角质形成细胞

皮肤性病学试题题库〔含答案〕一、填空题〔每空1分〕表皮属复层鳞状上皮，主要由角质形成细胞、黑素细胞、朗格汉斯细胞和麦克尔细胞等构成。

皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成，真皮属于不规则的致密结缔组织，由纤维、基质和细胞成分组成，其中纤维包括胶原纤维、网状纤维、弹力纤维。

1、角质形成细胞由深至浅分别为基底层、棘层、颗粒层、透明层、角质层构成。

2、基底膜带由胞膜层、透明层、致密层、致密下层四层构造组成。

3、真皮层由浅至深可分为乳头层、网状层。

皮肤附属器包括毛发、皮脂腺、汗腺和甲，由外胚层分化而来。

4、皮肤具有屏障、吸收、感觉、分泌排泄、体温调节、代谢、免疫等七大生理功能。

毛发的生长周期可分为生长期、退行期和休止期。

根据发生时间及机制，皮损可分为原发性和继发性两大类。

5、斑疹根据发生机制和特征不同可分为红斑、出血斑、色素沉着、色素减退斑。

形态介于斑疹与丘疹之间的稍隆起皮损称斑丘疹；丘疹顶部有小水疱时称丘疱疹出血斑由毛细血管破裂后红细胞外渗到真皮内所致，压之不褪色，直径小于2mm时称瘀点，大于2mm时称瘀斑急性皮炎仅有红斑、丘疹而无渗液时可选用粉剂或洗剂，炎症较重，糜烂、渗出较多时宜用溶液湿敷，有糜烂但渗出不多时则用糊剂亚急性皮炎渗出不多者宜用糊剂或油剂，如无糜烂宜用乳剂或糊剂单纯疱疹是由单纯疱疹病毒所致的皮肤病。

6、带状疱疹是由水痘—带状疱疹病毒所致的皮肤病。

7、疣是由人类乳头瘤病毒感染皮肤黏膜所引起的良性赘生物，常见临床类型有寻常疣、扁平疣、跖疣、锋利湿疣。

8、脓疱疮是由金黄色葡萄球菌和〔或〕乙型溶血性链球菌引起的一种急性化脓性皮肤病，本病临床上可分为接触传染性脓疱疮、深脓疱疮、大疱性脓疱疮、新生儿脓疱疮、SSSS。

9、按照菌落形态，真菌可分为酵母菌、霉菌两大类；根据真菌入侵组织深浅的不同，临床上把引起感染的真菌分为浅部真菌、深部真菌。

10、头癣多累及少年儿童，成人少见。

根据致病菌和临床表现的不同，可将头癣分为黄癣、白癣、黑点癣、脓癣四种类型。

角质形成细胞分群标记
在皮肤细胞中，角质形成细胞（keratinocytes）的分化和角质化过程受到多种细胞因子和信号通路的调控。

这些因子和通路的活化会导致角质形成细胞分化成角质细胞，并最终形成表皮的角质层。

在角质形成细胞分化和角质化过程中，一些细胞标记物可以用来标记这些细胞的不同分群。

以下是几个常用的角质形成细胞分群标记：
1.Keratin 1 (K1): K1是角质细胞的主要细胞骨架蛋白，广泛表达于不同类型的角质细胞中，是角质细胞分化的标志之一。

2.Keratin 10 (K10): K10是表皮中不同程度分化的角质细胞的标志，主要在角质层的上层表达。

3.Involucrin: Involucrin是角质形成的早期标志，在角质化过程中被表达，并参与角质蛋白的交联作用。

4.Filaggrin: Filaggrin是角质细胞中的一种重要蛋白质，参与角质层细胞间蛋白的交联，并促进角质细胞的角质化过程。

5.Loricrin: Loricrin是一种角质蛋白，在角质细胞的角质化过程中高度表达，是角质层的主要组成成分之一。

这些标记物的表达模式可以帮助研究者确定角质形成细胞的不同分群，并了解其在角质形成和表皮屏障功能中的作用。

通过对这些标记物的检测和分析，可以深入了解角质形成细胞的分化和角质化过程，从而为治疗皮肤疾病和维护皮肤健康提供重要的理论基础。

角质形成细胞原代培养的准备工作补充培养基的配制：（1）将0.5ml 浓度为0.06M 的CaCl 2加入到500ml 基础培养基中，则培养基中CaCl 2浓度为0.06mM ；（2）将5mlHKGS （人的角质形成细胞生长添加剂）加入到基础培养基中。

