下载文档原格式
蛋白质的呈色反应
蛋白质的呈色反应
蛋白质是有机体中主要的结构和功能物质。
它是由氨基酸构成的高分子物质，具有独特的化学性质。
它会发生各种反应，其中最常见的是呈色反应。
蛋白质的呈色反应主要是指蛋白质与某些物质发生反应时，蛋白质会产生颜色变化的现象。
这种反应是通过氨基酸残基中存在的含氮杂环结构，将反应物对应的原子或分子重新排列形成新的结构而导致。
蛋白质的呈色反应常以胆红素和卟啉胆素为代表，当这些物质染料与蛋白质发生反应时，蛋白质会产生特殊的颜色，这种颜色的深浅可用来表征蛋白质的种类、结构和功能。
蛋白质的呈色反应在医学检测、环境检测、食品安全监测等领域都有重要的应用。
例如，在医学检测中，可以利用呈色反应来诊断疾病；在环境检测中，可以观察水体中污染物的蛋白质的呈色反应来判断水质；而在食品检测中，可以通过蛋白质的呈色反应来检测食品的新鲜程度。
因此，蛋白质的呈色反应对于人类的工作和生活来说非常重要，对于我们的健康和安全也有很大的保障作用。
- 1 -。
蛋白质的显色反应集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-实验二蛋白质的显色反应一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接形式。
2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应1、双缩脲反应（1）原理：尿素加热至180o C左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性条件下能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应（二肽和氨基酸都不能发生双缩脲反应）。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
反应式如下：双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有，含有一个肽键和一个-CS-NH2,-CH2-NH2,-CHR-NH2,-CH2-NH2-CH-NH2-CH2-OH或-CHOHCH2NH2等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。
NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子Cu（NH3）42+。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
（2）试剂①尿素，②10%氢氧化钠溶液，③1%硫酸铜溶液，④2%卵清蛋白溶液（改为蛋清溶液：水=1：9）（3）操作取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10%氢氧化钠溶液约1mL ，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
（由于杂质以及氨气的干扰，导致颜色不都是紫红色）向另一试管加2%卵清蛋白溶液（改为蛋清溶液：水=1：9）约1mL 和10%氢氧化钠溶液约2mL ，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
2、茚三酮反应 (1)原理蛋白质、多肽和各种氨基酸以及所有?-氨基酸均能发生该反应，除无α-氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色反应外，其它均生成蓝紫色化合物，最终生成蓝色化合物。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。
如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸〔水浴加温助溶〕溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10g NaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应〔一〕米伦〔Millon’s〕反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂，电炉小心加热观察颜色变化。
第二讲蛋白质及氨基酸的显色反应一、实验目的：1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理蛋白质分子中因含有某种特殊氨基酸或某种结构，可与多种化合物作用，产生各种颜色反应。
这种颜色反应可作为蛋白质的定性和定量实验。
三、实验仪器、试剂和材料1、仪器：试管及试管架、试管夹、水浴锅、电陶炉。
2、试剂和材料：蛋白质溶液：将鸡（鸭）蛋白用蒸馏水稀释20倍，用2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
尿素：如颗粒较粗，最好研成细粉末状。
10%NaOH溶液、浓硝酸（比重1.42）、1%硫酸铜溶液、浓硫酸（A·R）、冰醋酸（C·P）、0.5%谷氨酸钠溶液、0.5%甘氨酸溶液、0.5%醋酸铅溶液、浓盐酸、红色石蕊试纸。
四、显色反应1、双缩脲反应：原理：如将脲素加热，则两分子脲素放出一分子氨而形成双缩脲。
双缩脲在碱性环境中硫酸铜结合成红紫色的络合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子含有多个肽键与双缩脲结构相似，故能呈此反应，形成紫红或蓝紫色的络合物。
双缩脲反应可用于好、鉴定蛋白质的存在及蛋白质水解是否完全用比色法可作蛋白质的定量测定。
步骤：（1）取少量结晶尿素（火柴头大小）放在干燥试管中，微火加热，尿素熔化并形成双缩脲，释出之氨可用红色石蕊试纸（遇酸变红，遇碱变蓝）试之，至试管内有白色固体出现停止加热(熔解至硬化，刚硬化时即停止加热），冷却。
然后加10％氢氧化钠溶液1ml摇匀，再加2滴1％硫酸铜溶液，混匀，观察颜色变化。
（2）另取一试管，加蛋白溶液（含有多个多肽键）约10滴，再加10％氢氧化钠溶液10滴及1％硫酸铜溶液2滴，混匀。
观察颜色变化。
2、茚三酮反应原理：除脯氨酸、羟脯氨酸外与茚三酮生成黄色物质外，所有a-氨基酸都能和茚三酮反应生成蓝紫色化合物。
蛋白质浓硝酸显色反应方程式
蛋白质浓硝酸显色反应是一种常用的蛋白质检测方法，常用于检
测蛋白质的存在和浓度。
本文将简要介绍蛋白质浓硝酸显色反应方程
式及其应用，以期能够为读者提供一定的指导意义。
蛋白质浓硝酸显色反应的基本步骤是，将待测样品与浓硝酸混合
后产生深黄至橙色的颜色反应。
其方程式如下：
R-CH(NH2)-COOH + 3HNO3 → R-NO2 + CO2 + 2H2O + 3NO2
其中，R代表蛋白质的氨基酸残基。
反应机理是硝化反应，即硝酸与蛋白质中氨基基团反应生成亚硝基化合物。
这种反应具有明显的时间和浓度效应，在一定的条件下（如反应
温度、反应时间、硝酸浓度等），样品中存在的蛋白质数量与反应产
物的颜色深度成正相关。
因此，通过比色法（如分光光度法）或比较
法（如半定量比较）可以对蛋白质在样品中的含量进行测定。
该方法主要用于生物医学、食品、农业、环境等领域中对蛋白质
的快速、简单、定量测定，存在一定的优点和局限性。
优点是该方法
灵敏度高、适用于大部分蛋白质和复合物的检测；局限性是该方法不
适用于含有硝酸还原酶、氧化酶、亚硝酸还原酶等有干扰效应的样品，且部分蛋白质可能会与硝酸生成氧化物，影响检测结果。
总之，了解蛋白质浓硝酸显色反应方程式有助于更深入地理解蛋白质的化学性质和检测方法，同时也有助于科学家们在实验中更加准确、高效地应用该方法。
实验二蛋白质的显色反应
一、实验目的
