质对照品法（适用于已知杂质并能制备得到杂质对照品的方法）、供试品溶液自身稀释对照法（适用于杂质的结构不能不能确定，或无杂质对照品的情况）、杂质对照品法和供试品溶液自身稀释对照法并用、对照药物法（前两种方法不适用时可用此方法）。
而薄层色谱在药物分析中我们则常用薄层色谱扫描法，其主要用于以下几个方面：1.中药材与中成药的鉴别与成分分析薄层色谱扫描法在中药材与中成药上的应用，主要是药材品种的鉴别、含量的测定、成分研究、采收期与炮制方法等对成分与含量的影响，以及成药中药味的鉴别与含量的测定等。
此方法可以直接在薄层板上进行中药成分的定量分析，其扫描图谱也可作为中药材的质量评价、鉴别依据。
例如：用薄层扫描法可以鉴别黄连品种并对对其所含生物碱进行定量的测定；用薄层扫描法测定土荆皮中乙酸的含量，以帮助鉴别其真伪等。
薄层色谱扫描法测定宫康中水苏碱含量
为 ５ ０ｎ １ ｍ。
２３ 样 品 测 定 ．
２ １ 年 第 ５ 期 ００
分 别 精 密 吸取 批 号 为 ２００ 、０ ８２、０８ ３ ０ ８ １２０ ０ ２００ 的 宫 康样 品 ， 供 试 品 溶 液 制 备方 法 制 备 溶 液 ， 按 依 法测 定 ， 量 分 别 为 １３ 、 ．８和 １１ ／ 。 含 ．０ １ ０ ．５ｍｇ ｍＬ
Ｒ Ｄ 为 １ ．％。 Ｓ ０１
２９１ 层 析 温 度 、 度 对 测 定 结 果 的 影 响 取 同 ．． 湿 批 样 品 （ 号 ２００ ）按 供 试 品溶 液 制 备 方 法 依 批 ０ ８３ ， 法提 取 ， 密 吸 取 对 照 品溶 液 ４ 、０ Ｌ 供 试 品 溶 精 １ ， 液 １ Ｌ， 叉 点 样 于 同～ 硅 胶 Ｇ 薄层 板 上 ， 别 ０ 交 分
成
于
药 ， 有 效 成 分 为 水 苏 碱 。 有 效 控 制 该 制 剂 的 质 其 为
干 ， 渣 加 乙醇 ５ｍ 残 Ｌ溶 解 ， 为 供 试 品溶 液 。 作 ２１２ 洗 脱 剂 用 量 考 察 ．． 精 密 吸 取 本 品 ｌ Ｌ， ０ｍ
水 浴 浓缩 至 ２ｍＬ 加 中性 氧 化 铝 （ ０ — ０ ， １０ ２ ０目） ， ２ｇ
技
术
量 ，笔者等采用薄层色谱扫描法对宫康 中水 苏碱
的含 量 测 定 方 法 进 行 了研 究 ，为 该 制 剂 的质 量 控 制提 供 了定 量 检 测 方 法 。 １ 仪 器 与 试 药
搅 拌 均 匀 ， 干 ， 磨 ， 其具 有 良好 流动 性 。 其 蒸 研 使 将 加入 氧化铝 柱 （ 中性 氧 化 铝 １０ ２ ０目 ， ， ０—０ ２ｇ 内径 １ ０ｍｍ） ，按上 述 方 法 共 制 备 ５ ，分 别 用 ６ 、０ 份 ０７ 、 ８ 、０ １０ｍＬ乙醇 洗 脱 ， 集 洗 脱 液 ， 干 ， 渣 ０ ９ 、０ 收 蒸 残 加 乙醇 ５ｍＬ溶 解 ， 到 ５份 供试 品溶 液 。 照含 量 得 按 测 定 方 法 测 定 其 含 量 ，结 果 乙 醇 的 洗 脱 量 为 ８ 、 ０
２３ 样 品 测 定 ．
２ １ 年 第 ５ 期 ００
分 别 精 密 吸取 批 号 为 ２００ 、０ ８２、０８ ３ ０ ８ １２０ ０ ２００ 的 宫 康样 品 ， 供 试 品 溶 液 制 备方 法 制 备 溶 液 ， 按 依 法测 定 ， 量 分 别 为 １３ 、 ．８和 １１ ／ 。 含 ．０ １ ０ ．５ｍｇ ｍＬ
Ｒ Ｄ 为 １ ．％。 Ｓ ０１
２９１ 层 析 温 度 、 度 对 测 定 结 果 的 影 响 取 同 ．． 湿 批 样 品 （ 号 ２００ ）按 供 试 品溶 液 制 备 方 法 依 批 ０ ８３ ， 法提 取 ， 密 吸 取 对 照 品溶 液 ４ 、０ Ｌ 供 试 品 溶 精 １ ， 液 １ Ｌ， 叉 点 样 于 同～ 硅 胶 Ｇ 薄层 板 上 ， 别 ０ 交 分
成
于
药 ， 有 效 成 分 为 水 苏 碱 。 有 效 控 制 该 制 剂 的 质 其 为
干 ， 渣 加 乙醇 ５ｍ 残 Ｌ溶 解 ， 为 供 试 品溶 液 。 作 ２１２ 洗 脱 剂 用 量 考 察 ．． 精 密 吸 取 本 品 ｌ Ｌ， ０ｍ
水 浴 浓缩 至 ２ｍＬ 加 中性 氧 化 铝 （ ０ — ０ ， １０ ２ ０目） ， ２ｇ
技
术
量 ，笔者等采用薄层色谱扫描法对宫康 中水 苏碱
的含 量 测 定 方 法 进 行 了研 究 ，为 该 制 剂 的质 量 控 制提 供 了定 量 检 测 方 法 。 １ 仪 器 与 试 药
搅 拌 均 匀 ， 干 ， 磨 ， 其具 有 良好 流动 性 。 其 蒸 研 使 将 加入 氧化铝 柱 （ 中性 氧 化 铝 １０ ２ ０目 ， ， ０—０ ２ｇ 内径 １ ０ｍｍ） ，按上 述 方 法 共 制 备 ５ ，分 别 用 ６ 、０ 份 ０７ 、 ８ 、０ １０ｍＬ乙醇 洗 脱 ， 集 洗 脱 液 ， 干 ， 渣 ０ ９ 、０ 收 蒸 残 加 乙醇 ５ｍＬ溶 解 ， 到 ５份 供试 品溶 液 。 照含 量 得 按 测 定 方 法 测 定 其 含 量 ，结 果 乙 醇 的 洗 脱 量 为 ８ 、 ０
药学专业-药物分析-第六章-药物的含量测定
