基于析因设计解析济川煎对小鼠肠蠕动主效应研究-陈桂芬

气滞胃痛颗粒对小鼠胃肠动力的调节作用研究的开
题报告
一、研究背景
气滞胃痛是一种常见的胃肠道问题，其症状表现为胃部不适、疼痛等，给人们的健康造成了较大的威胁。

中药作为传统医学的重要组成部分，其具有疗效确切、副作用小等优点，受到了广泛的关注。

本研究围绕气滞胃痛颗粒，旨在探究其对小鼠胃肠动力的调节作用，为其在临床治疗中的应用提供依据。

二、研究目的
本研究旨在探究气滞胃痛颗粒对小鼠胃肠动力的调节作用，并探索其机制，为临床治疗提供理论依据。

三、研究内容
本研究将采用小鼠模型，通过灌胃方式给予气滞胃痛颗粒，观察其对小鼠胃肠道运动的影响，并结合相关生理指标，探究其作用机制。

四、研究方法
1.实验动物
选用健康的C57BL/6J小鼠，雌雄不限，年龄在8周左右，体重在20g左右。

2.制备气滞胃痛颗粒
采取调剂优质中药原料，经挑选、洗净、切片、炮制、组合、熟化等工艺加工制成。

3.实验设计
采用随机分组的方式，将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予气滞胃痛颗粒，对照组给予生理盐水，观察小鼠胃肠道运动情况。

4.观察指标
1）观察小鼠进食量，检测食物通过时间。

2）观察小鼠粪便的颜色、形态及数量，获取粪便干重。

3）记录肠道推进时间及频率等，评估胃肠道动力学改变。

5.数据处理
采用SPSS软件分析各组数据，并进行多重比较分析。

五、研究意义
本研究将探究气滞胃痛颗粒对小鼠胃肠动力的调节作用及其机制，为临床治疗提供理论依据，对中医肠胃病的防治研究有积极意义。

益生菌发酵六神曲的制备及其对功能性消化不良小鼠的改善作用目录1. 内容描述 (2)1.1 研究背景 (3)1.2 研究目的 (4)1.3 研究意义 (4)1.4 研究方法与材料 (6)2. 益生菌发酵六神曲的制备 (7)2.1 原料准备 (7)2.2 益生菌的筛选与扩增 (9)2.3 六神曲的配方与制备 (9)2.4 益生菌发酵六神曲的制作方法 (10)3. 功能性消化不良小鼠模型的建立与评价 (11)3.1 实验动物的选择与饲养 (12)3.2 功能性消化不良小鼠模型的建立 (13)3.3 小鼠体质量变化的观察与评价指标 (14)3.4 小鼠血清生化指标的变化分析 (15)4. 益生菌发酵六神曲对功能性消化不良小鼠的影响 (15)4.1 不同剂量益生菌发酵六神曲对小鼠体质量的影响 (17)4.2 不同剂量益生菌发酵六神曲对小鼠血清生化指标的影响 (17)4.3 益生菌发酵六神曲对小鼠胃肠功能的影响 (18)5. 结果与讨论 (20)5.1 益生菌发酵六神曲对小鼠体质量的影响结果分析 (21)5.2 益生菌发酵六神曲对小鼠血清生化指标的影响结果分析 (22)5.3 益生菌发酵六神曲对小鼠胃肠功能的影响结果分析 (22)6. 结论与展望 (24)6.1 主要研究结论总结 (24)6.2 研究的不足之处与展望 (25)6.3 对实际应用的建议与启示 (27)1. 内容描述功能性消化不良是一种指病理形态上没有明显器质性病变，但以功能性紊乱为主的慢性上消化道临床症候群，是消化系统常见病和消化系统疾病的研究热点之一。

本研究以益生菌发酵传统中药六神曲为切入点，探究六神曲经益生菌发酵后的成分变化及其对功能性消化不良小鼠模型的作用效果。

作为中草药剂型之一，广泛应用于中医复合方剂中，根据药代学理论，六神曲含有多种有益活性成分，如挥发油、维生素B等，具有宣导游气、健胃口、化食除胀的功效。

首先将六神曲粗粉与乳酸菌、嗜酸性乳杆菌等益生菌按照一定的比例混合，在适宜的温度与湿度条件下进行发酵。

经典名方济川煎古今文献分析
牛林强;吴丽林;易腾达;王莎莎;刘丽宁;袁振仪
【期刊名称】《中医药学报》
【年(卷),期】2022(50)5
【摘要】济川煎载于《景岳全书》,为明代医家张景岳首创,同时也是百首经典名方之一。

经查阅相关文献发现,近年有关济川煎相关报道多集中于实验研究与临床试验,少有从文献角度对其进行分析。

基于济川煎研究现状,本文采用文献计量学与文献研究的方法对济川煎原文、剂量古今折算、功效、古今临床应用等方面进行考辨分析。

结果发现,济川煎除原文所载治疗虚秘、产后便秘、气瘕等外,清代医家还将其应用于小儿便秘、目病、燥结、胸中痞满(阴结于下)、冬温兼伏暑伤阴等症,现代研究发现其主治病症主要为“便秘”“眩晕”“中风”“腹痛”“消渴”“痞满”“郁证”“虚劳”等。

该方的功效可标记为温肾益精,润肠通便。

在尊重原方用量、保证处方安全、方便临床应用及标准化生产的前提下,建议该方临床参考剂量为当归12 g,牛膝6 g,肉苁蓉9 g,泽泻6 g,升麻3 g,枳壳3 g。

