各种液相色谱检测器介绍
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高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器:
1. 紫外光吸收检测器(UV检测器): 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器(MS检测器):在某些情况下,需要识别和定量化合物。
在这种情况下,使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较,以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器(RI检测器): 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种,有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达1ng,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。
当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。
局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector,PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
液相色谱仪各种检测器的应用范围HPLC中常用的检测器分有如下几种,紫外吸收检测器(UVD)、二极管阵列检测器(PDAD)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱检测器(MSD)等.下面就分别介绍简单介绍一下。
光学类检测器1、紫外吸收检测器(UVD)是目前HPLC中应用最广泛的检测器.它的主要特点是灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱。
它要求被检测样品组分有紫外吸收,属于选择性检测器。
2、二极管阵列检测器(PDAD)是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器,它可以看作是UVD的一个分支。
在对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量,常用于复杂样品(如生物样品、中草药)的定性定量分析.3、荧光检测器(FLD)同样属于选择性检测器,其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的,应用也较多,仅次于UVD。
它适用于能激发荧光的化合物.很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。
荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生后,可以检测很微量的氨基酸和肽.通用型检测器1、示差折光检测器(RID)是一种通用型检测器,只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。
生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收,一般常用示差折光检测器。
它的通用性比UVD广,但灵敏度要低,对温度变化敏感,并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用.2、蒸发光散射检测器(ELSD)也是一种通用型的检测器,可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物.ELSD灵敏度比RID高,对温度变化不敏感,基线稳定,可用于梯度洗脱。
现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测.3、质谱检测器(MSD)是另一种通用型检测器,在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点。
hplc检测器种类及特点HPLC检测器种类及特点HPLC(高效液相色谱法)是一种常用的分离和分析技术,广泛应用于各个领域的实验室。
HPLC系统由多个部分组成,其中检测器是其中之一,用于监测样品在色谱柱中的分离和识别。