2.测定方法：取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与 稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴 定，至溶液显蓝色在30s内不褪，即得。每1ml碘滴定液(0.1 mol/L)相 当于8.806mg的C6H8O6。
3.数据处理： 维生素C的百分含量为
因的芳伯氨基定量发生重氮化反应，反应式为：
用永停滴定法指示终点，由消耗亚硝酸钠滴定液的用 量计算盐酸普鲁卡因的含量。
2.测定方法。取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法 （2005年版附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液 (0.1 mol/L)滴定。每1ml的亚硝酸钠滴定液(0.1 mol/L)相当 于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。
测定。 1.测定原理。将本品溶于中性乙醇后，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧
化钠液直接滴定。滴定反应式如下：
2.测定方法。取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇(对酚酞指示液显中 性)20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠液(0.1mol/L)滴定。每 1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。
cx为待测成分的浓度； Ax为待测成分的峰面积（或峰高）； cR为对照品的浓度； AR为对照品的峰面积（或峰高）。
2.内标法加校正因子 精密称取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量
取各溶液，配成测定校正因子所用的对照溶液，取一定量 注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积 （或峰高），按下式计算校正因子f：
量计算。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相 当于盐酸氯苯胍25 mg），置50 ml棕色量瓶中，加甲醛 30 ml，振荡使溶解，用甲醛稀释至刻度，摇匀，照分光 光度法，在352 nm波长处测定吸收度。另取盐酸氯苯胍 对照品约25 mg，同法测定，计算即得。
3.数据处理： 维生素C的百分含量为
因的芳伯氨基定量发生重氮化反应，反应式为：
用永停滴定法指示终点，由消耗亚硝酸钠滴定液的用 量计算盐酸普鲁卡因的含量。
2.测定方法。取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法 （2005年版附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液 (0.1 mol/L)滴定。每1ml的亚硝酸钠滴定液(0.1 mol/L)相当 于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。
测定。 1.测定原理。将本品溶于中性乙醇后，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧
化钠液直接滴定。滴定反应式如下：
2.测定方法。取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇(对酚酞指示液显中 性)20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠液(0.1mol/L)滴定。每 1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。
cx为待测成分的浓度； Ax为待测成分的峰面积（或峰高）； cR为对照品的浓度； AR为对照品的峰面积（或峰高）。
2.内标法加校正因子 精密称取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量
取各溶液，配成测定校正因子所用的对照溶液，取一定量 注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积 （或峰高），按下式计算校正因子f：
量计算。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相 当于盐酸氯苯胍25 mg），置50 ml棕色量瓶中，加甲醛 30 ml，振荡使溶解，用甲醛稀释至刻度，摇匀，照分光 光度法，在352 nm波长处测定吸收度。另取盐酸氯苯胍 对照品约25 mg，同法测定，计算即得。
药物分析：中药制剂的薄层扫描法
薄层扫描法是用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有紫外光和可见光吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。
