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幽门螺杆菌鉴定生化鉴定：(1) 尿素酶试验（自己配置）用灭菌的接种环挑取适量菌落接种于尿素酶琼脂中，放入恒温培养箱中37℃培养约5min 后观察，幽门螺杆菌尿素酶阳性，可以分解周围试剂中的尿素，使培养基由酸性变成碱性，指示剂酚红由黄色变成红色。
(2) 氧化酶试验（公司购买试纸条）用牙签刮取适量菌落轻轻涂抹于白色的氧化酶试纸条上，幽门螺杆菌阳性则在接触部位出现深蓝或黑色的反应。
(3) 触酶试验在载玻片中央滴加1~2 滴3%H2O2溶液，用牙签挑取适量菌落，幽门螺杆菌阳性则立即可见连续气泡产生，反应剧烈形成持久的泡沫。
革兰染色镜检（革兰染液可购买）(1) 涂片：滴加1 滴生理盐水于洁净的载玻片上，用接种环挑取固体培养上生长的可疑菌落少许，在生理盐水中均匀涂开。
(2) 固定：待水分完全挥干后，在酒精灯火焰处来回通过2~3 次固定标本。
(3) 初染：在玻片上滴加革兰染液1 至覆盖菌膜，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。
结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。
(4) 媒染：滴加革兰染液2 至覆盖菌膜，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。
滴加卢哥氏碘液，媒染1min。
(5) 脱色：滴加革兰染液3，并轻轻晃动约30s，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，沥去水分。
连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。
(6) 复染：滴加革兰染液4，染色1min，用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去，用吸水纸吸掉水滴。
滴加蕃红复染5min。
(7) 观察：待标本干燥后置于光学显微镜下，观察细菌的染色特征以及形态特征。
从临床标本分离的Hp形态往往很典型，呈细长，弯曲，S型或海鸥展翅状，革兰染色阴性。
研究认为当菌液的OD660=1 时，此时幽门螺杆菌菌液浓度约为108cfu/ml[19]，测得实验所用原菌液OD660=1.12，粗略推算原菌液菌液浓度≈1.12×108 cfu/ml。
亚甲蓝染色用于幽门螺杆菌染色方法介绍
付红霞;任国庆;张欣欣;李艳丽
【期刊名称】《白求恩军医学院学报》
【年(卷),期】2010(8)6
【摘要】@@ 幽门螺杆菌(Hp)是一种革兰阴性菌,已经证明Hp与一些胃炎和消化性溃疡有较密切的关系[1].Hp也是胃窦炎最常见的病因之一,并与远端胃癌和低度恶性胃淋巴瘤的发生有关,越来越引起人们的重视.
【总页数】2页(P414-414,4封4)
【作者】付红霞;任国庆;张欣欣;李艳丽
【作者单位】解放军260医院病理科,石家庄,050041
【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.叶酸受体介导的亚甲蓝活体组织染色剂用于宫颈癌筛查的评价 [J], 朱彦玲;张杰;刘蓓蓓;张雪玲;张红;张萍;王新侠;于晓娟;王岚
2.集菌与直接染色法用于胃粘膜组织检测幽门螺杆菌的对比和评价 [J], 张德刚;张文琴;李明强
3.13C呼气试验与硼酸亚甲蓝染色检测幽门螺杆菌比较 [J], 谭洁;田霞;王晖;王成;韩峥
4.应用亚甲蓝显示幽门螺杆菌的染色初探 [J], 王用华
5.亚甲蓝染色法前哨淋巴结活检应用于肿块切除术后乳腺癌的可行性分析 [J], 郑中秋;陈敏龙;严星强;张建伟;谢伯剑
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消化内科技术操作规范消化神经中心第一章上消化道内镜检查上消化道内镜能清晰地观察食管、胃、十二指肠壶腹至降段的黏膜形态及病变如有病变可作活体组织病理学和细胞学检查以确定诊断。
......感谢聆听【适应证】1.有上消化道症状，包括上腹不适、胀痛、烧心及反酸、吞咽不适梗噎、嗳气、呃逆及不明原因食欲不振、体重下降贫血等；......感谢聆听2.上消化道钡餐造影检查不能确定病变或症状与钡餐检查结果不符者；3.原因不明的急慢性上消化道出血或须做内镜止血治疗者；4.须随访的病变如溃疡病萎缩性胃炎癌前病变等；5.高危人群食管癌胃癌高发区的普查；6.须做内镜治疗者。
【禁忌证】1.食管胃十二指肠急性穿孔；2.严重心肺肾脑功能不全及多脏器功能衰竭者；3.精神病及意识明显障碍不能合作者。
【术前准备】1.器材：内镜、光源主机、活检钳、细胞刷、必要的各种治疗器械、表面麻醉剂、各种急救药品备用以及内镜消毒设备。
......感谢聆听2.技术准备：了解病史检查目的特殊要求其他检查情况有无内镜检查禁忌证，有无药物过敏及急慢性传染病等。