1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接形式。
２、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、呈色反应
1、双缩脲反应
(1)原理:
尿素加热至1８０o C左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性条件下能与Cu2+结合生成紫红色化合物,此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应（二肽和氨基酸都不能发生双缩脲反应）。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
反应式如下：
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有，含有一个肽键和一个－CS-NH2， -Ｃ
H2－NH2, -CHR-NＨ２, －CH2-NH2－CH－NH2－CH2-OH或-ＣHOＨCH2ＮH２等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。
NH３也干扰此反应,因为NH3与Cu２+可生成暗蓝色的络离子Ｃｕ(NH3)42+。
因此,一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应,但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
（2)试剂
①尿素,②10%氢氧化钠溶液，③1%硫酸铜溶液，④2%卵清蛋白溶液（改为蛋清溶液：水= 1：９）
（３）操作
取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热,尿素放出氨,形成双缩脲。
冷后，加1０%氢氧化钠溶液约1mL,振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴,再振荡。
观察出现的粉红颜色。
要避免添加过量硫酸铜,否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
（由于杂质以及氨气的干扰,导致颜色不都是紫红色）
向另一试管加2%卵清蛋白溶液(改为蛋清溶液:水＝ 1：9)约1mL和10％氢氧化钠溶液约2mL,摇匀,再加１％硫酸铜溶液2滴,随加随摇。
观察紫玫瑰色的出现。
2、茚三酮反应
(１) 原理
蛋白质、多肽和各种氨基酸以及所有 －氨基酸均能发生该反应，除无α-氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色反应外，其它均生成蓝紫色化合物,最终生成蓝色化合物。
氨、β－丙氨酸和许多一级氨化合物都有此反应。
尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
因此,虽然蛋白质或氨基酸均有茚三酮反应,但能与茚三酮反应呈阳性反应的不一定都是蛋白质或氨基酸。
该反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化脱氨形成酮酸,酮酸脱羧成醛，放出CＯ2、NＨ3,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有蓝色物质。
反应机理如下：
该反应非常灵敏，1:15０万浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
但在定性、定量测定中,一方面要严防干扰物存在，另一方面要在适宜的PH 条件下进行测定。
该反应的适宜的PH 为５~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH 条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。
(2）试剂
①蛋白质溶液：2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清:水=1：9)，②０.5%甘氨酸,③0．１％茚三酮水溶液，④0.1%茚三酮－乙醇溶液。
（３）操作
①取两支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1mL,再各加０.５
mL0.
１%茚三酮水溶液,混匀,
C
C
C OH
OH +
H 2N
H COOH
R
O
O C
C C OH
H
+
NH 3
+CO 2+R
C
O
H
O O
还原型茚三酮
C
C C OH
H +
NH 3
O O
还原型茚三酮
+
C C C
HO
HO
O
O
C
C
C O O
H N
C
C C
O O +
3H2O
蓝紫色
在沸水浴中加热1~2分钟,观察颜色由粉色变紫色再变蓝色（pH 不同颜色深浅不同)。
②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液,风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮－乙醇溶液，在微火旁烘干显色,观察紫红色斑点的出现。
３、黄色反应 （1)原理
含有苯环的氨基酸,如酪氨酸、色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。
反应式如下
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸,所以呈黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，须加入少量浓硫酸才有黄色反应。
（2）试剂
①鸡蛋清溶液(将新鲜鸡蛋清用６层纱布过滤,然后按鸡蛋清：水=1:２0配制而成。
②大豆提取液:将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。
③头发。
④指甲。
⑤0.5％苯酚溶液。
⑥浓硝酸。
⑦0．３%色氨酸溶液。
⑧０．3％酪氨酸溶液。
⑨10%氢氧化钠溶液。
(3）操作
向７个试管中分别按下表加入试剂,观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。
待各管出现黄色后,于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性,观察颜 色变化(1 ~4管可能需要加热）。
4、考马斯亮蓝反应 (１)原理
考马斯亮蓝G ２５０（R ２50)具有红色和蓝色两种色调。
在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
HO
+
HNO 3HO
NO 2
N O -
Na +
O
硝基酚（黄色）
邻硝醌酸钠（橙黄色）
它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。
反应速度快,约在2分钟左右时间达到平衡,在室温一小时内稳定。
在0．０1 ~１．０mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595ｎm值成正比。
所以常用来测定蛋白质含量。
(2)试剂
①蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：２0配制而成）。
②考马斯亮蓝溶液:考马斯亮蓝G２50100mg溶于50mL95%乙醇中，加10０mL８5%磷酸混匀,配成原液。
临用前取原液15ｍL,加蒸馏水至１0０mL,用粗滤纸过滤后,最终浓度为0.01%。
（3）操作
取两支试管,按下表操作
结果分析：要分析结果,为什么出现这样的结果，什么原因导致的?
实验报告不能用铅笔写。