薄层扫描法具有分离效能高、快速、简便等特点，因而适用于中药的分析。
薄层扫描法虽然精密度不如HPLC法高，但可作为补充，，用于无紫外吸收，或不能用HPLC法分析的组分如人参皂甙、贝母生物碱等。
试验条件的选择薄层色谱条件：原则组分应完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾。
（2）检测方法：吸收测定法和荧光测定法两种。
在可见、紫外区有吸收的组分，可在200~800nm范围内采用吸收测定法测定。
有荧光的组分，可选择好激发光波长（λex）和发射波长（λem），用荧光法具有专属性强、灵敏度高和线性范围宽度等特点。
（3）测量方法：有反射法和透射法两种。
反射法是将光束照射到薄层斑点上，测量反射光的强度；反射光灵敏度较低，受薄层厚度影响较小，基线较稳，信噪比较大，因而使用较多。
透射法受薄层厚度影响较大，且玻璃对紫外光有吸收，所以实际应用较少。
（4）扫描方式：有单波长和双波长两种。
双波长是两束不同波长的光，一束测量样品称测定波长（λS）；另一束作为对照，称参比波长（λR）。
两束光通过斩光器交替照射到斑点上，以吸收度之差ΔA定量。
双波长可以消除薄层不均匀的影响，使基线变得平稳。
测定波长一般选测定组分的最大吸收波长，参比波长可选在组分无吸收的位置，若背景光谱中与λS的等吸收处，可达到排除背景干扰的目的。
单波长法通常用斑点吸收光谱的测定。
扫描方式还有线性扫描和锯齿扫描：线性扫描是用一束比斑点略长的光作单向扫描，扫描速度快，但斑点形状不规则或浓度不均匀时误差大，主要用于荧光测定；锯齿扫描是用一微小的光束同时互相垂直的两个方向进行锯齿状扫描，由于光束小（1.25mm*1.25mm），光束内部浓度差异可以忽略不计，因而受斑点形状和浓度分布的影响小。
（5）散射参数SX：由于薄层对光散射，其吸收度A和浓度KX之间不服从比尔定律，而符合K-M方程，其吸收度由于散射而减小，A-KX曲线偏向横轴，不成直线，其形状与SX有关。
薄层色谱扫描法测定板蓝根颗粒中亮氨酸的含量
１ 仪器与试药
瑞士卡玛公 司扫描仪 ： Ｃ Ａ ＭＡ Ｇ Ｔ Ｌ Ｃ Ｓ Ｃ Ａ Ｎ Ｎ Ｅ Ｒ ３ ； 半 自动
点样器 ： Ｃ Ａ Ｍ Ａ Ｇ Ｌ Ｉ Ｎ Ｏ ＭＡ Ｔ ５ ； Ｈ Ｈ － ４型数显恒温水浴锅 ， 国华 电 器有限公司 ； Ｎ ｅ ｗ Ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ Ｍ Ｓ电子天平 （ ０ ． ０ ｌ ｍ ｇ ） ， 梅特勒公司。 板蓝根颗粒 （ 含糖 型 ， 每袋装 １ ０ ｇ ， 相 当于饮 片 １ ４ ｇ ， 马鞍
摘要 ： 目的 建立板蓝根颗粒 中亮氨酸含量 的测定方法 。方法 采用单 波长薄层 扫描 法 ， 硅胶 Ｇ高效预制 板 ， 正丁醇一 冰 醋酸一 水（ １ ９ ： ５ ： ５ ） 为展开剂 ， 测 定波长 ５ ０ ９ ｎ ｍ。结果 亮氨酸点样量在 ０ ． １～ ０ ． ９ ｇ 之间与吸收度积分值呈 良好 的线性关 系， 平均 回
２ 方 法 与 结 果
２ ． １ 薄层色谱条件及 扫描 方法 取对 照品溶 液 ５ Ｌ点 于硅
胶 Ｇ高效预制板 上 ， 展开剂 为正 丁醇一 冰醋酸一水 （ １ ９ ： ５ ： ５ ） ； 上行展开 ， 展距 ９ ． ５ ｃ ｍ； 显 色剂 为茚 三酮 试液 。显色条 件 为
ห้องสมุดไป่ตู้
和精氨酸单组份 的含量 Ｊ ，没有测定其 有效 成分亮氨 酸的方
ｎ ｅ ｒ ｏ ｆ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｗ ａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｗ ａ ｓ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｌ ｅ ｕ ｃ ｉ ｎ ｅ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｇ ｅ ｌ ａ ｔ ｈ ｉ ｎ ｌ ａ ｙ ｅ ｒ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｂ ｕ ｔ ａ ｎ ｏ ｌ — ｇ ｌ ａ ｃ ｉ ａ ｌ ａ ｃ ｅ ｔ ｉ —
瑞士卡玛公 司扫描仪 ： Ｃ Ａ ＭＡ Ｇ Ｔ Ｌ Ｃ Ｓ Ｃ Ａ Ｎ Ｎ Ｅ Ｒ ３ ； 半 自动
点样器 ： Ｃ Ａ Ｍ Ａ Ｇ Ｌ Ｉ Ｎ Ｏ ＭＡ Ｔ ５ ； Ｈ Ｈ － ４型数显恒温水浴锅 ， 国华 电 器有限公司 ； Ｎ ｅ ｗ Ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ Ｍ Ｓ电子天平 （ ０ ． ０ ｌ ｍ ｇ ） ， 梅特勒公司。 板蓝根颗粒 （ 含糖 型 ， 每袋装 １ ０ ｇ ， 相 当于饮 片 １ ４ ｇ ， 马鞍
