实验十七 血清尿素的测定(二乙酰一肟法)

一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。

3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。

尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。

二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。

因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。

其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。

- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。

- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。

- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

二乙酰一肟法测尿素的原理二乙酰一肟法是一种常用于测定尿素含量的方法。

该方法基于尿素能与二乙酰一肟发生反应生成氨基脲的原理。

下面将详细介绍二乙酰一肟法测尿素的原理。

尿素是生物体代谢产物，也是一种重要的氮源。

测定尿素的含量对于了解生物体的氮代谢及肾功能等具有重要意义。

二乙酰一肟法是一种常用的尿素测定方法，其基本原理为将尿素与二乙酰一肟发生酰化反应，生成氨基脲。

具体的操作步骤如下：1. 取一定量的尿液样品，加入适量的三氯乙酸，使尿液中的尿素脱氢酶等酶失活。

2. 加入适量的二乙酰一肟试剂，与尿素发生反应生成氨基脲。

二乙酰一肟试剂的作用是使尿素与一肟酯发生酰化反应，生成稳定的酰尿素化合物。

3. 反应结束后，在碱性条件下，氨基脲水解，生成氨气。

可以利用此氨气的生成量来测定尿素的含量。

4. 使用比色法或者气相色谱法等进行测定，根据标准曲线计算出尿液中的尿素含量。

二乙酰一肟法测尿素的原理主要基于尿素与二乙酰一肟反应生成酰尿素的特性。

此反应是一个酯化反应，发生在酸性条件下。

二乙酰一肟试剂作为试剂，可反应生成具有稳定性和可检测性的酰尿素化合物。

此后，在碱性条件下，酰尿素水解生成氨气。

为了提高测定的准确性，二乙酰一肟法还可以结合其他方法进行测定。

例如，可以在水解反应结束后，用酚酞指示剂测定氨气生成量的酸度滴定法，或者使用离子选择电极进行电位测定。

这些方法可以更加准确地测定尿素的含量。

总结起来，二乙酰一肟法是通过尿素与二乙酰一肟试剂发生酰化反应生成氨基脲，再经过水解反应生成氨气来测定尿素含量的一种方法。

这种方法简单、灵敏且准确，因此被广泛应用于尿液中尿素含量的测定。

1. 熟悉血清尿素浓度测定的原理和方法。

2. 掌握生物化学实验的基本操作技能。

3. 了解血清尿素浓度与肾功能、蛋白质代谢的关系。

二、实验原理尿素是人体蛋白质代谢的终末产物，主要由肝脏合成，通过血液运输至肾脏排泄。

血清尿素浓度可以反映肾脏的滤过功能。

本实验采用二乙酰法测定血清尿素浓度，其原理是：在强酸条件下，二乙酰与尿素缩合成红色的二甲基氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清标本：收集患者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、硫酸、生理盐水、标准尿素溶液等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 准备工作：将试剂、仪器等实验用品准备齐全，并校准分光光度计。

2. 标准曲线制作：取一系列标准尿素溶液，分别加入二乙酰试剂，室温反应一定时间后，用分光光度计测定吸光度。

以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：取血清标本，加入二乙酰试剂，室温反应一定时间后，用分光光度计测定吸光度。

4. 计算血清尿素浓度：根据标准曲线，查得样品的吸光度对应的尿素浓度，即为血清尿素浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线：制作的标准曲线线性良好，相关系数R²大于0.99。

2. 样品测定：按照实验步骤对血清标本进行测定，得到吸光度值。

3. 血清尿素浓度计算：根据标准曲线，查得样品的吸光度对应的尿素浓度。

1. 实验过程中，要注意避免试剂污染，保证实验结果的准确性。

2. 标准曲线的制作要保证足够的浓度梯度，以便在测定过程中有足够的准确度。

3. 血清尿素浓度受多种因素影响，如肾功能、蛋白质摄入量、代谢分解情况等。

本实验测定的血清尿素浓度仅供参考，具体病情需结合临床综合判断。

七、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了血清尿素浓度测定的原理和方法，了解了血清尿素浓度与肾功能、蛋白质代谢的关系。

