生化实验实验三-蛋白质颜色反应及沉淀反应
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蛋白质的沉淀反应实验报告蛋白质的沉淀反应实验报告引言:蛋白质是生物体内一类重要的有机化合物,它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能,科学家们通过一系列实验来深入探索。
本实验旨在通过蛋白质的沉淀反应,研究其在溶液中的特性和行为。
实验材料和方法:1. 实验材料:- 鸡蛋清溶液- 醋酸铵溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 甲醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心机- 试管- 显微镜2. 实验方法:- 步骤一:取适量鸡蛋清溶液放入试管中。
- 步骤二:加入醋酸铵溶液,轻轻搅拌均匀。
- 步骤三:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤四:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤五:加入硫酸铵溶液,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤六:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤七:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤八:加入乙醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤九:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十一:加入甲醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十二:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十三:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十四:加入氯仿,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十五:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十六:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十七:观察沉淀的形态和颜色,并使用显微镜进行进一步观察。
结果和讨论:经过实验,我们观察到了蛋白质的沉淀反应。
在添加醋酸铵溶液后,鸡蛋清中的蛋白质发生了沉淀。
通过离心的过程,我们得到了一系列沉淀物。
在加入硫酸铵溶液后,沉淀物变得更加明显,颜色也发生了变化。
随后,通过加入乙醇、甲醇和氯仿,我们可以观察到沉淀物的进一步变化。
根据观察结果,我们可以得出一些结论。
首先,蛋白质在醋酸铵的作用下发生了沉淀,说明醋酸铵可以用作蛋白质的沉淀剂。
其次,随着添加硫酸铵、乙醇、甲醇和氯仿,沉淀物的形态和颜色发生了变化,这表明不同的溶剂可以对蛋白质的沉淀产生不同的影响。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 446、10%naoh:10g naoh溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物。
在一定条件下,蛋白质分子会发生沉淀现象。
蛋白质沉淀的原因主要有以下几种:1、盐析:在蛋白质溶液中加入中性盐,如硫酸铵、氯化钠等,随着盐浓度的增加,蛋白质的溶解度逐渐降低而沉淀析出。
这是因为中性盐会破坏蛋白质分子表面的水化膜,并中和蛋白质分子所带的电荷,从而使其沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般不变性,经透析或超滤等方法除去盐后,蛋白质仍能恢复其原有的溶解性和生物活性。
2、有机溶剂沉淀:向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂,如乙醇、丙酮等,可使蛋白质沉淀。
这是因为有机溶剂能降低溶液的介电常数,增加蛋白质分子之间的静电引力,同时还能破坏蛋白质分子的水化膜,导致蛋白质沉淀。
有机溶剂沉淀的蛋白质往往会发生变性,失去其原有的生物活性。
3、重金属盐沉淀:蛋白质在碱性溶液中可与重金属离子,如汞离子、铅离子等结合形成不溶性的盐而沉淀。
这种沉淀反应是由于重金属离子与蛋白质分子中的巯基、羧基等基团结合,从而破坏了蛋白质的结构,导致其沉淀。
重金属盐沉淀的蛋白质通常会发生变性。
4、生物碱试剂沉淀:生物碱试剂,如苦味酸、鞣酸等,能与蛋白质分子中的碱性基团结合而沉淀。
这种沉淀反应常用于定性和定量分析蛋白质。
三、实验材料与仪器1、实验材料蛋白质溶液(鸡蛋清稀释液)饱和硫酸铵溶液乙醇氯化汞溶液苦味酸溶液氢氧化钠溶液醋酸溶液2、实验仪器试管试管架滴管离心机四、实验步骤1、盐析沉淀取 2 支试管,分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液,边加边振荡,直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照,观察现象。
2、有机溶剂沉淀取 2 支试管,分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇,边加边振荡,直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照,观察现象。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(Millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(Millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 446、10%naoh:10g naoh溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(Millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(Millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应,进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。