摘要 ： 目的 建立板蓝根颗粒 中亮氨酸含量 的测定方法 。方法 采用单 波长薄层 扫描 法 ， 硅胶 Ｇ高效预制 板 ， 正丁醇一 冰 醋酸一 水（ １ ９ ： ５ ： ５ ） 为展开剂 ， 测 定波长 ５ ０ ９ ｎ ｍ。结果 亮氨酸点样量在 ０ ． １～ ０ ． ９ ｇ 之间与吸收度积分值呈 良好 的线性关 系， 平均 回
２ 方 法 与 结 果
２ ． １ 薄层色谱条件及 扫描 方法 取对 照品溶 液 ５ Ｌ点 于硅
胶 Ｇ高效预制板 上 ， 展开剂 为正 丁醇一 冰醋酸一水 （ １ ９ ： ５ ： ５ ） ； 上行展开 ， 展距 ９ ． ５ ｃ ｍ； 显 色剂 为茚 三酮 试液 。显色条 件 为
ห้องสมุดไป่ตู้
和精氨酸单组份 的含量 Ｊ ，没有测定其 有效 成分亮氨 酸的方
ｎ ｅ ｒ ｏ ｆ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｗ ａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｗ ａ ｓ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｌ ｅ ｕ ｃ ｉ ｎ ｅ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｇ ｅ ｌ ａ ｔ ｈ ｉ ｎ ｌ ａ ｙ ｅ ｒ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｂ ｕ ｔ ａ ｎ ｏ ｌ — ｇ ｌ ａ ｃ ｉ ａ ｌ ａ ｃ ｅ ｔ ｉ —
药品薄层色谱扫描法
药品薄层色谱扫描法一目的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。
二适用范围：适用于薄层扫描法的测定。
三责任者：品控部。
四正文：1.简述薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。
2.仪器2.1 仪器构成薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。
该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。
光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。
单色器：包括光栅与夹缝。
入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。
由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。
薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。
检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。
反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。
透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。
数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。
如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。
2.2 仪器性能检定2.2.1 仪器波长准确度的检查用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确度，汞灯谱线的已知波长为253.6、313.0、334.2、365.0、404.7、435.8、546.1、578.0nm，有的仪器规定波长准确度应不大于±8nm。
薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法标准操作规程1 简述薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。
所得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。
薄层色谱扫描法可分为吸收法和荧光法。
扫描时测定薄层板上的方法称为荧光法。
吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。
反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。
荧光法测定均采用反射法。
透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。
薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。
单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。
双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。