在实验过程中，我们要严格遵守实验操作规程，确保实验结果的准确性。

八、实验建议1. 在实验过程中，加强实验室安全管理，防止意外事故发生。

3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿 素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱 肿瘤致使尿道受压等。
2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者 外，常见于肝功能衰竭患者。
【注意事项】
1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽 稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色 经冷却后，应及时比色。
2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离 子水作50倍以上稀释。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分 子中有2个氮原子，所以1mmol尿素相当于28mg尿素氮 (1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮)；另外还有以尿素氮 mmol/L表示，则1mmol/L尿素＝2mmol/L尿素氮。世界卫生 组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规 定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。
【原理】本实验采用二乙酰一肟法测定血清尿素氮。二乙酰 一肟法系根据双乙酰与尿素形成二嗪衍生物的有色复合物 的显色反应。由于双乙酰本身不稳定，故用二乙酰一肟来 代替，其反应式如下：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰 不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它 化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然 也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少 引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的 最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋 白达10g/L入物(ml) 空白管 标准管 测定管 基础管 回收管

一、实验目的1. 掌握血清尿素含量测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清尿素在临床医学中的意义。

二、实验原理血清尿素含量测定采用二乙酰-肟法，其原理如下：在强酸条件下，二乙酰与尿素发生缩合反应，生成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物。

该化合物的颜色深浅与尿素的含量成正比。

通过比色法，可以计算出血清中尿素的含量。

三、实验材料1. 试剂：二乙酰-肟试剂、血清、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等；2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、试管架等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准尿素溶液；（2）向各试管加入2ml的二乙酰-肟试剂，充分混匀；（3）将试管置于60℃水浴中反应30分钟；（4）取出试管，用蒸馏水定容至5ml；（5）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（6）以尿素浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的血清样本；（2）按照标准曲线绘制步骤中的操作，进行反应和测定；（3）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（4）根据标准曲线，计算血清中尿素的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，结果显示尿素浓度与光密度呈线性关系，相关系数R²=0.998。

2. 血清尿素含量测定：根据标准曲线，计算各血清样本中尿素的含量，结果如下：样本1：尿素含量为5.2mmol/L；样本2：尿素含量为6.8mmol/L；样本3：尿素含量为7.4mmol/L；样本4：尿素含量为8.2mmol/L；样本5：尿素含量为9.0mmol/L；样本6：尿素含量为10.0mmol/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，二乙酰-肟试剂的浓度、反应时间、温度等因素对实验结果有较大影响，应严格控制实验条件，以保证结果的准确性。

实验十七 血清尿素的测定（二乙酰一肟法）【目的】1. 掌握血清尿素的测定原理和方法。

2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。

【原理】尿素（urea ）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon 反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。

与同样处理的标准液在540nm 处比色，求得尿素含量。

由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。

其反应式如下：CH 3CH 3O O +H 2OH +CH 3CH 3O N OH +NH 2OH二乙酰一肟二乙酰羟胺CH 3CH 3O O 二乙酰+C ON H 2NH 2尿素H +CH 3C C 3N N C O+H 2O2二嗪衍生物【器材】试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。

【试剂】 1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml ，然后缓慢加入浓硫酸44ml 、85%磷酸66ml ，冷至室温，加入氨基硫脲50mg 及硫酸镉(CdSO4·8H 2O)2g ，溶解后移入1L 容量瓶中，加去离子水至1L 。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

2．二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g 溶于去离子水中并定容至1L 。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

3．尿素标准贮存液(100mmol/L)精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(MW 为 60.06)0.6g ，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml ，加0.1g 叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。

4．尿素标准应用液(5mmol/L)取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。

【操作】取试管3支，按下表操作：表3-19 血清尿素测定加入物 (ml) 空白管标准管测定管血清－－0.02尿素标准应用液－0.02 －去离子水0.02 －－二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀，置沸水浴加热 12分钟，取出置冷水中冷却 5分钟，以空白管调零，在 540nm 波长处读取各管吸光度。