该研究立足于古今文献考证,对明确济川煎临床应用,阐释其临床功效具有重要意义,以期为济川煎的二次开发及其他经典名方的考证提供思路。

【总页数】7页(P48-54)
【作者】牛林强;吴丽林;易腾达;王莎莎;刘丽宁;袁振仪
【作者单位】湖南中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R289.5
【相关文献】
1.经典名方辛夷散的古今文献分析与考证
2.经典名方黄连汤的古今文献考证研究
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4.经典名方圣愈汤的古今文献分析
5.经典名方枇杷清肺饮的古今文献考证
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㊃综述㊃基金项目:国家自然科学基金面上项目(82074543)作者单位:300381　天津中医药大学第一附属医院针灸部　国家中医针灸临床医学研究中心[陈璐(硕士研究生)㊁邸嘉玮(硕士研究生)㊁杜元灏];陕西中医药大学针灸推拿学院(杜元灏)作者简介:陈璐(1996-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:针灸对缺血性脑病机制的研究㊂E⁃mail:cl1172369432@ 通信作者:杜元灏(1965-),博士,教授,主任医师㊂研究方向:针灸对缺血性脑病机制的研究㊂E⁃mail:jpjs_cn@针刺治疗功能性消化不良的可能作用机制与作用靶点研究概述陈璐　邸嘉玮　杜元灏【摘要】　针刺在调节胃肠动力㊁恢复胃肠微生物群稳定结构㊁消除炎症反应㊁修复受损粘膜屏障等方面发挥着双向调节效应㊂肠 脑轴作为胃肠道与脑的双向调节通道,通过肠 脑轴途径可调节中枢神经系统㊁自主神经系统和肠神经系统的功能,由脑及肠或由肠及脑双向调整胃肠功能,从而改善餐后饱胀㊁恶心㊁食欲不振等多种消化不良症状㊂本文对目前针刺治疗功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)的临床证据及内在作用机制进行总结,通过检索并梳理近年来针刺治疗FD 的相关文献,发现针刺治疗FD 疗效确切㊁安全且无不良反应㊂但鉴于目前研究的局限性,针刺作用于十二指肠嗜酸性粒细胞的免疫调节途径仍在进一步探索中㊂笔者认为今后有必要进行高质量的实验研究,制定严谨㊁合理的实验方案,建立更理想的动物模型,深入挖掘针刺对肠 脑轴的神经免疫调节机制,针刺对肠道菌群种类及数量的调控,以及迷走神经在针刺治疗FD 中的具体机制等,提供更有说服力和可信的实验证据,以便更好地优化临床治疗㊂【关键词】　针刺;　功能性消化不良;　胃肠动力;　十二指肠嗜酸性粒细胞;　迷走神经;　肠脑轴;　作用靶点【中图分类号】　R259　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.11.043Overview of the possible mechanism and target of acupuncture in the treatment of functional dys⁃pepsiaCHEN Lu ,DI Jiawei ,DU YuanhaoDepartment of Acupuncture and Moxibustion ,The First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine /National Clinical Research Center of Traditional Chinese Acupuncture and Moxibustion ,Tianjin 300381,ChinaCorresponding author :DU Yuanhao ,E⁃mail :jpjs_cn@【Abstract 】　Acupuncture plays a bidirectional regulating effect in regulating gastrointestinalmotility,restoring the stable structure of gastrointestinal microbiome,eliminating inflammatory response and repairing the damaged mucosal barrier.Moreover,the gut⁃brain axis is a bidirectional regulatory channelbetween the gastrointestinal tract and the brain.The functions of the central nervous system (CNS),autonomic nervous system (ANS)and enteric nervous system (ENS)can be regulated through the gut⁃brain axis pathway,and the gastrointestinal functions can be adjusted from the brain to the intestine or fromthe gut to the brain bidirectional,so as to improve various dyspepsia symptoms such as postmeal fullness,nausea and loss of appetite.The present clinical evidence and internal mechanism of acupuncture in the treatment of functional dyspepsia (FD)were summarized in this paper.Through searching and combingrelated literature on acupuncture in the treatment of FD in recent years,it was found that acupuncture was effective,safe and without adverse reactions.However,in view of the limitations of current studies,the immunomodulatory pathway of acupuncture on duodenal eosinophils is still being further explored.The author believed that it was necessary to conduct high⁃quality studies in the future,formulate rigorous and reasonable experimental protocols,establish a more ideal animal model,and dig deeper into the neuroim⁃munomodulatory mechanism of acupuncture on the gut⁃brain axis.The regulation of the type and quantity of intestinal flora by acupuncture,as well as the specific mechanism of vagus nerve in acupuncture treatment of FD,provided more convincing and credible experimental evidences,so as to better optimize clinical treatment.【Key words】　acupuncture;　functional dyspepsia;　gastrointestinal motility;　duodenal eosinophil;　vagus;　the gut brain axis;　the target of action 功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是全球高发的功能性胃肠道疾病之一㊂迄今为止,只有有限的治疗方案可用,且效果不尽人意[1]㊂几十年来,研究者已经进行了许多研究来调查针灸包括电针㊁经皮穴位电刺激对FD患者的影响和内在机制,证实了针刺已成为一种有效的补充和替代疗法,不仅可以有效控制餐后饱胀感㊁胃痛㊁打嗝等消化不良的症状,还可以改善患者的生活质量和情绪状态[2⁃4]㊂然而基于高质量临床试验的机制研究较少,针刺对FD治疗效果和潜在机制尚未完全阐明㊂本文主要从调节胃肠动力㊁以十二指肠嗜酸性粒细胞为切入点㊁通过肠脑轴途径双向调节等方面阐述针刺治疗FD潜在的作用机制与作用靶点㊂1　针刺调节胃肠动力的作用机制胃肠运动指依靠平滑肌的收缩㊁舒张和蠕动以帮助完成食物消化和吸收㊂胃分泌功能紊乱㊁胃排空速率减慢㊁精神情绪异常等可导致胃肠动力障碍,不能充分使食物形成食糜,引起餐后饱胀㊁早饱㊁腹痛㊁嗳气等症状㊂很久以前,国内外研究[5⁃7]就证实了针灸对胃肠功能有良好的调节作用,利用针刺的双向调节效应,促使胃肠功能低下者增强,功能亢进者减缓㊂1.1　针刺对胃肠肽的影响胃肠激素又称胃肠肽,除了在各种生理刺激下分泌影响胃肠运动,还作为神经递质对胃肠运动进行调节[8]㊂目前某些胃肠肽水平的测定已作为FD 诊断的指标之一,而调整胃肠激素水平则是针刺治疗FD的重要作用机制㊂马巧宁等[9]利用颊针影响胃肠蠕动并测试胃动素的水平,针刺后发现胃动素水平提高,同时消化不良症状缓解㊂也有学者研究发现,电针 足三里”穴可有效改善FD患者临床症状,其机制可能与胰高血糖素样肽⁃1水平升高㊁降钙素基因相关肽㊁血清胃饥饿素水平降低有关[10]㊂若将电针组与多潘立酮药物组对比,电针通过升高血清中胃动素及胃泌素的含量㊁降低血管活性肽的含量,显著改善FD大鼠的食欲与运动行为,降低肠道敏感性[11]㊂徐派的等[12]发现电针刺激FD大鼠模型能明显降低血管活性肽含量,大鼠胃排空速度加快,改善了胃肠功能紊乱症状,证实了胃肠功能与血管活性肽分泌水平相关㊂因此针刺对胃肠运动有明显的调整作用,其疗效与各种胃肠肽水平及相互作用有关,说明针刺对胃肠运动的调节与胃肠肽关系密切㊂1.2　针刺对间质细胞的影响卡哈尔间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)与肠神经纤维存在紧密联系,具有产生慢波电位并传导电活动的作用,是胃肠道慢波活动的起搏和调节细胞[13]㊂ICC通过突触样连接和缝隙连接与胃肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)㊁肠神经系统(enteric nervous system,ENS)共同构成胃肠道的基本功能单位(ENS⁃ICC⁃SMC网络),ICC将产生的电信号通过ENS⁃ICC⁃SMC网络传递给SMC,介导释放神经递质㊁神经肽,引起肌层的节律性收缩,加速胃排空[14]㊂已有研究证实,FD胃肠动力障碍与ICC结构异常或数量减少有关[15]㊂谢植等[16]与药物潘多立酮对照,针刺FD大鼠模型足三里发现,胃残留率降低,异常的ICC超微结构恢复到接近正常状态,说明针刺可以通过恢复受损的ICC结构以及增加ICC数量,从而提高胃肠运动能力㊂王丹等[17]研究证实电针后三里穴㊁太冲穴可显著增强胃肠道活力,其作用机制可能是通过增加肠组织中c⁃Kit蛋白(ICC标志物)的水平,改善ICCs的结构及形态,从而恢复ENS⁃ICCs⁃SMC网络电位传导功能,调控胃肠功能紊乱㊂还有研究发现电针足三里穴可以在一定程度上修复ICC的缝隙连接网络结构,促使ICC之间及SMC之间的物质交换得以顺利完成, ICC起搏动作电位得以正常传递,有助于FD大鼠胃肠动力的恢复[18]㊂综上,针刺是通过c⁃Kit信号通路,增加ICC细胞的可塑性,恢复细胞间信号通信功能,使胃肠肌电活动得以恢复,从而改善胃肠动力㊂1.3　针刺对肠道菌群的影响越来越多的研究证实了胃肠道菌群的生态失调与FD的发生和发展之间密切关联[19⁃20]㊂胃肠道微生物群的种类比例失调可能损伤胃肠粘膜的生物屏障㊁干扰粘膜的免疫功能和造成微生物 肠 脑轴失调,出现内脏疼痛反应㊁胃肠活动紊乱等病理变化,最终引发一系列功能性胃肠道疾病㊂针刺可以通过增加肠道有益菌㊁减少致病菌,恢复菌群平衡常态来调控胃肠活动㊂侯天舒等[21]研究发现,电针可使溃疡性结肠炎大鼠下降的肠道菌群多样性指数和丰度值升高,增强益生菌的定植力㊁减弱致病菌的繁殖力,使肠内菌群向正常方向转化,由此证实了电针可促使肠道微生物群恢复稳态㊂Song 等[22]发现电针FD模型的足三里㊁中脘穴可降低梭杆菌门的水平,修复肠道屏障功能,进而降低促炎因子白介素(interleukin,IL)⁃18的水平来缓解内脏超敏反应的症状㊂肠-脑轴是一个整合了肠道和大脑之间的神经㊁激素和免疫信号的通讯系统,为肠道微生物及其代谢产物提供了一个进入大脑的潜在途径㊂这种通讯系统是双向的,使大脑能够影响胃肠功能(消化㊁运动㊁分泌)以及免疫功能(释放细胞因子)[23]㊂因此针刺可依靠这种双向调节系统,由脑及肠治疗FD,通过调控肠 脑轴的下行通路系统㊁抑制炎性因子释放㊁调节脑肠肽水平等恢复肠道微生物的组成与功能,进而改善肠道运动及内脏敏感性[24]㊂赵映等[25]研究发现,FD患者静息脑糖代谢较健康个体明显增强,而针灸可显著降低岛叶㊁前扣带皮层和下丘脑的糖代谢,进而调节与肠道菌群相关的生物活性物质,增强胃肠蠕动,缓解消化不良症状㊂此外,针刺部位不同对肠道菌群的调节具有显著差异,如下肢电针和腹部电针比较,乳酸菌属和Muri菌属丰度升高[26];其次,不同联合疗法(艾灸㊁电针㊁经皮穴位电刺激)对肠道菌群也会产生不同影响[27]㊂目前关于针刺调节肠道菌群的作用机制研究较少,且针刺作用部位㊁作用途径是否对肠道菌群的调节存在差异,在未来应继续深入探究,完善以肠道菌群作为针刺效应机制的研究㊂综上,针刺通过对胃肠肽表达及相关受体㊁胃肠肌电活动㊁肠道菌群结构等多层次㊁多途径㊁多靶点来增强胃肠动力,加速胃排空,达到改善FD症状的目的,体现了针刺效应的整体作用㊂2　十二指肠嗜酸性粒细胞可能是针刺治疗的作用靶点 细菌㊁过敏原㊁应激等因素破坏了肠粘膜的完整性,引发局部炎症反应,从而激活免疫系统,使嗜酸性粒细胞释放白介素㊁炎症细胞因子㊁细胞毒性颗粒等因子[28],同时影响神经系统中的肠神经胶质细胞结构[29],分泌炎症介质(细胞因子㊁神经生长因子㊁一氧化氮),导致黏膜通透性增加,平滑肌收缩改变,出现腹胀㊁恶心等消化不良症状㊂因此,众多研究提出,与胃运动和感觉功能障碍相关的胃十二指肠区域粘膜完整性受损和低度免疫反应激活是FD的起源㊂近年来,基于单个细胞和细胞因子分析神经免疫机制的潜在作用㊁胃肠道免疫反应的相互作用,为分析FD病理生理过程带来了新见解,也成为探究针刺治疗FD潜在作用机制的重要指标[30]㊂越来越多的证据表明,FD患者的十二指肠炎症伴随着嗜酸性粒细胞浸润增加㊁脱颗粒程度增高和全身细胞因子水平升高[31⁃32]㊂针刺可以从调节炎症因子及细胞因子水平㊁抑制嗜酸性粒细胞脱颗粒等方面消除十二指肠低度炎症,进而修复受损的肠粘膜屏障,减轻内脏超敏反应,改善FD症状㊂在大鼠FD 模型中,电针足三里穴㊁太冲穴,观察P物质(substance P,SP)㊁降钙素基因相关肽㊁IL⁃6表达水平显著降低,证实针刺有效提高大鼠机体免疫水平,降低炎症因子表达水平,改善胃肠道功能障碍[33]㊂Dong等[34]研究发现针刺后FD患者肠粘膜上嗜酸性粒细胞呈规则的椭圆形,脱颗粒程度明显降低,表明针刺可抑制嗜酸性粒细胞活化和脱颗粒,减弱局部炎症反应,从而改善FD大鼠的内脏超敏反应㊂除此以外,还有研究者提出心理困扰与十二指肠嗜酸性粒细胞增多症之间存在相互作用[35],这为十二指肠嗜酸性粒细胞可能驱动焦虑提供第一个前瞻性证据,但在控制年龄㊁性别和服用质子泵抑制剂情况下,因果关系尚未完全明确,需严格制定纳排标准进一步研究十二指肠嗜酸性粒细胞与情绪的关系㊂十二指肠嗜酸性粒细胞增多在FD患者中很常见,但以十二指肠嗜酸性粒细胞作为针刺治疗FD 靶点的研究甚少,仅以动物实验研究为主,针刺对FD患者十二指肠嗜酸性粒细胞的潜在作用仍需要深入研究,包括阐明减少嗜酸性粒细胞募集和抑制脱颗粒的机制,以及靶向治疗的评估指标㊂3　针刺调节迷走神经的作用机制迷走神经是肠道和大脑之间双向沟通的关键组成部分,越来越多的证据提示迷走神经是感知 环境”并促进神经和内分泌反应以维持胃肠道健康状态的稳态的主要元素[36]㊂如何调节迷走神经功能成为实现调控内脏神经系统自稳态的主要治疗靶点㊂近年来,热点聚焦于寻找刺激迷走神经的部位和方法,使之成为供临床选择的治疗手段㊂针刺从体表刺激调节内脏功能的优势已成为一种公认的外治法,经皮耳穴迷走神经刺激(transcutaneous vague nerve stimulation,taVNS)是一种融合中医耳穴理论和迷走神经调控的现代科学疗法,已被引入科学研究和临床诊治领域[37]㊂taVNS刺激部位为耳甲区,此区域是迷走神经耳支的主要分布区,在针刺调节胃肠疾病中扮演着重要的角色㊂3.1　迷走神经传导通路胃肠功能受神经㊁体液㊁免疫等共同调控,其中神经系统占主导地位,神经系统的变化均能影响胃肠功能[38]㊂现代研究认为针刺后的躯体感觉信号通过脊髓上传至中枢神经系统的孤束核㊁迷走神经背核等核团,并与胃肠伤害性刺激信息汇集,经整合分析后传出神经冲动,将调控信息经迷走神经传递到胃肠壁内神经丛进而调控胃的感觉㊁运动和分泌功能[39]㊂Guo等[40]研究发现FD患者近端胃排空时间延迟,其认为可能是由餐后迷走神经活性降低导致自主神经系统平衡紊乱引起的㊂而最新研究发现可通过刺激迷走神经促进幽门括约肌的舒张,显著加速胃排空,由此可知迷走神经放电与胃运动关系密切[41]㊂也有学者发现针刺的躯体神经信号聚集在孤束核㊁迷走神经背核及下丘脑室旁核等中枢核团中并增强相关神经元的表达,进而激活迷走神经通路调节胃肠[42];当切断双侧膈下传出迷走神经后,电针的调节作用明显减弱或消失;当破坏下丘脑室旁核后,胃肠动力明显减弱,电针干预也不能恢复胃肠功能,这可能与不能激活迷走神经有关[43⁃44]㊂此外,在FD迷走神经传入超敏反应的大鼠模型中,膈下迷走神经切断术可使疼痛行为得到改善,这表明激活迷走神经传入信号可降低疼痛感觉,也可在情绪状态的调节中发挥作用[45]㊂3.2　胆碱能抗炎通路胆碱能抗炎通路的概念是Borovikova[46]于2000年首次提出㊂由肠神经元接触的迷走神经传出纤维介导,在巨噬细胞的突触连接处释放乙酰胆碱,与a7烟碱型乙酰胆碱受体结合后,可能发生一系列细胞内信号变化,导致高迁移率组蛋白1和肿瘤坏死因子⁃α等炎性细胞因子减少,以发挥抗炎作用,即为经典的胆碱能抗炎通路[47]㊂目前很多研究已表明针刺可以通过迷走神经激活胆碱能抗炎通路改善各种胃肠道的炎症反应㊂韩娟等[48]在研究taVNS治疗FD的作用机制中发现,taVNS可通过胆碱能抗炎通路减轻肠道炎症反应,降低促炎因子IL⁃6㊁IL⁃1β㊁肿瘤坏死因子⁃α的表达,增加乙酰胆碱及a7烟碱型乙酰胆碱受体蛋白表达以抑制核因子⁃κB 信号通路激活,显著改善肠道炎症和组织的损伤,促进胃排空㊂还有研究发现Janus激酶2(Janus kinase2,JAK2)和调节信号传导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription3, STAT3)在胆碱能抗炎过程中也发挥重要作用,推测针刺可能调控a7烟碱型乙酰胆碱受体介导的JAK2⁃STAT3信号转录通路以减少肠道炎性细胞因子,改善胃肠蠕动[49]㊂胆碱能抗炎通路作为一种神经 免疫调节通路,与体液抗炎机制相比,具有更快捷更易控制的优势,为调节细胞因子及炎症反应提供了新途径㊂3.3　脑肠轴的调节迷走神经在肠道和大脑之间的双向交流中至关重要,上行迷走神经感知肠道内的局部机械和化学信号,并将这些信号发送到大脑,进而调节食物的摄入量,改善不良情绪等;下行迷走神经将大脑信号传递到肠道,包括由压力或上行肠道信号(例如迷走神经反射)触发的大脑信号㊂这些迷走神经传出信号调节肠道功能,包括感觉㊁肠道蠕动㊁胃肠肽分泌㊁及炎症等[50]㊂因此迷走神经传入信号的改变会对大脑功能产生影响,进而影响肠道功能,迷走神经传出信号的改变会对肠道功能产生影响,进而影响大脑功能㊂Jin等[51]认为FD患者胃动力增强的原因很可能是激活迷走神经使胃泌素和其他激素分泌增加引起的㊂电针FD大鼠胃俞募穴,可以改变迷走神经背核区N-甲基-D-天冬氨酸受体活性及调节血清一氧化氮含量,从而实现对胃肠活动的调节[52]㊂须注意的是,针刺作用部位不同,驱动的胃肠道运动控制相关的自主神经通路不同㊂一般认为,下胸及腹部区域刺激,可通过节段性脊髓反射驱动胃肠道交感神经通路,诱导胃肠运动的抑制反应;刺激面颈㊁上下肢区域,迷走神经兴奋性增加,促进胃肠道活动[53]㊂然而针灸对脑肠肽㊁自主神经相关神经递质及其受体的调节,涉及的相关信号通路㊁分子生物学机制及各级中枢具体作用机制仍需进一步探究㊂4摇讨论综上所述,针刺治疗功能性消化不良的效果明显优于胃肠促动力药㊁抑酸药等,具有双向㊁多系统㊁多靶点调节作用,且无明显不良反应等优势,具有广阔的应用前景㊂尽管目前对针刺在胃肠道中的作用机制及作用靶点的研究上取得了一定进展,但从现有文献报道来看仍发现许多不足之处,需在今后的研究中重点关注㊂(1)现有文献质量较差且样本量相对不足,从这些实验中得出的结论有待考证;(2)目前国内外有关针刺治疗FD的研究仍处于动物研究阶段,部分基础实验设计不合理,相关检测方法精准度有待提高,导致结论具有明显的局限性,缺乏大样本㊁多中心的临床随机对照研究;(3)现有的针刺研究主要集中在肢体和腹部,对头面高位颈髓的刺激作用研究尚未受到重视,且穴位的特异性对肠-脑轴的调节是否一致;(4)对针刺疗法的主要参数(针具㊁深度㊁留针时间等)㊁针刺联合其他疗法的试验设计不够严谨,同时也未考虑性别㊁年龄㊁饮食习惯等客观因素对针刺的影响,然而这些要素在针刺治疗FD过程中起着决定性的作用㊂因此开展更多大样本㊁多中心的随机对照试验,设计严谨㊁精确的试验方案,从肠 脑轴角度仔细分析针刺在外周传入㊁传出过程中神经免疫调节机制,尤其是针刺对自主神经系统的具体作用是未来针刺治疗FD研究的新方向㊂参考文献[1]　Singh R,Zogg H,Ghoshal U C,et al.Current treatment optionsand therapeutic insights for gastrointestinal dysmotility andfunctional gastrointestinal disorders[J].Front Pharmacol,2022,13:808195.[2]　WANG X Y,WANG H,GUAN Y Y,et al.Acupuncture forfunctional gastrointestinal disorders:A systematic review andmeta⁃analysis[J].J Gastroenterol Hepatol,2021,36(11):3015⁃3026.[3]　WANG L,XIAN J,SUN M,et al.Acupuncture for emotionalsymptoms in patients with functional gastrointestinal disorders:Asystematic review and meta⁃analysis[J].PLoS One,2022,17(1):e263166.[4]　Rabitti S,Giovanardi C M,Colussi D.Acupuncture and relatedtherapies for the treatment of gastrointestinal diseases[J].J ClinGastroenterol,2021,55(3):207⁃217.[5]　Jang J H,Lee D J,Bae C H,et al.Changes in small intestinalmotility and related hormones by acupuncture stimulation atZusanli(ST36)in mice[J].Chin J Integr Med,2017,23(3):215⁃220.[6]　郭静,孙建华,陈璐,等.针刺双向调节效应 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HE Yue, YANG Song tao, TANG J ian jun, et al
Chengdu un iversity of TCM ( Chengdu 610075)
Abstrac t: O b jective: T o observe the effec t o f comb inations o f ex tractive from different part o fN ardostachys chinens is Bata l in pro m oting the m ovem ent of the sma ll intestina l o f m ice M ethod s: M ice w ere d iv ided into 6 groups : A trop ine group ( nega tive con tro l g roup)、 deco ction o f high dose group ( g roup ) 、 high dose vo latile oil and decoction g roup ( group)、 low dose vo latile o il w ith h igh dose deco ction g roup ( ! g roup)、 low dose vo la tile o il and decoc tion g roup ( ∀ g roup) and a positive contro l g roup o f C isapr ide H erba l decoction w as G iven to m ice o f these six g roups by intragastr ic adm in istration then to observe the m ovem ent in the sm all intesti nal o fm ice Resu lts: The m ovem ent o f the sm a ll intestine of g roups of 、 、 ! 、 ∀ w ere strong er than the negative contro l group; T he movement o f the sm all intestine o f g roups o f 、 、 ! w ere stronger than the P ositive contro l g roup Conclus ion: The comb ination o f extractive from d ifferent par t o fN ardostachys ch inensis Bata l has good effec t in promo ting the m ovem ent o f the sm a ll in testine ofm ice