根据扫描时光束的轨迹不同，波长色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。
线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向作单向等速扫描，它适合于形状较规则斑点的扫描。
锯齿扫描是用使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行反复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。
在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分照射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。
因此，波长扫描定量一般不符合Lambert-Beer定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk方程：（1-R）2/R=2.303εC/S其中R为反射光强，ε为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。
由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响波长扫描反射法定量的工作曲线方程。
薄层扫描法
用曲线校正法校直Kubelka—Munk曲线，必须巳知薄层板的 SX值，Mrck预制硅胶板的SX＝3，Merck预制氧化铝板的 SX＝7，Wako预制硅胶FM(硅胶GF254)板的SX＝7。国产 预制薄层板及自制薄层板，可参考上述数据试调，而后检查 校正是否适宜，修正SX值再校，直至A—KX曲线成直线为止。 检查方法如下图所示。图中点样量显(横坐标)常用单位为ug/ 点。
设薄板固定相的厚度为X, 入射光的强度为I.,当透过 厚度x的的固定相后，照 射在微分薄层厚度dx上的 入射光强与反射光强分别 为i和j时，如左图。其入 射光强的增量与反射光强 的增量分别符合以下两个 微分方程：
即光照射到厚度为x的薄层后，光被吸收及散射。 在入射方向，光强度因为被吸收与散射而减弱； 在入射的反方向，则光强度因散射而增强。解上 述方程得：
2、另取
熊果酸对照 品适量，精 称
+无水 乙醇
制成 0.5mg/ml 溶液
3、精吸供试液6ul及对照品溶液4ul与8ul，分别交叉点于同一硅胶G板上，
以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20:5:8:0.1）展开，取出，晾干，喷以10 ％硫酸乙醇溶液，在110℃加热5~7min，至斑点显色清晰，取出，在薄层板 上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行薄层扫描，波长波长 λs=535nm,λR=650nm,分别测量供试品与对照品A，计算即得.本品每丸含山 楂以熊果酸（C30H48O3）计
表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱 扫描仪
二、TLCS基本原理与方法
薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。 1. 薄层吸收扫描法的基本原理 薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射 展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸 光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A—L成A—Rf曲线， 即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。 曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。由于薄层 板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光 度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古 柏尔卡—曼克)理论来描述。该方程式是薄层扫描法的定 量分析基础。定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回 归法等。
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药品薄层色谱扫描法
一目的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。
二适用范围：适用于薄层扫描法的测定。
三责任者：品控部。
四正文：
1.简述
薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。
2.仪器
