幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明

胃幽门螺杆菌快速检测试剂盒使用说明书【产品名称】胃幽门螺杆菌快速检测试剂盒【包装规格】48 人份/盒,60 人份/盒。

【预期用途】适用于采用胃镜，取胃粘膜的新鲜活检组织，检测胃幽门螺杆菌的感染。

【检验原理】胃幽门螺杆菌（Helicobacter pylori ，HP）是导致慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病因素，检测该菌再施予针对治疗已成为临床需要。

本试剂盒依据胃幽门螺杆菌分泌大量高活性尿素酶的特性，尿素酶分解尿素而产生氨，使pH值升高，致使指示剂变色，根据颜色变化即可快速判定检测结果，为HP所致疾病的正确诊断和有效治疗提供可靠的4-30 121、做胃镜时，取病人病灶的胃粘膜，由于幽门螺杆菌寄居部位的差异，为提高检出率，建议对每个病人多部位胃粘膜取样。

2、由于尿素酶具有活性，胃镜活检粘膜取样后必须立即检测，陈旧或经处理的样本不能使用。

3、取样本时，尽可能避免酸碱类物质、重金属盐类的污染。

【检验方法】使用前依当日需检测例数取去底物微孔药条，每孔加入反应液贰滴（100ul ），待药膜完全溶解后，用牙签或洁净镊子将新鲜活检胃粘膜置入药液内，在10℃～30℃条件下孵育5分钟后观察结果。

【参考范围】采用目测法。

衬白纸在自然光线下或40W日光灯下观察各孔内胃粘膜组织边缘药液颜色变化。

1、阴性：粘膜样品孔颜色无显色反应。

2、阳性：粘膜样品孔颜色呈红色～紫红色。

【检验结果的解释】1、环境和样本陈旧可造成酸碱性物质、重金属盐类污染，酸性物质可造成假阴性，重金属盐类使尿素酶失活可造成假阴性，碱性物质可造成假阳性。

2、菌种变异造成不分泌尿素酶，分泌尿素酶失活可造成假阴性。

【检验方法的局限性】1、检验方法为定性测定，检验结果宜受样本取样、反应温度和孵育时间的影响，因此规范操作可最大限度保证结果的准确性。

2、检测产物为活性尿素酶，因此菌种变异、尿素酶失活可造成漏诊。

【产品性能指标】1、最底检出限：试剂盒在10℃～30℃ 时，对 1.7U/mg 的尿素酶最底检出限应≤78.125mg/L。

HK-MID革兰氏阴性杆菌生化鉴定系统(HK-MID-64GN-ID A)(HK-MID-65GN-ID B)使用说明书广东环凯微生物科技有限公司广东省微生物研究所HK-MID-GN鉴定条使用流程快速浏览：GN A GN A+B GN A+B 氧化酶阴性阴性阳性接种物挑取1个菌落至3ml盐水挑取1个菌落至5ml盐水挑取1个菌落至5ml盐水（若为放线杆菌属或巴斯德氏菌属，则在菌悬液中加入无菌马血清1滴/ml）接种量每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）每个反应管加3-4滴菌悬液（约100微升）矿物油覆盖管1－赖氨酸管2－鸟氨酸管3－硫化氢管1、2、3；管20－阿拉伯糖管24－精氨酸管1、2、3；管24－精氨酸培养时间18-24小时18-24小时48小时培养温度35-37℃35-37℃35-37℃（若为荧光假单胞菌，则为25℃）初读结果添加配套试剂管8（吲哚）：加2滴Kovac试剂，2分钟内记录结果；管10（VP）：加一滴VPⅠ和1滴VPⅡ，15-30分钟后记录结果；管12（TDA）：加1滴TDA试剂，立刻记录结果同GN A；明胶在24小时记录结果；管24（精氨酸）：黄色－阴性，绿/蓝色－阳性同GN A明胶在48小时记录结果，管24（精氨酸）：黄－阴性，蓝色－阳性记录最后结果，并在MID软件上读取结果注：在反应小管上部有黑色圈，表示培养前需用矿物油覆盖；有绿色圈，表示培养后需要添加配套试剂。

产品介绍：GN-ID鉴定系统包括两种独立的鉴定条，即GN A和GN B，GN A是用来鉴定氧化酶阴性、硝酸盐阳性、发酵葡萄糖的大多数肠杆菌科细菌，而GN B需要与GN A共同使用，而非单独使用，GN A+B主要用来鉴定非苛养革兰氏阴性杆菌（包括氧化酶阴性和阳性菌），共包括28个属（参照名录表）。

原理：GN A和GN B鉴定条均分别由12个含干燥培养基的小管组成。

这些测定管用细菌悬浮液接种，培养一定时间后，通过代谢作用产生颜色的变化，或是加入配套试剂后变色，从而来判定结果。

幽门螺旋杆菌金标法一、幽门螺旋杆菌简介幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，HP）是一种革兰氏阴性菌，属于螺旋菌科。