向患者说明检查目的及配合检查须注意的事项，术前禁食6-8小时，已做钡餐检查者须待钡剂排空后再做胃镜检查，幽门梗阻患者应禁食2-3天，必要时术前洗胃。
最好排空大小便。
咽部麻醉检查前15分钟用2%-4%利多卡因或普鲁卡因喷雾或口含，也可含服麻醉祛泡糊剂，有麻醉药过敏史者可不用麻醉。
不必常规应用镇静剂、解痉剂，对个别精神紧张或胃肠蠕动强者可在检查前15分钟肌内注射阿托品0.5mg或丁溴东莨菪碱10mg或行清醒镇静麻醉。
术前常规检查各项器材是否齐备。
......感谢聆听3.操作方法及程序：（1）患者体位：患者取左侧卧位，头部略向前倾双腿屈曲；如患者有活动假牙宜取出，松解领口和裤带，轻轻咬住牙垫。
......感谢聆听（2）插镜：①单手法：术者面向患者左手持内镜操纵部，右手在距离镜端处持镜使镜面对准患者舌根部，将镜端自牙垫中插至咽后壁，左手调节旋钮方向，使之顺利到达咽喉部，嘱患者做吞咽动作，顺势轻柔地插入食管。
幽门螺旋杆菌亚甲蓝染色原理嘿，咱今儿就来唠唠幽门螺旋杆菌亚甲蓝染色原理这档子事儿。
你说这幽门螺旋杆菌啊，就像个调皮的小捣蛋，藏在咱胃里搞事情。
那咱怎么才能把它给找出来呢？这就得靠亚甲蓝染色啦！亚甲蓝就像是个神奇的小侦探，能把幽门螺旋杆菌给标记出来。
你可以把幽门螺旋杆菌想象成一个会隐身的小怪物，而亚甲蓝呢，就是能让它现形的魔法药水。
当亚甲蓝碰到幽门螺旋杆菌的时候，就会发生奇妙的反应，让它无处可藏。
你看啊，这就好比在一个大迷宫里找一个会变色的小精灵。
没有亚甲蓝这个小侦探，咱可就像无头苍蝇一样乱撞，怎么也找不到它。
可一旦有了亚甲蓝，嘿，那小精灵就乖乖现形啦！这亚甲蓝染色的过程也挺有意思的。
就好像给幽门螺旋杆菌穿上了一件特别的衣服，让咱一眼就能认出它来。
这衣服还特别鲜艳，特别显眼呢！咱平时要是觉得胃不舒服，那说不定就是这小捣蛋在捣乱呢。
这时候医生就会用亚甲蓝染色这个厉害的招数，把幽门螺旋杆菌给揪出来。
然后咱就能对症下药，把这个小捣蛋给赶跑啦！咱想想，要是没有亚甲蓝染色，那得多麻烦呀。
医生得费好大的劲儿才能找到幽门螺旋杆菌，咱也得受更多的罪。
可现在有了这个好办法，一切都变得简单多啦。
所以说呀，这亚甲蓝染色原理可真是个了不起的发现呢。
它就像一把钥匙，能打开找到幽门螺旋杆菌的大门。
咱可得好好感谢那些聪明的科学家们，是他们让咱能更好地了解自己的身体，更好地保护自己的健康。
反正我觉得吧，这幽门螺旋杆菌亚甲蓝染色原理真的很神奇，很重要。
它能让咱及时发现问题，解决问题，让咱的胃能健健康康的。
你们说是不是这么个理儿呢？。
细菌活菌亚甲蓝染色原理
亚甲蓝染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以使细菌的染色体染上蓝色，同时可以区分细菌活菌与死菌。
该染色法的原理是利用亚甲蓝对细菌细胞壁和染色体的亲和力，使细菌染上蓝色。
在进行亚甲蓝染色前，需要先将菌液平铺于玻璃片上，晾干后进行固定。
固定的方法有多种，如火焰法、甲醛固定法等。
然后将亚甲蓝溶液滴于细菌上，静置2-3分钟后用水轻轻冲洗几遍，使多余的染料洗掉。
最后用纸巾将玻璃片吸干，即可观察到染色结果。
在染色结果中，活菌的染色体呈现出深蓝色，而死菌则呈现出浅蓝色或无色。
这是因为亚甲蓝对细胞膜和染色体的亲和力较弱，只有在活菌中才能充分渗透并染色。
而死菌细胞膜已经破裂，亚甲蓝无法渗透到细胞内部染色体上。
细菌活菌亚甲蓝染色法是一种简单、快速、易于操作的染色方法，可以用于鉴定细菌的形态、大小和排列方式，同时也是一种常用的生物学实验技术。
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内镜染⾊⼤全之亚甲蓝内镜⾊素的使⽤及配制⽅法美兰在胃⾷管结合部的Barrett（BE）⾷管以及Barrett腺癌⽐较常⽤。
内镜下⾊素染⾊在指导BE活检中有重要意义。
亚甲蓝可被⼩肠和结肠上⽪主动吸收，⽽在鳞状
上⽪和胃黏膜等⾮吸收上⽪并不着染。
当⾷管或胃黏膜出现肠上⽪化⽣时，可被亚甲蓝染成蓝
⾊。
为获得较好效果，染⾊前⼀般先使⽤20ml去泡剂（如10%⼄酰半胱氨酸）喷洒以去除表⾯
黏液，2min后再喷洒0.5%的亚甲蓝液（5cm的病变约⽤20ml液体）。
2min后再⽤⽔冲洗。
因长
节段的BE有多量的肠上⽪化⽣⼏乎均呈弥漫性着染，⽽短节段BE因有胃型上⽪化⽣夹杂其中，
染⾊呈局灶或斑点状。
染⾊的原理：亚甲蓝吸收进⼊上⽪细胞内使细胞核着⾊。
染⾊阳性的意义：正常的肠道上⽪、⾷管和胃的肠化上⽪以及部分早期胃癌上⽪，⼗⼆指肠内
异位的胃化⽣细胞并不染⾊。
同时因美兰可以和细胞内的DNA结合，在⽩光下可诱导氧化损伤
甚⾄突变。
肠化/异型增⽣：浅蓝
癌性病灶：深蓝
主要⽤于慢性萎缩性胃炎的诊断。
特染硼酸亚甲蓝法与13C-尿素呼气试验法对幽门螺杆菌检测效果比较杨小苗;申成香;潘成娜;曹明;朱燕燕;蒋艳;怀建国【期刊名称】《临床军医杂志》【年(卷),期】2023(51)1【摘要】目的探讨特染硼酸亚甲蓝法(特染法)与13C-尿素呼气试验(UBT)法在幽门螺杆菌(HP)检测中的应用效果。