不同类型的HPLC检测器具有不同的特点和适用范围,本文将详细介绍一些主要的HPLC检测器种类及其特点。
紫外检测器(UV检测器):紫外检测器是使用紫外线(UV)光源照射样品,并测量样品吸收/透射的紫外光强度的一种检测器。
这种检测器适用于大多数化学物质,因为大多数有机化合物和某些无机化合物(如金属离子)对紫外线具有吸收能力。
紫外检测器的工作原理是通过比较进样溶液和参比溶液对紫外光的吸收量来确定样品的存在和浓度。
UV检测器具有极高的检测灵敏度和广泛的线性范围,且对各种溶剂和化合物的稳定性较好。
然而,该检测器不能提供化合物的结构信息,因为它只是根据吸收强度进行检测。
荧光检测器:荧光检测器是在分离柱后的样品流中使用荧光探针,通过测量样品产生的荧光强度来检测化合物。
这种检测器适用于大多数有荧光性质的化合物,包括天然化合物、药物、色素等。
荧光检测器的工作原理是在激发光源(通常是紫外线)的作用下,分子从低能级跃迁到高能级,然后放射出荧光光子。
荧光检测器具有较高的检测灵敏度和特异性,且具有多通道检测的能力,可以同时测定多个组分。
然而,荧光检测器对环境和溶剂的要求比较高,并且需要选择合适的激发波长和荧光波长。
电化学检测器:电化学检测器是使用电化学技术进行检测的一种检测器。
电化学检测器可以测量样品中的电子转移反应、电荷转移反应、离子传递等电化学过程。
常见的电化学检测器有电导检测器(CD)和安培检测器(AD)。
电导检测器是通过电荷传递反应量测样品离子浓度的一种方法,适用于带电离子和非离子。
安培检测器则是通过测量样品中电流强度来识别化合物的一种方法,适用于具有可测电流的化合物。
电化学检测器具有非常高的选择性和灵敏度,能够检测到微量的化合物,但它们对电极的选择和维护要求较高。
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型中药制剂高效液相常见的色谱柱类型包括C18、C8、Phenyl、CN、NH2等。
其中C18属于常规的反相色谱柱,适用于大多数化合物的分离;C8柱的分离效果较C18柱略差,但可以用于分离易失活的化合物;Phenyl柱可以增加由于芳香环与反相胶体间的作用而引起的选择性;CN柱比C18柱对亲水性化合物更为灵敏,适合分离极性化合物;NH2柱与CN柱相似,适于极性化合物的分离。
常见的检测器类型包括UV检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。
UV检测器是常见的检测器类型,根据样品吸收UV光谱特征进行定量或者鉴定;荧光检测器则根据荧光光谱特征进行检测,其对于化合物的灵敏度一般高于UV 检测器;电化学检测器包括阳极和阴极两种类型,可用于检测电化学反应产生的电信号,最常用的电化学检测器是电化学荧光检测器;质谱检测器则可以对化合物的结构进行进一步的确认和鉴定,其灵敏度和选择性都比较高。
一、概述高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析化学技术,广泛应用于化学、生物、医药和食品等领域。
在HPLC技术中,检测器是至关重要的一部分,它负责检测样品中化合物的浓度,并将其转化为可读的信号输出。
本文将对HPLC检测器的种类及特点进行详细介绍。
二、紫外-可见光(UV-Vis)检测器1. 原理:UV-Vis检测器利用化合物中的紫外或可见光吸收特性来检测化合物。
2. 特点:1)广泛适用:UV-Vis检测器适用于大多数有机化合物和许多无机化合物的分析。
2)灵敏度高:对于绝大多数有机化合物,UV-Vis检测器的灵敏度较高。
3)简单易用:UV-Vis检测器的操作相对简单,适合实验室常规分析。
三、荧光检测器1. 原理:荧光检测器利用化合物在受激光照射下产生荧光的特性来检测化合物。
2. 特点:1)高灵敏度:荧光检测器对于有荧光活性的化合物具有极高的灵敏度。
2)特异性强:由于荧光本身具有较高的特异性,荧光检测器可以用于分析中对混杂物的忽略。
3)应用广泛:在生物学、医学和环境领域,荧光检测器得到了广泛的应用。
四、蒸发光散射检测器1. 原理:蒸发光散射检测器通过样品与蒸发后的溶剂之间的差异来检测化合物。
2. 特点:1)通用性强:蒸发光散射检测器对于大多数非吸收性化合物都具有较好的检测能力。
2)无需色谱柱:相比于其他检测器,蒸发光散射检测器可以不需要色谱柱,适用于高分子化合物的检测。
3)灵敏度较低:蒸发光散射检测器的灵敏度通常较低,需要较高浓度的样品才能进行检测。
五、质谱检测器1. 原理:质谱检测器通过将化合物转化为离子,并对离子进行质量分析来检测化合物。
2. 特点:1)高分辨率:质谱检测器具有极高的分辨率,可以准确确定化合物的质荷比。
