外源酶对异育银鲫内源酶活性和肠道食糜排空速度的影响

外源酶对异育银鲫内源酶活性和肠道食糜排空速度的影响王爱民1，2， 刘文斌1， 王 恬1（1.南京农业大学动物科技学院，江苏南京210095；2.盐城工学院化学与生物工程学院，江苏盐城220000）收稿日期：2005-05-24基金项目：国际合作项目（UP2002-43）作者简介：王爱民（1975-），男，湖南武岗人，硕士，讲师，从事动物营养生理及饲料教研工作。

通讯作者：刘文斌，（E-mail ）wbliu@摘要： 以均重（60.0±2.3）g 的异育银鲫300尾为试材，研究了在基础日粮中添加外源酶制剂250mg /kg 、500mg /kg 、750mg /kg 、1000mg /kg 后，外源酶对异育银鲫内源酶活性、肠道食糜排空速度的影响。

试验结果表明：与对照相比，在日粮中添加一定量的外源酶后，异育银鲫肝胰脏蛋白酶活性显著降低；但中肠食糜和组织中蛋白酶、淀粉酶活性和肝胰脏淀粉酶活性显著提高，异育银鲫对食糜的排空速度也加快。

关键词： 外源酶；异育银鲫；内源酶活性；消化吸收率；排空速度中图分类号： S963.73+2 文献标识码： A 文章编号： 1000-4440（2006）01-0046-05Effects of Exogenous Enzymes on Activity of Endogenous Enzymes and Intestine Evacuation Velocity of Allogynogenetic crucianWANG Ai-min 1，2， LIU Wen-bin 1， WANG Tian 1（1.College of Animal Science and Technology ，Nanjing Agricultural University ，Nanjing 210095，China ；2.College of Chemistry and Biology Engineer-ing ，Yancheng Institute of Technology ，Yancheng 220000，China ）Abstract ： Three hundred Allogynogenetic crucian fingerlings ［average weight （60.0±2.3）g ］were used in the ex-periment.The effect of exogenous enzymes on the activity of endogenous enzymes and the velocity of feed evacuation were studied when the fishes were fed with four sorts of diets which contained 250mg /kg ，500mg /kg ，750mg /kg and 1000mg /kg exogenous enzymes respectively.The results showed that the effects of exogenous enzymes on the activity of endogenous enzymes of foregut ，midgut ，hind-gut and hepatic-pancreas of Allogynogenetic crucian were different ，the activi-ty of digestive enzymes in mid-gut were increased ，and the velocity of feed evacuation and digestion of Allogynogenetic cru-cian was enhanced.Key words ： exogenous enzyme ；Allogynogenetic crucian ；endogenous enzyme activity ；digestive rate ；intestine evacuation velocity近年来外源酶在畜禽上应用的研究报道很多，如孙志和等在南阳牛［1］、吕敏之等在肉鸭［2］、徐建雄等在断奶仔猪［3］等饲料中都应用了外源酶制剂。

大量试验结果表明：饲料中添加适量的外源酶制剂可促进内源酶分泌［4］，消除抗营养因子，降低食糜粘度，促进动物生长［5］，以增加幼龄动物小肠粘膜微绒毛的密度和高度等［6］。

在水产养殖中，韩庆等在黄颡鱼［7］、余丰年等在团头鲂中分别研究了外源酶的促生长作用［8］，但对外源酶制剂在水产动物中的作用机制，国内外研究报道甚少，仅乔秀亭［9］等研究了不同温度处理的外源酶对鲤鱼内源酶活性的影响，而且目前在水产养殖中尚无专用酶制剂，大多借用畜禽用酶制剂，这与水产动物营养生理、酶制剂作用机制研究明显滞后有关。

对此，我们选择异育银鲫为实验动物，探讨外源酶对异育银鲫肠道及肝胰脏内源酶活性，食糜排空速度等的影响，为外源酶制剂在水产养殖中的广泛应用提供理论依据。

1 材料与方法1.1 供试鱼及外源酶供试鱼为异育银鲫，购自南京市水产良种场，均重为（60.0±2.3）g。

外源复合酶制剂为含有β-葡聚糖酶等8种酶组成的复合酶，由美国建明公司提供。

1.2 试验处理与饲料制备试验处理为分别在基础日粮中添加0mg/kg （对照）、250mg/kg、500mg/kg、750mg/kg、1000mg/kg复合酶制剂。

300尾均重为（60.0±2.3）g的异育银鲫随机分为5组，每组设3个重复，共15个水族箱（0.85m×0.55m×0.45m），每箱放养20尾试验鱼。

试验基础日粮主要由菜粕、花生粕、豆粕及鱼粉等组成，配方见表1，营养水平为：粗蛋白32.76%、有效磷0.75%、钙1.05%、蛋氨酸0.48%和赖氨酸1.56%。

按照异育银鲫营养需求，将各种原料混合均匀后，加水搅拌，再用小型绞肉机制成颗粒，自然晾干，放入-20℃冰箱中冷藏备用。

表1 异育银鲫基础日粮配方Table1 The formulation of the basal diet for Allogynogenetic crucian fingerling原料组成Ingredients鱼粉Fish meal豆粕Soybeanmeal花生粕Peanutmeal菜籽粕Rapeseedmeal次粉Wheatmiddings棒土Attapulgite磷酸二氢钙Dicalciumphosphate食盐Salt添加剂Additive含量Content（%）6.018.030.016.024.0 2.0 2.40.3 1.31.3 饲养管理试验在南京农业大学水产动物营养与饲料研究室进行，试验周期为135d，其中驯化时间为15d，每天投饲3次，时间分别为8:00，13:00和18:00，投饵率为2%～3%，具体投饲量还要根据天气、水质及鱼采食情况而调整，投饲做到“四定”（定时、定点、定质和定量），每次投饲时间为20～30min，使鱼吃饱，尽量不剩余饵料，每天排污1次，采用循环流水系统养鱼，每5d换水1次，每次换水量为水箱中总水量的1/4～1/3，每天充氧10h以上，保证水中溶解氧（D0）含量至少高于5mg/L，试验期间，平均水温为25.5℃。