（3）向其中加入50ul 双抗（100x ），使培养基中双抗比例为1%。

胶原涂层培养瓶：（1）在超净台无菌操作下，向培养面积为25cm 2的细胞培养瓶中先加入1.7ml 稀释液，再向其中加入17ul 胶原（培养面积为75cm 2的培养瓶先加5ml 稀释液，再加50ul 胶原）；（2）来回剧烈摇晃使胶原蛋白均匀分布于培养瓶表面，拧紧瓶盖在室温下孵育30min 30min；；（3）从培养瓶中吸取出多余的胶原或稀释液；涂层后的培养瓶可立即使用，或者短时间内放置于2°C-8°C 备用。

消化液：0.025%0.025%胰酶胰酶胰酶+0.01%EDTA +0.01%EDTA可用可用(0.25%(0.25%(0.25%胰酶胰酶胰酶+0.1%EDTA)+0.1%EDTA)+0.1%EDTA)稀释十倍得到稀释十倍得到其中的百分比表示质量体积比，即0.25%0.25%胰酶表示胰酶表示0.25g 胰酶溶于100mlPBS 溶液；溶液；0.1%EDTA 0.1%EDTA 表示0.1gEDTA 溶于100mlPBS 溶液。

终止消化液：含10%10%血清的血清的DMEM 或含10%10%血清的血清的PBS 溶液冻存比例：80%80%含细胞的培养基含细胞的培养基含细胞的培养基+10%+10%+10%血清血清血清+ 10%+ 10%+ 10%含含DMSO 的冻存液皮肤角质形成细胞的原代培养复苏（1） 将装有皮肤角质形成细胞的冻存管从液氮中取出，迅速置于37°37°C C 温水中来回摇动（将冻存管下半部分浸入温水中），使其在2min 内完全融化。

角质形成细胞原代培养1、用含1倍双抗的KSFM 培养基取儿童包皮（一般标本可保留1天）2、取出组织，放置于含有5倍双抗的PBS液中1h。

3、再将组织取出，用组织镊将组织拉伸展平，用无双抗的PBS冲洗三次。

然后用组织镊轻轻提起皮下组织（颜色为白色的组织），用组织剪剪除皮下组织（注意尽量去除皮下组织，操作过程中要不断用PBS冲洗组织，保持标本湿润）。

然后将剩余组织（颜色为灰色组织，含少许未清除干净的皮下组织）剪成宽一厘米的长条，长度不限。

然后置于用hanks液配制的0.2%的中性酶中浸泡18-20h（注意时间不要过长，否则会影响细胞贴壁）。

4、18-20h后取出组织置于培养皿上，两手各持一把组织镊轻轻将上皮与皮下组织分离（即将灰色组织轻轻撕脱于白色组织，保留灰色组织）。

将分离后的上皮组织用眼科剪剪成1mm*1mm的碎片（注意尽量剪碎）。

置于15ml的离心管中，加入2ml含EDTA的胰酶后置于温箱孵育10分钟（每隔2-3分钟用力震荡离心管，使组织充分消化）。

再用含10%FBS的DMEM 培养基终止胰酶。

用滤器将离心管中液体过滤到新的15ml离心管中，离心1000rpm，5min，去除上清，加5mlPBS清洗沉淀后再离心5min，去除上清，加入4ml含EGF,BPG 的KSFM。