2)特异性强:质谱检测器对于复杂混合物的成分分析具有很强的特异性。
3)操作复杂:相比于其他检测器,质谱检测器的操作和维护较为复杂,需要专业的操作人员。
六、综述HPLC检测器种类繁多,每种检测器都有其特定的适用场景和优势。
液相色谱仪的基本构造和各部分作用液相色谱仪是一种常用的分析仪器,广泛应用于化学、生物、环境等领域。
它通过将待测样品溶解在流动相中,利用固定相对溶质进行分离和分析。
液相色谱仪的基本构造和各部分作用对于了解其工作原理和性能非常重要。
本文将围绕液相色谱仪的基本构造和各部分作用展开阐述。
一、基本构造1.1 主体部分液相色谱仪的主体部分包括进样器、柱温箱、检测器和数据处理系统。
进样器用于将待测样品引入色谱柱系统,柱温箱用于控制色谱柱的温度,检测器用于检测溶质的浓度和组成,数据处理系统用于数据的采集与分析。
1.2 流动相传递系统流动相传递系统由溶剂瓶、输液泵、进样阀和色谱柱等组成。
溶剂瓶用于存储流动相溶剂,输液泵用于将溶剂从溶剂瓶中输送至色谱柱,进样阀用于控制待测样品的输入,色谱柱用于溶质的分离。
1.3 控制系统控制系统包括温度控制、流量控制、压力控制和信号采集等功能。
通过对这些参数的精确控制,可以实现对色谱分离过程的精确控制和数据采集。
二、各部分作用2.1 进样器进样器的作用是将待测样品引入色谱系统,并确保样品的准确、快速输入。
进样器通常分为自动进样器和手动进样器两种类型,能够满足不同实验需求。
2.2 柱温箱柱温箱的作用是控制色谱柱的温度。
适当的温度可以提高分离效率和减少分离时间,对于一些高温或低温敏感的样品分析也有重要作用。
2.3 检测器检测器是液相色谱仪的核心部件,主要用于检测溶质的浓度和组成。
常见的检测器有紫外-可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等,不同的检测器适用于不同类型的溶质。
2.4 数据处理系统数据处理系统用于数据的采集与分析。
它能够实现对色谱分离过程中产生的数据进行实时采集和处理,提高数据的准确性和可靠性。
2.5 流动相传递系统流动相传递系统起着输送溶剂和样品的作用,是保证液相色谱分离正常进行的重要组成部分。
其中输液泵的性能直接影响分离的准确性和稳定性。
2.6 控制系统控制系统通过对温度、流量、压力等参数的控制,实现对色谱分离过程的精确控制和数据采集。
液相色谱仪检测器类型及原理
液相色谱仪检测器类型及原理如下:
1. 紫外检测器:该检测器适用于吸收波长在200-400nm的物质。
样品溶液通过进样管进入流动相,进入紫外检测器前经过一条石英衬里的检测池。
紫外辐射通过溶液时,被样品分子吸收,吸收的光强度被检测器测量。
2. 荧光检测器:该检测器适用于荧光性物质。
样品溶液通过进样管进入流动相,经过紫外激发后,样品分子发生激发态,脱离激发态时会放出发射波长固定的荧光。
该荧光被荧光检测器检测并转换为电信号。
3. 漂移时间检测器:该检测器适用于分子量小的有机物。
样
品溶液经过进样管进入流动相,在漂移时间管中流动,被高电压加速后通过泄漏孔,被带电终点接收器捕获。
根据分子质量的不同,分子的漂移时间也不同,漂移时间越短,质量越大。
4. 折射率检测器:该检测器适用于非紫外吸收物质,如糖类,蛋白质等。
样品溶液经过进样管进入流动相,经过一条单色光源后,进入折射率检测器。
折射率的变化导致被检测到的偏折角度发生变化,进而被检测器检测和记录。
5. 电化学检测器:该检测器适用于可被氧化还原的物质。
样品通过进样管进入流动相,经过电化学池后,从阳极溶出的电子被电流计测量。
随着溶出的电子数增加,电流也随之增加。
根据电流的变化反映出样品组分的浓度。
各种液相色谱检测器介绍
各种液相色谱检测器介绍
液色迷人/
紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector
紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector 简称紫外检测器(UV),是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸收性质,所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器,几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。
它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度,而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱。