样本（微升） 校准液（微升） 蒸馏水（微升） 试剂R1（微升） 试剂R3（微升）
测定 10
50 1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟 试剂R4（微升） 1000
校准 10 50 1000
1000
空白
10 50 1000
1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟，600纳米波长，以空白管调零，测定 各管吸光度值。
血清尿素测定
尿素的测定方法
尿素（urea）是氨基酸分解代谢的最 终产物，在肝脏合成，通过血液运至肾 脏，从尿中排除。检测尿素的方法有二 乙酰一肟法和酶法。二乙酰一肟法操作 简便，仍为大多数基层医疗单位所采用。
脲酶波氏法是我们今天实验课所选用的 酶法。
பைடு நூலகம்
实验原理
脲酶水解样本中的尿素，产生两分子氨和一分 子的二氧化碳。氨在碱性条件下与酚及次氯酸 反应，在亚硝基铁氰化钠催化作用下生成蓝色 化合物，与经过同样处理的校准液进行比较， 即可计算出样本中尿素的含量。（终点法）
方法局限性
1.尿液尿素也可用此法测定，但因浓度 高（超过28mmol/L），需先用去离子 水稀释。
再乘以稀释倍数。 2.试剂变混浊或空白吸光度大于0.150，
将不能使用，应弃去。 3.所用试验器材必须清洁，避免氨污染。 4.试剂含化学成分，应避免氨污染。
环功能不全、心功能不全，休克等引起肾血流 量减少，肾小球滤过率减低而使血中尿素潴留； ②肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能 衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎都可出现血 中尿素含量增高。③肾后性疾患：如前列腺肿 大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道 受压等都可能使尿路阻塞引起血液中尿素含量 增加。 2.血清尿素减少 较少见，尿素减少表示严重 肝病，如肝炎合并广泛性肝坏死。

二乙酰一肟法在临床检验上和卫生检验上测定尿素的区别
项目 方法名称 显色颜色 吸光度比色波长 试剂瓶要求 稀释样品 加热时间 临床检验 二乙酰一肟法 红色 540nm 无特殊 不需要 较短，10-15分钟 卫生检验 二乙酰一肟安替比林法 黄色 460nm
需用棕色的具塞比色管
需要，并按稀释倍数求 出原样品中尿素的浓度 较长，45-55分钟
在卫生检验方面：
1、增加沸水浴时间，由50min缩短为20min[5]； 2、由于反应所使用的具塞比色管较难买到，可使用普通透 明比色管并在外面套上黑色塑料袋来代替棕色比色管[6]； 3、扩大标准曲线，将定容体积由25ml改为10ml，并加入稳 定剂异丙醇，从而使线性范围变宽，吸光度的值增大[7]。
混匀后，置沸水浴中加热12min，取出，置冷水中冷却5min后，用分光 光度计540nm，以空白管调至零点，读取标准管及测定管吸光度。
卫生检验
在卫生检验方面，可用于如掺伪食品中的尿素检 验，也可用于肥料中的尿素检验等。现重点研究在 游泳池水中的尿素检验。 游泳池水中的尿素检验属于公共场所卫生检验， 有国家规定的标准检验方法：二乙酰一肟安替比林 法（GB/T 18204.29-2000）。 原理：尿素与二乙酸一肟及安替比林反应呈现 黄色 ，在波长460nm处有最大吸收峰。
参考文献
[1] 李影林，中华医学检验全书，第一版，人民卫生出版社，1996，698 [2] 潘忠孝，邸秋媛，高炳德，王洪兰，血清尿素测定_二乙酰一肟改良法，中 国医科大学学报，1988，17（3） [3] 徐致义，血清尿素氮的二乙酰一肟56℃保温测定法，临床检验杂志，1988， 6（4） [4] 冯敬池，尹济群，马树臣，二乙酰一肟改良法测定学尿素，河北医科大学 学报，1998，19（5） [5] 王益萍，陈海红，沈仁富，陈金斌，陈宇鸿,二乙酰一肟分光光度法测定游 泳池水中的尿素含量，中国卫生检验杂志，2012，22（3） [6] 刘晨阳，张梅君，透明比色管在尿素测定中的应用，环境与健康杂志，1999， 16（2） [7] 张雪梅，游泳池水中尿素检测方法改进，中国卫生检验杂志，2009，19（10）

