_1_抗胰蛋白酶的分离纯化及活力测定

实验胰蛋白酶或抑制剂分离、纯化在动物胰脏中，胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的。

在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后，在小肠上腔有Ca2+的环境中，为肠激酶或胰蛋白酶所激活，其肽链N -端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解，失去一个酸性6肽，其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶。

胰蛋白酶原分子量约为24 000，其等电点为pH8.9；胰蛋白酶的分子量约为23 400，其等电点为pH 10.8。

胰蛋白酶在pH3.0时最稳定，其浓溶液可贮存于冰箱（0℃以下）数周而活性无显著丧失。

pH＜3时，胰蛋白酶易变性。

PH＞５时，胰蛋白酶易自溶。

胰蛋白酶催化活性的最适pH为7.6～7.8。

重金属离子、有机磷化合物和反应产物都能抑制胰蛋白酶的活性。

胰脏、卵清和大豆中也含有一些蛋白质对胰蛋白酶活性具有抑制作用。

实验（一）胰蛋白酶活性测定[原理]胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的肽键具有高度的专一性。

此外，胰蛋白酶也能催化由碱性氨基酸的羧基所形成的酰胺键和酯键，有高度的专一性仍表现为对碱性氨基酸羧基一侧的选择对此等化学键的催化水解活性的敏感度为：酯键＞酰胺键＞肽键。

因此，可以利用含有这些化学键中任一种键型的底物来研究胰蛋白酶的专一催化活性。

本实验方法一采用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯[（BAEE），N-benzoyl-L-arginine ethyl ester]作为底物，水解反应如下：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）在波长253nm下的紫外光吸收远远弱于N-苯甲酰-L-精氨酸[（BA），benzoyl-L-arginine]的紫外光吸收。

在胰蛋白酶的催化下，BAEE随着酯键的水解，水解产物BA逐渐增多，反应体系的紫外光吸收亦随之相应增加，以△A253nm计算胰蛋白酶的活性。

胰蛋白酶的BAEE单位定义为：以BAEE为底物，在一定反应条件下，每分钟使△A253nm 增加0.001的酶量为一个BAEE单位。

亲和层析法纯化胰蛋白酶一. 实验目的1.理解亲和层析法的基本原理, 并通过实验能初步掌握制备一种亲和吸附剂的操作方法；2.掌握利用紫外可见分光光度计测定酶活性和抑制酶活性的原理和方法。

二. 实验原理亲和层析主要是根据生物分子与其特定的固相化的配基或配体之间具有一定的亲和力而使生物分子得以分离。

这是由一种典型的吸附层析发展而来的分离纯化方法。

许多生物分子都具有能和某些相对应的专一分子可逆地结合的特性。

这种分子之间的结合能力做亲和力。

亲和层析正是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。

所以有人称为“生物专一吸附技术”。

在实际工作中, 只要把被识别的分子, 称为配基（Ligand）, 在不损害其生物学功能的条件下共价结合到水不溶性载体或基质上（如Sepharose4B）制成亲和吸附剂, 然后装柱。

再把含有要分离纯化的物质的混合液通过这个柱子, 这时绝大部分对配基没有亲和力的化合物均顺利地流过层析柱而不滞留, 只有与配基互补的化合物被吸附留在柱内。

当所有的杂质从柱上流走后, 再改变洗脱条件, 使结合在配基上的物质解离下来。

这样, 原来混合液中被分离的物质便以高度纯化的形式在洗脱液中出现。

本实验为了纯化胰蛋白酶, 采用胰蛋白酶的天然抑制剂—鸡卵粘蛋白作为配基制成亲和吸附剂。

鸡卵粘蛋白是专一性较高的胰蛋白酶抑制剂, 对牛和猪的胰蛋白酶有相当强的抑制作用, 但不抑制糜蛋白酶。

在pH=7-8的缓冲溶液中卵粘蛋白与胰蛋白酶牢固地结合, 而在pH=2-3时, 又能被解离下来。

采用鸡卵粘蛋白作成的亲和吸附剂可以从粗提液中通过一次亲和层析直接获得高纯度的胰蛋白酶制品, 比用经典分离纯化方法简便得多。

纯化效率可达到10-20倍以上。

1.三. 实验方法步骤2.鸡卵粘蛋白的制备取蛋清60ml, 加入等体积的三氯乙酸丙酮溶液（丙酮: 三氯乙酸=40:60）后, 出现大量白色沉淀, 搅匀后室温静置4h以上, 待清蛋白完全沉淀, 3000rpm离心10min, 弃去沉淀, 47ml上清液倒入250ml锥形瓶并用塑料薄膜封好, 置于冰箱中冰浴片刻, 缓慢加入3倍体积(141ml)的预冷丙酮, 搅匀后冰浴4h直到出现沉淀,用真空泵抽去部分上清液, 剩余部分的部分沉淀和上清液全部转移至离心管中, 以3000rpm下离心15min, 弃上清液。

