ttc法根系活力标准曲线

氯化三苯基四氮唑（TTC ）法测定根系活力摘要：氯化三苯基四氮唑是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液, 但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【原理】氯化三苯基四氮唑（TTC ）是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF ）,如下式：生成的TTF 比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体, 植物根所引起的TTC 还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性, 并作为根系活力的指标.【仪器与用具】分光光度计；分析天平（感量0.1mg ）；恒温箱1 台；研钵1 套；100ml 三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架,药匙；石英砂适量. 【试剂】1 、乙酸乙酯；2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4, 为强还原剂,俗称保险粉）；3、1%TTC 溶液：准确称取TTC 1.0g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；4、0.4%TTC 溶液：准确称取TTC 0.4g, 溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,pH7.0 ）；6、1mol/L 硫酸：用量筒量取比重1.84 的浓硫酸55ml, 边搅拌边加入盛有500ml 蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml ；7、0.4mol/L 琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6 个结晶水）10.81g, 溶于蒸馏水中,定容至100ml.【方法】1 、定性测定1)配置反应液把1%TTC 溶液,0.4moL/L 琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合.(2)把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37 C左右暗处放1h,以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在•2、定量测定( 1 ) TTC 标准曲线的制作吸取0.25ml 0.4%TTC 溶液放入10ml 容量瓶,加少许Na2S2O4 粉末,摇匀后立即产生红色的TTF. 再用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0. 25ml 、0.5ml 、1 .00ml 、1 .50ml 、2.00ml 置10ml 容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25口g、50 口g、100口g、150口g、200口g的标准比色系列,以空白作参比,在485nm 波长下测定光密度,绘制标准曲线.(2)称取根样品0.5g,放入小培养皿(空白试验先加硫酸再加入根样品，其他操作相同),加入0.4%TTC 溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内，在37 C下暗处保温1h,此后加入1mol/L 硫酸2ml, 以停止反应.( 3)把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml 和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF. 把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在485nm 下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.( 4)计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还强度。

实验三植物根系活力的测定——TTC法植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，跟的生长情况的活力水平直接影响地上部分的生长和营养状况及产量水平。

本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据一、原理：氧化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到加强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。

所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

二、植物材料、仪器设备及试剂配制：（一）植物材料：完全液和铅溶液培养的黄瓜苗根系（二）仪器设备：电子天平、生化培养箱、分光光度计、剪刀、镊子、10mL离心管、10mL具塞刻度试管、研钵、漏斗、移液管或移液枪、滴管、小烧杯、玻璃棒等。

（三）配置试剂：1、乙酸乙酯（分析纯）2、次硫酸钠（Na2S2O4）3、1%TTC溶液：标准称TTC1.00g，溶于少量去离子水中，定容到100mL，用时稀释。

4、硫酸缓冲液（1/15mol/L，pH7）5、1mol/L硫酸：量取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL去离子水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL三、实验步骤：1.TTC标准曲线的制作：取0.4%TTC溶液0.2mL放入10mL量瓶中，加少许Na2S2O4 粉末摇匀后立即产生红色的甲月替，再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。

然后分别取此液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL置于10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

2.称取新鲜根尖0.5g，放入10mL离心管中，加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液5mL，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1h，此后加入1mol/L硫酸1ml，以终止反应。

实验概要植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。

本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲瓒，生成的三苯甲瓒比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。

所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

主要试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。

2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。

3. 1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100ml。

用时稀释至各需要的浓度。

4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。

5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。

6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。

主要设备1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。

实验材料水培小麦根系。

实验步骤1. 定性测定1）配制反应液把1％TTC 溶液、0.4 mol／L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合。

2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。

将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。

实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。

本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

一、原理氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ），如下式：生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。

所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

（二）试剂1. 乙酸乙酯（分析纯）。

2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。

3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。

用时稀释至需要的浓度。

4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ， pH7.0 ）。

5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。

6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。

（三）仪器设备小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ），电子顶载天平（感量 0.1 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。