健脾益气方对脾虚小鼠胃肠动力、血清淀粉酶、GAS及血浆MTL的影响李冰;张淑玲;范会织【期刊名称】《临床医学研究与实践》【年(卷),期】2024(9)8【摘要】目的分析健脾益气方对脾虚小鼠胃肠动力、血清淀粉酶、胃泌素(GAS)及血浆胃动素(MTL)的影响。

方法将80只小鼠随机分为空白对照组、模型组、JPYQ-低剂量组、JPYQ-中剂量组、JPYQ-高剂量组,每组16只。

除空白对照组外,其余各组均采用大黄水煎液灌胃造小鼠脾虚模型,JPYQ-低剂量组、JPYQ-中剂量组、JPYQ-高剂量组分别给予10.00 g/(kg·d)、20.00 g/(kg·d)、40.00 g/(kg·d)健脾益气方治疗。

比较各组的体质量、血清淀粉酶、GAS、血浆MTL水平、脾脏指数、胸腺指数、胃内色素相对残留率及小肠推进率。

结果给药后,JPYQ-高剂量组的体质量高于JPYQ-低剂量组、JPYQ-中剂量组(P<0.05)。

血清淀粉酶、GAS及血浆MTL水平比较,JPYQ-高剂量组>JPYQ-中剂量组>JPYQ-低剂量组>模型组(P<0.05)。

脾脏指数比较,JPYQ-高剂量组>JPYQ-中剂量组>JPYQ-低剂量组>模型组(P<0.05);JPYQ-高剂量组的胸腺指数高于JPYQ-低剂量组、JPYQ-中剂量组及模型组(P<0.05)。

胃内色素相对残留率比较,JPYQ-高剂量组<JPYQ-中剂量组JPYQ-低剂量组<模型组(P<0.05);小肠推进率比较,JPYQ-高剂量组>JPYQ-中剂量组>JPYQ-低剂量组>模型组(P<0.05)。

结论健脾益气方可明显改善脾虚小鼠胃肠动力、血清淀粉酶、GAS和血浆MTL水平,且高剂量应用的效果更佳。

【总页数】4页(P1-4)【作者】李冰;张淑玲;范会织【作者单位】北京中医药大学孙思邈医院(李志刚名医工作室)【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.超微枳术丸对功能性消化不良小鼠胃肠运动及MTL、GAS的影响2.健脾益气方对化疗性胃肠功能紊乱大鼠血清GAS、EGF水平的影响3.人参水提物对脾虚小鼠胃肠动力和血清Ghrelin的影响4.柴术理胃饮对肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠血清MTL、GAS的影响5.金仁陈子方对脾虚小鼠免疫、胃肠动力及其生存状态的影响研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

陆为民教授辨证治疗消化病医案3则发布时间：2021-12-28T09:08:53.960Z 来源：《医师在线》2021年32期作者：许波，陈敏，陆为民，赵菁，赵俊，郑浩[导读] 陆为民教授系江苏省中医院主任中医师，博士生导师，师从国医大师徐景藩教授，从事临床工作30余年，尤擅治疗消化系统相关疾许波，陈敏，陆为民，赵菁，赵俊，郑浩南京中医药大学附属医院南京 210029）摘要：陆为民教授系江苏省中医院主任中医师，博士生导师，师从国医大师徐景藩教授，从事临床工作30余年，尤擅治疗消化系统相关疾病，临床经验丰富，疗效显著。

笔者有幸跟随陆师学习，今将陆师运用中医临床思维，辨证论治，治疗胃痛、噎膈、便秘验案介绍如下，以飨同道。

关键词：胃痛；脾虚血瘀；噎膈；肝胃郁热；便秘；阴阳两虚；验案陆为民教授系江苏省中医院主任中医师，博士生导师，师从国医大师徐景藩教授，从事临床工作30余年，尤擅治疗消化系统相关疾病，临床经验丰富，深受广大患者好评。

笔者有幸跟随陆师学习，侍诊左右，收益良多，现将其验案介绍如下，以飨同道。

1.益气健脾，活血化瘀治胃痛患者李某，男，45岁，2021年3月10日初诊。

主诉：剑突下隐痛间作半年余。

2021年2月26日查胃镜示：慢性胃炎伴糜烂。

病理示：（窦小）轻度慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生。

后间断服用奥美拉唑肠溶片，未见明显好转。

诊见：患者剑突下隐痛，进食后加重，时有胃胀，神疲乏力，少气懒言，食纳欠香，大便日行1-2次，不成形，舌紫暗，苔薄，脉细数。

患者为饭店老板，平素饮食作息不规律。

西医诊断：慢性萎缩性胃炎。

中医诊断：胃脘痛病，辩证：脾虚血瘀证。

治拟益气健脾，活血化瘀。

处方：黄芪15g，麸炒白术10g，茯苓15g，陈皮10g，法半夏10g，薏苡仁30g，淮山药15g，枳壳10g，鸡内金10g，莪术10g，白花蛇舌草15g，炒谷芽30g，炒麦芽30g，焦神曲15g。

14剂，早晚水煎，温服。

2021年3月25日二诊：患者乏力明显好转，但仍感剑突下隐痛，嗳气频，无反酸烧心，食纳香，大便正常。

56第19卷 第5期 2017 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 19 No. 5 May，2017北京：北京中医药大学，2012.[ 10 ] 姚丹霓. 寻常型银屑病主症量表构建及DLQI 量表临床最小重要差异值研究[ D ] .广州：广州中医药大学，2015.[ 11 ] 姜春燕，谭勇，赵宁，等. 湿疹证候分类及中药用药规律分析[ J ] . 中华中医药学刊，2013，31 ( 11 )：2397-2399.[ 12 ] 韩海军，郭菲，刘红霞. 中药药浴联合他克莫司软膏治疗儿童特应性皮炎的疗效及安全性观察[ J ] . 中国中西医结合皮肤性病学杂志，2013 ( 3 )：164-166.[ 13 ] 高东玲. 湿疹患者体质类型与其辨证分型相关性的研究[ D ] . 济南：山东中医药大学，2013.[ 14 ] 杨彦洁. 中药治疗寻常性痤疮的文献分析及中医药内外结合治疗痤疮的临床研究[ D ] .北京：北京中医药大学，2014.[ 15 ] 张存雪，陈艳，杨配力，等. 中西医结合治疗婴幼儿湿疹（湿热证）临床观察[ J ] . 中国中医急症，2015 ( 12 )：2195-2197.[ 16 ] 郭念星. 中医药治疗过敏性紫癜性肾炎的文献研究[ D ] .济南：山东中医药大学，2015.[ 17 ] 李伟霞，唐于平，王欢，等. 药对研究（Ⅶ）——当归-川芎药对[ J ] . 中国中药杂志，2013 ( 24 )：4220-4226.[ 18 ] 徐晓兰. 灵芝三萜和金银花绿原酸生物合成途径关键酶基因的挖掘及分析[ D ] .北京：北京协和医学院，2013.[ 19 ] 于思杰. 复方苦参止痒软膏（乳膏）治疗慢性湿疹的临床研究[ D ] .北京：北京中医药大学，2014.[ 20 ] 颜贵明，汪长中，张传英，等. 丹皮酚干预慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构作用的实验研究[ J ] . 中国临床药理学与治疗学，2015 ( 5 )：499-504.[ 21 ] 高彦炜，王贵涛，钱中央，等. 复方氟米松软膏联合盐酸西替利嗪片治疗慢性湿疹的临床疗效观察[ J ] . 中国医院用药评价与分析，2013 ( 7 )：644-646.[ 22 ] 郭晓明. 湿疹溻渍方治疗婴儿湿疹的临床与实验研究[ D ] .北京：北京中医药大学，2013.目前的流行病学调查显示，英国、美国和加拿大便秘患病率为10%~15%[1]，我国成年人群便秘的发生率为3%~17%[2]，可见便秘发病趋势西方略高于东方。