2 试剂
2．1 0．2％二乙酰一肟溶液：称取0．2g二乙酰一肟 ［CH3COC：（NOH）CH3］溶于10％乙酸中，并稀释至100ml， 保存于棕色瓶备用。 2．2 0．2％安替比林溶液：称取0．2g安替经林（1，5 －二甲基－2－苯－3－吡唑酮C6H5NN（CH3）C（CH3）：CHC： O），溶于1＋1硫酸中并用混酸稀释至100ml，棕色瓶中保 存。（注：硫酸浓度大于1＋1时，显色缓慢且操作不便。） 2．3 尿素标准溶液：准确称取0．1000g尿素于小烧杯中， 加少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中，加0．1ml氯仿并 用纯水定容，此液每ml含0．1mg尿素。冷藏保存。 2．4 尿素标准使用溶液，准确吸取尿素标准储备溶液 10．00ml于100ml容量瓶中，用纯水定容，此液每ml含 0．01mg尿素。
3 方法
3．1 定性测定：取使用液 2 mL 加入试管中，加 0.1 mL
牛奶，在电炉上快速加热至煮沸，保持沸腾 1 min，观察
颜色，用不含尿素样品做比较。正常奶颜色为淡红色， 添加尿素的牛奶反应颜色为玫红色。 3．2 定量测定：取5mL使用液加入0.1mL牛奶，于20 mL
的螺口试管中，加盖拧紧，于 95 ℃水浴中反应 20 min，过
( 011 ~ 11 5 m g /L), 吸光度偏低,反应产物不稳定, 溶液
显色后遇光褪色等多种问题, 对检测结果影响较大, 为此 本法参阅有关文献[ 2, 3] , 通过摸索, 将国标法中的标准 曲线扩大, 定容体积由25 m l改为10 ml, 使线性范围变宽, 吸光度的值增大, 标准系列的稳定时间长, 结果满意, 其准 确度、精密度较好, 能满足基层实验室的需要。
1．原理
尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸环境中

以空白管调零比色，读取各管吸光度。
【计算】
尿素氮mg% = 测定管/标准管×0.002×100/0.1×5 = 测定管/标准管×10
【参考范围】
5-20 mg/dl
【临床意义】 1．血液尿素浓度增高，可分生理性与病理性因素二个方面。 (1) 生理性因素：高蛋白的饮食可引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血
【注意事项】 1．试剂中加入硫氨脲和镉离子可增加显色强度和色泽的稳
定性，还可消除羟胺的干扰，但仍有轻度退色现象，故应及时 比色。
2．尿液中尿素亦可用此法测定，但因尿液中尿素浓度较高， 需将尿液作50倍以上稀释后再行测定。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个 氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组 织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已 规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
取4只试管，具体操作按下表进行。
加入物(ml)
空白管（B） 标准管（S） 测定管（人） 测定管（牛）
血清
——0.1Fra bibliotek0.1
尿素标准应用液
—
0.1
—
—
蒸馏水
0.1
—
—
—
二乙酰一肟溶液
0.5
0.5
0.5
0.5
尿素氮试剂
5.0
5.0
5.0
5.0
各管混匀后，置沸水中加热15min，取出置冷水中冷却后，分光光度计波长540nm，
血清（血浆）尿素氮测定
（二乙酰一肟显色法）
非蛋白含氮化合物包括除蛋白质以外的 尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、核苷酸、 嘌呤、谷胱甘肽等多种含氮有机物。体内氨 基酸代谢产生的氨，主要经肝脏生成尿素， 而后又主要经肾脏排出体外。因此，血清尿 素浓度的测定是临床上应用较多的反映肾小 球滤过功能的常用指标。

尿素(Urea)检测试剂盒(二乙酰一肟比色法)简介：尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。

尿素检测方法大致分为化学方法和酶学方法，后者被认为是间接方法，先经尿素酶分解尿素为铵离子，然后根据波氏反应，检测铵离子的生成量。

尿素(Urea)检测试剂盒(二乙酰一肟比色法)检测原理是在酸性条件下，尿素与乙二酰缩合，生成红色diazine ，该反应被称为Fearon 反应，生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度。

该试剂盒可用于检测人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，尿液样品可直接检测，无需处理。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存。

尿液中尿素含量较高，应先用蒸馏水作1：50稀释后再测。

2、 配制标准品工作液：取尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L)：尿素标准稀释液混合，使浓度达到，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)。

4℃保存1周有效。

3、 Urea 比色操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

如果样品中的Urea 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后编号 名称TC1173 100T Storage试剂(A): 尿素标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 试剂(B): 尿素标准稀释液 2ml RT 试剂(C): Diazine 显色液 25ml -20℃ 避光 试剂(D): Urea assay buffer 250ml-20℃ 避光 使用说明书1份再进行测定。