胰蛋白酶的制备及活力的测定-1目的要求1．学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。

2．了解酶的活性与比活性的概念。

实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在Ca2+的存在下，被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开，失去一段六肽，分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。

胰蛋白酶原的分子量约为24000，其等电点约为pH8.9，胰蛋白酶的分子量与其酶原接近（23300），其等电点约为pH10.8，最适pH7.6～8.0，在pH=3时最稳定，低于此pH时，胰蛋白酶易变性，在pH>5时易自溶。

Ca2+离子对胰蛋白酶有稳定作用。

重金属离子，有机磷化合物和反应物都能抑制胰蛋白酶的活性，胰脏、卵清和豆类植物的种子中都存在着蛋白酶抑制剂。

最近发现在一些植物的块基（如土豆、白薯、芋头等）中也存在有胰蛋白酶抑制剂。

胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。

此外还能催化由碱性氨基酸和羧基形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。

胰蛋白酶对这些键的敏感性次序为：酯键> 酰胺键> 肽键。

因此可利用含有这些键的酰胺或酯类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。

目前常用苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺（简称BAPA）和苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺（简称BANA）测定酰胺酶活力。

用苯甲酰-L-精氨酸乙酯（简称BAEE）和对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（简称TAME）测定酯酶活力。

本实验以BAEE为底物，用紫外吸收法测定胰蛋白酶活力。

酶活力单位的规定常因底物及测定方法而异。

从动物胰脏中提取胰蛋白酶时，一般是用稀酸溶液将胰腺细胞中含有的酶原提取出来，然后再根据等电点沉淀的原理，调节pH以沉淀除去大量的酸性杂蛋白以及非蛋白杂质，再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等（包括大量的酸性杂蛋白以及非蛋白杂质，再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等（包括大量糜蛋白酶原和弹性蛋白酶原）沉淀析出。

α1-抗胰蛋白酶的分离纯化及活力测定
何小维;刘玉;罗志刚
【期刊名称】《农产品加工·学刊》
【年(卷),期】2006(000)004
【摘要】以猪血清为原料,经盐析、离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤层析等过程,制备较高纯度的α1-抗胰蛋白酶制剂.根据改良的Eriksson法,采用苯甲酰-DL-精氨酸和以硝基苯胺(BAPNA)为底物,测定猪血清中α1-抗胰蛋白酶的抑制活力.【总页数】3页(P51-52,54)
【作者】何小维;刘玉;罗志刚
【作者单位】华南理工大学轻工与食品学院,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广州,510640
【正文语种】中文
【中图分类】Q814.1
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α1-抗胰蛋白酶的克隆、表达、纯化及其抗原性鉴定α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin,α1-AT）是人体内重要的蛋白酶抑制剂,主要是由肝细胞合成的一种糖蛋白,也能在肠上皮细胞肾实质等肝外组织和某些肿瘤细胞中产生,它能抑制多种蛋白酶与丝氨酸内切肽酶。

在电泳中,其迁移位点位于α1蛋白带,因而又被称为α1蛋白酶抑制剂。

在多种肺部炎性疾病中,胰蛋白酶-抗胰蛋白酶系统起到关键作用。

某些有关α1-抗胰蛋白酶疾病的诊治,尤其α1-抗胰蛋白酶与肝脏疾病,有待进一步研究。

在胃癌患者胃液中存在大量的α1-抗胰蛋白酶,其具体原因尚不明确,有待进一步研究。

目的:克隆人α1-抗胰蛋白酶基因使其在细胞中表达,进行其抗原性鉴定。

方法:（1）表达质粒的构建:以人胚肾细胞系293T的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人α1-AT cDNA序列（1200bp）,克隆至载体后酶切鉴定,进行序列分析。

（2）融合蛋白的表达与纯化:提取序列正确的重组质粒转入大肠杆菌M₁₅中表达,GST亲和纯化方法纯化上清（过柱法）,还原型谷氨酸溶液洗杂蛋白,用PBS（pH7.4）缓冲液洗目的蛋白,分别取10μl过柱前上清、过柱后上清和所得目的蛋白进行SDS-PAGE分析。

