微生物检验实习报告

微生物检验实习报告篇一：微生物实习报告菌群检测和分析摘要本实验对生活中的几个水样，包括自来水、热干面、冰红茶、南湖水，进行了细菌总数和大肠菌群数的测定。

对大肠菌群的检测利用了多管发酵法，通过记录阳性管数并查最大可能数表（MPN）查出不同水样中大肠菌群的可能含量。

结果显示：热干面细菌总数、大肠菌群数超标；南湖水细菌总数、大肠菌群数超标，属于污染状态，不宜直接饮用；自来水和冰红茶因操作失误未得到可靠结果。

对类大肠杆菌的分析表明，南湖水、校所售的热干面中含有类大肠杆菌。

关键词:水样、大肠菌群、细菌总数、粪大肠杆菌。

AbstractIn this study, several water samples which are universal in our life including tap water, dry noodles, iced tea, water of Nanhu Lake, the determination of total bacteria and coli form counts. Coliform detection using multiple tube fermentation method, by recording the number of positive tubes and check the maximum possible number of tables (MPN) to find out the possiblecontent of the different water samples coli forms. The results showed that: dry noodles bacterial count, coli form counts exceeded; South Lake water total bacterial counts, coli form counts exceeded the polluter of state, should not be directly consumed; water and iced tea did not get reliable results due to operational errors. The analysis shows that the class of E. coli, containing the Nanhu water, dry noodles sold by the school class of E. coli. Keywords: water samples, coliform bacteria, total bacteria, fecal coliform 1 前言随着人们生活水平的提高，人们对食品安全的关注度也越来越高。

伴随着经济的发展，水体污染现象也越来越严重，而病原微生物造成的污染是其中主要的原因之一。

夏季气温升高，食品也容易受到病原微生物的污染，人们使用后会造成腹泻、呕吐等中毒现象，给人们的生活带来很大威胁。

因此检测食物、饮用水中的病原菌污染情况显得十分重要。

食品卫生法规定:食品中不允许含有伤寒、副伤寒、沙门氏、痢疾、霍乱等消化系统病源菌，但实际上这些致病菌却难以在各个场合中检测出来。

因此，常通过检测与病原微生物有密切关系的指示菌来判断。

水体中细菌性污染主要是由人和动物粪便的不合理排放引起的，因此鉴定水体污染的指示菌可选用存在于人，通过对这些细菌的检测，判断水体是否受到粪便污染，从而说明是否有被病原菌污染的可能性。

由于不同国家的食品种类不同和对粪便指示菌的认识的差异，而对粪便污染指示菌的应用也具有很大的不同，其中多以大肠菌群、埃希氏大肠杆菌、粪大肠菌群、耐热大肠菌群、粪链球菌、肠杆菌科等作为粪便指示菌。

世界大多数国家将大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群和耐热大肠菌群作为食品的一类微生物限量标准进行定量分析，大肠杆菌 015： H7作为一个致病菌进行定性检验。

大肠菌群并非细菌学分类命名，它不代表某一个或某一属细菌，大肠菌群是一群以大肠杆菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

包括埃希氏菌属（Escherichia）、柠檬酸菌属（Citrobacter）、肠细菌属（Enterobacter）和克雷伯氏菌属（Klebsiella）等，是肠道中最普遍、数量最多的一类细菌。

若食品中检出大肠菌群便意味着该食品受到人畜粪便的污染。

大肠菌群多数寄生在温血动物肠道内，在肠道内进行大量繁殖，并随粪便排出体外。

被粪便污染的水体中可能有健康人粪便，也可能有肠致病菌携带者的粪便，因此经粪便污染的水体中可能含有肠道致病菌。

由于经粪便污染的水中病原菌数量少，直接检测比较困难，一般情况下只测定水中有无肠道正常细菌存在。

粪大肠菌群系指一群需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌，在44.5℃培养24~48h能发酵乳糖产酸产气，是用来表示来源于粪便的大肠菌群。

粪大肠菌群是人与温血动物肠道中数量最多的杆菌，其基本形状与大肠菌群相似，而且是总大肠菌群的一部分。

美国《饮用水及废水检验的标准方法》第20版中对粪大肠菌群检测的要求也仅是:乳糖发酵管产酸、产气者，转种EC肉汤管，于44.5℃+/-2℃孵育24月h，若产气则为粪大肠菌群阳性，否则为阴性l3]。

粪大肠菌群是人类粪便中的主要细菌，具有作为指标菌的一般特征，所以被用来作为评价检品中是否粪便污染的指标菌。

粪大肠菌群数的高低，指示了粪便污染的程度，也预示了对人体健康危害性的大小。

我国的食品卫生微生物标准体系主要由菌落总数、大肠菌群和致病菌三大类构成。

同时，大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌是食品卫生的三项重要的卫生指标，目前在世界各地广泛采用这三项作为食品卫生指标菌，污染和有害的程度以大肠杆菌最为严重，在检验实践中常有大肠菌群阳性而大肠杆菌阴性的情况。