1.4 测定项目及方法1.4.1 酶活性1.4.1.1 样品采集从每处理的每个水族箱中取2尾异育银鲫，于冰盘上解剖，取出肠道和肝胰脏，剔除脂肪组织，用4℃冷却去离子水冲洗，然后用滤纸轻轻吸干水分，放入-26℃冰箱中冷却保存。

1.4.1.2 酶液制备将肠道及肝胰脏解冻之后，肠道等分成3份，即前、中、后肠。

取肠道食糜0.5g放入离心塑料管中加4℃冷却去离子水4ml，在4℃，1000r/min高速离心机下离心20min，取上清液标号分装，并于4℃冰箱中冷却保存，24h内测完。

分别取前、中、后肠组织及肝胰脏样1.0g加4℃冷却去离子水4ml，先在冰浴玻璃中，600r/min 匀浆6min，随后在4℃10000r/min高速离心机下离心20min，取上清液标号分装，并于4℃冰箱中冷却保存。

24h内测定完。

1.4.1.3 测定方法蛋白酶活性测定方法参照中山大学生物系福林-试剂法［10］，蛋白酶活性单位（U）为1.0g食糜或组织在30℃，pH7.0的条件下，1min水解酪蛋白产生1µg酪氨酸的酶量。

淀粉酶测定方法参照南京建成生物工程研究所提供的淀粉酶试剂盒比色法，淀粉酶活性单位（U）为1.0g食糜或组织在30℃，pH7.0的条件下，1min水解1mg淀粉的酶量。

1.4.2 消化率测定试验30d后，各处理分别投喂含1%Cr2O3指示剂的试验日粮7d，然后每天喂料2h后收集粪便，共收集6d。

收集时用捞网捞起条状粪便，用镊子选择新鲜、外表带有包膜的，尽可能完整粪便放在干净培养皿中，在60℃的烘箱中烘干，保存在-26℃条件下待测干物质、粗蛋白及磷的表观消化率。

其中蛋白质含量采用凯氏定氮法测定，磷含量采用钒钼酸显色剂比色法测定，Cr2O3含量采用湿式灰化定量法测定。

1.4.3 肠道排空速度肠道食糜排空速度是指肠道中食糜由前向后移动的速度，本试验采用的测定方法为：首先将试验鱼饥饿2d后，各处理分别投喂含1%Cr2O3指示剂的试验日粮，使各处理鱼1次吃饱，然后每隔6h每处理解剖3条鱼，测定肠道前部空肠长度与总肠道长度。

肠道排空速度=肠道前部空肠长度/总肠道长度×100%2 结果2.1 外源酶对异育银鲫内源酶活性的影响2.1.1 外源酶对异育银鲫肠道中食糜内源酶活性的影响表2可知：在饲料中添加外源酶，各处理与对照组比较，异育银鲫前肠食糜蛋白酶活性和淀粉酶活性均没有显著提高（P>0.05）；中肠食糜蛋白酶活性和淀粉酶活性，除外源酶添加量为1000mg/kg处理外，其余各处理均显著提高（P<0.05），其中在日粮中添加外源酶250mg/kg、500mg/kg和750mg/kg处理的异育银鲫中肠食糜蛋白酶活性分别提高99.36U、118.33U和126.68U。

说明基础日粮中外源酶添加量在250～750mg/kg 对异育银鲫中肠食糜酶活性影响显著，促进内源酶的分泌。

2.1.2 外源酶对异育银鲫肠道组织内源酶活性的影响试验结果表明：基础日粮中添加不同剂量外源酶后，前肠组织和后肠组织的蛋白酶活性提高均不显著（P>0.05），但中肠组织蛋白酶活性显著提高（P<0.05）；前肠组织淀粉酶活性随日粮中外源酶添加量的增加而提高，其中日粮中外源酶添加量750mg/kg和1000mg/kg处理的前肠组织淀粉酶活性比对照显著提高（P<0.05）；随着日粮中外源酶添加量的增加，中肠组织淀粉酶活性先升高（P< 0.05），但当日粮中外源酶添加量增至1000mg/kg 时，中肠组织淀粉酶活性反而下降至对照水平；日粮中添加不同剂量的外源酶对后肠组织淀粉酶活性的影响均不显著（表3）表2 日粮中添加不同剂量的外源酶后异育银鲫肠道食糜内源酶活性Table2 Endogenous enzyme activity of chyme in intestine of Allogynogenetic crucian affected by different levels of exogenous enzymes in diets日粮中外源酶添加量Levels of exogenousenzymes in diets（mg/kg）蛋白酶Protease淀粉酶Amylase前肠食糜Foregut chyme中肠食糜Mid-gut chyme前肠食糜Foregut chyme中肠食糜Mid-gut chyme（U）0（CK）776.18±24.77a555.38±41.33b32.76±3.82a29.57±3.29c 250750.10±42.25a654.74±81.53a37.68±8.15a42.43±8.50a 500769.52±165.90a673.71±35.17a34.34±4.07a36.03±0.47b 750756.75±69.34a682.06±58.78a40.68±4.04a37.22±4.80b 1000736.08±60.32a552.58±51.76b36.08±1.66a31.51±2.14c 同一列小写字母不同者表示差异达显著水平（P<0.05）。