◇基础研究◇摘要目的：基于转录组学探索调脾承气汤改善高热量和高蛋白食物导致积食小鼠的分子机制。

方法：C57小鼠被随机分为正常对照组、模型组、调脾承气汤低剂量组（145mg/mL ）、调脾承气汤高剂量组（580mg/mL ）、多潘立酮组（0.15mg/mL ）。

对实验小鼠进行一般状态观察和平均食量统计，测定各组小鼠胃排空及肠推进率。

H&E 染色观察胃组织病理变化；PAS 染色观察胃组织糖元变化；比色法测定胃蛋白酶活力；酸碱滴定法测胃内容物的pH 值。

转录组测序分析胃组织差异基因，并对差异基因制作火山图和聚类热图，KEGG 对差异基因进行信号通路富集分析。

RT-qPCR 验证筛选得到的差异基因。

结果：积食小鼠在调脾承气汤治疗后小鼠体质量和平均食量增加（P <0.05），积食小鼠肠推进率和胃排空速度加快（P <0.05）。

调脾承气汤能够保护胃组织结构和胃组织糖元降解，提升胃蛋白酶活力（P <0.05）和降低胃内容物pH （P <0.05）。

转录组结果显示调脾承气汤可以调节Acox2和cilp2的表达，调节脂肪消化吸收、蛋白质消化吸收、胰腺分泌信号。

RT-qPCR 显示，相较于模型组，调脾承气汤上调Acox2（P <0.05），下调cilp2（P <0.05）的mRNA 水平。

结论：调脾承气汤可以改善高热量和高蛋白食物导致积食小鼠的消化功能障碍，其机制涉及到调节脂肪和糖类代谢基因Acox2和cilp2，以及胰腺分泌信号。

关键词调脾承气汤；转录组；消化不良；胃肠功能中图分类号：R965.2文献标志码：A文章编号：1009-2501(2024)03-0252-08doi ：10.12092/j.issn.1009-2501.2024.03.002功能性消化不良（functional dyspepsia ，FD ），是一组具有餐后饱胀、恶心、呕吐、厌食、上腹痛或反酸等持续或反复出现的症状，但排除器质性、系统性、代谢性疾病的综合征。

DOIʒ10．13192/j．issn．1000-1719．2015．03．081拆方研究胃肠舒片对小鼠胃肠动力障碍的影响徐芳1，丁宝刚2，刘孟安2，孙喜灵2（1．滨州医学院病理生理学教研室，山东烟台264003；2．滨州医学院中西医结合学院，山东烟台264003）摘要：目的：探讨胃肠舒片的药物配伍机制。

方法：选择昆明种小鼠随机分9组，除正常对照组外，其余各组复制胃肠动力障碍动物模型。

模型成功后，正常对照组和模型对照组给予生理盐水，其余各组分别给予胃肠舒片、不同药物配伍及各单味药药液灌胃，连续用药7天，以葡聚糖蓝（BD ）2000为标记物，观察胃排空和肠推进率。

结果：胃肠舒片、白芍熟大黄、熟大黄甘草及单味熟大黄，均能显著提高胃排空和肠推进率，其中胃肠舒片与白芍熟大黄两组的胃排空率高于单味大黄组（P ＜0.05）；白芍甘草、单味白芍及单味甘草对胃排空和肠推进率较模型对照组无明显差异（P ＞0.05）。

结论：胃肠舒片促进胃肠动力作用机制可能与白芍熟大黄配伍后，芍药总苷和大黄素等物质发挥协同作用有关。

关键词：胃肠舒片；拆方；胃肠动力障碍；实验研究中图分类号：Ｒ285．5文献标志码：A 文章编号：1000-1719（2015）03-0641-02Study on Effect of Decomposed Ｒecipes of Weichangshu Tablet onMice with Disorder of Gastrointestinal MotilityXU Fang 1，DING Baogang 2，LIU Meng'an 2，SUN Xiling 2（1．Department of Pathophysiology ，Binzhou Medical University ，Yantai 264003，Shandong ，China ；2．College of Combination ofTraditional Chinese Medicine with Western Medicine ，Binzhou Medical University ，Yantai 264003，Shandong ，China ）Abstract ：Objective ：To discuss the mechanism of compatibility of Weichangshu Tablet．Methods ：Kunming mice were random-ly divided into 9groups （n =10）．In addition to the normal control group ，the other eight groups were duplicated animal models of gastrointestinal motility disorder．The normal control group and the model control group were given normal saline by intragastric administration and the other groups were respectively given Weichangshu Tablet ，different medicines compatibilities and different single medicine for 7days．Blue dextran （BD ）2000was used to observe the gastric emptying rate and the rate of intestinal pro-pulsion．Ｒesults ：Weichangshu Tablet ，Ｒadix Paeoniae Alba －cooked Ｒhubarb ，cooked Ｒhubarb －Licorice and single cooked Ｒhu-barb all promoted the gastric emptying rate and the rate of intestinal propulsion．Weichangshu Tablet and Ｒadix Paeoniae Alba －cooked Ｒhubarb were better in the function of promoting gastric emptying than single Ｒhubarb （P ＜0．05）．Compared with the model control group ，there was no significant difference of gastric emptying rate and the rate of intestinal propulsion （P ＞0．05）in Ｒadix Paeoniae Alba －Licorice ，single Ｒadix Paeoniae Alba and single Licorice group．Conclusion ：The mechanism of Weichang-shu Tablet promoting gastrointestinal dynamics may be related to the synergistic action of total glucosides of paeony and emodin af-ter compatibility of Ｒadix Paeoniae Alba and cooked Ｒhubarb．Key words ：Weichangshu Tablets ；disorder of gastrointestinal motility ；decomposed recipe ；experimental research 收稿日期：2014－10－15基金项目：国家自然科学基金资助项目（30873263）；山东省自然科学基金资助项目（ZＲ2012HM040）作者简介：徐芳（1979－），女，山东淄博人，副教授，博士，研究方向：中药应用基础研究。

２０23年12月第42卷第12期山东中医杂志论著·临床研究济川煎治疗老年功能性便秘临床研究高静1，李国荣1，张本艳1，许翠萍2（1.山东中医药大学，山东济南250355；2.山东第一医科大学第一附属医院，山东济南250014）［摘要］目的：探讨济川煎治疗老年功能性便秘的临床疗效。

方法：选择153例65岁及以上的功能性便秘患者，分为两组，研究组78例服用济川煎治疗，对照组75例采用功能性便秘一般治疗法。

治疗前1周开始，对患者排便频率、粪便质量、粪便含水量、粪便性状、SF -36健康量表进行评估，治疗4周后再持续观察4周，观察济川煎的临床疗效。

采用qPCR TaqMan 探针法定量检测双歧杆菌（Bifidobacterium ）、乳酸杆菌（Lactobacillus ）、拟杆菌（Bacteroides ）、肠杆菌（Enterobacter ）和肠球菌（Enterococcus ）的含量，以探讨济川煎对老年功能性便秘患者肠道微生物的影响。

结果：研究组治疗4周后排便频率由平均每周2.2次提高至4～5次；平均排便质量由平均每次75～80g 提高至105～110g ，Bristol 粪便性状量表平均评分治疗前2.58分，大多数患者表现出粪便干燥、硬块且成条或成条但有裂纹，治疗后评分显著提高，达到4分；治疗前患者SF -36健康量表评分低于50分，济川煎治疗后，SF -36评分提高至50～60分。

上述指标研究组治疗效果优于对照组。

济川煎治疗前肠杆菌数量和肠球菌的数量多于双歧杆菌、拟杆菌和乳酸杆菌，治疗后拟杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的丰度显著增加，而肠球菌和肠杆菌丰度显著减少，在这几种特定菌群中，济川煎治疗后，双歧杆菌数量最多。

对照组治疗后，拟杆菌丰度增加，其他菌群变化无统计学意义（P ＜0.05）。

结论：济川煎治疗可有效改善肠道菌群稳态，缓解老年人功能性便秘，提高老年人生活质量。

［关键词］功能性便秘；济川煎；肠道菌群；排便频率；排便质量；Bristol 粪便性状量表评分；SF -36健康量表［中图分类号］R256.35；R289.5［文献标志码］A［文章编号］0257-358X （2023）12-1266-08DOI ：10.16295/ki.0257-358x.2023.12.005Clinical Study on Jichuan Decoction （济川煎）for Functional Constipation in the ElderlyGAO Jing 1，LI Guorong 1，ZHANG Benyan 1，XU Cuiping 2（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Jinan 250355，China ；2.First Affiliated Hospital ofShandong First Medical University ，Jinan 250014，China ）AbstractObjective ：To investigate the efficacy ofJichuan Decoction （济川煎）on functional constipation in the elderly.Methods ：A total of 153patients with functional constipation aged 65and above were divided into two groups.The research group was treated with Jichuan Decoction （78patients ）and the control group was treated with conventional［收稿日期］2023-05-11［基金项目］山东省自然科学基金项目（编号：ZR202102280528）；山东省中医药科技发展计划项目（编号：2021Z037）［作者简介］高静（1996—），女，山东枣庄人，2021年级硕士研究生，研究方向：中药抗肿瘤研究。