其检测灵敏度在mg/L至mg/L范围。
可见光检测器visible light detector
可见光检测器visible light detector 又称分光光度检测器,是基于溶质分子吸收可见光的原理设计的检测器。
能够直接采用可见光检测的溶质不是很多,而且多数灵敏度也不高,但采用具有高摩尔吸光系数的有机试剂(配位体和螯合剂)作为衍生化试剂进行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度检测法是相当有用的,特别是在金属离子配合物液相色谱中的应用是相当成功的。
低压梯度low-pressure gradient
低压梯度low-pressure gradient 又称外梯度,是在低压状态下完成流动相强度调整的梯度装置。
只需一个高压泵,与等度洗脱输液系统相比,就是在泵前安装了一个比例阀,混合就在比例阀中完成。
因为比例阀是在泵之前,所以是在常压(低压)下混合之后再增压输送到色谱柱的。
蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题
虽然阵法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开
发生产15年,但是对于许多色谱工作者来说,它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的,并在八十年代初转化为商品,八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
此后,通过不断设计提高了ELSD的操作性能。
现在ELSD 越来越多的作为通用型检测器]用于高效液相色谱,超临界色谱(SFC)和逆流色谱中。
ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物,如:碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物,并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。
ELSD的通用检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点,不同于紫外和荧光检测器,ELSD的响应不依赖与样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响。
ELSD
的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。
示差检测器(RI)也可以说是一种通用型检测器,打它灵敏度低,并与梯度脱洗不相容。
质谱是另一种通用型检测器,但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的应用。
ELSD的独特检测方法,对于它的多种用途和高性能至为关键。
ELSD检测只要分为三个步骤:(1)用惰性气体雾化脱洗液(2)流动相在加热管(漂移管)中蒸发(3)样品颗粒散射光后得到检测。
讨论:
UV检测的主要缺点在于紫外不吸收的化合物灵敏度很低。
ELSD
可以检测任何挥发性低于流动相的样品。
ELSD的通用性响应值使得ELSD响应值比UV响应值更能代表样品的质量
不同于紫外检测只能使用不吸收紫外的流动相,ELSD能与任何的挥发性流动相相容,不论其光学特性。
您可根据样品的溶解度或分离特性选择流动相,例如选择氯仿和丙酮用于脂类的分离以提高样品的溶解性。
用紫外检测器定量未知物是困难的,因为样品的紫外吸收值往往和代表样品的质量的色谱峰的大小无关。
ELSD对几乎所有的样品给出一致的响应因子。
因此可以通过和内标比较定量未知化合物,此特性对于使用组合化合技术而合成的系列化合物的定量尤其有用。
用组合合成技术合成的化合物通常是用HPLC联合低波长紫外或质谱检测进行分析,但是,在缺乏已表面活性剂非常灵敏,并在梯度脱洗下维知结构参数已
知的参照标准品情况下,两种方法都不能准确的定量分析此种系列化合物。
荧光检测
荧光检测的主要缺点在于只有少数化合物产生荧光。
大多数的分子不发荧光,但含有可衍生的官能团用于合成能发荧光的衍生物,例如,邻苯二甲醛是一种常用荧光基团用于柱后衍生氨基酸。
虽然荧光检测很灵敏,但对于常见的样品分析来说不需要如此高的灵敏度。
因为ELSD 的响应不依赖于荧光基团,所以不需要衍生,因此大大降低了样品预处理和分析时间。
示差检测:
虽然示差检测在原理上是通用型检测器,但是它的灵敏度低,和梯度脱洗不相容,因此它对于HPLC来说不是理想的检测器。