【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。

【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。

它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。

肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。

是研究药物肾毒性的重要指标之一。

【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。

48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。

【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。

附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。

因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。

通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。

二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。

根据颜色深浅确定尿素含量的多少。

【试剂】(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。

冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。

溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。

(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。

(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。

(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。

比色读取标准管及测定管的吸光度。

实验题目:
•血尿素的测定 （BUN） • （二乙酰一肟法）
• 实验人：体育教育专业、运动训练专业、民族 体育专业、运动人体科学专业、特殊教育等专 业 • 实验地点：运动生化实验教室 • 日期
2013-8-1 1
实验目的
•了解血尿素测定的原理 及操作、观察运动前后 血尿素值的变化，了解 血尿素指标在体育实践 中的应用。
2013-8-1 4
实验步骤
• 取试管3只，标明‘空白’、‘标准’、‘标 本’，按下表操作。
试管号 （ml）
空白
0.05 ------0.5 5.0
标准
---0.05 ---0.5 5.0
标本
------0.05 0.5 5.0
5
蒸馏水 尿素标准液 血清
二乙酰一肟氨 基硫脲溶液
酸混合液
2013-8-1
2013-8-1 7
• 混匀，置沸水浴中10分钟，取出冷 却。 • 525毫微米为波长，空白管调零， 比色 • 代入公式计算结果 • 血尿素mmoL/L=测定管光密度/标 准管光密度×20 • 正常值:1.7—7.0mmoL论
长时间大强度运动时蛋白质、氨基酸分解 代谢加强参与供能，血液和尿液中的尿 素含量随蛋白质、氨基酸分解加强而增 多。机体对负荷的适应性越差，运动生 成的尿素就越多。因此，血尿素可作为 反映机体疲劳程度和评定机能状况的重 要指标。运动中血尿素浓度的升高，一 般出现在运动后30分，绝大多数出现在 40-60分。
2013-8-1 2
实验用仪器及试剂 • 722－分光光度计、离心机、 恒温水浴锅、微量取样器、 微量采血工具等。 • 尿素标准液、二乙酰一肟氨 基硫脲溶液、酸混合液。
2013-8-1 3
实验原理 • 在强酸的条件下，样品中的 尿素与二乙酰一肟和氨基硫 脲共热，生成红色复合物， 其显色强度与尿素成正比。 与同样处理的尿素标准液比 较，即可求出样品中的尿素 含量。

第1篇一、实验目的1. 熟悉生物化学实验的基本操作步骤。

2. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

3. 了解血清尿素在临床诊断中的意义。

二、实验原理尿素是哺乳动物体内蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏合成，通过肾脏排泄。

血清尿素氮（BUN）是血液中尿素的浓度，是反映肾功能和体内氮代谢状况的重要指标。

本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法基于二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清样本：采集受试者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、强酸试剂、显色剂、空白试剂等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验方法1. 样本处理：取血清样本100μl，加入1ml强酸试剂，充分混匀后室温放置10分钟。

2. 显色：加入2ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。

3. 测定：以空白试剂为参比，于540nm波长下测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线计算血清尿素含量。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：将不同浓度的尿素标准品按照实验方法进行测定，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：将受试者血清样本按照实验方法进行测定，得到吸光度值，根据标准曲线计算血清尿素含量。

六、结果分析1. 血清尿素正常范围为3.2～7.1mmol/L。

本实验受试者血清尿素含量在正常范围内，说明受试者肾功能正常。

2. 血清尿素升高可能见于以下情况：- 肾脏功能受损：如急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾小球肾炎等。

- 蛋白质摄入过多或分解代谢增强：如发热、创伤、肿瘤等。

- 肾前性少尿：如严重脱水、充血性心力衰竭、肝肾综合征等。

3. 血清尿素降低可能见于以下情况：- 蛋白质摄入减少：如营养不良、消化系统疾病等。

- 肝脏功能异常：如肝功能衰竭、肝脏病变等。

- 肾小球滤过功能下降：如肾小球肾炎、肾病综合征等。

七、实验讨论1. 本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法操作简便、准确度高，是临床常用的测定方法。

二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮【目的】1. 掌握二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验方法。

2. 熟悉二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验原理。

3. 了解血清尿素氮测定的临床意义。

【原理】在酸性条件下加热，稳定的二乙酰一肟水解成不稳定的二乙酰，后者与血清中的尿素反应合成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。