畜牧兽医学报 2023,54(9):3931-3940A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.09.031开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过N F -κB 信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应陈喜宏1,路桂聪1,王浩磊1,苟少校1,玉永雄1,林 涛1,2*,蒋曹德1*(1.西南大学动物科学技术学院重庆市食草动物资源保护与利用工程技术研究中心,重庆400715;2.广安市饲料工业管理站,广安638000)摘 要:旨在探究异绿原酸C (I C A C )对乳腺炎及N F -κB 炎性通路的抑制作用㊂本研究以脂多糖(L P S )分别刺激牛乳腺上皮细胞(MA C -T )和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型,采用M T T 方法筛选I C A C 处理MA C -T 细胞的适宜浓度,E L I S A 检测炎性因子(I L -1β㊁I L -6和T N F -α)和炎性介导因子(C O X -2和i N O S )的表达水平,W e s t -e r n b l o t 方法检测N F -κB 信号通路关键蛋白(I κB 和p 65)的表达水平和磷酸化水平㊂结果发现:1)I C A C 在20~100m g ㊃L -1的浓度下对MA C -T 细胞没有显著的生长抑制作用(P >0.05);2)1m g㊃L -1的L P S 处理引起MA C -T 细胞中I L -1β㊁I L -6的蛋白质表达量极显著高于对照组(P <0.01),I C A C 处理(20㊁50㊁80m g ㊃L -1)极显著下调了MA C -T 细胞中I L -1β㊁I L -6㊁T N F -α㊁C O X -2和i N O S 的表达量(P <0.01);3)小鼠腹腔注射的I C A C (60㊁80㊁100m g ㊃k g -1)均降低了L P S 诱导的C D 3的表达,小鼠乳腺组织T 淋巴细胞浸润减少;4)I C A C 显著降低了L P S 诱导的MA C -T 细胞和小鼠乳腺组织中p 65和I κB 的磷酸化水平(P <0.05),抑制了p 65的核转移㊂上述结果说明,异绿原酸C 通过N F -κB 炎性通路抑制MA C -T 细胞和小鼠乳腺组织的炎性反应,但是异绿原酸C 在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究㊂关键词:异绿原酸C ;抗炎作用;N F -κB ;MA C -T ;小鼠乳腺中图分类号:S 858.23 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)09-3931-10收稿日期:2022-09-30基金项目:重庆民生专项创新项目(c s t c 2017s h m s -k j f p 0114;c s t c 2017s h m s -z d y f x 0045);中央高校基本科研业务费(X D J K 2017A 003);国家自然科学基金(32171673)作者简介:陈喜宏(1998-),女,吉林吉林人,硕士生,主要从事动物分子遗传育种研究,E -m a i l :150********@163.c o m ;路桂聪(1998-),女,河南濮阳人,硕士生,主要从事动物分子遗传育种研究,E -m a i l :1647313439@q q.c o m ㊂陈喜宏和路桂聪为同等贡献作者*通信作者:蒋曹德,主要从事动植物分子遗传育种与饲料生物技术与加工利用研究,E -m a i l :j c d p jx @s w u .e d u .c n ;林 涛,主要从事动物营养与动物炎症治疗研究,E -m a i l :727826660@q q.c o m I s o c h l o r o g e n i c A c i d C I n h i b i t s M a m m a r y I n f l a m m a t o r y R e s p o n s e t h r o u gh N F -κB S i g n a l i n g P a t h w a y U s i n g B o v i n e M a m m a r y G l a n d C e l l s a n d M o u s e M a m m a r y Gl a n d T i s s u e C H E N X i h o n g 1,L U G u i c o n g 1,WA N G H a o l e i 1,G O U S h a o x i a o 1,Y U Y o n g x i o n g 1,L I N T a o 1,2*,J I A N G C a o d e1*(1.C h o n g q i n g E n g i n e e r i n g R e s e a r c h C e n t e r f o r H e r b i v o r e s R e s o u r c e P r o t e c t i o n a n d U t i l i z a t i o n ,C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y ,S o u t h w e s t U n i v e r s i t y ,C h o n g q i n g 400715,C h i n a ;2.G u a n g a n F e e d I n d u s t r y M a n a g e m e n t S t a t i o n ,G u a n ga n 638000,C h i n a )Ab s t r ac t :T h e r e s e a r c h a i m s t o i n v e s t i g a t e t h e i n h i b i t o r y e f f e c t o f i s o c h l o r o ge n i c a c i d C (I C A C )o n m a s t i t i s a n d N F -κB i nf l a mm a t o r y p a t h w a y .I n t h i s s t u d y ,b o v i n e m a mm a r y e pi t h e l i a l c e l l s (MA C -T )a n d m o u s e m a mm a r y t i s s u e s t i m u l a t e d w i t h l i p o p o l ys a c c h a r i d e (L P S )w e r e u s e d a s i n v i t r o a n d i n v i v o i n f l a mm a t o r y m o d e l ,r e s p e c t i v e l y .MT T m e t h o d w a s u s e d t o s c r e e n t h e o pt i m a l畜牧兽医学报54卷c o n c e n t r a t i o n s o f I C A C f o r MA C-T c e l l t r e a t m e n t.T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f i n f l a mm a t o r y f a c t o r s (I L-1β,I L-6a n d T N F-α)a n d i n f l a mm a t o r y m e d i a t o r s(C O X-2a n d i N O S)w e r e d e t e c t e d u s i n gE L I S A,w h e r e a s t h e e x p r e s s i o n a n d p h o s p h o r y l a t i o n l e v e l s o f k e y p r o t e i n s(IκB a n d p65)i n N F-κB s i g n a l i n g p a t h w a y w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t:1)I C A C d i d n o t s i g n i f i c a n t l y i n h i b i t t h e g r o w t h o f MA C-T c e l l s a t t h e c o n c e n t r a t i o n s f r o m20t o100m g㊃L-1(P> 0.05);2)T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f I L-1βa n d I L-6p r o t e i n i n MA C-T c e l l s t r e a t e d w i t h1m g㊃L-1 L P S w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n u n t r e a t e d g r o u p(P<0.01),b u t I C A C(20,50,80 m g㊃L-1)s i g n i f i c a n t l y d o w n-r e g u l a t e d t h e e x p r e s s i o n o f I L-1β,I L-6,T N F-α,C O X-2a n d i N O S i n MA C-T c e l l s(P<0.01);3)I n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t I C A C(60㊁80㊁100m g㊃k g-1)r e d u c e d L P S-i n d u c e d C D3e x p r e s s i o n a n d T l y m p h o c y t e i n f i l t r a t i o n i n m a mm a r y t i s s u e s o f m i c e;4)I C A C s i g-n i f i c a n t l y r e d u c e d t h e p h o s p h o r y l a t i o n o f p65a n d IκB i n L P S-i n d u c e d MA C-T c e l l s a n d i n m o u s e m a mm a r y t i s s u e(P<0.05),a n d i t i n h i b i t e d t h e n u c l e a r t r a n s f e r o f p65.T h e s e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t I C A C i n h i b i t s t h e i n f l a mm a t o r y r e s p o n s e i n MA C-T c e l l s a n d m o u s e m a mm a r y t i s s u e t h r o u g h N F-κB i n f l a mm a t o r y p a t h w a y,b u t t h e r o l e o f I C A C i n t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n t o f b o v i n e m a s t i t i s n e e d s f u r t h e r i n v e s t i g a t i o n.K e y w o r d s:i s o c h l o r o g e n i c a c i d C;a n t i-i n f l a mm a t o r y;N F-κB;MA C-T;m o u s e m a mm a r y g l a n d *C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s:J I A N G C a o d e,E-m a i l:j c d p j x@s w u.e d u.c n,L I N T a o,E-m a i l: 727826660@q q.c o m奶牛乳腺炎又称乳房炎(m a s t i t i s),是奶牛养殖过程中一种常见且危害严重的炎性疾病㊂奶牛乳房炎会减少奶牛泌乳量㊁降低乳产品质量㊁增加奶牛淘汰率,造成养殖场的经济损失上升[1]㊂奶牛乳房炎主要分为隐性和临床乳房炎㊂奶牛乳房炎主要由病原微生物引起,主要的病原菌包括金黄色葡萄球菌㊁大肠杆菌和链球菌等㊂此外,布氏杆菌可能造成全身性感染而导致奶牛乳房病变[2]㊂研究发现,由大肠杆菌引起的奶牛乳房炎会从血液中调动白细胞进入乳腺,使临床型的乳腺炎发病风险增加[3]㊂目前国内外对于奶牛乳房炎的治疗主要采用抗生素疗法㊂抗生素在乳房炎发生初期可以有效杀死病原菌,特别是急性临床型乳房炎㊂但是,抗生素的大量使用会导致动物机体产生副作用,如机体免疫机能下降㊁胃肠道菌群紊乱等[4]㊂此外,抗生素会导致病原菌产生耐药性,奶牛乳汁也会残留抗生素危害人类健康㊂植物提取物具有安全性高㊁无药物残留和无耐药性等优点,可以改善动物机体的免疫力,因此被广泛应用于畜禽饲料添加剂[5]㊂因此,研究植物提取物的抗炎作用,对于筛选奶牛乳房炎的抗生素替代防治方法具有重要的理论和实践意义[6]㊂研究发现,异绿原酸(i s o c h l o r o g e n i c a c i d, I C A)具有抗氧化㊁心血管保护㊁抗菌㊁抗病毒㊁降糖㊁保护肝㊁抗炎和神经保护等多种药理作用[7]㊂I C A 最初于1950年从咖啡提取物中分离出来,现发现于茶㊁蔬菜和中药材等多种天然植物中[7]㊂I C A是一种由一分子奎宁酸和两分子咖啡酸组成的多酚类物质 双咖啡酰奎宁酸,有异绿原酸A㊁B和C (I C A A㊁I C A B㊁I C A C)三种异构体[7]㊂茶叶㊁西红柿和甘薯的相关研究揭示了I C A A为抗氧化剂和醛糖还原酶抑制剂[8-10]㊂W a n g等[9]报道I C A抑制了L P S(l i p o p o l y s a c c h a r i d e)诱导的R AW264.7细胞中N O的水平;体内试验证实,异绿原酸A对胶原蛋白诱导关节炎小鼠模型有较好的抗炎作用,剂量依赖性地逆转了L P S诱导的超氧化物歧化酶(S O D)㊁乳酸脱氢酶(L D H)㊁丙二醛(M D A)㊁白介素6(I L-6)㊁I L-1β水平[11-12];其他研究进一步证实了I C A A通过N F-κB(n u c l e a r f a c t o r k a p p a B)/ N L R P3(N L R f a m i l y p y r i n d o m a i n c o n t a i n i n g3)通路抑制L P S诱导的小鼠急性肺炎[13-14]㊂迄今为止发表的文献集中在I C A A药代动力学研究以及在小鼠模型中I C A A㊁I C A B抗氧化和抗炎作用,但是I C A C的相关功能以及I C A对牛奶乳腺炎抑制作用很少有研究报道㊂N F-κB是经典的炎性反应通路[15],N F-κB信号通路在炎症反应中的重要作用已在小鼠乳腺上皮细胞[16-19]㊁R AW264.7细胞[20-21]㊁B V-2细胞[22]中得到广泛证实㊂因此,本研究选择牛乳腺上皮细胞23939期陈喜宏等:利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过N F-κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应MA C-T,采用L P S诱导MA C-T细胞建立炎症模型,分析I C A C对炎症因子和N F-κB通路关键成员的表达及其活性的调控作用㊂1材料与方法1.1细胞培养在25c m2培养瓶内,将MA C-T细胞(B M C C, C HN)培养于5%C O2㊁37ħ培养箱(F o r m a S e r i e s 3W J,T h e r m o,U S A)㊂细胞培养采用D M E M基础培养液,加入10%F B S(G i b c o,A U S)㊁1%青链霉素(S o l a r b i o,C H N)和100m g㊃L-1的链霉素(S o-l a r b i o,C HN)㊂当细胞贴壁生长到90%时用0.25%胰酶(S o l a r b i o,C H N)消化并传代㊂1.2细胞活性检测MA C-T细胞按照2ˑ106个㊃孔-1的浓度接种在6孔板中,待其贴壁后添加不同浓度的I C A C(0㊁20㊁40㊁60㊁80㊁100㊁120㊁160m g㊃L-1),并设置5个重复㊂处理细胞24h后,吸弃上清,加入10μL MT T(S o l a r b i o,C H N)和90μL D M E M基础培养液,继续培养4h㊂培养结束后,弃去培养液,再加入110μL F o r m a z a n(S o l a r b i o,C H N)共育10m i n,光密度计(M u l t i s k a n G O,T h e r m o,U S A)检测490n m处的光密度(O D),并计算处理组相对对照组的细胞活性㊂细胞活性=(处理组O D值/对照组O D值)ˑ100%㊂1.3动物试验选取50只(30只雌鼠和20只公鼠)6~8周龄的B A L B/c小鼠(伯恩斯韦尔生物技术有限公司,重庆),母鼠每笼2只,公鼠每笼1只,并在无菌环境下饲养1周,自由采食(光照/黑暗各12h)㊂1周后,2只母鼠和1只公鼠合1笼进行交配㊂1周后将公鼠分出,母鼠单笼饲养㊂母鼠分娩7d后,将哺乳期母鼠随机分成6组,每组5只,各组分别为空白对照组㊁L P S组㊁L P S+D E X(d e x a m e t h a s o n e)(M a c k-l i n,C H N)[23]㊁L P S+I C A C(60m g㊃k g-1)㊁L P S+ I C A C(80m g㊃k g-1)㊁L P S+I C A C(100m g㊃k g-1)组[16]㊂L P S(200m g㊃L-1,50μL)溶于磷酸盐缓冲液(P B S)中,用2m L注射器(6号针头)注射到每只哺乳期母鼠最容易观察和采集的第四对乳头(R4和L4)的乳腺导管中[24]㊂I C A C处理组的每只哺乳期母鼠用9μL4%水合氯醛深度麻醉,在L P S滴注前1h腹腔注射不同浓度I C A C(60㊁80㊁100m g㊃k g-1),空白对照组和L P S组腹腔注射等体积的P B S,D E X 组注射0.5m g㊃k