室温的变化会影响基线的稳定性,大的溶剂前沿峰可能会掩盖前期脱洗的色谱峰。
因为ELSD在检测前将流动相蒸发,所以基线的噪声和漂移都很小,因此基线稳定和样品检测的灵敏度高。
流动相的蒸发使得ELSD和梯度脱洗相容,因而可提高色谱分离的分辨率和缩短分离时间。
另外ELSD比RI检测蔗糖灵敏度高和基线稳定。
应用实例:
近年来,脂类在生物学和经济领域中的重要性正在日益引起广泛的
关注。
脂类的分析方法对于许多研究工作,临床使用和质量控制方面都非常重要。
大多数的脂类分子都缺乏适当的发色团,因此脂类除非通过衍生化,否则不能用紫外检测。
一般但一样品种含有的各种脂类其极性差异很大,弱项要达到个作分的最佳分离和分辨率需要使用梯度脱洗,因而限制了示差检测器的使用。
不同于UV和RI的局限性,ELSD是脂类检测的有用工具。
碳水化合物不带有发色团,因而不能用UV来检测。
他们通常用氨基柱或者阳离子交换树脂分离。
但是示差检测器不是很灵敏,而且需要控制温度来维持基线稳定,不能与梯度脱洗相容。
ELSD灵敏度高,基线稳定,与梯度脱洗相容。
随着高聚物和表面活性剂在许多行业中的广泛应用,简单和可靠的分析方法的尤为重要,他们通常是不含有发色团的复合分子。
此类化合物不带有适当的发色团和分离是需要采用梯度脱洗意味着不能采用示差和紫外检测器。
ELSD检测高聚物和表面活性剂可以保持基线稳定。
在科研、临床和生产的工艺控制上,药物需要分析评估。
目前,随着日益增长的加速药品开发的要求,药品工作者需要一种开速的鉴定方法来测定带物的代谢物、杂质、降解物和各种天然产物,许多不含有适当的发色团,限制了紫外检测器的使用。
示差比紫外检测器的灵敏度要低,且不能与梯度脱洗相容,而复杂的药品分析常需要梯度脱洗。
ELSD 的通用检测能力和梯度相容性使得ELSD是药物分析的理想工具。
因为ELSD的响应接近于代表产品的质量,所以即使在降解产物和杂质的性
质不明确的情况下ELSD的使用为药物杂质分析提供最快速的方法。
结论:蒸发光散射检测器正日益成为分析碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油、和其他难检样品的强大工具,多用途的ELSD能检测任何挥发相低于流动相的样品,克服了常见于示差和紫外检测器的缺点。
紫外-可见光(UV-VIS)检测器
原理:基于Lambert-Beer定律,即被测组分对紫外光或可见光具有吸收,且吸收强度与组分浓度成正比。
很多有机分子都具紫外或可见光吸收基团,有较强的紫外或可见光吸收能力,因此UV-VIS检测器既有较高的灵敏度,也有很广泛的应用范围。
由于UV-VIS对环境温度、流速、流动相组成等的变化不是很敏感,所以还能用于梯度淋洗。
一般的液相色谱仪都配置有UV-VIS检测器。
用UV-VIS检测时,为了得到高的灵敏度,常选择被测物质能产生最大吸收的波长作检测波长,但为了选择性或其它目的也可适当牺牲灵敏度而选择吸收稍弱的波长,另外,应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相。
二极管阵列检测器(diode-array detector, DAD):以光电二极管阵列(或CCD阵列,硅靶摄像管等)作为检测元件的UV-VIS检
测器(图8-15)。
它可构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号,然后,对二极管阵列快速扫描采集数据,得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。
与普通UV-VIS 检测器不同的是,普通UV-VIS检测器是先用单色器分光,只让特定波长的光进入流动池。
而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池,然后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检
直接紫外检测:所使用的流动相为在检测波长下无紫外吸收的溶剂,检测器直接测定被测组分的紫外吸收强度。
多数情况下采用直接紫外检测。
间接紫外检测:使用具有紫外吸收的溶液作流动相,间接检测无紫外吸收的组分。
在离子色谱中使用较多,如以具有紫外吸收的邻苯二甲酸氢钾溶液作阴离子分离的流动相,当无紫外吸收的无机阴离子被洗脱到流动相中时,会使流动相的紫外吸收减小。
柱后衍生化光度检测:对于那些可以与显色剂反应生成有色配合物的组分(过渡金属离子、氨基酸等),可以在组分从色谱柱中洗脱出来之后与合适的显色剂反应,在可见光区检测生成的有色配合物。