它存在于人类胃黏膜表面，并与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等多种胃部疾病有着密切的关系。

二、金标法原理金标法是一种常用的HP检测方法，也被称为尿素酶快速测定法（urease rapid test）。

其原理是基于HP细菌特有的尿素酶，该酶可以将尿素分解为二氧化碳和氨。

金标试剂中含有一种指示剂，当尿素被分解后产生的氨使指示剂变色，从而可以判断样本中是否存在HP 细菌。

三、金标法操作步骤1. 准备样本：取得患者的胃黏膜组织或呼出空气样本。

2. 打开试剂盒：将试剂盒从密封袋中取出，打开包装。

3. 取样：使用采样棒或吸管等工具取得样本。

4. 滴加样本：将采集的样本滴在试剂盒上。

5. 等待反应：等待约10分钟，观察试剂盒上的指示剂是否变色。

6. 判断结果：根据指示剂颜色变化判断样本中是否存在HP细菌。

四、金标法优缺点1. 优点：（1）操作简便，快速方便；（2）对患者无创伤，不需要进行胃镜检查；（3）准确率较高，可作为初步筛查方法。

2. 缺点：（1）金标法只能检测到HP的存在与否，不能确定感染程度；（2）可能会出现假阴性或假阳性结果；（3）金标试剂需要保存在低温下，否则易失效。

五、金标法应用范围金标法适用于初步筛查HP感染患者，特别是对于不能进行胃镜检查的患者。

同时，该方法也可以用于评估治疗效果和复发情况。

六、注意事项1. 采样前应告知患者相关注意事项，并征得其同意。

2. 采集样本时要避免污染和误差。

3. 操作过程中要遵守严格的消毒规范。

4. 金标试剂要保存在低温下，不要暴露在阳光下和高温环境中。

七、总结金标法是一种简便快速的HP检测方法，可以作为初步筛查方法。

但该方法也存在一定的局限性，如不能确定感染程度和可能出现假阴性或假阳性结果等。

因此，在使用该方法时需要注意操作规范，同时结合其他检测手段进行综合分析和诊断。

人幽门螺旋杆菌IgM(HP IgM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

96T使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中幽门螺旋杆菌IgM(HP IgM)表达。

实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人幽门螺旋杆菌IgM(HP IgM)表达。

用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中幽门螺旋杆菌IgM(HP IgM)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中幽门螺旋杆菌IgM(HP IgM)的存在与否。

试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8阳性对照0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9阴性对照0.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50µl。

然后在待测样品孔先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

广州市外显子生物技术有限公司
幽门螺杆菌染色液
产品说明：
幽门螺杆菌为短杆菌，两端微弯的一种革兰氏阴性杆菌，主要生存于胃黏膜上皮和胃腺体黏液屏障之间，与慢性胃炎、消化性溃疡和胃肿瘤有密切关系。

本染色液染色步骤简便，能清晰显示菌体，可大批浸染，为一种理想的HP染色液。

产品组成：
货号产品规格储存条件
S-1543 幽门螺杆菌染色液15ml RT -- 说明书1份
有效期：12 个月。

原包装未开封染色液的使用期限为 12 个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后 6 个月内使
用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

实验步骤：
1.切片厚4-5微米，脱蜡至水。

2.幽门螺杆菌染色液染色1-2分钟。

3.水洗。

4.风干后，树胶封片，镜检。

结果判定：幽门螺杆菌蓝色，红细胞绿色，背景蓝色。

幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明书货号:G1930有效期：24个月有效。

产品组成：名称2×100ml Storage试剂(A)A1:May-Grunwald Stain50ml RT避光A2:MG磷酸盐缓冲液50ml RT取A1、A2等量混合，即为May-Grunwald工作液，不宜预先配制。

试剂(B)B1:Giemsa Stain50ml RT避光B2:Giemsa磷酸盐缓冲液50ml RT取A1、A2等量混合，即为Giemsa工作液，不宜预先配制。

产品说明：胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。

现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。

胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S形或海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。

该菌多见于胃黏膜表面上皮与黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦有此菌。

幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法(May-Grunwald-Giemsa，MGG法)、碱性品红法等。

硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存，但操作较为麻烦、耗时。

其他方法较为简便，但染片容易褪色。

May-Grunwald-Giemsa染色液主要由迈格林华染液和姬姆萨染液组成，染色后胃幽门螺旋杆菌呈蓝色，胶原纤维呈红色，红细胞呈绿色，胃黏膜上皮呈淡蓝色，细胞核呈深蓝色。