g-1的D E X[24]㊂注射L P S24h 后,通过颈椎脱臼处死小鼠,收集乳腺组织,一部分储存在-80ħ,另一部分存放于4%多聚甲醛组织固定液里㊂1.4炎症因子表达水平检测MA C-T细胞按照2ˑ106个㊃孔-1接种于6孔板中待其贴壁,随后培养在含有不同浓度I C A C(0㊁20㊁50㊁80m g㊃L-1)和1m g㊃L-1L P S的培养液中,并设置未处理和20m g㊃L-1的D E X处理对照[24]㊂24h后收集细胞上清液,按照I L-1β㊁I L-6㊁T N F-α㊁C O X-2和i N O S E L I S A试剂盒说明书(重庆博诺恒生物科技有限公司)测定各炎性因子的浓度㊂1.5W e s t e r n b l o t分析上述 1.4 培养的细胞采用细胞总蛋白提取试剂盒(S o l a r b i o,C H N)提取总蛋白,随后用B C A蛋白定量试剂盒(V a z y m e,C H N)进行总蛋白定量㊂取16μL蛋白样品,加入4μL上样缓冲液(S o l a r-b i o,C H N)后煮沸5m i n使蛋白变性,采用10% S D S-P A G E电泳(P o w e r P a c H C,B i o-r a d,U S A)㊂电泳条带通过转印设备(1703812,B i o-r a d,U S A)转移到P V D F膜(B i o s h a r p,C H N),在含有5%牛血清白蛋白(B i o t o p p e d,C H N)的封闭液中室温封闭1h (磷酸化蛋白封闭4h),进一步与一抗4ħ孵育过夜,其中一抗包括β-a c t i n(b s m-33036M;稀释比1ʒ10000)㊁p65(b s-23217R,稀释比1ʒ1000)㊁磷酸化p65(p-p65)(b s-0982R,稀释比1ʒ1000)㊁IκBα(b s-1287R,稀释比1ʒ1000)㊁磷酸化IκB(p-IκB)(b s-2513R,稀释比1ʒ1000)㊂将上述一抗杂交膜使用T B S T洗涤(6m i n,5次),随后与二抗G o a t A n t i-r a b b i t I g G/H R P(A B501-01A,N o v o p r o t e i n,C H N)室温孵育1h㊂孵育结束后,使用E C L化学发光系统(G e l D o c X R,B i o-R a d,U S A)检测目标条带,并使用I m a g e L a b(v e r s i o n5.2.1,B i o-R a d,U S A)和G r a p h P a d P r i s m(v e r s i o n8.2)进行定量分析㊂每个试验设置3个重复,以20m g㊃L-1D E X和1m g㊃L-1 L P S共处理作为阳性对照㊂1.6p65核转移免疫荧光检测MA C-T细胞培养在96孔板至90%融合,将细胞分为6组:空白对照组㊁L P S组㊁L P S+D E X组㊁L P S+I C A C(20㊁50㊁80m g㊃L-1),按照B e y o t i m e试剂盒说明书进行操作㊂1.7乳腺组织免疫组织化学试验将处理好的乳腺组织在甲醇中脱水,随后使用3393畜 牧 兽 医 学 报54卷石蜡包埋,制作成5μm 石蜡切片,将C D 3抗体(A b c a m ,稀释比1ʒ150)与石蜡切片一起放入4ħ孵育过夜㊂用P B S 洗涤3次,在室温下与G o a t A n -t i -r a b b i t I g G /H R P (A B 501-01A ,N o v o pr o t e i n ,C HN )在室温下孵育1h ,通过D A B 染色将信号可视化,苏木精进行细胞核染后在光学显微镜下进行拍照㊂1.8 数据分析利用S P S S 19.0进行单因素方差分析(O n e -w a y A N O V A ),多重比较采用D u n c a n s 法,P <0.05为差异显著,P <0.01为差异极显著㊂2 结 果2.1 I C A C 对M A C -T 细胞活性的影响采用不同浓度I C A C 处理MA C -T 细胞,检测I C A C 对MA C -T 细胞活性的影响(图1)㊂与对照组相比,浓度为20㊁40㊁60㊁80和100m g㊃L -1的I C A C 对MA C -T 细胞活性均没有显著影响(P >0.05)㊂当I C A C 浓度大于120m g㊃L -1时,与对照组相比,MA C -T 细胞的活性显著降低(P <0.05)㊂因此,选用20㊁50㊁80m g㊃L -1的I C A C 处理MA C -T 细胞进行下一步研究㊂柱形图上相同小写字母表示P >0.05,不同小写字母表示P <0.05(下同)T h e s a m e l o w e r c a s e l e t t e r s a b o v e t h e b a r s i n d i c a t e P >0.05,a n d d i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s m e a n P <0.05(t h e s a m e b e -l o w )图1 不同浓度的I C A C 处理对M A C -T 细胞活性的影响F i g .1 E f f e c t s o f I C A C t r e a t m e n t w i t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o n t h e a c t i v i t y of M A C -T c e l l s 2.2 I C A C 对L P S 诱导的M A C -T 炎症反应与氧化应激的抑制采用不同浓度的I C A C 和L P S 共处理MA C -T细胞,检测I C A C 对炎性与氧化应激因子的表达(图2)㊂与空白对照组相比,L P S 处理组炎性因子I L -1β㊁I L -6㊁T N F -α的蛋白质水平极显著增加(P <0.01),氧化应激因子C O X -2和i N O S 的表达量也极显著上调(P <0.01)㊂与L P S 处理组相比,20㊁50㊁80m g ㊃L -1I C A C 处理组I L -1β㊁I L -6㊁T N F -α㊁C O X -2和i N O S 的表达量极显著下调(P <0.01)㊂2.3 I C A C 对M A C -T 细胞N F -κB 信号通路的抑制利用W e s t e r n b l o t 检测I C A C 对N F -κB 信号通路关键蛋白(p65和I κB )磷酸化水平的影响(图3)㊂与空白对照组相比,L P S 处理后p 65和I κB的蛋白质水平没有显著差异(P >0.05,图3A~C ),但是p -p65和p -I κB 水平显著上升(P <0.05)(图3D )㊂相反,20㊁50和80m g㊃L -1I C A C 处理显著降低了L P S 诱导的p -p65和p -I κB 水平(P <0.05),且I C A C 处理组p -p65水平显著低于D E X 处理组(P <0.05)㊂进一步利用免疫荧光方法观察p 65核转移情况㊂图4A 显示,在空白对照组中p 65(红色荧光)分散在细胞中,但是在L P S 处理组中p 65大量向细胞核(蓝色荧光)聚集;与L P S 处理组相比,D E X 和I C A C 处理组(20㊁50㊁80m g㊃L -1)的细胞核红色荧光聚集较少㊂图4B 结果进一步证实L P S 处理组的细胞核p 65蛋白质水平相对于空白对照组极显著上升(P <0.01);与L P S 组相比,D E X 组和I C A C 处理组(20㊁50㊁80m g㊃L -1)细胞核p 65极显著下降(P <0.01)㊂2.4 I C A C 对L P S 诱导小鼠乳腺炎症的抑制采用组织免疫组化方法体内证实I C A C 对L P S43939期陈喜宏等:利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C 通过N F -κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应与空白对照相比,柱形图上##表示P <0.01;与L P S 处理组相比,*和**分别表示P <0.05和P <0.01,下同C o m p a r e d w i t h t h e b l a n k c o n t r o l ,##o n t h e b a r c h a r t r e p r e s e n t s P <0.01;c o m p a r e d w i t h L P S t r e a t m e n t g r o u p,*a n d **r e p r e s e n t P <0.05a n d P <0.01,r e s p e c t i v e l y,t h e s a m e a s b e l o w 图2 I C A C 对L P S 诱导的炎性因子表达的影响F i g .2 E f f e c t o f I C A C o n L P S -i n d u c e d e x p r e s s i o n o f i n f l a m m a t o r yf a c t o r s 诱导的小鼠乳房炎症的保护作用㊂如图5所示,空白对照组的乳腺组织形态表现正常,L P S 处理组中的T 细胞标记物C D 3明显增多,表明乳腺组织T 淋巴细胞浸润增多㊂与L P S 处理组相比,D E X 对照组与I C A C 处理组的小鼠乳腺组织的T 淋巴细胞浸润明显减少,且I C A C 处理组比D E X 组效果更明显㊂2.5 I C A C 对小鼠乳腺组织N F -κB 信号通路的抑制利用W e s t e r n b l o t 检测小鼠乳腺组织中I C A C 对N F -κB 信号通路关键成员p 65和I κB 的磷酸化影响(图6)㊂与对照组相比,L P S 处理后p 65和I κB 蛋白表达显著上调(P <0.05,图6B~C ),但是60㊁80和100m g ㊃k g -1的IC A C 处理均显著下调了L P S 诱导的p 65和I κB 的表达(P <0.05),而且I C A C 处理组中两种蛋白的表达量也显著低于D E X处理组(P <0.05)㊂同样,I C A C 的处理也显著降低了p -p65和p -I κB 蛋白质水平(P <0.05,图6D ~F )㊂3 讨 论临床型牛乳腺炎主要由细菌感染引起奶牛局部以及全身炎症,最常见的病原体是金黄色葡萄球菌和大肠杆菌㊂大肠杆菌引发的急性临床症状,使机体产生免疫应答和免疫损伤效应,包括细胞因子和趋化因子的表达[25]㊂L P S 是大肠杆菌细胞壁的主要组成成分,通过T L R 4/N F -κB 级联激活引起炎症反应[26]㊂另一方面,MA C -T 细胞是通过转染猴病毒-40的大T 抗原后从牛乳腺上皮细胞中分离出来的;由于MA C -T 与原代细胞具有相似的生物学反应,经常被用来作为牛乳腺炎的炎症模型[27]㊂因此,本研究根据前期研究采用1m g㊃L -1的L P S 刺激MA C -T 细胞炎性反应;通过筛选I C A C 处理浓度(图1),选择20㊁50㊁80m g㊃L -1的I C A C 探究其对MA C -T 细胞炎性反应的影响㊂先前的研究证明了细胞因子在细菌病原体促进细胞炎症反应中的重要作用[27]㊂L P S 诱导的促炎5393畜 牧 兽 医 学 报54卷A :p 65和I κB 的W e s t e r n b l o t 条带;B :p -p 65和p -I κB 的W e s t e r n b l o t 条带;C ㊁D :不同浓度异绿原酸C 处理24h 后p -p 65和p -I κB 相对水平A :W e s t e r n b l o t t i n g f o r p 65a n d I κB ;B :W e s t e r n b l o t t i n g f o r p -p 65a n d p -I κB ;C a n d D :T h e l e v e l s o f p -p65a n d p -I κB r e l a -t i v e t o p 65a n d I κB ,r e s p e c t i v e l y,i n MA C -T c e l l s a f t e r 24h t r e a t m e n t w i t h I C A C 图3 I C A C 对M A C -T 细胞N F -κB 通路活性的抑制F i g .3 I n h i b i t o r y e f f e c t o f I C A C o n N F -κB p a t h w a yi n M A C -T c e l ls A.p 65核转移免疫荧光检测(细胞核标记为蓝色荧光,p65蛋白标记为红色荧光);B .细胞核p 65蛋白质相对β-a c t i n 的含量A.I mm u n o f l u o r e s c e n c e o f p65n u c l e a r t r a n s f e r .T h e n u c l e u s w a s l a b e l e d w i t h b l u e f l u o r e s c e n c e ,w h i l e p 65p r o t e i n s w e r e l a -b e l e d w i t h r e d f l u o r e s c e n c e .B .N u c l e a r p 65p r o t e i n c o n t e n t r e l a t i v e t o β-a c t i n 图4 I C A C 对L P S 诱导的p 65核转移的抑制F i g .4 I n h i b i t i o n o f L P S -i n d u c e d p 65n u c l e a r t r a n s f e r b y IC A C 63939期陈喜宏等:利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C 通过N F -κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应图5 小鼠乳腺组织C D 3免疫组织化学染色(400ˑ)F i g .5 I m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g (400ˑ)o f C D 3i n m o u s e m a m m a r y gl a n d t i s s u es A.p 65和I κB 的W e s t e r n b l o t 条带;B ㊁C .p 65和I κB 相对β-a c t i n 的表达量;D.p -p 65和p -I κB 的W e s t e r n b l o t 条带;E ㊁F .p -p65和p -I κB 相对β-a c t i n 的表达量A.W e s t e r n b l o t t i n g f o r p 65a n d I κB ;B ,C .p 65/β-a c t i n a n d I κB /β-a c t i n r a t i o ,r e s p e c t i v e l y ;D.W e s t e r n b l o t t i n g f o r p -p 65a n d p -I κB ;E ,F .p -p 65/β-a c t i n a n d p -I κB /β-a c t i n r a t i o ,r e s p e c t i v e l y 图6 I C A C 对小鼠乳腺组织N F -κB 通路的影响F i g .6 E f f e c t o f I C A C o n N F -κB p a t h w a y i n m o u s e m a m m a r y gl a n d t i s s u e 因子I L -6㊁T N F -α和I L -1β对牛乳腺组织造成严重损伤,I C A 减轻小鼠自身免疫性关节炎和R AW 264.7巨噬细胞中的炎症[13-14,16]㊂本研究发现,I C A C 降低了L P S 诱导的I L -1β和IL -6的表达量,并且I C A C 还抑制了炎症介导因子C O X -2和i N O S 的表达(图2),证明了I C A C 可以减轻L P S 诱导的MA C -T 细胞的炎症反应㊂C O X -2是一种诱导酶,在炎症反应过程中表达量上调,并且诱导P G E 2的表达[28];i N O S 主要在巨噬细胞和白细胞内表达,在炎症反应中,i N O S 促进释放N O[29-31],说明C O X -2和i N O S 介导炎症的发生,它们的表达与氧化应激密切相关[15,32]㊂近期的研究进一步证实7393畜牧兽医学报54卷I C A C降低E V71感染小鼠脑部I L-6和T N F-α表示水平以及G S H/G S S G比值和活性氧水平[33];I C A C抑制了高脂肪日粮小鼠巨噬细胞中i N O S, C O X2和I L-1β的表达[34]㊂上述结果证明I C A C具有抗氧化应急和抗炎性反应的作用㊂N F-κB是L P S诱导炎症过程中经典的信号传导路径,许多植物提取物是通过阻断N F-κB信号传导途径来抑制炎症反应[35-37]㊂N F-κB是细胞中广泛存在的转录因子㊂在静息状态下,位于细胞质中的N F-κB与IκB结合而处于无活性状态[38]㊂L P S 刺激产生IκBα和p65磷酸化,p-IκBα通过泛素化被降解,释放出p-p65迁移到细胞核启动C O X-2㊁T N F-α㊁I L-6和I L-1β等炎性因子基因的转录[33]㊂本研究的体内与体外实验结果均表明,I C A C处理降低p-p65和p-IκB的水平,尤其降低p-p65在细胞核内的含量㊂免疫组化试验进一步发现,I C A C处理后L P S引起的小鼠乳腺组织T淋巴细胞浸润明显减轻㊂近期的研究也指出,异绿原酸的抗炎机制与抑制N L R P3炎性复合体的形成和N F-κB磷酸化有关[37]㊂综上,I C A C通过抑制IκB和p65磷酸化从而抑制L P S诱导MA C-T细胞和小鼠乳腺炎性反应㊂4结论本研究表明,I C A C能降低L P S诱导的MA C-T细胞炎性因子I L-1β㊁I L-6㊁T N F-α和炎症介导因子C O X-2和i N O S的表达;I C A C通过抑制N F-κB 信号通路抑制MA C-T细胞和小鼠乳腺炎症反应,但是异绿原酸C在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] Z HA N G 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基于EGC研究大建中汤对肠易激综合征内脏痛模型大鼠的改善作用作者：武静王慧杨毅李尧锋王俊霞杨莎莎来源：《中国药房》2020年第16期摘要目的：研究大建中湯对肠易激综合征（IBS）内脏痛模型大鼠的改善作用及其机制。