2.1 仪器构成薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。
该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。
光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。
单色器：包括光栅与夹缝。
入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。
由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。
薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。
检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。
反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。
透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。
数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。
如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。
2.2 仪器性能检定
2.2.1 仪器波长准确度的检查用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确
度，汞灯谱线的已知波长为253.6、313.0、334.2、365.0、404.7、435.8、546.1、578.0nm，有的仪器规定波长准确度应不大于±8nm。
日常工作中波长准确度的初步核对可采用以下方法：于硅胶G薄层板上点样10ul浓度约为10mg/ml的磷酸氯喹水溶液，用氘灯以反射方式对样品斑点作光谱扫描（220～360nm），扫描所得谱图应在（257±10）nm和（343±10）nm处有最大吸收峰。
2.2.2 薄层板斑点扫描积分值重现性的考核于硅胶G薄层板上点样10ul浓度约为0.5mg/ml的甲基黄的甲醇溶液，以苯为展开剂，展开5后，晾干，扫描10次，波长λS=400nm，λR=600nm，以甲基黄斑点的吸收度积分值计算相对标准偏差。
锯齿扫描相对标准偏差应≤1.5%，线性扫描相对标准偏差应≤2.0%。
3 操作方法
薄层扫描法常用于一些药物制剂中成分的含量测定，其操作一般分为供试品前处理；点样于薄层板、展开、上机扫描和数据处理等步骤。
3.1 供试品前处理按各品种项下规定执行，但应取样2份，平行操作。
3.2 薄层色谱操作步骤要严格按薄层色谱法标准操作规程要求进行，以保证色谱质量。
3.3 上机扫描具体操作除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合实际情况选择进行。
检测方法有光吸收法（紫外光或可见光）和荧光法，测量方法一般采用反射法，电泳谱用透射法，扫描波长选择有单波长和双波长两种，单波长较适用于分离度较好、无背景干扰的薄层，双波长扫描是用于两种波长的单色光交替照射斑点，测斑点对两种波长单色光吸收度之差。
正确选择好两个波长，以减少分离度欠佳的两个斑点间的相互干扰，排除背景干扰，提高检测灵敏度，一般采用被扫描成分的最大吸收波长为样品波长（λS），用对该成分无吸收或最小吸收波长为参比波长（λR）。
扫描方式有线性扫描和锯齿扫描，线性扫描是用一狭窄光带照射于薄层板的一端，薄层板相对于光带作直线运动，它较适用于较规则的圆形斑点，所能测斑点的大小，以仪器的光带长度为上限。
锯齿扫描系用截面积为正方形的光束照射薄层板，光束的运动轨迹为锯齿形或矩形，由于光束反复通过斑点，积分值较大，重复性较好，并可适用于形状欠规则斑点的定量，但扫描速度较慢。
薄层扫描用于含量测定时，扫描的步进跨距不宜太大，如岛津产的薄层扫描仪可设△Y=0.1mm。
3.4 薄层扫描定量方法有内标法与外标法，而以外标法较常用。
外标法一般应分别精密称取对照品适量，配制高、低两种浓度的对照品溶液；供试品溶液应制备至少2份；每份对照品溶液和供试品溶液在同一薄层板上点样不少于2个斑点，交叉点样。
各份溶液所点斑点测定结果对其相应平均值的偏差均不得大于3%；供试品测定结果对平均值的偏差也不得大
于3%。
本法为内插法算，如果供试品的响应值超出二份对照溶液的响应值范围，则应调整相应浓度，使供试品溶液测定的响应值价于高、低浓度对照品溶液响应值之间，并重新准确测定。
薄层扫描定量的对照品纯度应符合含量测定用对照品的要求。
4 注意事项
4.1 色谱斑点的分离度待测成分斑点与相邻斑点的分离最好在1.5以上，至少不能小于1.0，背景干扰应尽量小。
4.2 待测成分斑点与对照品斑点的一致性待没斑点与对照品斑点目测颜色或荧光应一致，原们扫描得到的吸收光谱应与对照品基本相符。
4.3 测定记录必须包含薄层扫描图、积分记录、工作曲线及回归方程和相关系数，测定结果的计算应用两点内插法或回归方程（多水平校正法）计算。