HP多位于胃黏膜上皮表面的黏液中，特别在胃小凹中数量较多。

自备材料：1.10%福尔马林固定液2.蒸馏水3.系列乙醇第1页，共2页操作步骤(仅供参考)：1、组织固定于10%福尔马林，常规脱水包埋。

2、切片厚4μm，常规脱蜡至水。

3、再用蒸馏水洗1次。

4、把切片周围水分抹干，滴入May-Grunwald工作液数滴染色10min，倾去染液。

5、Giemsa工作液滴染20min，倾去染液。

幽门螺杆菌免疫印迹法使用说明幽门螺杆菌免疫印迹法使用说明：
1、首先，操作者需要准备好幽门螺杆菌免疫印迹法所需的试剂，确保试剂的有效期。

2、将标本放入洗涤液中洗涤，以去除外部污染，然后以pH为7.2的肌苷酸缓冲液稀释标本。

3、将稀释后的标本放入酶标板中，用磁力搅拌机振荡稀释物
5min，以有效地分解和提取质粒DNA。

4、加入测序缓冲液，进行模板DNA复制，2次循环。

5、施加免疫印迹，利用免疫印迹原理将有目的基因片段结合到免疫印迹支架上，做出免疫印迹。

6、清洗、烘干及三次结果叠加分析，以获取准确的结果。

c13呼气试剂使用说明书
C13呼气试剂是一种检测幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染的
无创性诊断方法，主要用于诊断胃部疾病，如胃炎、胃溃疡和胃癌等。

以下是C13呼气试剂的使用说明书：
一、适用人群：
适用于所有疑似有Hp感染的成年人和儿童。

二、操作步骤：
1. 受检者空腹或进食2小时后，用20ml凉开水（不含碳酸）吞服一颗胶囊。

2. 静坐30分钟，然后一口气吹向集气瓶内。

3. 标上受检者的姓名、日期，送往实验室进行检测。

三、注意事项：
1. 受检者需停用质子泵抑制剂（PPI）至少2周，停用抗菌药物、铋剂和某
些具有抗菌作用的中药至少4周。

2. 受检者在检测前1天不宜进食辛辣、刺激的食物，也不宜饮酒。

3. 受检者应避免剧烈运动，以免影响检测结果。

4. 受检者应按照医生的要求进行检测，如有不适，请及时告知医生。

四、检测结果解读：
1. 结果为阳性，提示存在Hp感染。

建议及时就医，遵医嘱治疗。

2. 结果为阴性，提示不存在Hp感染。

但仍需注意保持良好的生活习惯，预防Hp感染。

五、保存方式：
C13呼气试剂应存放在阴凉干燥处，避免阳光直射和高温。

请勿将试剂放在儿童可及之处。

请注意：以上为C13呼气试剂的一般使用说明，具体操作方法和注意事项应以试剂盒内的说明书为准。

如有任何疑问或不适，请及时咨询专业医生或药师。

内镜黏膜染色剂的使用方法受阿俊仁院长的委托，今天在基层内镜学习群里跟大家交流一下内镜黏膜染色剂的使用方法，请大家共同探讨指正。

对黏膜染色剂的基本要求：1、本身具有颜色2、与被染组织间具有亲和力3、被染色的染色体或者包浆有被染色的特性目前的黏膜染色剂主要有以下几种：1、靛胭脂靓胭脂是对比性的表面黏膜染色剂，而非细胞内染色剂，在胃和肠均可使用。

原理：利用重力沉积于上皮表面的低凹处，勾勒出胃小沟、肠黏膜的无名沟以及pit形态，推断病变的范围及大体性质，最佳浓度为 0.2-0.4%，须使用喷洒管，通常在2-3分钟后观察效果最佳。

值得注意的是：喷洒时并不是浓度越高越好，而是从低浓度开始喷洒（绝大多数病变低浓度会显示的更清楚）如果需要可进行再次喷洒。

但反过来一开始高浓度喷洒，如果再想低浓度就比较难处理。

AIM三明治法1：0.2％靛胭脂10ml+1.5％10ml+清水30ml，用于判断病变黏膜的侧向进展范围。

2、美兰又称亚甲蓝，浓度为0.1%到0.2%，作为一种吸收性的染料，它是吸收到细胞内部对细胞核进行。

被染的对象一般是肠道的上皮细胞、食管和胃中肠化的上皮细胞，它只染色肠化的细胞。

染色的原理：亚甲兰吸收进入上皮细胞内使细胞核着色，染色阳性的意义：正常的肠道上皮、食管和胃的肠化上皮以及部分早期胃癌上皮，其中值得注意的是：十二指肠内异位的胃化生细胞并不染色。