方法选取2020年5—12月芜湖市第一人民医院收治的149例患者为研究对象。
所有患者行胃镜检查前均进行了13C-UBT法检测HP;胃镜活检后标本均进行了特殊染色以识别活检标本中的HP。
比较两种方法的HP阳性检出率。
结果 149例患者中,13C-UBT法检测HP阳性且特染法检测HP阴性7例,13C-UBT法检测HP阴性且特染法检测HP阳性68例。
149例患者中,13C-UBT检测HP阳性率为26.85%(40/149),低于特染法的67.79%(101/149),差异有统计学意义(P<0.05)。
在诊断伴有肠化生的64例患者中,13C-UBT检测HP阳性率为31.25%(20/64),低于特染法的65.63%(42/64),差异有统计学意义(P<0.05)。
结论特染法检测HP的效果更优于13C-UBT法。
两种方法同时应用能更加准确地进行HP的检测,更有效地指导临床用药治疗。
【总页数】4页(P40-43)【作者】杨小苗;申成香;潘成娜;曹明;朱燕燕;蒋艳;怀建国【作者单位】芜湖市第一人民医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R573【相关文献】1.13C呼气试验与硼酸亚甲蓝染色检测幽门螺杆菌比较2.幽门螺杆菌尿素酶金标抗体检查法与14C-尿素呼气试验检测幽门螺杆菌感染的对照研究3.粪便幽门螺杆菌抗原检测法与13C-尿素呼气试验比较研究4.两种不同样本收集时间对13C-尿素呼气试验检测儿童幽门螺杆菌的结果比较5.循证护理模式在疑似幽门螺杆菌感染者13C-尿素呼气试验检测中的效果分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)
简介：
胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric ，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。
现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。
胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S 形或海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。
该菌多见于胃黏膜表面上皮与黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦有此菌。
幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法(May-Grunwald-Giemsa ，MGG 法)、碱性品红法等。
硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存，但操作较为麻烦、耗时，其他方法较为简便，但染片容易褪色。
Leagene 幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)采用亚甲蓝法，价格便宜，保存时间长，质量稳定。
临床上常亚甲蓝法对慢性胃炎和消化性溃疡的诊断和治疗效果的判断，Leagene 推荐采用亚甲蓝法作为鉴别幽门螺旋杆菌的常规染色方法。
组成：
自备材料：
1、10%福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、系列乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1、 组织固定于10%的福尔马林，常规脱水包埋。
2、 切片，常规脱蜡至水。
3、 蒸馏水洗。
4、 滴入HP Stain 染色。
5、 迅速水洗。
6、 稍吹干或烤干切片。
7、 二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果： 编号 名称 DM0053 Storage HP Stain(亚甲蓝法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
胃幽门螺旋杆菌蓝色
注意事项：
1、水洗后无需乙醇清洗，否则容易脱色。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件：12个月有效。
相关：
编号名称
CZ0061 台氏液(Tyrode's Solution)
DC0032 Masson三色染色液
DM0001 姬姆萨染色液(即用型)
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
DM0015 标准革兰氏染色液
DM0035 抗酸染色液(Kinyoun冷染法)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