我国国家标准提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群。

多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸产气[46]以及具备革兰氏染色阴性，无芽抱，呈杆状等有关特性，采用三步法进行检验，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。

在乳糖发酵试验中可根据检测的精度确定发酵管数，我国食品中大肠菌群的检测采用的是九管发酵法，在样本处理中选择三个适宜的稀释梯度作为接种浓度，于37℃条件下恒温培养24h，观察产酸产气情况。

对产酸或产气的发酵管进行EMB平板分离培养，若大肠菌群阳性样本将会出现典型的具有金属光泽的紫黑色菌落。

证实试验时，选取EMB平板上的可疑阳性菌落进行革兰氏染色观察，并接种乳糖发酵管复发酵。

最终根据证实试验确定大肠菌群阳性的管数，查MPN表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。

多管发酵法容易操作，对操作人员的专业性要求较低，检测费用便宜，无需精密实验仪器，但它耗时费力，完成一个阳性样品的检测需要72h。

菌落总数：在我国食品卫生学评价中，菌落总数是指在每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定基础上，检样中的细菌细胞和营养琼脂培养基混合，于37℃有氧条件下培养后所生成的细菌集落数，其单位是cfu/g(mL)，表示琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数，而并不能测出检样中的实际总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不能生长，有特殊营养要求的一些细菌受到了限制。

由此可见，大肠菌群是菌落总数所检细菌中的一小类细菌，出现菌落总数很高，但大肠菌群数很低的检测结果是正常现象。

霉菌和酵母菌属于真菌，与菌落总数所检的细菌在分类学上有质的区别;同时，食品中的霉菌和酵母菌计数检测和菌落总数检测在培养基、培养温度和培养时间上均不同，故两者培养出来的微生物种类和数量自然不同。

因此，出现细菌菌落总数很低而霉菌和酵母菌超标的情况也属于正常现象。

2 材料与方法2.1实验材料新取样的南湖水、华中农业大学生命科学技术学院微生物实验室自来水、华中农业大学桃园食堂二楼新制冷却后的热干面、康师傅1L冰红茶。

2.2 培养基：（1）单倍乳糖发酵液：猪胆盐 5g（可不加），蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏 3g，乳糖5 g，自来水1000ml，0.04%溴甲酚紫溶液25ml 或者 1.6%溴甲酚紫溶液1ml，pH 7 - 7.2（3倍乳糖发酵液各量乘以三）（2）牛肉膏蛋白胨培养基 (1000ml)灭菌条件：121OC，30min,牛肉膏 5g, 蛋白胨10g , NaCl 5g , 自来水1000ml,pH7-7.2（配固体培养基时，加2% 琼脂）O（3）E·C培养液（1000ml，pH7.2-7.4）灭菌条件：115C，20min,蛋白胨20g ,乳糖 5g ,三号胆盐1.5 g,K2HPO4 4 g, KH2PO4 1.5 g, NaCl5g,1.6%溴甲酚紫溶液1ml ,自来水1000ml, pH7.2-7.4（4）伊红美兰培养基1000 ml（pH7.2,灭菌条件：115℃/20 min,蛋白胨 10g ,乳糖 10g, K2HPO4 2g,自来水1000ml,2%伊红（曙红cosin）20 ml ,0.5%美兰（Methylene blue）13 ml2.3 细菌总数测定2.3.1 主要仪器采样用空大蓝盖瓶：2瓶,小蓝盖瓶装90ml无菌水：3瓶,试管装9 ml 无菌水：3管,加玻璃珠三角瓶装225ml无菌水：1瓶,灭菌5ml吸头（tip）：1包,灭菌1 ml吸头（tip）：1盒,试管装单倍乳糖发酵液：10ml /管x 30管,试管装3倍浓缩乳糖发酵液：5ml /管x 25管大蓝盖瓶装三倍浓缩乳糖发酵液：50ml / 瓶x 2 瓶,培养皿（10皿/筒）4筒,牛肉膏蛋白胨固体培养基：200ml / 瓶x 4 瓶2.3.2 实验方法将1瓶牛肉膏蛋白胨培养基，融化后倒10皿，以供试材料作10倍稀释（自10-2，共三个稀释度（原样、10-1、10-2），每个稀释度做三个重复，用涂抹法（0.1ml）测其中的细菌总数。

稀释方法：水域、饮料液体样品做10倍稀释，10 – 1稀释度用5ml吸头吸两次共10ml原液加入瓶装90ml水中，10 – 2稀释度用1ml吸头吸10 – 1稀释液1ml加入试管装9ml水中，热干面或其它固体食品取25克放入225ml无菌水震荡10分钟作为10 – 1再进行稀释；自来水不稀释，用原液做实验。

2.4多管发酵法测定大肠菌群数（利用15管发酵法）2.4.1 初发酵（1）南湖水污染液体样品稀释至10-2，以最末稀释度水样接种，接种方法按下所示（接种总量55.5 ml）（2）豆奶和饮料等干净液体类样品直接如图加入，但隔夜豆奶需稀释10倍，以10-1稀释度水样按下所示接种（接种总量55.5 ml / 样品）。