同时因美兰可以和细胞内的DNA结合，在白光下可诱导氧化损伤甚至突变。

3、卢戈氏碘浓度0.5-0.75％须使用喷洒管均匀地进行全食道染色，建议从肛侧到口侧，边喷洒边吸引，床头抬高避免呛咳窒息。

如果浓度大颜色过黑，浓度小染不上色。

二个人配合喷洒会更均匀更细腻，尤其是食管入口部分的染色。

推荐对于可疑的早期食管鳞癌及癌前病变采用碘染色借助“粉色征或银色征”行进一步诊断和靶向活检。

20世纪70年代即有应用碘染色来诊断食管疾病的报道。

碘染色的原理是正常成熟非角化食管鳞状上皮细胞含有大量糖原，遇碘后呈棕褐色，当食管炎症或癌变时细胞内糖原含量减少甚至消失，因此碘染后相应部位呈淡染或不染区。

GUS染色液产品说明书货号：G3060有效期：6个月产品说明：X-Gluc（X-GlcA）分子量为521.8，CAS 号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS 基因的底物，可快速检测植物中GUS 基因融合标记。

GUS 染色液在适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc 水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS 活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

GUS 染色液多用于转基因植物的GUS 基因表达分析。

操作步骤(仅供参考)：1、配制X-GlcA Solution：取X-GlcA solvent 229μl 加入至80mg X-GlcA 中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻Vortex 混匀，即为X-GlcA Solution，分装后，-20℃避光保存。

2、按下列比例配制GUS 染色液：组分体积GUS Buffer A 2.5ml GUS Buffer B 10μl GUS Buffer C 10μl Deionized water 5.5ml 甲醇2.0ml X-GlcA Solution 20μl Tatal volume～10ml3、固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：Reagentspackage Storage 试剂(A):GUS Buffer A 50ml RT 试剂(B):GUS Buffer B 0.2ml 4℃避光试剂(C):GUS Buffer C 0.2ml 4℃避光试剂(D):2×Fixation Buffer25ml RT 避光试剂(E):X-GlcA80mg -20℃避光试剂(F):X-GlcA solvent 1ml RT 避光试剂(G):Deionized water100mlRT①取转基因植物组织，加入到3-5ml左右清洁小瓶或多孔板中。

( 革兰氏阳性鉴定卡及药敏卡) GPI 及 GPS 卡的操作步骤Tryticase Say agar +5% bloodBlood agar①样本作划线培养分纯Sample②培养时间性 18hr 至 24hr, 不要超过，以防老化。

分纯菌落①革兰氏染色试验确定是革兰氏阴性②触酶试验+反应 ③作凝固酶试验④催化酶试验不要-沾反到应 blood ③作溶agar 血酶试验（ β- 溶血）GNS 卡上填上 AMS.NOGNI 试卡上填上 AMS 。

NO① 如果催化酶试验是正反应，则在图内的 31 处填 黑② 若凝固酶是 +反应或溶血酶是 +反应则将 32 标记填黑稀释比浊①如果催化酶试验是正反应，则在图内的 31 处填黑②若凝固酶是 +反应或溶血酶是+反应则将 32 标记填黑③AMS NO 完全与 GNI 的相同① 0.45% 至 0.5%盐水②用消毒的接种环挑取纯菌落鉴定试验药敏试验①菌落放入 1.8ml 盐水内均匀②浓度： 1McFarland③最好用电子比色器量度充填①从菌液（ 1McFarland）抽取 200uL 放入试管内②加入 1.8mL 盐水均匀充填时间约 3 分钟①封口器要预热约 3 分钟，直至“Ready”灯亮②用力将架子及试卡推入，直至切割声音停下③检查卡片是否有气泡，将气泡摔切割封口①放入最快被读数的架子上②GNI及 GNS要放在同一个架子上③放好后尽快将门关上④再将资料从键盘及荧光幕输入②加入 1.8mL 盐水均匀放入培养 / 读数箱内YBC卡 ( 酵母菌 ) Sample① 在法国甘露醇葡萄糖琼脂或马玲薯葡萄糖琼脂上作划线培养分纯后选取纯菌落② 18hr至48hr,28~30摄氏度①选取纯菌落 ,3 至 4 个独立菌②约 2 至 3mm直径落①1.8mL 的 0.45%-0.9%盐水稀释比浊②浓度 =2McFarland③用电子比浊器量度①若试卡要在普通培养箱再次 24hr培养即共 48hr 培养 , 则在图 6 的充填充填时间约 3分钟31， 48hr 培养标记处填黑 .②第一次的 24hr 不用填放入普通培养箱平放在 30 摄氏度的培养箱内24hr①待读数器阅读最终报告放入 AMS培养 / 读数箱②一次阅读后马上自动将报告打印出来最终结果未能显示最终结果①若未有最终结果 , 打印出来的报告直会建议①再次放入 30℃的培养箱内24hr放入普通培养箱子②即此试卡总共在30℃培养箱内 48hr③将试卡上 48hr 培养标记处填黑①待读数器阅读最终放入 AMS培养 / 读数箱结果②一次阅读后马上自动将报告打印出来最终结果。