方法：将48只雄性未断乳大鼠随机分为正常对照组、模型组、匹维溴铵组（阳性对照，45 mg/kg）和大建中汤高、中、低剂量组（2.16、1.08、0.54 g/kg，以生药总量计），每组8只。

除正常对照组外，其余各组大鼠经母子分离、乙酸灌肠、卵清白蛋白腹腔注射等复制IBS内脏痛模型，造模共57 d。

第58天，给药组大鼠灌胃相应药物，模型组和正常对照组大鼠灌胃等体积水，每日1次，连续14 d。

观察各组大鼠一般情况;采用腹壁撤退反应（AWR）评估各组大鼠在20、40、60、80 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）压力下的内脏敏感性;采用苏木精-伊红染色方法观察各组大鼠结肠组织病理学特征;采用Western blotting技术检测结肠组织中肠胶质细胞标志物纤维酸性蛋白（GFAP）和神经生长因子（NGF）及其受体酪氨酸蛋白激酶A （TrkA）蛋白的表达情况。

结果：正常对照组大鼠结肠组织未见明显病理学改变。

模型组大鼠结肠组织黏膜不连续，腺体水肿，固有层内散在分布淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞;大建中汤低剂量组大鼠结肠组织黏膜不完整，部分腺体轻度水肿，固有层内有少量淋巴细胞和中性粒细胞;大建中汤中、高剂量组和匹维溴铵组大鼠结肠黏膜上皮结构完整，腺体排列规则，未见变性坏死和炎症细胞浸润。

与正常对照组比较，模型组和大建中汤低剂量组大鼠20、40、60 mmHg压力下的AWR评分和结肠组织中GFAP、NGF、TrkA 蛋白的相对表达量均显著升高（P关键词肠易激综合征;内脏痛;肠胶质细胞;神经生长因子;大建中汤;大鼠ABSTRACT OBJECTIVE： To study the improvement effect and mechanism of Dajianzhong decoction on irritable bowel syndrome （IBS） visceral pain model rats. METHODS： Totally 48 male non-weaning rats were randomly divided into normal control group， model group，pinaverium bromide group （positive control， 45 mg/kg） and Dajianzhong decoction high-dose，medium-dose and low-dose groups （2.16， 1.08， 0.54 g/kg， by crude drug）， with 8 rats in each group. Except for normal control group， IBS visceral pain model was established by mother and child separation， acetic acid enema， ovalbumin intraperitoneal injection in other groups for 57 d. On the 58th day， the rats in administration groups were given the corresponding drugs intragastrically， and model group and normal control group were given constant volume of purified water， once a day， for consecutive 14 d. The general condition of rats was observed; abdominal wall withdrawal reaction （AWR） was adopted to evaluate the visceral sensitivity of rats in each group under 20， 40， 60， and 80 mmHg （1 mmHg=0.133 kPa） pressure; HE staining method was used to observe the colon pathological features of rats in each group. Western blotting assay was used to detect the protein expression of intestinal glial cells markers fibrillary acidic protein （GFAP）， nerve growth factor （NGF） and its receptor TrkA in colon tissue. RESULTS： The mucosal layer of colon tissue in rats of model group was discontinuous， gland edema was observed and lymphocytes， neutrophils and eosinophils were scattered in the lamina propria. In Dajianzhong decoction low-does group， the mucosal layer of colon tissue was incomplete， some glands were slightly edematous， and a few lymphocytes， neutrophils in the lamina propria. The colonic mucosa epithelial structure was intact， glands arranged regularly， and no degenerative necrosis and inflammatory cells were observed in Dajianzhong decoction medium- and high-dose groups and pinaverium bromide group. Compared with normal control group， AWR scores under 20， 40，and 60 mmHg pressure， relative protein expression of GFAR， NGF and TrkA were all increased significantly in model group and Dajianzhong decoction low-does groups （PKEYWORDS Irritable bowel syndrome; Visceral pain; Intestinal glial cells; Nerve growth factor; Dajianzhong decoction; Rats肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是最常见的功能性胃肠道疾病，其特征是反复出现腹痛或与排便习惯改变相关的不适[1]。