（3）重组蛋白的抗原性鉴定:免疫印迹（Western blot）法验证目的蛋白是否符合α1-AT的抗原性。

结果:基因克隆方法得到人α1-AT基因cDNA,获得的人α1-AT序列与Gene bank文献报道的核苷酸序列一致,Western blot法验证目的蛋白符合α1-AT的免疫学特性。

结论:（1）以人胚肾细胞系293T细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR法获得α1-AT基因cDNA,构建人α1-AT的表达载体PQE₃₀-α1-AT,可在大肠杆菌M₁₅中获得高效表达的α1-AT蛋白。

胰蛋白酶比活力测定的实验操作胰蛋白酶（trypsin）是一种重要的消化酶，用于蛋白质的降解。

测定胰蛋白酶的比活力可以评估其酶活性及纯度。

下面是测定胰蛋白酶比活力的实验操作步骤。

实验所需材料：1.胰酶溶液2. Brain Heart Infusion (BHI)培养基3. 丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-色氨酸对(L-Tyr-L-Phe)4.0.1M氢氧化钠（NaOH）溶液5.0.1M硫酸（H2SO4）溶液实验步骤：1.准备酶样品：取适量的胰酶溶液，可以是商业制备的纯胰蛋白酶或者胰腺提取物。

2. 酶样品稀释：将胰酶溶液与BHI培养基按照一定比例混合，使得最终浓度在0.5-1.2mg/mL之间。

3.加入底物：向每个试管中加入20μL的丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-色氨酸对底物。

4.孵育反应：将试管置于37℃恒温培养箱中，在设定的时间内进行酶催化反应。

5.终止反应：用加入2NNaOH溶液终止酶反应，使底物水解停止。

6.酶解产物的提取：将反应液离心，取上清液转移到新的离心管中。

实验测量方法：1. 分光光度计法：利用胰酶催化底物水解产生的对分光光度计可见吸收的产物进行测定。

用1cm光程的比色皿，将底物水解产物的吸光度读数记录下来。

2. pH差比色法：用pH差比色法测量胰酶反应液中产生的酪氨酸分解产物。

黄色小麦胚芽酪氨酸（Tyr）的醛缩反应，其产物具有红色或紫色，在526nm处吸收峰。

通过比较不同样品的吸收度可以得出胰酶比活力。

数据处理：1.分光光度计法：根据底物水解产物的吸光度，绘制标准吸光度-底物浓度曲线，利用该曲线确定底物浓度，进一步计算胰酶的比活力。

2.pH差比色法：计算样品吸收值，将其与标准吸光度曲线相对应的底物浓度进行比较，计算胰酶的比活力。

注意事项：1.操作要严格遵守无菌技术，以避免细菌或其他污染物对实验结果的干扰。

2.实验过程中可以选择不同的底物和测量方法，以适应实验目的和条件。

3.实验操作需谨慎，避免接触眼睛和口腔，注意个人安全。

一、实验目的1. 学习和掌握胰蛋白酶的纯化方法。

2. 了解胰蛋白酶的理化性质和生物学功能。

3. 培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理胰蛋白酶是一种广泛存在于胰腺中的丝氨酸蛋白酶，具有水解蛋白质的能力。