置于温箱孵育24小时后再用加了EGF，BPG的KSFM培养，3-4天换液。

(注意第一次换液后不要频繁镜下观察细胞，最好换液后三天再观察，有利于细胞贴壁及生长)。

一般第一代细胞生长10天即可传第二代。

角质形成细胞的传代去除原培养基，用PBS清洗两遍后，加入0.25%胰酶2ml，温箱孵育10min，用含血清的DMEM培养基终止胰酶消化。

1000rpm，5min 离心，去除上清，用3ml含EGF及BPG的KSFM培养基悬浮细胞，各吸1ml种入培养瓶，补足4ml培养基，温箱孵育。

3-4天换液，一般7天可传第三代。

继续培养，待镜下观察细胞生长状态良好，培养瓶覆盖率达70%---80%即可种板进行相关实验。

KC值分子生物学角质形成细胞(keratinocyte，KC)是人皮肤表皮的主要细胞，在表皮基底细胞层至角质层的分化过程中，KC最后失去细胞核及相应的细胞器，目前很多学者认为KC的分化实际上是一种特殊的细胞凋亡。

角化是角质形成细胞的一个重要特征，在此过程中产生一系列特征性形态学变化：角蛋白细丝从基底层开始积累、聚集直至最终充满整个无核的角质细胞；透明角质颗粒在颗粒层出现；板层小体（lamellar body）从棘层上部出现并逐渐向细胞周边移动，在颗粒层与细胞膜融合并将内容物排出至细胞间；细胞套膜（cell envelope，CE）从颗粒层开始在质膜下逐步形成并最终取代质膜，其生物化学变化极其复杂。

从分子生物学角度讲，角化是KC分化特异性分子有序表达、相互作用和衍变的结果。

长期以来KC被认为只起到机械的屏障作用。

80年代发现KC能分泌IL1后，各国学者陆续发现KC尚能分泌多种细胞因子(IL3，IL6，IL7，IL8，IL10，IL11，IL12，IL13，IL15，TNFα，TGFα，TGF β，GM CSF，G CSF，M CSF，VEGF，bFGF，PDGF，POMC，αMSH，MGSA等)，故KC可能在细胞的其他生理功能中起到重要作用，并且与皮肤病的发病密切相关[1]。

1控制角质形成细胞凋亡的调控通路及调控因子1．1许多生理和病理性细胞死亡的信号传递可激活由遗传调控的细胞程序性死亡传导旁路而诱导凋亡。

由Fas介导的细胞凋亡信号的传递主要是经：caspase 8(caspase，又称半胱天冬酶)和ceramide(神经酰胺)介导的线粒体细胞色素C两种主要级连反应途经实现的。

凋亡相关的细胞内信号传导旁路迄今尚未完全阐明。

何春涤等对正常人角质形成细胞、HaCaT细胞和皮肤鳞状细胞癌细胞等细胞系凋亡相关基因及蛋白的表达进行了研究。

通过培养正常人的KC和永生化的人KC系HaCaT、皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL1，SCC 12，SCC13)、上皮样癌A431细胞系等，同时用结直肠癌细胞系SW480和黑素瘤细胞系MeWo作对照；结果在培养的正常人KC、永生化的人KC系HaCaT、皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL1，SCC12，SCC13)、上皮样癌A431细胞系等，结直肠癌细胞系SW480和黑素瘤细胞系MeWo中均观察到CD95 mRNA的表达。

2021上皮细胞相关标志物在角质形成细胞中的表达特征范文 角质形成细胞是鳞状上皮细胞的主要组成成分，具有广泛的生物学特性。

常见的鳞状上皮细胞有皮肤和口腔黏膜上皮细胞，当其出现大面积损伤时创口自身不能正常愈合，只能通过组织移植来补偿缺损的组织面。

皮肤或口腔黏膜是容易接触一些药物或材料刺激的组织，因此探讨皮肤或口腔黏膜组织对于临床药物和材料的反应是重要的研究课题。

体外细胞检测模型一般来自患者的原代培养细胞或来自肿瘤、遗传物质突变的转化细胞系，但原代细胞培养获得的细胞有限，传代后组织特异性也逐渐丧失，且组织来源不同的原代细胞培养所得出的测定数据差异较大，不是毒理学研究的理想细胞；转化细胞容易获得并易于维持，稳定性高，可重复性好，但其具有肿瘤细胞的特性，例如生长失去控制、接触抑制丧失、细胞外形改变、核型异常等[1],也不是毒理学研究的理想模型，因此，急需建立新的外源性化合物安全性的评价模型。