三、实验步骤1. 定性测定（ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。

TTC法测根系活力Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020氯化三苯基四氮哇（TTC）法测定根系活力摘要：氯化三苯基四氮卩坐是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标.【原理】氯化三苯基四氮陞（TTC）是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质，溶T•水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF）,如下式：生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧口动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制•所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标.【仪器与用具】分光光度计：分析天平（感量）：恒温箱1台：研钵1套：100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml1支、1支：20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿：试管架,药匙：石英砂适量.【试剂】1、乙酸乙酯；2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4,为强还原剂，俗称保险粉）：3、1%TTC溶液：准确称収TTC,溶丁•少量蒸懈水中,定容至100ml：4、%TTC溶液：准确称取TTC,溶于少量蒸懈水中,定容至100ml；5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,）:6、1 mol/L硫酸：用量筒量取比垂的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸憎水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml；7、L琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6个结晶水），溶于蒸憎水中,定容至100ml.【方法】1、定性测定（1）配置反应液把1%TTC溶液丄琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合.（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37°C左右暗处放1h,以观察着色情况，新根尖端儿亳米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在.2、定量测定（1）TTC标准曲线的制作吸取％TTC溶液放入10ml容量瓶，加少许Na2S2O4粉末，摇匀后立即产生红色的TTF.再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀•然后分别取此液、、、、置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25pg、50pg、100pg. 150pg、200pg的标准比色系列,以空白作参比，在485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线.（2）称取根样品,放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加I入根样品,其他操作相同），加N%TTC 溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内，在37°C下暗处保温1h,此后加入1 mol儿硫酸2ml,以停止反应.（3）把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF.把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在485nm下比色，以空白作参比读出光密度，查标准曲线，求出四氮膛还原量.（4）计算将所得数据带入下式，求出四氮瞠还强度.。

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力原理：TTC+2H=TTF+HCLTTC无色,TTF红色且比较稳定,不会被空气中的氧气自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.试剂:95%乙醇Na2S(还原剂)0.4%TTC溶液:准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至 100 ;0.2M PH8.4 Tris-HCL 缓冲液:母液 A:0.2mol/l三羟甲基甲烷(Tris：分子量121g/mol)(24.2g溶至1000ml) B:0.2mol/l HCL A:5OmL+B:16.5 mL,稀释至200ml.1mol/l硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释定容至1000ml定量测定:(1)TTC标准曲线的制作吸取0.25ml0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶中,加少许Na2S晶体（药匙后端一点即可）,摇匀后立即产生红色的TTF.再用95%乙醇定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、2.00ml、4ml置10ml容量瓶中,用95%的乙醇定容至刻度,即得到含TTF25μg、50μg 、100μg、200 μg、400 μg的标准比色系列,以空白做参比,在485nm波长下测定光密度,绘制标准曲线.(2)称取样品0.5g,放入25ml的小烧杯中(空白实验先加硫酸再加根样品,其他操作相同),加入0.4%TTC溶液和PH8.4 Tris-HCL 缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液中,37℃下暗处保温6h,此后加入1mol/l硫酸2ml(除对照外),以停止反应.(3)把根取出,用吸水纸把材料表面的水吸干,转移到原来的小烧杯中,先加6ml95%的乙醇,浸提15-20min或者封口后放置过夜,直至红色物质完全提出。

提取液转入到10ml的离心管中,用乙醇反复洗涤2-3次,皆转入离心管中,最后加95%的乙醇定容至刻度,4000转速下离心10min,冷却,用分光光度计在485nm下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.(4)计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还原强度四氮唑还原强度=四氮唑还原量(μg)/根重(g)/时间(h)注意事项:1、把根从TTC和Tris-HCL等量混合液中取出时可以不过滤，而直接把根和溶液倾倒在一层纱窗上，在其上面再盖一层纱窗，在纱窗的上面用吸水纸把根上的水分吸干2、37℃保温一定在暗处.3.根切成1cm左右的小段。