如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应(一)米伦(Millon’s)反应1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,电炉小心加热观察颜色变化。
蛋白质沉淀反应实验报告蛋白质沉淀反应实验报告引言:蛋白质是生物体中重要的组成部分,对于维持生命活动起着至关重要的作用。
蛋白质沉淀反应是一种常见的实验方法,用于分离和纯化蛋白质。
本实验旨在通过蛋白质沉淀反应的方法,从复杂的混合物中分离出目标蛋白质,并探究其原理和应用。
实验方法:1. 样品制备:选取待分离的混合物样品,如细胞裂解液或组织提取液,并进行预处理,如去除杂质和浓缩样品。
2. 沉淀剂选择:根据样品特性和目标蛋白质的性质,选择合适的沉淀剂。
常用的沉淀剂有醋酸铵、三氯醋酸、硫酸铵等。
3. 沉淀反应:将沉淀剂加入样品中,调节溶液的pH值和离子强度,促使蛋白质沉淀。
通常需要在低温条件下进行,以减少非特异性沉淀。
4. 沉淀收集:通过离心或过滤等方法,将沉淀物与上清液分离。
收集沉淀物,可用于进一步的纯化和分析。
实验结果:本实验以细胞裂解液为样品,采用醋酸铵作为沉淀剂进行蛋白质沉淀反应。
经过实验操作,观察到样品中的蛋白质在添加醋酸铵后迅速沉淀,形成白色沉淀物。
通过离心分离沉淀物和上清液后,得到了纯净的蛋白质沉淀物。
讨论与分析:蛋白质沉淀反应的原理是基于沉淀剂与蛋白质之间的相互作用。
醋酸铵作为一种常用的沉淀剂,可以与蛋白质中的羧基和氨基发生离子交换作用,从而使蛋白质失去溶解性,形成沉淀。
此外,沉淀反应的成功与否还与溶液的pH值、离子强度和温度等因素有关。
蛋白质沉淀反应在生物学研究中有着广泛的应用。
首先,它可以用于分离和纯化目标蛋白质。
通过调节沉淀剂的种类和条件,可以将复杂的混合物中的目标蛋白质从其他杂质中分离出来,为后续的研究提供纯净的样品。
其次,蛋白质沉淀反应还可用于蛋白质的浓缩和富集。
在样品中含有低浓度的蛋白质时,通过沉淀反应可以将蛋白质富集到较小的体积中,便于后续的分析和检测。
然而,蛋白质沉淀反应也存在一些局限性。
首先,沉淀剂的选择需要根据样品和目标蛋白质的特性进行优化,不同的蛋白质可能需要不同的沉淀剂。
实验一蛋白质的颜色反应和沉淀反应蛋白质的颜色反应与蛋白质的沉淀反应图文攻略20131120056 生物技术朱然一.蛋白质的颜色反应(一)、米伦氏反应从左往右依次是苯酚、蛋白质溶液、白明胶(二)、双缩脲反应从左往右依次是双缩脲、蛋白溶液。
其中双缩脲的放大图如下:边壁上为加热融化尿素时残留的白色固体。
溶液为粉红色的,分析是尿素纯度低,制得双缩脲浓度低造成。
(三)、黄色反应以上是蛋白溶液加入浓硝酸后加热出现的浅黄色浑浊液加入NAOH后变为橘黄色。
(四)、茚三酮这个颜色,有点加热过了(五)乙醛酸反应上层浑浊,应该为少许浓硫酸与蛋白溶液混合导致蛋白变性二、蛋白质沉淀反应(一)、蛋白质盐析作用滤液中加入硫酸铵加水稀释后(二)、酒精沉淀蛋白质加入乙醇产生沉淀(图片拍忘了=。
=)加水稀释后蛋白质溶液中分别加入醋酸铅(左)和硫酸铜(右),均产生沉淀。
加水稀释后,仍然浑浊蛋白质溶液中分别加入苦味酸(左)、醋酸与鞣酸(右)加水稀释后,仍然浑浊蛋白质溶液中加入磺基水杨酸(左)加水后,右管较清澈,由于加水稀释前倒掉和三氯乙酸(右)一半溶液时倒多了蛋白质中分别加入浓硝酸(左)、加水稀释后,沉淀明显没溶解浓硫酸(中)、浓盐酸(右)(七)、加热沉淀蛋白质从左往右依次是1号(蛋白质+蒸馏水)、2号(蛋白质+0.1%醋酸+蒸馏水)、3号(蛋白质+10%醋酸+蒸馏水)、4号(蛋白质+10%醋酸+饱和NACl)、5号(蛋白质+10%NACl+水)水浴加热10分钟后(顺序从左往右为1、2、3、4、5)3、4、5号中分别用10%氢氧化钠与10%醋酸中和(从左往右依次为3、4、5)。
实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应一、目的1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法。
2、熟悉蛋白质的沉淀反应。
3、进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸种类不同,颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
多数蛋白质是亲水胶体,当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后,即产生沉淀。
三、实验器材1、鸡蛋白2、试管3、吸管4、滴管5、水浴锅等四、实验试剂1、卵清蛋白液:将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍,2-3层纱布过滤,滤液冷藏备用。
2、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、10%氢氧化钠溶液:10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml。
4、浓硝酸:比重1.42。
5、1%硫酸铜溶液:硫酸铜1g溶于蒸馏水,稀释至100ml。
6、饱和硫酸铵溶液:蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。
7、95%乙醇。
8、结晶氯化钠。
9、1%醋酸铅:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
10、饱和苦味酸溶液。
11、1%醋酸溶液:冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
五、操作1、颜色反应:A、双缩脲反应:蛋白质分子中含有肽键,与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似,能与硫酸铜结合成红紫色的络合物。