人胚胎干细胞（ hu-man embryonic stem cells,hESCs）是健康和永生的单一胚胎细胞来源的人类样本，既可真实反映人类生物学特征[2],又可通过单一胚胎细胞无限增殖和定向分化达到样本高度标准化[3],可能成为预测受试物细胞毒性和遗传毒性的体外替代实验模型[4],为体外安全性评价提供了新的希望。

将 hESCs 诱导分化为角质形成细胞目前暂无标准化方法，研究发现通过形成拟胚体（ embryonic body,EB）的方法获得的角质形成细胞增殖能力过低，不利于组织发育[5]; 2008 年，Metallo 等[6]用直接诱导法将 hESCs诱导分化为上皮细胞的前体细胞，并比较了 EB 法和直接诱导法诱导 hESCs 5 周后获得的细胞角蛋白（ cytokeratin,CK） 14 的阳性表达率（ 15% vs. 87%） ,发现直接诱导法具有显著的优势。

人永生化口腔上皮细胞系（human immortalizedoral epithelialcells,HIOECs）是用人乳头瘤状病毒E6、E7 开放读码框架转染原代培养的正常口腔上皮细胞后建立的[7],HIOECs 具有与口腔黏膜上皮细胞相似的形态和生化特性，所建模型可被用于评价药物在口腔吸收机制的研究[8].人永生化皮肤角质形成细胞 HaCaT 是由成人皮肤转染猴空泡病毒40（ simian virus,SV40）后发生自分化的未成瘤的永生化皮肤角质形成细胞系[9]. 本课题组前期实验亦通过直接诱导法将hESCs诱导分化为上皮样细胞[10],但尚不清楚所得到的上皮样细胞是否仍保持正常的染色体核型，其进一步分化是趋向于发展为皮肤上皮还是口腔黏膜上皮，以及能否作为将来毒理学的检测模型。

原代角质形成细胞的分离培养方法原代细胞在相关细胞实验使用过程中越来越多，人们不再单单趋于使用细胞系进行实验研究，因为细胞系常常由于体外长期培养，而容易丢失原有的生物学特性，对药物处理的反应差距越来越大。

原代细胞刚从组织中分离开，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也最接近和反应体内生长特性，原代细胞的活力和生长状态都比较好，细胞的纯度和基因保留可达到90%以上，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等试验研究，使用原代细胞进行实验，可以获得更准确的研究和数据。

为了更好的服务于广大科研工作者，赛百慷技术人员特提供了角质形成细胞分离的常用方法，技术因人而异仅供参考：角质形成细胞是一种不断分化的复层鳞状上皮细胞，其分化的最终阶是形成角蛋白。

根据角质形成细胞的发展阶段和特点，从内向外可将其分为五层。

基底细胞层又称生发层，棘细胞层，颗粒层，透明层，角质层。

角质形成细胞的分化成熟表现为从基底层到向角质层的逐渐移行。

在单一移行过程中，角质形成;细胞的形状和功能也逐渐发生着变化，从单层柱状上皮的基底层到扁平的细胞核消失的角质层。

新生的基底细胞进入棘细胞层，然后上移到颗粒层的最上层。

细胞组织来源于实验动物的正常皮肤组织，细胞生长状态为贴壁培养。

需要的实验试剂：1.培养基1：iCell原代角质细胞培养体系4.基础培养基：DMEM/F125.缓冲液：无菌不含Ca2+和Mg2+的1×PBS+1×P/S，pH=7.46.消化液1：1.2U/ml的dispase Ⅱ7.消化液2：0.25%胰蛋白酶+0.02mM EDTA8.消化液3：0.1%Ⅰ型胶原酶9.75%医用酒精10.胎牛血清（FBS）实验器械：1.培养皿2.T-25细胞培养瓶3.100目不锈钢网筛4.200目不锈钢网筛5.眼科剪6.眼科镊7.离心管（15ml、50ml）实验步骤：1.新鲜的包皮组织，装盛于含有无菌生理盐水或1×PBS的无菌容器中，于保温盒中，冰上放置离体6h内运输到实验室进行后续分离。