与同样处理的尿素标准液比色可求得血清中的尿素含量。

其反应式如下：【器材】1 ．血清；2 ．微量移液器；3 ．刻度吸量管；4. 沸水浴；5. 分光光度计。

【试剂】1 ．血清新鲜人或动物血清，无溶血。

2 ．酸性试剂（或称尿素氮试剂）在三角烧瓶中加蒸馏水约 100ml ，再加浓硫酸 4ml 及 85% 磷酸 66ml 。

冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉（CdSO 4 ·8H 2 O ） 2g （提高尿素与二乙酰反应灵敏度），溶解后用蒸馏水稀释至 1L 。

置棕色瓶在冰箱保存。

可稳定半年。

3 ．二乙酰一肟溶液称取二乙酰一肟 20g 。

加蒸馏水约 900ml ，溶解后，再用蒸馏水稀释至 1L 。

置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年不变。

4 ．尿素氮标准液（ 14mmol/L ， 19.6mg/dl ）称取干燥纯尿素 4 2mg ，加少量蒸馏水溶解后，移入 100ml 容量瓶，加氯仿数滴防腐，再加蒸馏水至刻度，在冰箱中可稳定半年。

如用 8mmol/L 苯甲酸溶液代替蒸馏水配制，此标准溶液防腐效果更好。

【操作】取 3 支试管，标明测定管、标准管及空白管，按下表操作。

试剂（ ml ）测定管标准管空白管血清0.02 - -尿素氮标准液- 0.02 -蒸馏水- - 0.02 二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀后，置沸水浴中加热 12min ，取出，置冷水中冷却 5min 后，用于波长540nm ，以空白管调 0 ，读取并记录标准管及测定管吸光度值。

【计算】【注意事项】1 ．本法线性范围达 40mg/dl 尿素氮，即吸光度 0.7 。

2．2 二乙酰一肟溶液 2．3 尿素标准贮存液 200ml，棕色瓶冷藏可保存半年。 后，移至 1000ml 容量瓶中，加 5滴三氯甲烷作防腐剂，用纯水 定容至刻度。4℃保存，此溶液尿素浓度为0.1mg/ml。 2 ． 4 尿素标准使用液 临用时将尿素标准贮存液稀释 10倍。 此溶液尿素浓度10ug/ml。
3 操作步骤
3．1取水样10ml于具塞标准比色管中。另取比色管8只，分别
加入10ug/ml的尿素标准使用液0、0.10、0.25、0.50、
1.00、2.00、3.00、5.00ml，各加水至约10ml。 3．2 每管各加酸性试剂5.0ml，2%的二乙酰一肟溶液2.0ml， 加纯水至25ml。沸水浴12分钟，取出后用冷水冷却至室温。 3．3 以空白管调零，在540nm处，用1cm比色皿测定各管吸光
值。以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样的吸光值
在标准曲线上查出尿素含量。
4 结果
本法操作简便，溶液显色稳定，线性范围宽，试剂 稳定时间长，适合平时工作中使用。
二乙酰一肟-异丙醇-安替比林法
化学式
（CH3）2CHOH OH
异丙醇
结构式
H3C
CH
I
CH3
作用
作显色稳定剂。
1 原理
在原发的基础上，选择异丙醇作显色稳定剂对游泳池 水中尿素进行测定，使标准曲线的线性范围有了很大的提 高，缩短了煮沸时间，方法的精密度、准确度优于原法， 且符合卫生检验要求。
3 分析步骤
3 ．1取游泳池水样 10 ml于25 ml比色管中。另取尿素标准使用 溶液( 10μ g/ml) 0、0．25、0．50、1．00、2．00、3．00、 4．00、5．00、6．00 ml (尿素含量为0、2．5、5、10、20、 30、40、50、60μ g) ,各管加纯水至10 ml,做标准系列。 3 ．2样品及标准系列管各加入 110 ml二乙酰一肟溶液,摇匀,再 加入210 ml安替比林溶液,混匀后置沸水浴锅中煮沸20 min (建 议同时放入同时取出 ,或按次序放入、取出, 以保证加热时间的 一致。在样品多时这点尤为重要) ,在沸水浴时轻轻盖上比色管 塞,以防溶液蒸发。 3 ．3停止加热后在冷水浴 (10℃～15℃,冷水浴水位高于比色管 中溶液为佳 ) 中冷却2 min, 再次混匀后以纯水为对照 , 在460 nm处,用1 cm 比色皿,在避免阳光直射的条件下测定吸光度。绘 制标准曲线并求得样品中尿素的浓度。