丁香柿蒂汤及其拆方对小鼠离体小肠收缩活动的影响福建中医学院2010年8月第20卷第4期JournalofFujianUniversityofTCMAugust2010,20(4)丁香柿蒂汤及其拆方对小鼠离体小肠收缩活动的影响谢金东’,涂春香.,陈继承,张文杰(1.福建中医药大学实验动物中心,福建福州350108;2.福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350108)摘要:目的研究丁香柿蒂汤对离体小肠收缩活动的影响及其配伍机制.方法采用常规离体灌注小肠平滑肌标本运动实验方法,记录丁香柿蒂汤及其拆方对小鼠离体小肠收缩频率,平均肌张力及收缩幅度的影响.结果丁香柿蒂汤及其拆方对离体小肠收缩频率及收缩幅度无明显影响,丁香柿蒂汤可降低离体小肠平均肌张力.结论丁香柿蒂汤具有降低离体小肠平均肌张力的作用,此作用与人参配伍有关.关键词:丁香柿蒂汤;拆方;方剂配伍;离体小肠;小鼠中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号:1004—5627(2010)04—0036—02丁香柿蒂汤出自《症因脉治》卷二,全方由丁香,柿蒂,人参,生姜组成,功能补胃气,散胃寒,降胃逆,主胃虚有寒,呃逆不止,或恶心呕吐,得热则减,得寒则甚者.该方对顽固性呃逆及手术,放化疗所致呕吐,呃逆有较好的治疗作用,亦用于胃食管返流病的治疗r3.丁香柿蒂汤为足阳明少阴药, 而《内经》云”大肠小肠,皆属于胃,是足阳明也.”现代研究认为.呃逆的发生与膈肌的痉挛性收缩有关.而呕吐的发生则与膈肌,胃,小肠上段及腹肌的强烈收缩有关.本研究以丁香柿蒂汤及其拆方干预小鼠离体小肠,以收缩频率,平均收缩力及收缩幅度为指标,观察药物对离体小肠收缩性能的影响.探讨丁香柿蒂汤降逆止呕作用与调节小肠收缩性能的相关性.并对该方配伍机制进行初步研究.1材料与方法1.1实验动物雌性昆明种小鼠.体重2o～22g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号:SCXK(沪)20o7一oo05.1.2药物制备实验用中药材均购自福建中医药大学国医堂中药房.①丁香柿蒂汤(A组)药物组成为丁香6g,柿蒂9g,人参3g,生姜6g;②拆方B组:丁香6g,人参3g,生姜6g;③拆方C组:柿蒂9g,人参3g,生姜6g;④拆方D组:丁香6g,柿蒂9g;⑤拆方E组:丁香6g,柿蒂9g,生姜6g.药物以蒸馏水煎30min,提取2次,合并煎液,并将所得药液用4层纱布过滤,减压浓缩至24mL.装瓶冻存备用.1.3主要仪器BL一420生物机能信号采集系统(四川成都泰盟科技),CJZ型张力换能器(航空工业部第六三四研究所),DW一5A自供式液式恒温平滑肌槽(广东汕头教育医学仪器厂),02—8型氧气机(福州明牌氧气机有限公司)1.4实验方法小鼠实验前禁食12h,脱颈处死,迅速自幽门取长约1cm上段小肠段,上下两端穿线固定.下端挂在恒温平滑肌槽底部的挂钩上,浴管中盛有25mL37℃新鲜配制的Krebs液, 并持续供给氧气;另一端固定在张力换能器上,并接人BL一420生物机能信号采集系统(参数:增益1000,滤波1OHz,时间常数DC,信号类型:张力).标本置于浴管中后,用Krebs液冲洗3～4次,在约1g的前负荷下37℃温育.每20min更换1次新鲜的Krebs液(37℃),待平衡稳定则可出现自然的节律性收缩活动,再加入200L实验用药液,描记给药前后各3min小肠段的收缩曲线.撤药时冲洗3～4次,重复实验时均需先平衡,每次用药间隔15min.计算给药前后各3min小肠平均肌张力(—ng),以此作为小肠平滑肌紧张性的参考指标;计算给药前后各3min的收缩频率,以此作为小肠收缩频率的参考指标:计算给药前后各100个单收缩的平均收缩幅度,以此作为小肠收缩幅度的参考指标.1.5数据处理采用SP=sS13.0forwindows统计学软件包进行统计,组内给药前后数据采用配对检验,组间数据比较采用单向分组方差分析(OneWayANOV A),组间两两比较采用最小极差法收稿日期:2010—03—01作者简介:谢金东(1975一),男,实验师,主要从事动物实验研究工作.E-mail:********************第4期谢金东等:丁香柿蒂汤及其拆方对小鼠离体小肠收缩活动的影响37(LSD法).2实验结果2.1药物对离体小肠收缩频率的影响各实验动物离体小肠在各批次实验中.收缩频率基本一致,各组药物对离体小肠收缩频率无明显影响,结果见表l.表1药物对离体小肠收缩频率的影响(弛J2.2药物对离体小肠紧张性的影响以给药前后肌张力变化评价药物对离体小肠平滑肌紧张性的影响,结果显示丁香柿蒂汤(A组)可降低离体小肠平滑肌紧张性,B组与C组也具有不同程度降低离体小肠平滑肌紧张性作用.表明有趋向作用,但无显着作用.而D组,E组对离体小肠平滑肌紧张性则无明显改变.肌张力变化率=(给药后肌张力一给药前肌张力)/给药前肌张力×100%. 具体见表2.表2药物对离体小肠平均肌张力的影响(如)2.3药物对离体小肠收缩幅度的影响结果见表3,显示丁香柿蒂汤及其拆方各组对离体小肠收缩幅度无明显影响.表3药物对离体小肠收缩幅度的影响(i虹)3讨论胃气虚寒之呃逆,呕吐,主要由于久病或误治,使脾胃阳气受损,中阳不振,胃气虚寒,失其和降之职.寒阻气逆.或呃逆不止或恶心呕吐.丁香柿蒂汤温中降逆,益气和胃,在治疗胃气虚寒之呃逆,呕吐方面具有较好疗效.方中以丁香温胃祛寒,补火生土;柿蒂苦温降气,生姜散逆疏邪,二味皆胃经之药;祛邪必先补正,以人参补中益气,邪退正安,人参人胃,镇守于中,以增加前3味之功. 研究表明,单味柿蒂对电刺激性,药物性骨骼肌痉挛具有饵痉作用,柿蒂汤(柿蒂,生姜,丁香)对药物性骨骼肌痉挛也具有解痉作用[5-6].呕吐的发生除了与骨骼肌收缩有关,同时伴随着消化道平滑肌收缩功能的改变.本研究表明,丁香柿蒂汤对小鼠离体小肠的收缩频率及收缩幅度并无明显的调节作用,但是该方可降低离体小肠收缩的平均肌张力,表现为肠段紧张性的下降,小肠段松弛,对小肠平滑肌具有解痉作用.通过降低十二指肠肌张力,可使小肠上段内压降低,使胃一十二指肠压差增大,有利于胃排空,同时,十二指肠的收缩频率和幅度并无明显改变.可保证小肠内容物的正常推进.这一结果显示该方降逆止呕作用与降低十二指肠平滑肌紧张性能有关.拆方研究结果表明,丁香柿蒂汤全方组(A组)对小肠上段平均肌张力的降低作用较为显着, B组及C组也具有类似作用,而D组和E组却不表现出这一作用.这一结果显示,丁香柿蒂汤降低小肠上段肌张力依赖于人参的配伍,人参配伍对十二指肠的肠蠕动并无明显抑制作用,仅表现为肠段紧张性降低,而收缩性能无明显改变.综上所述,降低小肠上段紧张性,不改变其收缩性能,是丁香柿蒂汤降逆止呕的可能药理学作用之一,全方的这一作用依赖于人参的配伍.而该方对全胃肠动力的调节作用还有待进一步研究.参考文献:[1]靳贵木.丁香柿蒂汤加减治疗顽固性呃逆68例[J].山西中医学院,2008,9(S):38.E2]杨华英,洪多伦.丁香柿蒂汤治疗反流性食管炎疗效观察[J].时珍国医国药,2002,13(6):367—368.[3]王国庆.丁香柿蒂加半夏汤治疗化疗后消化道反应5O例[J].中国民间疗法,2002,10(8):4J0.E4]王海峰.丁香柿蒂汤治疗肿瘤合并顽固性呃逆32例临床观察[J].肿瘤防治杂志,2004,11(4):444.[5]南荣子.柿蒂的抗痉挛作用[J].日本药理学杂志,1995,lO5 (2):87.[6]南荣子,柴田浩树,布浦由树,等.柿蒂溻抗c于,扎尢作用:Pentetrazolkindling;:及I中影譬[C].和漠医藁学会大会要旨集,1997:140.。

-1922-中国老年学杂志2021年5月第41卷4参考文献1Ziegler I,Cajander S,Rasmussen G,et al.High nuc DNA load in whole blood is associated with sepsis,mortality and immune dysregu-lation in Staphylococcus aureus bacteraemia〔J〕.Infect Dis,2019;51(3)：216-26.2Becker S,Korpelainen S,Arvonen M,et al.MMP-10and TIMP-1as indicators of severe sepsis in adult hematological patients with febrile neutropenia也J.Leukem Lymphoma,2019;60(12)：3036-43.3穆红，杨磊•脓毒症相关微小RNA标志物功能机制研究进展与诊疗价值〔J〕.中华检验医学杂志,2019；42(12)：1007-13.4姚咏明，栾樱译.外科脓毒症免疫调控障碍机制〔J〕.医学研究生学报,2019；32(1)：26-30.5何兴凤，伍国胜,罗鹏飞，等•脓毒症血管通透性分子调控机制研究进展〔J〕.中华烧伤杂志,2020；36(10)：982-6.6Markovic MT,Pedersen C,Gottfredsson M, et al.Epidemiology of com­munity-acquired sepsis in the Faroe Islands-a prospective observation­al study〔J〕.Infect Dis,2019;51(1)：38-49.7Kyriazopoulou E,Giamarellos-Bourboulis EJ.Pharmacological manage­ment of sepsis in adults with a focus on the current gold standard treatments and promising adjunctive strategies：evidence from the lastfive years〔J〕.Expert Opin Pharmacother,2019;20(8)：991-1007.8朱明玉，孙立群•长链非编码RNA参与脓毒症细胞调控机制的研究进展〔J〕.中国急救复苏与灾害医学杂志,2019；14(11)：1092-5.9Sparenberg S,Blankensteijn LL,Ibrahim AM,et al.Risk factors asso­ciated with the development of sepsis after reconstructive flap surgery 〔J〕.J Plast Surg Hand Surg,2019；53(6)：328-34.10Rasooli A,Fatemi F,Hajihosseini R,et al.Synergistic effects of deu­terium depleted water and Mentha longifolia L.essential oils on sep­sis-induced liver injuries through regulation of cyclooxygenase-2〔J〕.Pharmaceut Biol,2019；57(1)：125-32.11Bruse N,Leijte GP,Pickkers P,et al.New frontiers in precision med­icine for sepsis-induced immunoparalysis〔J〕.Expert Rev Clin Im-munol,2019；15(3)：251-63.12Claushuis TA,Veen A,Horn J,et al.Platelet toll-like receptor ex­pression and activation induced by lipopolysaccharide and sepsis 〔J〕.P)latelets,2019；30(3)：296-304.〔2020-05-21修回〕(编辑滕欣航)小承气汤促进脾虚小鼠胃肠动力刘震坤1张兆鹏2葛斌2吴瑶瑶2金影1董克勤1（1吉林省中医药科学院，吉林长春130021；2长春中医药大学）也摘要〕目的探讨小承气汤对大黄所致脾虚小鼠胃肠动力不足的改善作用。

四川 医学 ２ １ ０ ０年 ８月第 ３ 卷 （ ８期 ） Ｓｃ ｕｎＭｅｉ ｌ ｏｒａ，０ ０，ｏ． １ Ｎ ． １ 第 ｉ ａ ｈ ｄ ａ Ｊｕｎｌ２ １ Ｖ１３ ， ｏ８ ｃ
神 曲对 实验 动 物肠 管运 动 功 能 的影 响
沈夕 ， 砷 张露蓉 江国荣‘叶亮亮 ， ，
（． １苏州市 中医医院药剂科 ， 江苏 苏州 ２ ５０ ；． １０ ３ ２ 苏州市春晖堂 中药饮片厂 ， 苏 苏州 ２５ ０ ） 江 １０３
【 摘要 】 目的
观察不 同产地 六神 曲对 实验动物肠运动功 能的作用。方法
取 用四川、 安徽 和河 南三 个产 地的 六
神 曲 ， 用 离体 方 法研 究 不 同产 地 六 神 曲对 大鼠 回肠 平 滑 肌 收 缩 活 动 的 影 响 以及 阿托 品 对 其 作 用 的 影 响 ； 用整 体 方 法 采 采 研 究 不 同产地 六神 曲对 地 芬 诺 酯 导致 胃肠 动 力 障碍 小 鼠 肠 内容 物 推 进 的 影 响 。结 果 离体 实验 结 果 表 明 ， 个 产 地 六 三 神 曲 都 能 引起 大 鼠肠 平 滑肌 的收 缩 作 用增 强 （ 别 为 Ｐ ０ ０ １ Ｐ ０ ０ ， ＜ ．５ ， 该 作 用 受 阿托 品 影 响 ； 鼠 肠 推 进 分 ＜ ．０ ， ＜ ． １ Ｐ Ｏ ０ ） 且 小
ｉ ｃ ｆｇ ｔｏｎ ｅ ｔ ａ ｔ ｉ ｉｏ ｄ ｒｗ ｓｓｕ ｉ ｄ ｉ ｉｏ Ｒｅ ｕ ｔ Ｉ ｉ ｏ ｅ ｐ ｒ ｎ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｌ ｉ ｅｅ ｔ ａ ｉ ｔＬ — ｎ ｍｉｅ ｏ ａ ｒ ｉｔ ｓ ｎ ｌ ｓ ｉ ｍｏｉ ｔ ｄ ｓ ｒ ｅ ａ ｔ ｄ ｅ ｎ ｖｖ ． ｓ ｌ ｌｙ ｓ ｎ ｖ ｔ ｘ ｅｉ ｒ ｍｅ ｔ ｏ ｄ ｔ ａ ｆ ｒ ｎ ｂ ｔ ｉ ｓ ｌ ａ ｄ ｈ ａ

济川煎对老龄小鼠老化相关酶的影响肖洪彬;车彦忠;安立凤【期刊名称】《中国中医药科技》【年(卷),期】2006(013)002【摘要】1材料药品：中药饮片由黑龙江中医药大学第二附属医院提供。

将中药饮片按济川煎方中药量的比例称重、混匀后，加14倍量水煎煮2次，每次1h，合并两次滤液，浓缩至150％浓度，备用。

将六味地黄丸（由哈药集团世一堂制药厂生产，批号：0509164）水晶丸研成粉末，用蒸馏水配制成7．5％浓度的混悬液，备用。

试剂；SOD、MDA和MAO测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

动物：雄性昆明小鼠40只，均由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

合格证号sYxD（黑）20050023。

仪器：722型分光光度计、HP-2型紫外分光光度计均由上海光学仪器厂生产。

【总页数】1页(P135)【作者】肖洪彬;车彦忠;安立凤【作者单位】黑龙江中医药大学·哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学·哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学·哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.复方保元煎对老龄雌性小鼠阴道、子宫及性激素的影响 [J], 杨大男;赵卫;秦宗永2.东奇胶囊对老龄小鼠血、肝组织超氧化物歧化酶及相关酶的影响 [J], 董从丽;吴建新;秦燕;苏娟3.六味地黄汤及其类方对小鼠血中老化相关酶活力的影响 [J], 李献平;刘敏;刘凯业4.金水六君煎对慢性支气管炎小鼠血清超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量的影响[J], 赵长鹰;沈英森;孟辉;唐颖;陈再智;陈小娟;陈丽娟5.济川煎对老龄大鼠胃肠蠕动的影响及相关机制研究 [J], 车彦忠;陈洪宝;安立凤;常丽;樊小勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。