取一支试管,加蛋白质溶液10滴,再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴,混匀,观察是否出现紫玫瑰色。
B、黄色反应:蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸。
遇硝酸可硝化成黄色物质,此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。
于一试管中加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3-4滴,加热,冷却后再加10%NaOH溶液5滴,观察颜色变化。
C、茚三酮反应:蛋白质与茚三酮共热,则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应
一、目的
1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法。
2、熟悉蛋白质的沉淀反应。
3、进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应,不同蛋白质所含氨基酸种类不同,颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
多数蛋白质是亲水胶体,当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后,即产生沉淀。
三、实验器材
1、鸡蛋白
2、试管
3、吸管
4、滴管
5、水浴锅等
四、实验试剂
1、卵清蛋白液:将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍,2-3层纱布过滤,滤液冷藏备用。
2、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、10%氢氧化钠溶液:10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml。
4、浓硝酸:比重1.42。
5、1%硫酸铜溶液:硫酸铜1g溶于蒸馏水,稀释至100ml。
6、饱和硫酸铵溶液:蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。
7、95%乙醇。
8、结晶氯化钠。
9、1%醋酸铅:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
10、饱和苦味酸溶液。
11、1%醋酸溶液:冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
五、操作
1、颜色反应:
A、双缩脲反应:蛋白质分子中含有肽键,与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似,能与硫酸铜结合成红紫色的络合物。
取一支试管,加蛋白质溶液10滴,再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴,混匀,观察是否出现紫玫瑰色。
B、黄色反应:蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸。
遇硝酸可硝化成黄色物质,此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。
于一试管中加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3-4滴,加热,冷却后再加10%NaOH溶液5滴,观察颜色变化。
C、茚三酮反应:蛋白质与茚三酮共热,则产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
此反应为一切蛋白质及α-氨基酸所共有。
含有氨基的其他物质亦呈此反应。
取1ml蛋白质溶液置于试管中,加2滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现。
2、沉淀反应:
A、蛋白质盐析作用:向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度,蛋白质即沉淀析出,这种作用称为盐析。
取蛋白质溶液5ml,加入等量饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵溶液的浓度为50%饱和),微微摇动试管,使溶液混合静置数分钟,球蛋白析出(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵)。
B、乙醇沉淀蛋白质:乙醇为脱水剂,能破坏蛋白质胶体质点的水化层而使其沉淀析出。
取蛋白质溶液1ml,加晶体NaCl少许(加速沉淀并使沉淀完全),待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀。
观察有无沉淀析出。
C、重金属盐沉淀蛋白质:蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀。
取试管2支各加蛋白质溶液2ml,一管内滴加1%醋酸铅溶液,另一管内滴加1%CuSO4溶液至有沉淀生成。
D、生物碱试剂沉淀蛋白质:植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生物碱(或植物碱)。
能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂,如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。
生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀,可能因蛋白质和生物碱含有相似的含氮基团之故。
于1支试管中加2ml蛋白质溶液及1%醋酸溶液4-5滴,再加饱和苦味酸溶液数滴,观察结果。
六、实验结果记录
七、思考题
1、简述茚三酮与蛋白质进行颜色反应的原理。
2、维持蛋白质胶体溶液稳定性的因素有哪些?乙醇、重金属盐及生物碱试剂破坏蛋白质胶体溶液稳定性的机理是什么?。