本实验采用硫酸铵盐析法对胰蛋白酶进行纯化，该方法具有操作简便、成本低廉、纯度较高等优点。

三、实验材料1. 胰蛋白酶粗品：由动物胰腺提取。

2. 硫酸铵：分析纯。

3. 氯化钠：分析纯。

4. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）：0.1 mol/L。

5. 其他试剂：三氯乙酸、硫酸、氢氧化钠等。

四、实验方法1. 胰蛋白酶粗品预处理：将胰蛋白酶粗品溶解于磷酸盐缓冲液（pH 7.0），搅拌使其充分溶解。

2. 盐析：向胰蛋白酶溶液中加入硫酸铵，使其饱和，充分搅拌，室温静置过夜。

3. 沉淀收集：用布氏漏斗抽滤，收集沉淀，并用磷酸盐缓冲液（pH 7.0）洗涤沉淀。

4. 脱盐：将沉淀溶于适量的水，加入适量的三氯乙酸，使蛋白质变性，去除杂质。

5. 纯化：将变性后的蛋白质溶液透析，去除三氯乙酸和硫酸铵。

6. 蛋白质复性：将透析后的蛋白质溶液加入适量的磷酸盐缓冲液（pH7.0），使蛋白质复性。

7. 检测：采用SDS-PAGE方法检测纯化后的胰蛋白酶。

五、实验结果与分析1. 盐析：在胰蛋白酶溶液中加入硫酸铵后，溶液出现白色沉淀，说明胰蛋白酶已经盐析。

2. 沉淀收集：通过抽滤，收集到白色沉淀，表明胰蛋白酶已经沉淀。

3. 脱盐：加入三氯乙酸后，沉淀溶解，表明蛋白质已经变性。

4. 纯化：透析后的蛋白质溶液中，SDS-PAGE电泳结果显示，只有一个明显的条带，说明胰蛋白酶已经纯化。

5. 蛋白质复性：复性后的胰蛋白酶溶液中，SDS-PAGE电泳结果显示，蛋白条带清晰，说明蛋白质已经复性。

六、实验结论本实验采用硫酸铵盐析法对胰蛋白酶进行纯化，成功地将胰蛋白酶从粗品中分离出来，并通过SDS-PAGE电泳检测，证明纯化后的胰蛋白酶具有较高的纯度。

酶的提取、分离、纯化及其活力测定一、实验目的酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。

为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。

在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。

二、实验原理（一）酶的提取1.酶的存在位置？存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。

2.如何将酶从细胞中分离？从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。

此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不同处理。

如果酶仅存在于细胞质中，只要将细胞破碎，酶就会转移到提取液中；但如果是与细胞器（如细胞壁、细胞核、线粒体、原生质膜、微粒体等）紧密结合的酶，这时如仅仅破碎细胞还不够，还需要用适当的方法将酶从这些结构上溶解下来。

其次，细胞中存在抑制物质，如酚，酸，离子等，它们通常在液泡中，当细胞破碎时，这些物质象蛋白质一样从细胞中释放出来，进入提取液中，特别是酚类物质，具有游离的酚羟基，能与蛋白质肽键的氧原子形成强的氢键，不能为一般的实验方法，如透析和凝胶过滤所解离。

酚易氧化产生醌，醌为一种强氧化剂，会使蛋白质的功能团发生氧化或发生聚合，使蛋白质上的反应基团，如—SH，—NH2，通过1，4—加成反应而发生不可逆的聚合作用，使酶失活，也使植物组织和提取液产生棕色，以致影响酶活性的测定。

因此如果没有特殊需要，一般常选用植物的非绿色部分或者黄化的幼苗，在这些组织中一般酚类化合物含量较低。

牛血清α1-AT抗胰蛋白酶的分离和鉴定【摘要】目的熟悉α1-AT的基本性质和功能，账务蛋白质分离纯化步骤的基本原理和操作过程。

原理α1-AT是血清中主要的蛋白酶抑制剂，分子量54000，PI为4.7是一种糖蛋白。

方法盐析，离子交换层析，凝胶过滤，双缩脲法，凝胶电泳。

【关键词】牛血清α1-AT抗胰蛋白酶，层析法，双缩脲法，凝胶电泳实验目的和原理1.盐析法：利用蛋白质在高盐溶液中溶解度不同而分离，将（NH4）2SO4加入蛋白质溶液，是蛋白质表面电荷被中和水化膜被破坏，稳定性因素出去而沉淀。

2.凝胶过滤层析：对α1-AT盐析粗体蛋白进行蛋白进行除盐，混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相得层析柱时，分子量大的物质先被洗脱，分子量小的后被洗脱。

3.DEAE—纤维素离子交换层析：出去样品中球蛋白。

DEAE带正电荷，吸附溶液中的阴离子，使用含阴离子的溶液洗柱时，含负电荷少的先被洗脱，多的后被洗脱。

4.α1-AT活力测定及蛋白定量：胰蛋白酶可水解低分子底物使之释放出黄色产物，用410nm比色测定，测样品与已知量胰蛋白酶反应后胰蛋白酶反应后测剩余活力，α1-AT活力与剩余活力负相关。

5.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳：带电质点在电场中泳动速度V=EQ/ 迁移M=Q/6πrη凝胶电泳具有电荷效应，浓缩效应，分子筛效应。

实验步骤量取15ml牛血清，加入饱和（NH4）2SO415ml边加边搅拌，静置30min，然后将液体倒入离心管离心20min，取上清记录体积，加入固体（NH4）2SO4边加边搅拌，静置30Min,最后在布氏漏斗上放两层滤纸，润湿，将液体倒入漏斗后抽滤至龟裂，刮下沉淀。

将α1-AT粗提用20ml 0.05mol/l ph=6.4PBS溶液，夹住出口，加入1/3V PBS,搅匀凝胶后灌胶，待沉降约1cm打开出口，继续添加至2/3-3/5处，加紧出口，用PBS平衡，加入样品打开出口，并用少量PBS清洗管壁，用双缩脲检查洗脱液，待试剂变红开始收集直至不变色，收集液体记录体积。

实验一胰蛋白酶的结晶及活力测定原理胰蛋白酶（trypsin，EC.3.4.21.4）通常是以无活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）形式存在于动物的胰脏中。

在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌到十二指肠后，在小肠上腔有钙离子的环境中被肠激酶（enterokinase）或胰蛋白酶所激活，其肽链N端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解而失去一个酸性6肽，分子构象发生改变，转变成有生物活性的胰蛋白酶。

胰蛋白酶原的M r约为24000，其等电点为pH8.9。

胰蛋白酶的的M r为23400，等电点为pH10.8。

胰蛋白酶在酸性条件下稳定。

通常在pH3.0的溶液内，在4的冰箱内储存数约乃至2年其活性无显著变化。

当溶液的pH值小于2.5时，胰蛋白酶易变性；pH大于5.0时，容易发生自溶；在pH7.6~8.0时，其催化水解的活性最佳。

重金属离子，有机磷化合物和某些反应产物均可抑制胰蛋白酶的活性。

在胰脏、卵清和大豆中含有一些对胰蛋白酶活性具有抑制作用的天然抑制剂。

胰蛋白酶催化水解蛋白质的能力，表现在它对碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸所形成的肽键具有高度的专一性。

此外，还能催化水解有碱性氨基酸所形成的酰胺键和酯键，胰蛋白酶对这些化学键催化水解活性的敏感性依次是酯键＞酰胺键＞肽键。

因此，可以利用含有这些化学键的人工合成的化合物为底物来研究胰蛋白酶的专一性催化活性。

在动物的胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶的性质相似的蛋白水解酶，即：胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）亦称糜蛋白酶，弹性蛋白酶(elastase)。

在制备过程，采用常规的方法往往很难将三者彼此分离开。

而采用具有高度专一性的亲合层析法可将它们分开。

从胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性蛋白沉淀析出。

经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀，抽滤后的沉淀物经水溶解并调至pH8.0，用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活，同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原、弹性蛋白酶原也被激活。

胰蛋白酶活力测定胰蛋白酶活力测定一、目的了解并掌握米氏常数的意义和测定方法。

二、原理1）福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。

2）蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。

三、实验仪器1、试管2、7220分光光度计3、恒温水浴锅四、实验试剂1、福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中)2、0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml3、10%三氯乙酸溶液4、0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)：5、0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml 湿润，再加少量0. 2mol/L磷酸缓冲液稀释。

在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml，冷藏在(冰箱)里。

6、500ug/L酪氨酸溶液7、胰蛋白酶溶液(冰箱中)五、实验步骤1、标准曲线的制作：按下表加入试剂：管号 1 2 3 4 5 6500ug/mL酪氨0 0.2 0.4 0.6 0.8 1酸溶液蒸馏水 1 0.8 0.6 0.4 0.2 02、管号7 8 备注0.5%酪素溶液 2.0 2.0 37水浴中酶解15分钟0.2mol/l磷酸缓冲液 1.0 02mg/ml胰酶溶液0 1.010%三氯乙酸溶液 3.0 3.0 过滤上清液 1 1 37水浴中显色15分钟0.55mol/L碳酸钠溶液 5.0 5.0福林试剂B 1 1OD680 0 0.1903、以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线六、实验结果组别 1 2 3 4 5 6 样液吸光度1 0 0.237 0.367 0.576 0.690 0.852 0.38 吸光度2 0 0.234 0.365 0.573 0.680 0.848 0.38 吸光度3 0 0.237 0.367 0.577 0.688 0.847 0.38 平均吸光度0 0.236 0.366 0.575 0.686 0.849 0.38酪氨酸含量（μg)0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 Y酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。

血清抗胰蛋白酶活力的快速测定法
李秀芬
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】1989(7)1
【摘要】我们用苏联K.H.BepeMeeHKo 等提出的快速测定法测定了110例健康人,其结果同其它方法的文献资料相近似,并克服了目前常用方法的缺点.原理:根据血清抗胰蛋白酶能够抑制外源性胰蛋白酶溶解X 线胶片表面的明胶,将不同浓度的胰
蛋白酶加入人血清中,使与血清中抗胰蛋白酶结合,不能溶解X 线胶片表面的明胶.一、材料1.0.01mol/L Tris—HCl 缓冲液:称量1.
【总页数】1页(P16)
【作者】李秀芬
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
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昌玉
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